Verzameling, verwerking en opslag Overweging voor onderzoek naar biomarkers in de urine

Summary

Dit protocol is bedoeld om overwegingen te bieden voor het verzamelen, verwerken en bewaren van urinemonsters voor biomarkerstudies naar urinekanaalinfecties.

Abstract

Er zijn verschillende urine-eiwitten die veelbelovend zijn als nieuwe markers van urineweginfecties. De identificatie van een nieuwe biomarker die een grotere voorspellende nauwkeurigheid heeft in vergelijking met de huidige diagnostische methoden, heeft het potentieel om het vermogen om patiënten met urineweginfecties te behandelen aanzienlijk te verbeteren. Het verzamelen, verwerken en opslaan van monsters kan echter allemaal van invloed zijn op de resultaten van biomarkeronderzoek. Inzicht in de effecten van elk van deze fasen op biomarkerstudies is noodzakelijk om toekomstig, hoogwaardig onderzoek op dit gebied te informeren, en om andere studies op dit gebied kritisch te beoordelen. Hier geeft de studie een overzicht van de literatuur over de effecten van elke fase van de verwerking van urinemonsters en rapporteert de effecten van verschillende aandoeningen op urine-eiwitten. Het protocol zal zich richten op verzameltechnieken, tijd en temperatuur van opslag, verwerkingstechnieken, gebruik van reagentia en langdurig invriezen op de stabiliteit van biomarkers. Het zal zich richten op eiwitten, maar zal kort ingaan op andere materialen die kunnen worden gebruikt in biomarkeronderzoek. Daarbij zal dit protocol een leidraad zijn voor toekomstige onderzoekers om te helpen bij het opzetten van studies naar urinaire biomarkers.

Introduction

Urineweginfecties (UTI) zijn een van de meest voorkomende bacteriële infecties bij zowel kinderen als volwassenen¹. Hoewel de diagnose van urineweginfecties in sommige populaties ongecompliceerd kan zijn, kan deze in andere complexer zijn, zoals mensen met een neuropathische blaas². Het vermogen om urineweginfecties nauwkeurig te diagnosticeren, zal helpen bij het verbeteren van de inspanningen op het gebied van antibioticabeheer door het gebruik van onnodige antibiotica te verminderen en mogelijk te helpen bij de eerdere diagnose van urineweginfecties, waardoor het risico op morbiditeit....

Protocol

Dit protocol volgt de richtlijnen van de ethische commissie voor menselijk onderzoek van de instelling. Zorg ervoor dat de goedkeuring is verkregen van de institutionele beoordelingsraad (IRB) voorafgaand aan het verzamelen en gebruiken van biologische specimens voor onderzoek.

1. Inzameling

1. Verkrijg een urinemonster in een steriel monsterbekertje. Bepaal het type urinemonster, evenals specifieke in- en exclusiecriteria, op basis van de specifieke onderzoeksopzet. Gebruik voor UTI-onderzoeken de clean-catch-methode of katheterisatie om perineale besmetting te voorkomen.
2. Om een schoon u....

Results

Centrifugatie had een kleine impact op de NGAL-niveaus. Gecentrifugeerde monsters die bij -80 °C werden bewaard, hadden lagere niveaus van NGAL dan niet-gecentrifugeerde monsters (2,17 ng/ml ± 0,32 ng/ml, 2,77 ng/ml ± 0,21 ng/ml). Vriescycli hadden ook een impact op de NGAL-niveaus na de derde vries-dooicyclus. (Figuur 2). Van de onderzochte omstandigheden (centrifugeren, vries-dooicycli en opslagtemperatuur) had de opslagtemperatuur de grootste invloed op d.......

Discussion

Het belang van het produceren van consistente en reproduceerbare resultaten is niet beperkt tot het succes van individuele studies, maar zal ook een betere vergelijking van de resultaten in de literatuur mogelijk maken⁹. Variatie tussen onderzoeken in belangrijke procedurele stappen kan onomkeerbare vertekening introduceren die van invloed kan zijn op biomarkersignalen en hun interpretatie, wat verantwoordelijk kan zijn voor discrepanties tussen verschillende onde.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Boric acid	Sigma-Aldrich	B6768	To be considered for samples that cannot be rapidly processed and frozen
Freezer boxes	Fisher Scientific	03-395-464
Microcentrifuge tubes	Thomas scientific	1149X93
NGAL ELISA Kit	R&D Systems	DLCN20	Used to create representative results
Pipette and tips	Dependent on pipette size and volume of fluid.
Sodium azide	Sigma-Aldrich	S2002	To be considered for samples that cannot be rapidly processed and frozen
Urine collection cups	Thermo Scientific	3122B03ORG	Sterile cups not required unless needed for other studies