Hier presenteren we verfijnde chirurgische procedures voor het succesvol uitvoeren van intraportale eilandjestransplantatie, een klinisch relevante maar technisch uitdagende chirurgische procedure, bij muizen.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Minimalisering van post-infusie portale aderbloedingen tijdens intrahepatische eilandtransplantatie bij muizen
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Hoewel de lever momenteel wordt geaccepteerd als de primaire transplantatieplaats voor menselijke eilandjes in klinische omgevingen, worden eilandjes getransplanteerd onder de niercapsule in de meeste preklinische eilandjestransplantatiestudies bij knaagdieren. Dit model wordt vaak gebruikt omdat murine intrahepatische eilandjestransplantatie technisch uitdagend is en een hoog percentage muizen kan sterven aan chirurgische complicaties, vooral bloedingen van de injectieplaats na transplantatie. In deze studie worden twee procedures gedemonstreerd die de incidentie van post-infusie portale aderbloedingen kunnen minimaliseren. De eerste methode past een absorbeerbare hemostatische gelatinespons toe op de injectieplaats en de tweede methode omvat het penetreren van de eilandjesinjecternaald door het vetweefsel eerst en vervolgens in de poortader door het vetweefsel te gebruiken als een fysieke barrière om het bloeden te stoppen. Beide methoden kunnen effectief bloedingsgeïnduceerde muizensterfte voorkomen. De hele leversectie met eilandjesverdeling en bewijs van eilandjestrombose na transplantatie, een typisch kenmerk voor intrahepatische eilandjestransplantatie, werden gepresenteerd. Deze verbeterde protocollen verfijnen de intrahepatische eilandjestransplantatieprocedures en kunnen laboratoria helpen bij het opzetten van de procedure om de overleving en functie van eilandjes in preklinische omgevingen te bestuderen.
Inleiding
Intraportalische eilandjestransplantatie (IIT) via de poortader is de meest gebruikte methode voor menselijke eilandjestransplantatie in klinische omgevingen. Het IIT-model van de muis biedt een geweldige kans om eilandjestransplantatie te bestuderen en veelbelovende interventionele benaderingen te testen die de werkzaamheid van eilandjestransplantatie kunnen verbeteren1. IIT werd voor het eerst beschreven in de jaren 1970 en gebruikt door verschillende groepen1,2,3,4,5. Het herwon a....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle procedures werden uitgevoerd met de goedkeuring van de Institutional Animal Care and Use Committees aan de Medical University of South Carolina en het Ralph H Johnson Medical Center in Charleston.
1. Diabetes inductie met behulp van streptozotocine (STZ)
- Ontvanger muizen voorbereiding:
- Weeg alle muizen afzonderlijk.
- Controleer de bloedglucosespiegels van een bloedmonster van een staartader met behulp van een glucometer.
- STZ-dosisbepaling voor drie verschillende scenario's:
- Injecteer voor muizen met leververvetting één dosis STZ [40 mg/kg/dag, intraperitoneale (i.p.) injectie] ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
We voerden syngenetische en xenogene eilandjestransplantaties uit via de poortader. De transplantaatfunctie van eilandjes werd op een dosisafhankelijke manier waargenomen in beide eilandjestransplantatiemodellen. In het syngeneïsche eilandjestransplantatiemodel met C57BL/6-muizen leidde transplantatie van 250 eilandjes tot voorbijgaande normoglycemie voordat muizen terugkeerden naar hyperglycemie. Muizen die 500 eilandjes kregen, bereikten en behielden normoglycemie langer dan 30 dagen na transplantatie (
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
In deze studie zijn twee verbeterde procedures aangetoond die bloedingen kunnen voorkomen en de muissterfte tijdens muis IIT kunnen verminderen. Deze studie stelt onderzoekers in staat om het eilandjestransplantatiemodel te visualiseren dat uniek is in het bestuderen van de onmiddellijke bloedgemedieerde ontstekingsreactie na transplantatie. Het IIT-model is een onderscheidend model voor het bestuderen van eilandceloverleving en ischemische leverletsels als reactie op eilandjestransplantatie19. Hi.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
Alle auteurs verklaren dat ze geen belangenverstrengeling hebben.
Dankbetuigingen
Deze studie werd ondersteund door het Department of Veterans Affairs (VA-ORD BLR & D Merit I01BX004536) en het National Institute of Health grants # 1R01DK105183, DK120394, DK118529, aan HW. We willen u bedanken meneer Michael Lee en mevrouw Lindsay Swaby voor het bewerken van de taal
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 10% Neutral buffered formalin v/v | Fisher Scientific | 23426796 | |
| 1 mL Syringe met naald | AHS | AH01T | |
| 20 mL Syringe | BD | 301031 | |
| 25G x 5/8" hypodermische naalden | BD | 305122 | |
| Alcohol prep pads, steriele | Fisher Scientific | 22-363-750 | |
| Anesthesiesysteem voor dieren | VetEquip, Inc. | 901806 | |
| Buprenorfinehydrochloride, injectie | Par Sterile Products, LLC | NDC 42023-179-05 | |
| Centrifuge tubes, 15 mL | Fisher Scientific | 0553859A | |
| CMRL-1066 | Corning | 15110CV | |
| DMEM | Corning | 10013CV | |
| Ethanol, absoluut (200 proof), moleculaire biologiekwaliteit | Fisher Scientific | BP2818500 | |
| Extra fijne micro dissectiescharen 4” recht scherp | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5882 | |
| Foetaal bovien serum (FBS) | Corning | 35011CV | |
| FreeStyle Glucose meter | Abbott | Lite | |
| FreeStyle Bloedglucose test strips | Abbott | Lite | |
| Gelfoam (opneembaar gelatine spons, USP) | Pharmacia & Upjohn Company | 34201 | |
| Graefe forceps 4” extra delicate tip | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5136 | |
| Verwarmde pad | Amazon | B07HMKMBKM | |
| Hegar-Baumgartner Needle Holder 5.25” | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-7850 | |
| Insulin spuit met 27-gauge naald | BD | 879588 | |
| Jodium prep pads | Fisher Scientific | 19-027048 | |
| Isofluraan | Piramal Critical Care | NDC 66794-017-25 | |
| Penicilline/streptomycine (P/S) | HyClone | SV30010 | |
| Polypropyleen Suture 4-0 | Med-Vet International | MV-8683 | |
| Polypropyleen Suture 5-0 | Med-Vet International | MV-8661 | |
| Natriumchloride, 0,9% intraveneuze oplossing | VWR | 2B1322Q | |
| Streptozocine (STZ) | Sigma | S0130 | |
| Chirurgische drape, steriele | Med-Vet International | DR1826 | |
| Weefsel Cassette | Fisher Scientific | 22-272416 |
Referenties
- Pellegrini, S., Cantarelli, E., Sordi, V., Nano, R., Piemonti, L. The state of the art of islet transplantation and cell therapy in type 1 diabetes. Acta Diabetology. 53 (5), 683-691 (2016).
- Ballinger, W. F., Lacy, P. E. Transplantation of intact pancreatic islets in rats. Surg....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
