Dit artikel beschrijft een hanteringstechniek bij muizen, de 3D-handlingtechniek, die routinematige behandeling vergemakkelijkt door angstachtig gedrag te verminderen en details presenteert over twee bestaande gerelateerde technieken (tunnel- en staartbehandeling).
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Behandelingstechnieken om stress bij muizen te verminderen
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Proefdieren worden onderworpen aan meerdere manipulaties door wetenschappers of dierenverzorgers. De stress die dit veroorzaakt kan diepgaande effecten hebben op het welzijn van dieren en kan ook een verwarrende factor zijn voor experimentele variabelen zoals angstmaatregelen. In de loop der jaren zijn behandelingstechnieken ontwikkeld die handling-gerelateerde stress minimaliseren met een bijzondere focus op ratten en weinig aandacht voor muizen. Het is echter aangetoond dat muizen kunnen worden gewend aan manipulaties met behulp van behandelingstechnieken. Het gewennen van muizen aan het hanteren vermindert stress, vergemakkelijkt routinematige behandeling, verbetert het welzijn van dieren, vermindert de gegevensvariabiliteit en verbetert de experimentele betrouwbaarheid. Ondanks de gunstige effecten van de hantering, wordt de tail-pick-up-aanpak, die bijzonder stressvol is, nog steeds veel gebruikt. Dit artikel geeft een gedetailleerde beschrijving en demonstratie van een nieuw ontwikkelde muisbehandelingstechniek die bedoeld is om de stress die het dier tijdens menselijke interactie 2018 2018 2000 heeft ondervonden, tot een minimum te beperken. Deze handmatige techniek wordt gedurende 3 dagen uitgevoerd (3D-handling techniek) en richt zich op het vermogen van het dier om te habitueren aan de experimenteerder. Deze studie toont ook het effect aan van eerder vastgestelde tunnelbehandelingstechnieken (met behulp van een polycarbonaattunnel) en de tail-pick-up techniek. Specifiek bestudeerd zijn hun effecten op angstachtig gedrag, met behulp van gedragstests (Elevated-Plus Maze en Novelty Suppressed Feeding), vrijwillige interactie met experimenteerders en fysiologische meting (corticosteronniveaus). De 3D-handling techniek en de tunnel handling techniek verminderden angst-achtige fenotypes. In het eerste experiment, met behulp van 6 maanden oude mannelijke muizen, verbeterde de 3D-handling-techniek de interactie tussen experimenten aanzienlijk. In het tweede experiment, met behulp van 2,5 maanden oude vrouw, het verlaagde corticosteron niveaus. Als zodanig is de 3D-handling een nuttige aanpak in scenario's waarin interactie met de experimenteerder vereist of de voorkeur heeft, of waar tunnelafhandeling mogelijk niet mogelijk is tijdens het experiment.
Inleiding
Muizen en ratten zijn essentiële troeven voor preklinische studies1,2 voor meerdere doeleinden, waaronder endocriene, fysiologische, farmacologische of gedragsstudies2. Uit het toenemende aantal studies met dieren is gestegen dat ongecontroleerde omgevingsvariabelen , waaronder menselijke interactie , verschillende uitkomsten in biomedisch onderzoek beïnvloeden3,4,5. Dit is verantwoordelijk voor significante variabiliteit waargenomen in experimenten en onderzoekslaboratoria4
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Procedures met betrekking tot dieronderwerpen werden goedgekeurd door de CAMH-commissie voor dierverzorging en uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen van de Canadian Council on Animal Care.
OPMERKING: De hierin beschreven behandelingsmethode kan worden gebruikt in verschillende muizenstammen, waaronder niet-transgene (C57/BL6, BalbC, CD1, SV129, enz.) en transgene lijnen. Het kan ook worden gebruikt met jonge of oude muizen, waarbij wordt opgemerkt dat jonge volwassen (4-6 weken oude) muizen de neiging hebben iets actiever te zijn dan volwassen of oude muizen, vooral op dag 1.
1. Experimentele voorbereidi....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Er werden twee afzonderlijke studies uitgevoerd met C57BL/6 muizen. Studie #1 omvatte 6 maanden oude mannen en studie #2 2,5 maanden oude vrouwtjes (N = 36 / studie) van Jackson Laboratories (Cat #000664) omvatte. Muizen arriveerden in de faciliteit op de leeftijd van 2 maanden. Terwijl studie #2 vrouwtjes twee weken na aankomst werden behandeld en getest, werden studie #1 mannetjes pas behandeld en getest op de leeftijd van 6 maanden (vertraging als gevolg van wereldwijde pandemie-shutdown). Gedurende deze tijd stierf e.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Deze studie en methodeontwikkeling zijn gebaseerd op de observatie dat behandelingstechnieken bij muizen nog steeds over het hoofd worden gezien door de wetenschappelijke gemeenschap, en dat sommige laboratoria nog steeds terughoudend zijn om gewennijt- of hanteringstechnieken te implementeren om stress en reactiviteit van hun dieren voorafgaand aan experimenten te verminderen. Hoewel het een tijdsbesteding vertegenwoordigt, biedt de behandeling van dieren gunstige effecten voor de dieren die kunnen bijdragen aan het suc.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben geen belangenverstrengeling te onthullen.
Dankbetuigingen
De auteurs danken de Animal Care Committee van CAMH voor hun steun aan dit werk, evenals de dierenverzorgers van CAMH die uitgebreide feedback gaven over het nut van de procedure, het motiveren van de uitvoering van de beschreven experimenten en het indienen van het gedetailleerde protocol voor andere gebruikers. Dit werk werd gedeeltelijk gefinancierd door CAMH BreakThrough Challenge, toegekend aan TP, en door interne fondsen van CAMH.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 23 G x 1 in. BD PrecisionGlide algemeen gebruik steriele hypodermische naald. Reguliere wandtype en reguliere bevel. | BD | 2546-CABD305145 | Naalden voor bloedopname |
| BD Vacutainer® Veneuze Bloedopname EDTA Buizen met Lavendel BD Hemogard™ sluiting, 2,0 ml (13x75 mm), 100/pk | BD | 367841 | EDTA gecoate buizen voor bloedopname |
| Bed’o maïskolbessen ¼” Maïskolbessen laboratoriumdierbedekking | Bed-O-Cobs | BEDO1/4 | Nieuwe bedekking voor onderdrukt voeren |
| Centrifuge | Eppendorf | Centrifuge 5424 R | Voor centrifugatie van bloed. |
| Corticosterone ELISA Kit | Arbor Assays | K003-H1W | |
| Digitale Camera | Panasonic | HC-V770 | Camera om EPM/Experimentator interacties vast te leggen |
| Elevated Plus Maze | Home Made | n/a | Aangepaste Maze gemaakt van vier zwarte Plexiglas armen (twee open armen (29 cm lang door 7 cm breed) en twee gesloten armen (29 cm lang x7 cm breed met 16 cm hoge muren)) die een kruisvorm vormen met de twee open armen tegenover elkaar gehouden 55 cm boven de vloer |
| Ethanol | Medstore House Brand | 39753-P016-EA95 | Verdunnen tot 70% met Gedistilleerd water, voor reiniging |
| Ethovision XT 15 | Noldus | n/a | Geautomatiseerde diertrackingsoftware |
| Laboratorium knaagdieet | LabDiet | Knaagdieet 5001 | Standaard knaagdieet |
| Geheugenkaart | Kingstone Technology | SDA3/64GB | Voor video-opnames en bestandsoverdracht |
| Novelty Suppressed Feeding Chamber | Home Made | n/a | Aangepaste test plexiglas testkamer met heldere vloeren en muren 62 cm lang, 31 cm breed door 40 cm hoog. |
| Parlycarbonate buizen | Home Made | n/a | 13 cm lang en 5 cm in diameter |
| Purina Gisteren's nieuws gerecyclede krantenbedekking | Purina | n/a | Standaard bedekking |
| Spectrofotometer | Biotek | Epoch Microplate Reader |
Referenties
- Deacon, R. M. Housing, husbandry and handling of rodents for behavioral experiments. Nature Protocols. 1 (2), 936(2006).
- Bryda, E. C. The Mighty Mouse: the impact of rodents on advances in biomedical research. Missouri Medicine. 110
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
