Methodenartikel

Macrofaagdifferentiatie en polarisatie in een M2-achtig fenotype met behulp van een menselijke monocytachtige THP-1 leukemie cellijn

31.6K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/62652

⸱

2 augustus 2021

 ,  ,  ,  , 
1Price Institute of Surgical Research, Department of Surgery, University of Louisville

In dit artikel

Samenvatting

M2-achtige tumor-geassocieerde macrofagen (TAM) zijn geassocieerd met tumorprogressie en slechte prognose bij kanker. Dit protocol dient als een gedetailleerde gids om THP-1 monocytachtige cellen binnen 14 dagen reproduceerbaar te differentiëren en te polariseren in M2-achtige macrofagen. Dit model is de basis om de ontstekingsremmende effecten van TAM in de tumormicro-omgeving te onderzoeken.

Samenvatting

Tumor-geassocieerde macrofagen (TAM) kunnen hun expressie en cytokineprofiel veranderen op basis van externe stimuli. Deze opmerkelijke plasticiteit stelt TAM in staat zich aan te passen aan voortdurende veranderingen in de micro-omgeving van de tumor. Macrofagen kunnen voornamelijk pro-inflammatoire (M1-achtige) of ontstekingsremmende (M2-achtige) eigenschappen hebben en kunnen voortdurend schakelen tussen deze twee hoofdtoestanden. M2-achtige macrofagen in de tumoromgeving worden geassocieerd met kankerprogressie en slechte prognose bij verschillende soorten kanker. Veel verschillende methoden voor het induceren van differentiatie en polarisatie van THP-1-cellen worden gebruikt om cellulaire en intercellulaire mechanismen en de effecten van TAM in de micro-omgeving van tumoren te onderzoeken. Momenteel is er geen vastgesteld model voor M2-achtige macrofaagpolarisatie met behulp van de THP-1-cellijn en de resultaten van expressie- en cytokineprofielen van macrofagen als gevolg van bepaalde in vitro stimuli variëren tussen studies. Dit protocol dient als gedetailleerde leidraad om THP-1 monocytachtige cellen te differentiëren in M0-macrofagen en om cellen binnen 14 dagen verder te polariseren tot een M2-achtig fenotype. We demonstreren de morfologische veranderingen van THP-1 monocytachtige cellen, gedifferentieerde macrofagen en gepolariseerde M2-achtige macrofagen met behulp van lichtmicroscopie. Dit model is de basis voor cellijnmodellen die de ontstekingsremmende effecten van TAM en hun interacties met andere celpopulaties van de tumormicro-omgeving onderzoeken.

Inleiding

Tumor-geassocieerde macrofagen (TAM) en hun rol bij chronische ontsteking, het begin van kanker en tumorontwikkeling zijn belangrijke doelen in recent onderzoek1,2. Perifere bloedmonocyten die worden gerekruteerd naar de weefselmicro-omgeving van de zich ontwikkelende tumor differentiëren in macrofagen en kunnen worden gepolariseerd in twee hoofdsubtypen van macrofagen3. De klassiek geactiveerde macrofaag vertegenwoordigt het voornamelijk pro-inflammatoire M1-achtige fenotype en het alternatief geactiveerde M2-achtige subtype vertoont overwegend ontstekingsremmende kenmerken4. Macrofagen kunnen dynamisch schakelen tussen deze twee belangrijkste fenotypen, afhankelijk van hun cellulaire metabolisme, waarbij intermediaire subtypen zowel inflammatoire als ontstekingsremmende eigenschappen hebben5. TAM vertegenwoordigt een heterogene populatie van beide fenotypen. Een tumorbevorderende functie en slechte prognose bij verschillende soorten kanker wordt echter vooral geassocieerd met M2-achtige macrofagen6,7,8.

De functionele profielen van macrofagen en hun interactie met andere cellen in de micro-omgeving van de tumor zijn complex en uitdagend om vast te leggen in een voortdurend veranderende omgeving tijdens de voortdurende tumorontwikkeling. Cellijnen kunnen een homogene celpopulatie bieden met een stabiele levensvatbaarheid in cultuur, wat het proces van het aantonen van gedefinieerde cellulaire en intercellulaire mechanismen kan vergemakkelijken. De monocyt-achtige THP-1 cellijn is een legitiem modelsysteem voor primaire menselijke monocyten9. Deze spontaan vereeuwigde cellijn is verkregen uit het perifere bloed van een eenjarig kind met acute monocytische leukemie9,10. De differentiatie en polarisatie van THP-1-cellen zijn gemeld door verschillende studies en zijn op meerdere verschillende manieren uitgevoerd11,12,13,14. Activering en daarom de polarisatie van macrofagen in een M1-achtig fenotype wordt gevolgd door een compenserend ontstekingsremmend reboundmechanisme, dat een M2-achtig fenotype bevordert via cytokines geproduceerd door inflammatoire macrofagen, zoals interleukine 6 (IL-6) of itaconate15,16. Dit kan dienen als een pauzemechanisme om een overschietende ontstekingsreactie na celactivering tedempen 17. Het proces van het differentiëren en polariseren van monocyten en THP-1 monocytachtige cellen tot een ontstekingsremmend M2-achtig fenotype gaat zelf ook gepaard met pro-inflammatoire stimuli die moeten worden overwonnen. Een inflammatoire cytokinerespons kan worden veroorzaakt door mechanische stress18, zoals het veranderen van media om de cellen te voeden, of het toevoegen van chemische verbindingen om THP-1-cellen te differentiëren, zoals phorbol 12-myristate 13-acetaat (PMA), en induceert de productie van tumornecrosefactor α (TNFα), interleukine 1β (IL-1β) of IL-619. Dit veranderde cytokine-expressieprofiel als reactie op PMA kan latere macrofaagpolarisatie beïnvloeden en voorkomen20. Adequate rustperioden, zoals gemeld vóór na PMA-behandeling, zorgen ervoor dat deze ontstekingsreacties verminderen en celpolarisatie vergemakkelijken tot een duidelijk M2-achtig fenotype21.

Dit protocol demonstreert een methode om THP-1 monocytachtige cellen binnen 14 dagen te differentiëren en te polariseren tot een M2-achtig fenotype van macrofagen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

OPMERKING: Een overzicht van de stappen die in dit protocol worden beschreven, wordt weergegeven in figuur 1. De menselijke monocyt-achtige leukemie cellijn THP-1 werd gekocht. Korte tandemherhalingsanalyse werd uitgevoerd om de THP-1-cellijn te verifiëren. Voer alle stappen uit onder steriele omstandigheden. De THP-1 monocytische cellijn groeit in suspensie en hecht zich niet aan celkweekoppervlakken. Hechting kan worden geïnduceerd door monocyten te differentiëren in macrofaagachtige cellen door bijvoorbeeld mechanische stress of specifieke behandeling metPMA.

1. Kweken en onderhouden van THP-1 monocytachtige cellen

  1. Stel een timer in voor 150 s. Verwijder de bevroren injectieflacon met de THP-1 cellijn(Tabel van materialen)uit de vloeibare stikstof en ontdooi deze onmiddellijk in een schoonwaterbad (37 °C). Start de timer zodra de injectieflacon in het waterbad is gedaan. Maak de dop los om de druk los te laten die zich opbouwt als gevolg van het ontdooiproces, maar zorg ervoor dat de buisopening niet in contact komt met het water, om verontreiniging te voorkomen. De optimale tijdsperiode voor het ontdooien van de cellen ligt tussen 120-150 s. Ga door met het ontdooien van de celsuspensie totdat een ijschip ter grootte van ongeveer 4 mm in de injectieflacon achterblijft; ga vervolgens onmiddellijk door naar de volgende stap.
  2. Breng de vloeibare fase van de celsuspensie over in een buis van 15 ml met 9 ml warme (37 °C) groeimedia(tabel met materialen). Breng vervolgens 1 ml van de warme mediumcelsuspensie over in de THP-1-injectieflacon en terug in de buis van 15 ml om de resterende ijschip te smelten en de injectieflacon te spoelen om ervoor te zorgen dat er geen cellen achterblijven.
  3. Meng de suspensie voorzichtig door op en neer te pipetteren met een pipet van 1000 μL. Verwijder een klein monster (ongeveer 10 μL) om de cellen te tellen op levensvatbaarheid (met trypan blue voor uitsluiting) terwijl ze worden gesponnen. Draai de suspensie van de warme cel gedurende 7 minuten bij 37 °C op 200 x g.
  4. Verwijder het supernatant volledig en resuspend met een bepaald volume warm groeimedium om een celdichtheid van 5 x 105/ ml te bereiken. Meng de suspensie voorzichtig en breng 22 ml volume over in T-75 celkweekkolven(Materialentabel). Bewaar kolven rechtop in een incubator bij 37 °C met een concentratie van 5% kooldioxide (CO2). Wissel de groeimedia om de 3-4 dagen uit.

2. Zaaien van THP-1-cellen en differentiatie in M0-macrofagen

  1. Bereid de cel met groeimedium met de respectieve celdichtheid voor zaadcellen met een dichtheid van 3 x 105/ ml / goed in 24-well celkweekplaten(Tabel met materialen). Meng het medium voorzichtig en bereid aliquots van 26 ml, elk in een buis van 50 ml. Gebruik elke 26 ml aliquot voor het zaaien van de cellen in een respectievelijke plaat.
  2. Breng 1 ml van het celbevattende medium over in elke put van een plaat met 24 putten. Meng de media voorzichtig door tussen de overdrachten op en neer te pipetteren.
  3. Bereid een stamoplossing van PMA (los 1 mg PMA op in 100 μL dimethylsulfoxide (DMSO) = ~ 16 mM oplossing van PMA in DMSO) en verdun deze met koude fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) tot een eindwerkconcentratie van 10 ng / μL vlak voor celbehandeling (Tabel met materialen). Houd de oplossing op ijs en gebruik deze onmiddellijk. Niet opnieuw invriezen. Voeg 100 ng PMA per put toe. Laat elke celplaat 72 uur in de couveuse zitten zonder verdere behandeling.
  4. Verwijder na 72 uur het groeimedium en vervang het door 1 ml vers groeimedium. Raak de bodem van de putten niet aan met pipetpunten. Laat de cellen nog 96 uur rusten in de couveuse.
  5. Herhaal na 96 uur stap 2.4 (mediaverandering) en laat de cellen nog 24 uur rusten.
    OPMERKING: De M0-macrofagen zijn nu klaar om te worden gebruikt voor experimenten(figuur 2). Onmiddellijk voorafgaand aan de behandeling van de cellen als onderdeel van verdere experimenten, overweeg een mediaverandering met alleen RPMI (Tabel met materialen), omdat groeimediasupplementen interferentie kunnen veroorzaken met reagentia die worden toegevoegd voor celbehandeling. Indien M2-achtige macrofagen nodig zijn, gaat u verder met rubriek 3.

3. Polarisatie van M0-macrofagen in M2-achtige macrofagen

  1. Bereid een stamoplossing van IL-4 en IL-13 (los 20 μg IL-4 of IL-13 op in 200 μL nucleasevrij water) en verdun deze onmiddellijk voorafgaand aan de celbehandeling tot een eindwerkconcentratie van 2 ng/μL met PBS. Houd de oplossing op ijs en gebruik deze onmiddellijk. Niet opnieuw invriezen.
  2. Verwijder het groeimedium en vervang het door 1 ml vers groeimedium. Voeg 20 ng interleukine 4 (IL-4) en 20 ng interleukine 13 (IL-13) per put toe. Laat de cellen 48 uur rusten in de couveuse.
  3. Herhaal stap 3.2 na 48 uur. Laat de cellen nog 48 uur rusten in de couveuse.
  4. Verwijder het groeimedium en vervang het door 1 ml vers groeimedium. Laat de cellen 48 uur rusten in de couveuse.
    OPMERKING: M2-achtige macrofagen zijn nu klaar om te worden gebruikt voor experimenten(figuur 2). Onmiddellijk voorafgaand aan de behandeling van de cellen als onderdeel van verdere experimenten, overweeg een mediaverandering met alleen RPMI (Tabel met materialen), omdat groeimediasupplementen interferentie kunnen veroorzaken.

4. Losmaken en oogsten van macrofagen voor flowcytometrie

OPMERKING: Gebruik een mechanische methode die koud schokken en celschrapen combineert om de gepolariseerde macrofagen van platen los te maken en te oogsten voor flowcytometrie.

  1. Verwijder het warme celmedium en vervang het door een mengsel van ijskoud PBS (zonder calcium en magnesium) en 5% foetaal runderserum (FBS), 1 ml per put. Plaats direct hierna de celplaat gedurende 45 minuten op ijs. Plaats de celplaat niet op ijs voordat het warme celmedium is verwijderd, omdat dit de levensvatbaarheid van de cel aanzienlijk zal verminderen. Houd de cellen alleen op ijs na het induceren van koude schokken met ijskoud PBS / 5% FBS-mengsel.
  2. Na 45 minuten op ijs, schraap de cellen af met behulp van mini-celschrapers(Table of Materials). Breng de losgemaakte macrofagen in koude PBS/5% FBS voorzichtig over in een buis van 15 ml. Houd de buis te allen tijde op ijs totdat de cellen gekleurd zijn.
    OPMERKING: Pool acht putten van cellen om voldoende celtellingen voor kleuring te bereiken.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

M2-achtige macrofagen werden gekarakteriseerd en M2-polarisatie werd gevalideerd met behulp van flowcytometrie voor Cluster of Differentiation markers (CD) CD14, CD11b, CD80 (M1-achtige marker) en CD206 (M2-achtige marker). Flowcytometriekleuring werd uitgevoerd volgens de instructies van de fabrikant. Macrofagen werden gewassen met PBS/5% FBS en geïncubeerd met Fcγ-receptorblok om niet-specifieke binding te voorkomen. Cellen werden vervolgens gekleurd met FITC-geconjugeerde muis anti-humane CD14- en CD80-antilichamen, m...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Dit protocol voor het differentiëren en polariseren van THP-1 monocytachtige cellen binnen 14 dagen biedt een methode om macrofagen te verkrijgen met een duidelijk M2-achtig fenotype als gevolg van lange behandeling incubatie van cellen met voldoende rustperioden tussen stappen.

Bepaalde stappen zijn van cruciaal belang voor dit protocol. De verdubbelingstijd van THP-1 monocyten is ongeveer 26 uur. Cellen kunnen worden gesplitst met een celdichtheid van 9 x 105/ ml en moeten worden ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs verklaren geen potentiële belangenconflicten te hebben.

Dankbetuigingen

Het Price Institute of Surgical Research, University of Louisville, wordt financieel ondersteund door de John W. Price en Barbara Thruston Atwood Price Trust. De financieringsbronnen speelden geen rol in de opzet en uitvoering van het onderzoek en in het verzamelen, beheren, analyseren en interpreteren van de gegevens.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
0.4% trypan blueVWR, Radnor, USA152-5061
1.5 mL microcentrifuge tubeUSA Scientific, Ocala, USA1615-5510
10 mL serological pipetVWR, Radnor, USA 89130-898
1000 μL TipOne pipet tipsUSA Scientific, Ocala, USA1111-2821
15 mL  Centrifuge tubeVWR, Radnor, USA89039-664
20 μL TipOne pipet tipsUSA Scientific, Ocala, USA1120-1810
200 μL TipOne pipet tipsUSA Scientific, Ocala, USA1120-8810
25 mL serological pipetVWR, Radnor, USA 89130-900
5 mL serological pipetVWR, Radnor, USA 89130-896
50 mL Centrifuge tubeVWR, Radnor, USA89039-662
Accutase solution 500 mLSigma, St. Louis, USAA6964
Antibiotic Antimycotic Solution (100x), stabilizedSigma, St. Louis, USAA5955-100 mLmet 10.000 eenheden penicilline, 10 mg streptomycine en 25 μg amfotericine B per mL, steriel gefilterd, BioReagent, geschikt voor celkweek
Binder CO2 IncubatorVWR, Radnor, USAC170-ULE3
CytoOne T-75cm flask with filter capUSA Scientific, Ocala, USACC7682-4875
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (PBS)Sigma, St. Louis, USAD8537-500 mLEr moet PBS zonder calciumchloride en magnesiumchloride worden gebruikt, omdat beide de macrofaagpolarisatie kunnen veranderen
Eppendorf Centrifuge 5804 R (refrigerated)Eppendorf, Enfield, USA-
Ethyl alcohol (70%)--
FACSCalibur flow cytometerBD Biosciences, San Diego, USA-De flowcytometer werkt met CellQuest software (BD Biosciences)
Falcon 24-well plateVWR, Radnor, USA353504
Fetal Bovine Serum (FBS)ATCC, Manassas, USA30-2020
FITC Mouse Anti-Human CD14BD Biosciences, San Diego, USA555397Flow cytometry, myeloid cell marker (100 tests)
FITC Mouse Anti-Human CD80BD Pharmingen, San Diego, USA557226Flow cytometry, M1 marker (100 tests)
FITC Mouse IgG1 κ Isotype ControlBD Pharmingen, San Diego, USA555748Flow cytometry, isotype control for CD80 (100 tests)
FITC Mouse IgG2a, κ Isotype ControlBD Biosciences, San Diego, USA553456Flow cytometry, isotype control for CD14 (100 tests)
Human BD Fc BlockBD Biosciences, San Diego, USA564220Flow cytometry, Fc block (0,25 mg)
Human interleukin 13 (IL-13)R&D, Minneapolis, USAIL-771-10 μg
Human interleukin 4 (IL-4)R&D, Minneapolis, USASRP3093-20 μg
Labconco Biosafety Cabinet (Delta Series 36212/36213)Labconco, Kansas City, USA-
L-Glutamine Solution, 200 mMATCC, Manassas, USA30-2214
Lipopolysaccharide (LPS) from E. coli 0111:B4Sigma, St. Louis, USAL2630-100 mg
Mini Cell ScrapersBiotium, Fremont, USA22003
Neubauer hemocytometerFisher Scientific, Waltham, USA02-671-5
Nikon Eclipse inverted microscope TS100Nikon, Melville, USA-
Nuclease-free waterInvitrogen, Carlsbad, USAAM9937
Olympus Light Microscope RH-2Microscope Central, Feasterville, USA40888
P10 variable pipet- GilsonVWR, Radnor, USA76180-014
P1000 variable pipet-GilsonVWR, Radnor, USA76177-990
P200 variable pipet- GilsonVWR, Radnor, USA76177-988
PE Mouse Anti-Human CD11bBD Biosciences, San Diego, USA555388Flow cytometry, myeloid cell marker (100 tests)
PE Mouse IgG1, κ Isotype ControlBD Biosciences, San Diego, USA555749Flow cytometry, isotype control for CD11b (100 tests)
PE-Cy 5 Mouse Anti-Human CD206BD Pharmingen, San Diego, USA551136Flow cytometry, M2 marker (100 tests)
PE-Cy 5 Mouse IgG1 κ Isotype ControlBD Pharmingen, San Diego, USA555750Flow cytometry, isotype control for CD206 (100 tests)
Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)Sigma, St. Louis, USAP8139
Powerpette Plus pipettorVWR, Radnor, USA75856-448
Precision Water bath (model 183)Precision Scientific, Chicago, USA66551
RPMI-1640 MediumATCC, Manassas, USA30-2001
THP-1 cell line, American Type Culture Collection (ATCC)ATCC, Manassas, USATIB-202

Referenties

  1. Zhang, R., et al. Cancer-associated fibroblasts enhance tumor-associated macrophages enrichment and suppress NK cells function in colorectal cancer. Cell Death and Disease. 10 (4), 273(2019).
  2. Wang, J., Li, D., Cang, H., Guo, B. Crosstalk between cancer and immune cells: Role of tumor-associated macrophages in the tumor microenvironment. Cancer Medicine. 8 (10), 4709-4721 (2019).
  3. Soncin, I., et al. The tumor microenvironment creates a niche for the self-renewal of tumor-promoting macrophages in colon adenoma. Nature Communications. 9 (1), 582(2018).
  4. Mosser, D. M., Edwards, J. P. Exploring the full spectrum of macrophage activation. Nature Reviews Immunology. 8 (12), 958-969 (2008).
  5. Mazzone, M., Menga, A., Castegna, A. Metabolism and TAM functions-it takes two to tango. Federation of European Biochemical Societies Journal. 285 (4), 700-716 (2018).
  6. Eum, H. H., et al. Tumor-promoting macrophages prevail in malignant ascites of advanced gastric cancer. Experimental and Molecular Medicine. 52 (12), 1976-1988 (2020).
  7. Qian, B. Z., Pollard, J. W. Macrophage diversity enhances tumor progression and metastasis. Cell. 141 (1), 39-51 (2010).
  8. Scheurlen, K. M., Billeter, A. T., O'Brien, S. J., Galandiuk, S. Metabolic dysfunction and early-onset colorectal cancer - how macrophages build the bridge. Cancer Medicine. 9 (18), 6679-6693 (2020).
  9. Bosshart, H., Heinzelmann, M. THP-1 cells as a model for human monocytes. Annals of Translational Medicine. 4 (21), 438(2016).
  10. The American Type Culture Collection (ATCC). , Available from: https://www.atcc.org/products/all/TIB-202.aspx#generalinformation (2021).
  11. Baxter, E. W., et al. Standardized protocols for differentiation of THP-1 cells to macrophages with distinct M(IFNgamma+LPS), M(IL-4), and M(IL-10) phenotypes. Journal of Immunological Methods. 478, 112721(2020).
  12. Genin, M., Clement, F., Fattaccioli, A., Raes, M., Michiels, C. M1 and M2 macrophages derived from THP-1 cells differentially modulate the response of cancer cells to etoposide. BMC Cancer. 15, 577(2015).
  13. Starr, T., Bauler, T. J., Malik-Kale, P., Steele-Mortimer, O. The phorbol 12-myristate-13-acetate differentiation protocol is critical to the interaction of THP-1 macrophages with Salmonella Typhimurium. PLoS One. 13 (3), 0193601(2018).
  14. Lund, M. E., To, J., O'Brien, B. A., Donnelly, S. The choice of phorbol 12-myristate 13-acetate differentiation protocol influences the response of THP-1 macrophages to a pro-inflammatory stimulus. Journal of Immunological Methods. 430, 64-70 (2016).
  15. Yin, Z., et al. IL-6/STAT3 pathway intermediates M1/M2 macrophage polarization during the development of hepatocellular carcinoma. Journal of Cellular Biochemistry. 119 (11), 9419-9432 (2018).
  16. O'Neill, L. A. J., Artyomov, M. N. Itaconate: the poster child of metabolic reprogramming in macrophage function. Nature Reviews Immunology. 19 (5), 273-281 (2019).
  17. Luig, M., et al. Inflammation-induced IL-6 functions as a natural brake on macrophages and limits gn. Journal of the American Society of Nephrology. 26 (7), 1597-1607 (2015).
  18. Maruyama, K., Nemoto, E., Yamada, S. Mechanical regulation of macrophage function - cyclic tensile force inhibits NLRP3 inflammasome-dependent IL-1beta secretion in murine macrophages. Inflammation and Regeneration. 39, 3(2019).
  19. Gatto, F., et al. PMA-Induced THP-1 Macrophage Differentiation is Not Impaired by Citrate-Coated Platinum Nanoparticles. Nanomaterials (Basel). 7 (10), (2017).
  20. Maess, M. B., Wittig, B., Cignarella, A., Lorkowski, S. Reduced PMA enhances the responsiveness of transfected THP-1 macrophages to polarizing stimuli. Journal of Immunological Methods. 402 (1-2), 76-81 (2014).
  21. Daigneault, M., Preston, J. A., Marriott, H. M., Whyte, M. K., Dockrell, D. H. The identification of markers of macrophage differentiation in PMA-stimulated THP-1 cells and monocyte-derived macrophages. PLoS One. 5 (1), 8668(2010).
  22. Raggi, F., et al. Regulation of human macrophage M1-M2 polarization balance by hypoxia and the triggering receptor expressed on myeloid cells-1. Frontiers in Immunology. 8, 11097(2017).
  23. Neutelings, T., Lambert, C. A., Nusgens, B. V., Colige, A. C. Effects of mild cold shock (25 degrees C) followed by warming up at 37 degrees C on the cellular stress response. PLoS One. 8 (7), 69687(2013).
  24. Kurashina, Y., et al. Enzyme-free release of adhered cells from standard culture dishes using intermittent ultrasonic traveling waves. Communications Biology. 2, 393(2019).
  25. Chen, S., So, E. C., Strome, S. E., Zhang, X. Impact of Detachment Methods on M2 Macrophage Phenotype and Function. Journal of Immunological Methods. 426, 56-61 (2015).
  26. Bailey, J. D., et al. Isolation and culture of murine bone marrow-derived macrophages for nitric oxide and redox biology. Nitric Oxide. 100-101, 17-29 (2020).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

M2 achtige macrofagenTHP 1 cellijnmacrofaagpolarisatietumorgeassocieerde macrofagenanti inflammatoire macrofagenflowcytometrieCD14 markerCD206 markerinterleukine 4

Gerelateerde artikelen