Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

N-glycaanprofilering van glycoproteïnen door hydrofiele interactie Vloeistofchromatografie met fluorescentie en massaspectrometrische detectie

1.3K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/62751

⸱

25 september 2021

 , 
1Department of Biomedical Engineering, Karabuk University, 2Department of Chemistry, Hacettepe University

In dit artikel

Samenvatting

N-glycaanprofilering van glycoproteïnen is essentieel voor het ontdekken van nieuwe biomarkers en het begrijpen van glycaanfuncties in cellulaire gebeurtenissen. Bovendien is N-glycaananalyse van biofarmaceutica in eiwitten erg belangrijk voor menselijk gebruik. In dit huidige artikel werd een high-throughput strategie voor het identificeren en kwantificeren van N-glycaanstructuren gepresenteerd met behulp van de HILIC-FLD-MS/MS-techniek.

Samenvatting

Glycosylering is een essentiële wijziging die wordt aangetroffen in eiwitten. N-glycaanprofilering van glycoproteïnen is nodig om nieuwe biomarkerkandidaten te detecteren en glycaanveranderingen in ziekten te bepalen. De meeste in de handel verkrijgbare biofarmaceutische eiwitten zijn glycoproteïnen. De werkzaamheid van deze geneesmiddelen wordt beïnvloed door glycosyleringspatronen. Daarom is een diepgaande karakteriseringsmethode voor de N-glycanen noodzakelijk. Hier presenteren we een uitgebreide benadering voor kwalitatieve en kwantitatieve analyse van N-glycanen met behulp van hydrofiele interactie vloeistofchromatografie uitgerust met fluorescentiedetectie en tandem-massaspectrometrie (HILIC-FLD-MS/MS). N-glycanen werden met een gemakkelijke methode vrijgemaakt uit glycoproteïnen en gelabeld met een procaïnamidefluorofoor-tag in de strategie. Vervolgens werden de met procaïnamide gelabelde N-glycanen geanalyseerd met een HILIC-FLD-MS/MS-techniek. In deze benadering werden N-glycaanstructuren bevestigd door de tandem massaspectrometrische analyse, terwijl fluorescentiedetectie werd gebruikt voor de kwantitatieve analyse. In het onderzoek wordt een toepassing beschreven voor data-analyse van de gedetecteerde N-glycaanpieken. Dit protocol kan worden toegepast op elk glycoproteïne dat uit verschillende soorten wordt geëxtraheerd.

Inleiding

Glycosylering is een essentiële posttranslationele modificatie die wordt waargenomen in eiwitten1. Meerdere enzymatische processen reguleren de modificatie van glycosylering in cellulaire organismen. Glycanen worden door deze enzymatische processen aan de eiwitten gehecht en de eiwitten die aan deze wijziging worden onderworpen, worden glycoproteïnen1 genoemd. Twee soorten glycosylering worden vaak waargenomen in eiwitten. O-glycosylering is de hechting van O-glycanen aan de zijketen van serine- of threonine-aminozuurresiduen. N-glycosylering is de hechting van N-glycanen aan de zijketen van asparagine-aminozuurresidu in een eiwit.

De structuur, stabiliteit en vouwing van de eiwitten worden beïnvloed door glycaanbindingen2. Het glycosyleringsproces heeft een dramatische invloed op de functies van de eiwitten en glycoproteïnen reguleren veel cellulaire functies in organismen 3,4. Zwaar geglycosyleerde eiwitten beschermen bijvoorbeeld hun glycoproteïnen tegen proteolytische afbraak5. Een ander voorbeeld zijn glycanen van schildkliereiwitten die het Tg-transport en de hormoonsynthese reguleren 6,7. Om hun rol in cellulaire gebeurtenissen te verklaren, is een diepgaande karakterisering van glycoproteïnen nodig8.

N-glycaanprofielen van de glycoproteïnen veranderen in ziektesituaties 9,10,11,12. Het profileren van N-glycanen afgeleid van cruciale glycoproteïnen of lichaamsvloeistoffen is nodig om nieuwe biomarkers te ontdekken en de enzymatische activiteitsveranderingen in ziektegevallen te begrijpen. Aan de andere kant zijn de meeste biofarmaceutica glycoproteïnen en beïnvloeden hun glycaanprofielen de werkzaamheid van geneesmiddelen13. Daarom moet een aanvaardbare methode voor N-glycaanprofilering worden uitgevoerd bij de ontwikkeling van de juiste eiwitbiofarmaceutica voor menselijk gebruik14.

Glycomics is een opkomende discipline die wordt gebruikt om glycaanstructuren van geglycosyleerde moleculen te identificeren en te kwantificeren15,16. Er zijn veel methoden gebruikt voor het profileren van de glycanen van geglycosyleerde soorten, waaronder NMR17 en MS18. Hydrofiele interactie vloeistofchromatografie - met fluorescentiedetectie (HPLC-HILIC-FLD) is de gouden standaardmethode voor het profileren van N-glycanen afgeleid van glycoproteïnen19. Wanneer deze strategie wordt gecombineerd met massaspectrometrische detectie, kan het identificeren van N-glycaanstructuren eenvoudiger en betrouwbaarder zijn. De meeste fluorescentietags die worden gebruikt in N-glycaananalyse met massaspectrometrie hebben een lage ionisatie-efficiëntie. Daarentegen verhoogt procaïnamide de ionisatie-efficiëntie van N-glycanen, wat wordt gebruikt om efficiënte tandemmassaspectra van N-glycaanstructuren te verkrijgen20,21. Specifieke fragmenten kunnen uit deze strategie worden verkregen door middel van tandem-massaspectrometrie voor de structurele identificatie van N-glycanen zoals kern fucosyleer22 (proc-HexNAc1Fuc1) en doorsnijdingstypen23 (proc-Hex1HexNAc3, proc-Hex1HexNAc3).

Deze studie demonstreert een eenvoudig protocol voor de N-glycaanprofilering van glycoproteïnen met HILIC-FLD-MS/MS. De gepresenteerde methode omvat vier stappen: (1) het vrijmaken van N-glycanen uit glycoproteïnen, (2) labeling van N-glycanen door een procaïnamide-tag, (3) zuivering van de procaïnamide-gelabelde N-glycanen, en (4) gegevensanalyse.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

OPMERKING: Het gebruikte menselijk plasma is in de handel verkrijgbaar (Materiaaltabel). Er werden geen verdere biologische monsters van mensen gebruikt.

1. Afgifte van glycaan

  1. Denaturatie van (glyco-)eiwitten
    1. Bereid de glycoproteïnestandaarden (bijv. IgG, een monoklonaal antilichaam) voor bij een concentratie van een 10 μg·μL-1 in gedeïoniseerde H2O. Voor menselijk plasma wordt 70 μgμL-1 gebruikt.
      OPMERKING: De monsters moeten worden gevortexed totdat alle vaste eiwitten zijn opgelost. Menselijk plasma (gevriesdroogd) werd gebruikt voor de bereiding van de plasmamonsters.
    2. Neem 20 μL glycoproteïnemonsters (200 μg) en gevriesdroogd menselijk plasma (1,4 mg).
    3. Voeg 40 μL 2% SDS (natriumdodecylsulfaat) (w/v) toe.
    4. Incubeer de monsters gedurende 10 minuten bij 60 °C om de (glyco-)eiwitten te denatureren.
      OPMERKING: De monsters kunnen tijdens de incubatie bij 500 tpm door een thermomixer worden gemengd. Als alternatief kan een schudwaterbad worden gebruikt.
  2. Glycaan afgifte
    1. Voeg 20 μL 4% Igepal-CA630 toe aan de monsters uit stap 1.1.4.
    2. Voeg 20 μL 5x PBS (fosfaatbuffer zoutoplossing) toe.
    3. Bereid het PNGase F-enzym voor in een concentratie van 1 U·μL-1 in gedeïoniseerd water.
    4. Voeg 1 U enzym toe voor glycoproteïnestandaarden en 2 U enzym voor menselijke plasmamonsters.
    5. Incubeer de monsters gedurende 16 uur bij 37 °C.
  3. Procaïnamide-etikettering
    1. Bereid de etiketteringsoplossing met behulp van procaïnamidezoutzuur (110 mg·ml-1 in DMSO/AA (dimethylsulfoxide/ijsazijn) 7/3, v/v).
    2. Bereid reductieve amineringsoplossing met behulp van natriumcyanoborohydride (65 mg·ml-1 in DMSO/AA, 7/3, v/v).
      LET OP: Natriumcyaanoborohydride is zeer giftig en ontvlambaar. Draag oogbeschermers. 2-picoline boraancomplex (107 mg·ml-1 in DMSO) zou als alternatief kunnen worden gebruikt.
    3. Meng deze oplossingen in een verhouding van 1:1, v/v om het etiketteringsmengsel te bereiden.
    4. Voeg 100 μL van dit etiketteringsmengsel toe aan het glycaanvrijgekomen monster uit stap 1.2.5.
    5. Incubeer de monsters gedurende 2 uur bij 65 °C.

2. Zuivering van procaïnamide-gelabelde N-glycanen door middel van vastefase-extractie (SPE) cartridge

  1. Bereid een oplossing van microkristallijne cellulose (100 mg·ml-1) in gedeïoniseerd water.
  2. Neem 300 μL microkristallijne cellulose en breng deze in de microcentrifugebuisjes in.
  3. Was de microkristallijne cellulose met 1 ml gedeïoniseerde H2O.
  4. Was de microkristallijne cellulose met 1 ml ACN/MQ (acetonitril/dH2O), 85/15, v/v voor conditionering.
    OPMERKING: De microcentrifuge moet 1 minuut worden gebruikt om de wasoplossing voorzichtig weg te gooien.
  5. Neem 120 μL glycaanafgifteoplossing en meng met 680 μL ACN om de juiste laadcondities te verkrijgen (85/15, v/v, ACN/monster).
  6. Meng dit mengsel met microkristallijne cellulose in de microcentrifugebuisjes.
  7. Incubeer het bij kamertemperatuur in een thermomixer door 15 minuten op 500 tpm te schudden.
  8. Breng de slurry over naar een SPE-patroon (1 ml volumecapaciteit).
    OPMERKING: Zorg ervoor dat er geen lucht in de patroonverpakking komt.
  9. Gooi de laadoplossingen weg door langzaam te passeren (1 druppel/seconde).
    NOTITIE: Zorg ervoor dat het SPE-systeem is aangesloten op de vacuümpomp. Oplosmiddelen kunnen met de zwaartekracht meestromen. Pas indien nodig vacuüm toe via een vacuümpomp. De toegepaste vacuümdruk moet op de juiste manier worden aangepast om vloeistoffen langzaam naar beneden te transporteren.
  10. Was het monster door tweemaal 1 ml ACN/MQ/TFA (acetonitril/dH2O/trifluorazijnzuur) oplossing (85/14/1, v/v/v) te gieten.
  11. Was het monster door tweemaal 1 ml ACN/MQ-mengsel (85/15, v/v) te passeren.
  12. Elute de procaïnamide-gelabelde N-glycanen met 0,75 ml water.
  13. Droog de elutieoplossing een nacht met een concentrator.
    OPMERKING: Gebruik voor het drogen een concentratortemperatuur van 45 °C.
  14. Los de gedroogde monsters op in een mengsel van 100 μl ACN/MQ (75/25, v/v) en breng deze oplossing over in de injectieflacons, inclusief een inzetstuk.
    OPMERKING: De opnieuw opgeloste monsters moeten gedurende 20 seconden worden gevortexd.

3. HILIC-FLD-MS/MS-analyse

  1. Plaats T-adapters in de HILIC-kolom om de stroom in twee gelijke volumes te scheiden. Sluit een van beide aan op de FLD-detector, de andere op de MS-detector.
    OPMERKING: De stroomleidingen moeten dezelfde lengte hebben.
  2. Pas een gradiëntprogramma aan voor HILIC-scheidingen van procaïnamide-gelabelde N-glycanen, zoals aangegeven in aanvullende figuur 1. Gebruik Mobiele Fase A: 50 mM ammoniumformiaat (pH: 4,4 en Mobiele Fase B: 100 % ACN).
    OPMERKING: Het gradiëntprogramma kan verder worden geoptimaliseerd, afhankelijk van de glycane heterogeniteit van monsters.
  3. Klik op de knop Sampler en stel het injectievolume in op 10 μl.
  4. Klik op de Column Comp en stel de kolomtemperatuur in op 60 °C.
  5. Klik op FLD en pas de FLD-excitatie- en emissiegolflengten aan op respectievelijk 310 nm en 370 nm.
  6. Pas de MS-bron-, tune- en MS/MS-parameters aan zoals weergegeven in aanvullende afbeelding 2.
    OPMERKING: De MS- en MS/MS-parameters kunnen worden gewijzigd, afhankelijk van de massaspectrometrie die in de analyse wordt gebruikt.

4. Gegevensanalyse

  1. Identificatie van procaïnamide-gelabelde N-glycanen
    1. Exporteer MS/MS-gegevens in een geschikt formaat voor het doorzoeken van databases (bijv. .mgf, .xml).
    2. Plaats ze in een database-zoekinstrument voor de identificatie van N-glycanen.
    3. Selecteer de monsternaam die in de software wordt vermeld en klik op de knop Glycaan zoeken voor de identificatie van procaïnamide-gelabelde N-glycanen met behulp van de Carbbank-database met gegeven parameters (aanvullende afbeelding 3).
    4. Open de knop Chromatogrammen bewerken in de data-analysesoftware voor onbewerkte gegevens en selecteer het geëxtraheerde ionchromatogramtype door in alle MSn te filteren.
    5. Voeg specifieke massa's toe voor kern-gefucosyleerd fragment proc-N1F1 (m/z 587.3+) en doorgesneden fragmenten proc-H1N3 (m/z 1009.5+) en proc-H1N3F1 (m/z 1155.5+).
    6. Bepaal de voorlopers die kern-fucosylated en doorsneden N-glycaanstructuurfragmenten bevatten.
    7. Exporteer de geïdentificeerde N-glycaanstructuren door de software (aanvullende tabel 1-3).
    8. Controleer de handmatig gedetecteerde voorlopers voor de bepaling van de gefucosyleerde en in tweeën gesneden N-glycaanstructuren.
  2. Kwantificering van procaïnamide-gelabelde N-glycanen door een open-source software24
    1. Selecteer FLD-chromatogram in de chromatogrammen en klik op de methode in de software. Open een methode voor het exporteren van chromatogrammen als XY-bestandsindeling.
    2. Converteer het .xy-bestandsformaat van geëxporteerde chromatogrammen naar .txt bestanden.
    3. Open de software voor kwantitatieve analyse.
      OPMERKING: De software die in het onderzoek is gebruikt, kan worden gedownload van een Github-bron (https://github.com/Tarskin/HappyTools).
    4. Volg de instructies en tutorials van het programma dat door de ontwikkelaar wordt gepresenteerd.
      OPMERKING: Het wordt aanbevolen om een batchproces te gebruiken om relatieve gebieden te exporteren.
    5. Pas de instelparameters aan (aanvullende afbeelding 4). Definieer vier minimale pieken en 27 signaal/ruisverhoudingen voor kalibraties.
    6. Open het resultatenbestand met de juiste software zoals Microsoft Excel voor verdere evaluatie.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

In deze gepresenteerde aanpak werden de N-glycanen eerst vrijgegeven, gelabeld met het procaïnamide-label en gezuiverd door cellulose-bevattende SPE-cartridges. Vervolgens werd N-glycaananalyse van IgG, trastuzumab en humaan plasma uitgevoerd door een HPLC-HILIC-FLD-MS/MS-systeem. De MS (base peak) en FLD chromatogrammen van de bepaalde N-glycaanstructuren verkregen uit respectievelijk IgG en trastuzumab worden weergegeven in figuur 1

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

N-glycaanprofilering van glycoproteïnen omvat uitdagende stappen. Hoewel er veel verschillende methodologieën voor dit doel zijn, moet een geschikte benadering worden gekozen voor zowel de identificatie als de kwantificering van N-glycaanstructuren 14. HILIC-FLD is de gouden standaardbenadering voor de kwantificering van N-glycanen. Identificatie van alle N-glycaantypen door FLD-detectie wordt echter niet bereikt. Daarom is tand...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

Dit werk werd mede mogelijk gemaakt door het Ministerie van Ontwikkeling-Republiek Turkije met projectnummer: 2016 K121230. Bekir Salih dankt de Turkse Academie van Wetenschappen (TUBA) voor de gedeeltelijke financiële steun.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
AzijnzuurCarlo Erba Reagents401413Glacial RS Voor LC/MS
AcetonitrileMerck1000292500LC-MS LiChrosolv
Agilent 1200 Series HPLC met 1260 Series FLD dedectorAgilent Technologies
AmmoniumformiaatCarlo Erba Reagents419741Voor LC/MS
Bruker TIMS-TOF (Q-TOF) MassaspectrometrieBruker Daltonics
CelluloseSigma Aldrich310697microkristallijn, poeder, 20 μm
De-ioniseerd waterCarlo Erba Reagents412111Voor LC/MS
DimethylsulfoxideSigma Aldrich41639BioUltra, voor moleculaire biologie, ≥99,5% (GC)
Lege polypropyleen SPE-buis met PE-fritSigma Aldrich5422020 μm porositeit, volume 1 mL
Extractie Manifold, 20-positiesWatersWAT200607Compleet met rek voor 13 x 100 mm buizen
Menselijk plasmaSigma AldrichP9523gevriesdroogd
IGEPAL CA-630Sigma AldrichI8896voor moleculaire biologie
IgGSigma AldrichI4506gevriesdroogd poeder
Fosfaatgebufferd zoutwaterSigma AldrichP4417Tablet
PNGase F enzymPromegaV483A
Procaïnamidehydrochlorideabcamab120955
NatriumcyanoborohydrideSigma Aldrich156159reagenskwaliteit, 95%
NatriumdodecylsulfaatSigma Aldrich71725
trastuzumabRoche Diagnostics
TrifluorazijnzuurSigma Aldrich302031voor HPLC, ≥99,9%

Referenties

  1. Dwek, R. A. Glycobiology: Toward understanding the function of sugars. Chemical Reviews. 96 (2), 683-720 (1996).
  2. Varki, A. Biological roles of glycans. Glycobiology. 27 (1), 3-49 (2016).
  3. Spiro, R. G. Protein glycosylation: nature, distribution, enzymatic formation, and disease implications of glycopeptide bonds. Glycobiology. 12 (4), 43(2002).
  4. Apweiler, R., Hermjakob, H., Sharon, N. On the frequency of protein glycosylation, as deduced from analysis of the SWISS-PROT database. Biochimica et Biophysica Acta. 1473 (1), 4-8 (1999).
  5. Stavenhagen, K., et al. and O-glycosylation Analysis of Human C1-inhibitor Reveals Extensive Mucin-type O-Glycosylation. Molecular & Cellular Proteomics. 17 (6), 1225-1238 (2018).
  6. Ząbczyńska, M., Kozłowska, K., Pocheć, E. Glycosylation in the Thyroid Gland: Vital Aspects of Glycoprotein Function in Thyrocyte Physiology and Thyroid Disorders. International Journal of Molecular Sciences. 19 (9), (2018).
  7. Mallet, B., et al. N-Glycans Modulate in Vivo and in Vitro Thyroid Hormone Synthesis: Study at the N-Terminal Domain Of Thyroglobulin. Journal of Biological Chemistry. 270 (50), 29881-29888 (1995).
  8. Dong, X., et al. Advances in mass spectrometry-based glycomics. Electrophoresis. 39 (24), 3063-3081 (2018).
  9. Ohtsubo, K., Marth, J. D. Glycosylation in cellular mechanisms of health and disease. Cell. 126 (5), 855-867 (2006).
  10. Koçak, ÖF., et al. N-glycan profiling of papillary thyroid carcinoma tissues by MALDI-TOF-MS. Analytical Biochemistry. 584, 113389(2019).
  11. Peng, W., et al. Clinical application of quantitative glycomics. Expert Review of Proteomics. 15 (12), 1007-1031 (2018).
  12. Yaman, M. E., Kayili, H. M., Albayrak, M., Kadioglu, Y., Salih, B. Differential N-glycosylation profiling of formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) invasive ductal carcinoma tissues using MALDI-TOF-MS. Molecular Omics. 17 (3), 394-404 (2021).
  13. Liu, L. Antibody Glycosylation and Its Impact on the Pharmacokinetics and Pharmacodynamics of Monoclonal Antibodies and Fc-Fusion Proteins. Journal of Pharmaceutical Sciences. 104 (6), 1866-1884 (2015).
  14. Zhang, L., Luo, S., Zhang, B. Glycan analysis of therapeutic glycoproteins. mAbs. 8 (2), 205-215 (2016).
  15. Hart, G. W., Copeland, R. J. Glycomics Hits the Big Time. Cell. 143 (5), 672-676 (2010).
  16. West, C. M., Malzl, D., Hykollari, A., Wilson, I. B. H. Glycomics, Glycoproteomics, Glycogenomics: An Inter-Taxa Evolutionary Perspective. Molecular & Cellular Proteomics. 20, 100024(2021).
  17. Unione, L., et al. Glycoprofile Analysis of an Intact Glycoprotein As Inferred by NMR Spectroscopy. ACS Central Science. 5 (9), 1554-1561 (2019).
  18. Morelle, W., Michalski, J. -C. Analysis of protein glycosylation by mass spectrometry. Nature Protocols. 2 (7), 1585-1602 (2007).
  19. Reusch, D., et al. Comparison of methods for the analysis of therapeutic immunoglobulin G Fc-glycosylation profiles--part 1: separation-based methods. mAbs. 7 (1), 167-179 (2015).
  20. Keser, T., Pavić, T., Lauc, G., Gornik, O. Comparison of 2-Aminobenzamide, Procainamide and RapiFluor-MS as Derivatizing Agents for High-Throughput HILIC-UPLC-FLR-MS N-glycan Analysis. Frontiers in Chemistry. 6, 324(2018).
  21. Kozak, R. P., Tortosa, C. B., Fernandes, D. L., Spencer, D. I. R. Comparison of procainamide and 2-aminobenzamide labeling for profiling and identification of glycans by liquid chromatography with fluorescence detection coupled to electrospray ionization-mass spectrometry. Analytical Biochemistry. 486, 38-40 (2015).
  22. Nwosu, C., Yau, H. K., Becht, S. Assignment of Core versus Antenna Fucosylation Types in Protein N-Glycosylation via Procainamide Labeling and Tandem Mass Spectrometry. Analytical Chemistry. 87 (12), 5905-5913 (2015).
  23. Kayili, H. M. Identification of bisecting N-glycans in tandem mass spectra using a procainamide labeling approach for in-depth N-glycan profiling of biological samples. International Journal of Mass Spectrometry. 457, 116412(2020).
  24. Jansen, B. C., et al. HappyTools: A software for high-throughput HPLC data processing and quantitation. PLOS ONE. 13 (7), 0200280(2018).
  25. Ruhaak, L. R., et al. Glycan labeling strategies and their use in identification and quantification. Analytical and bioanalytical chemistry. 397 (8), 3457-3481 (2010).
  26. Rojas-Macias, M. A., et al. Towards a standardized bioinformatics infrastructure for N- and O-glycomics. Nature Communications. 10 (1), 3275(2019).
  27. Everest-Dass, A. V., Abrahams, J. L., Kolarich, D., Packer, N. H., Campbell, M. P. Structural feature ions for distinguishing N- and O-linked glycan isomers by LC-ESI-IT MS/MS. Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 24 (6), 895-906 (2013).
  28. Li, X., Xu, Z., Hong, X., Zhang, Y., Zou, X. Databases and Bioinformatic Tools for Glycobiology and Glycoproteomics. International Journal of Molecular Sciences. 21 (18), 6727(2020).
  29. Qing, G., Yan, J., He, X., Li, X., Liang, X. Recent advances in hydrophilic interaction liquid interaction chromatography materials for glycopeptide enrichment and glycan separation. TrAC Trends in Analytical Chemistry. 124, 115570(2020).
  30. Reiding, K. R., et al. Human Plasma N-glycosylation as Analyzed by Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization-Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance-MS Associates with Markers of Inflammation and Metabolic Health. Molecular & Cellular Proteomics. 16 (2), 228-242 (2017).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

Glycoprote neanalyseHydrofiele InteractiechromatografieFluorescentiedetectieGlycosyleringspatronenProcainamide labelingTandemmassaspectrometrieBiomarker ontdekkingGlycaankwantificering

Dit artikel is gepubliceerd

Video binnenkort beschikbaar

Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.