Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Een permanent venster voor het onderzoeken van kankermetastase naar de longen

5.2K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/62761

⸱

1 juli 2021

 ,  ,  ,  , 
1Department of Anatomy and Structural Biology, Einstein College of Medicine / Montefiore Medical Center, 2Gruss-Lipper Biophotonics Center, Einstein College of Medicine / Montefiore Medical Center, 3Department of Surgery, Einstein College of Medicine / Montefiore Medical Center, 4Integrated Imaging Program, Einstein College of Medicine / Montefiore Medical Cente, 5Department of Pathology, Einstein College of Medicine / Montefiore Medical Center

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Hier presenteren we een protocol voor de chirurgische implantatie van een permanent inwonend optisch venster voor de muriene thorax, dat een hoge resolutie, intravitale beeldvorming van de long mogelijk maakt. De duurzaamheid van het venster maakt het zeer geschikt voor de studie van dynamische cellulaire processen in de longen, vooral die welke langzaam evolueren, zoals gemetastaseerde progressie van verspreide tumorcellen.

Samenvatting

Metastase, goed voor ~ 90% van de kankergerelateerde mortaliteit, omvat de systemische verspreiding van kankercellen van primaire tumoren naar secundaire plaatsen zoals het bot, de hersenen en de longen. Hoewel uitgebreid bestudeerd, blijven de mechanistische details van dit proces slecht begrepen. Hoewel gemeenschappelijke beeldvormingsmodaliteiten, waaronder computertomografie (CT), positronemissietomografie (PET) en magnetische resonantiebeeldvorming (MRI), verschillende gradaties van grove visualisatie bieden, mist elk de temporele en ruimtelijke resolutie die nodig is om de dynamiek van individuele tumorcellen te detecteren. Om dit aan te pakken, zijn tal van technieken beschreven voor intravitale beeldvorming van gemeenschappelijke metastatische sites. Van deze plaatsen is de long bijzonder moeilijk gebleken om toegang te krijgen voor intravitale beeldvorming vanwege de delicatesse en kritieke rol bij het in stand houden van het leven. Hoewel verschillende benaderingen eerder zijn beschreven voor eencellige intravitale beeldvorming van de intacte long, omvatten ze allemaal zeer invasieve en terminale procedures, waarbij de maximaal mogelijke beeldvormingsduur wordt beperkt tot 6-12 uur. Hier wordt een verbeterde techniek beschreven voor de permanente implantatie van een minimaal invasief thoracale optische venster voor hoge-resolutie beeldvorming van de long (WHRIL). In combinatie met een aangepaste benadering van microcartografie, vergemakkelijkt het innovatieve optische venster seriële intravitale beeldvorming van de intacte long met eencellige resolutie gedurende meerdere beeldvormingssessies en verspreid over meerdere weken. Gezien de ongekende tijdsduur waarover beeldvormingsgegevens kunnen worden verzameld, kan de WHRIL de versnelde ontdekking van de dynamische mechanismen die ten grondslag liggen aan metastatische progressie en tal van aanvullende biologische processen in de longen vergemakkelijken.

Inleiding

Verantwoordelijk voor ~ 90% van de sterfgevallen, metastas is de belangrijkste oorzaak van kankergerelateerde sterfte1. Onder de belangrijkste plaatsen van klinisch waargenomen metastase (bot, lever, long, hersenen)2, is de long bijzonder uitdagend gebleken voor in vivo beeldvorming via intravitale microscopie. Dit komt omdat de long een delicaat orgaan is in perpetuum mobile. De continue beweging van de longen, verder verergerd door intrathoracale cardiale beweging, vormt een aanzienlijke barrière voor nauwkeurige beeldvorming. Daarom, vanwege de relatieve ontoegankelijkheid tot modaliteiten voor hoge resolutie intravitale optische beeldvorming, is kankergroei in de longen vaak beschouwd als een occult proces3.

In de klinische setting maken beeldvormingstechnologieën zoals computertomografie (CT), positronemissietomografie (PET) en magnetische resonantiebeeldvorming (MRI) visualisatie diep in intacte vitale organen zoals de longmogelijk 4. Hoewel deze modaliteiten zorgen voor een uitstekend beeld van het grove orgaan (vaak zelfs onthullende pathologie voorafgaand aan het begin van klinische symptomen), zijn ze van onvoldoende resolutie om individuele gedissemineerde tumorcellen te detecteren terwijl ze zich door de vroege stadia van metastase ontwikkelen. Bijgevolg, tegen de tijd dat de bovengenoemde modaliteiten enige indicatie van metastase naar de long geven, zijn gemetastaseerde foci al goed ingeburgerd en prolifererend. Aangezien de tumormicro-omgeving een cruciale rol speelt bij de progressie van kanker en metastasevorming5,6, is er grote interesse in het onderzoeken van de vroegste stappen van gemetastaseerd zaaien in vivo. Deze interesse wordt verder gevoed door de toegenomen waardering dat kankercellen zich verspreiden nog voordat de primaire tumor wordt gedetecteerd7,8 en het toenemende bewijs dat ze overleven als afzonderlijke cellen en in een slapende toestand gedurende jaren tot decennia voordat ze uitgroeien in macro-metastase9.

Voorheen was beeldvorming van de long met eencellige resolutie noodzakelijkerwijs ex vivo of explantische preparaten10,11,12,13,waarbij analyses werden beperkt tot enkele tijdspunten. Hoewel deze preparaten nuttige informatie bieden, geven ze geen inzicht in de dynamiek van tumorcellen in het orgaan dat is verbonden met een intacte bloedsomloop.

Recente technologische ontwikkelingen in beeldvorming hebben intravitale visualisatie van de intacte long met eencellige resolutie mogelijk gemaakt gedurende perioden van maximaal 12 h14,15,16. Dit werd bereikt in een muizenmodel met behulp van een protocol dat mechanische ventilatie, resectie van de ribbenkast en vacuümondersteunde longimmobilisatie omvatte. Ondanks het aanbieden van de eerste beelden met een enkele celresolutie van de fysiologisch intacte long, is de techniek echter zeer invasief en terminaal, waardoor verdere beeldvormingssessies buiten de indexprocedure worden uitgesloten. Deze beperking voorkomt daarom de toepassing ervan op de studie van gemetastaseerde stappen die langer dan 12 uur duren, zoals rust en het opnieuw initiëren van groei14,15,16. Verder moeten patronen van cellulair gedrag waargenomen met behulp van deze beeldvormingsbenadering voorzichtig worden geïnterpreteerd, aangezien vacuümgeïnduceerde drukverschillen waarschijnlijk afleidingen in de bloedstroom veroorzaken.

Om deze beperkingen te overwinnen, is onlangs een minimaal invasief venster voor beeldvorming van de long met hoge resolutie (WHRIL) ontwikkeld, dat seriële beeldvorming over een langere periode van dagen tot weken mogelijk maakt, zonder de noodzaak van mechanische beademing17. De techniek omvat het creëren van een 'transparante ribbenkast' met een afgesloten thoracale holte voor het behoud van een normale longfunctie. De procedure wordt goed verdragen, waardoor de muis kan herstellen zonder zinvolle wijziging van de basislijnactiviteit en -functie. Om precies hetzelfde longgebied bij elke respectieve beeldvormingssessie betrouwbaar te lokaliseren, werd een techniek die bekend staat als microcartografie toegepast op dit venster18. Door dit venster was het mogelijk om beelden van cellen vast te leggen terwijl ze bij het vaatbed van de long aankomen, het endotheel kruisen, celdeling ondergaan en uitgroeien tot micrometastasen.

Hier presenteert de studie een gedetailleerde beschrijving van een verbeterd chirurgisch protocol voor implantatie van de WHRIL, dat de operatie vereenvoudigt en tegelijkertijd de reproduceerbaarheid en kwaliteit ervan verhoogt. Hoewel dit protocol is ontworpen om onderzoek mogelijk te maken naar de dynamische processen die ten grondslag liggen aan metastase, kan de techniek als alternatief worden toegepast op onderzoeken van tal van processen van longbiologie en pathologie.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle procedures die in dit protocol worden beschreven, zijn uitgevoerd in overeenstemming met richtlijnen en voorschriften voor het gebruik van gewervelde dieren, inclusief voorafgaande goedkeuring door het Albert Einstein College of Medicine Institutional Animal Care and Use Committee.

1. Passivering van ramen

  1. Spoel de optische kozijnen(aanvullende figuur 2)af met een 1% (w/v) oplossing van enzymatisch actief reinigingsmiddel.
  2. Dompel in een glazen pot de optische raamkozijnen onder in 5% (w/v) natriumhydroxideoplossing gedurende 30 minuten bij 70 °C.
  3. Verwijder en was de kozijnen met gedeïoniseerd water.
  4. Dompel in een nieuwe glazen pot de optische kozijnen onder in 7% (w/v) citroenzuuroplossing gedurende 10 min bij 55 °C.
  5. Nogmaals, verwijder en was de kozijnen met gedeïoniseerd water.
  6. Herhaal stap 1.2; verwijder en was vervolgens raamkozijnen met gedeïoniseerd water.

2. Voorbereiding op de operatie

  1. Voer de operatie uit in een kap of laminaire flowkast. Om besmetting van het operatieveld te voorkomen, moet u zorgen voor verschillende, gescheiden gebieden voor respectievelijk voorbereiding, chirurgie en herstel.
  2. Steriliseer voorafgaand aan de operatie alle chirurgische instrumenten in een autoclaaf. Als volgende procedures worden gepland, steriliseer instrumenten dan opnieuw met behulp van een hete kraalsterilisator. Voor deze chirurgische ingreep wordt een tips-only techniek gebruikt.
  3. Schakel de verwarmde chirurgische kraal- en kralensterilisator in.
  4. Verdoof de muis met 5% isofluraan in de anesthesiekamer.
  5. Om het haar te verwijderen, breng royaal ontharingscrème aan op de incisieplaats van de linkerbovenborst. Veeg na niet langer dan 20 s het haar en de ontharingscrème stevig weg met bevochtigd tissuepapier. Herhaal indien nodig om al het haar van de operatieplaats te verwijderen.
  6. Bind met behulp van 2-0 zijden hechtdraad een knoop aan de basis van een katheter van 22 G, waardoor 2-inch lange staarten overblijven (zie figuur 1A).

3. Longetalagechirurgie

  1. Was de handen met antiseptische zeep.
  2. Trek voor elke nieuwe operatie nieuwe steriele handschoenen aan.
  3. Om uitdroging van het hoornvlies en schade aan de ogen van de muis te voorkomen, brengt u oogheelkundige zalf aan op beide ogen.
  4. Verdun 10 μL (0,1 mg/kg) buprenorfine in 90 μL steriel PBS en injecteer vervolgens subcutaan om preoperatieve analgesie te garanderen.
  5. Intubeer de muis met de zijden hechtdraadgebonden 22 G-katheter15. Bevestig met behulp van een inflatielamp een succesvolle intubatie door bilaterale borststijging bij boldruk op te merken.
  6. Zet de intubatiekatheter vast door de 2-0 zijden hechtdraad rond de snuit van de muis te binden (zie figuur 1B).
  7. Plaats de muis op de verwarmde operatiestandaard en plaats deze in de rechter laterale decubitus om de linker thorax bloot te leggen.
  8. Sluit de ventilator aan op de intubatiekatheter.
  9. Zorg voor gecontroleerde, stabiele ventilatie op de ventilator en verlaag vervolgens de isofluor tot 3%. Beoordeel bij het begin van de procedure en periodiek gedurende de duur van de procedure de geschiktheid van anesthesie door een teenknijptest uit te voeren.
  10. Met behulp van papieren tape worden respectievelijk de voorste en achterpoten craniaal en caudaal vastgezet voor het verwarmde chirurgische stadium. Plaats nog een stuk tape over de lengte van de rug van de muis om de blootstelling aan het operatieveld te maximaliseren (zie figuur 1C).
  11. Open alle chirurgische instrumenten onder de motorkap voor het behoud van steriliteit.
  12. Steriliseer de chirurgische plaats door een royale toepassing van antisepticum op de huid van de muis.
  13. Til met behulp van een tang de huid op en maak een cirkelvormige incisie van ~ 10 mm, ~ 7 mm links van het borstbeen en ~ 7 mm superieur aan de subcostale marge(figuur 1D).
  14. Identificeer zorgvuldig alle belangrijke schepen. Als de verdeling van bloedvaten noodzakelijk is, cauteriseer dan aan beide uiteinden met de elektrocauterisatiepen om de hemostase te behouden.
  15. Snijd het zachte weefsel boven de ribben.
  16. Til de 6e of7e ribop met een tang. Met behulp van een enkel mes van de stompe micro-ontleedbare schaar, de afgeronde kant naar de long, doorboort voorzichtig de intercostale spier tussen de6e en7e ribben om de intrathoracale ruimte binnen te gaan (Figuur 1E).
  17. Ontlaad de persluchtbus subtiel bij het defect om de long in te klappen en te scheiden van de borstwand. Vuur de perslucht in korte uitbarstingen af om iatrogene longschade te voorkomen.
  18. Plaats de biopsiepons over het snijgereedschap(aanvullende figuur 1)en manoeuvreer de basis van het snijgereedschap voorzichtig door de intercostale incisie(figuur 1F).
  19. Oriënteer de basis van het snijgereedschap zodanig dat deze evenwijdig is aan de borstwand. Prik een cirkelvormig gat van 5 mm door de ribbenkast(figuur 1G).
    OPMERKING: Zorg ervoor dat het blootgestelde longweefsel roze is, zonder tekenen van schade.
  20. Maak met behulp van de 5-0 zijden hechtdraad een tas-stringsteek ~ 1 mm van het gat, omtrek, verweven met de ribben(figuur 1H).
  21. Plaats het raamkozijn zodanig dat de randen van het cirkelvormige defect in de groef van het raam worden uitgelijnd (zie figuur 1I).
  22. Vergrendel het geïmplanteerde raam stevig door de 5-0 zijden hechtdraad stevig vast te binden.
  23. Laad 100 μL cyanoacrylaatgellijm in de spuit van 1 ml.
  24. Droog de longen door een gestage zachte stroom perslucht aan te brengen gedurende ~ 10-20 s(figuur 1J).
  25. Gebruik een tang om het raamkozijn aan de buitenrand vast te pakken en til voorzichtig op om ervoor te zorgen dat de long wordt gescheiden van de ondergrond van het raamkozijn.
  26. Breng een dunne laag cyanoacrylaatlijm aan langs de onderzijde van het optische raamkozijn (figuur 1K).
  27. Verhoog de positieve eind-expiratoire druk (PEEP) op de ventilator om de long op te blazen.
  28. Houd 10-20 s vast en oefen zachte maar stevige druk uit om het optische raamkozijn op het longweefsel te bevestigen(figuur 1L).
  29. Doseer een druppel van 5 mm van de resterende cyanoacrylaatgellijm op een rechthoekige deklap.
  30. Pak de 5 mm afdekplaat op met behulp van vacuüm pickups. Dompel de ondergrond van de coverslip in de lijm en schraap vervolgens de overtollige lijm drie keer af tegen de zijkant van de rechthoekige coverslip, zodat er slechts een zeer dunne laag overblijft (Figuur 1M).
  31. Plaats de afdekplaat zorgvuldig zodat deze in de uitsparing in het midden van het optische raamkozijn past en wordt onder een hoek boven het longweefsel gehouden. Klem de ventilator kort vast om positieve druk te genereren, waardoor de long hyperopgeblazen wordt. Gebruik een roterende beweging om de coverslip parallel aan het longweefsel te oriënteren om een directe appositie te creëren tussen het oppervlak van de long en de ondergrond van de coverslip. Houd een zachte druk aan en laat de cyanoacrylaatlijm uitharden (~ 25 s).
  32. Gebruik de tang om de afdekplaat van de vacuüm pickups te scheiden(figuur 1N).
  33. Maak met behulp van 5-0 zijden hechtdraad opnieuw een tas-stringsteek, dit keer < 1 mm om de snijrand van de huidincisie. Stop overtollige huid onder de buitenrand van het raamkozijn voordat u het stevig vastbindt met borgknopen.
  34. Om een luchtdichte afdichting tussen de afdekplaat en het raamkozijn te garanderen, doseert u een kleine hoeveelheid vloeibaar cyanoacrylaat op de metaal-glasinterface (zie figuur 1O).
  35. Bevestig een steriele naald aan een insulinespuit van 1 ml. Steek de naald onder het xiphoid-proces, ga naar de linkerschouder en ga via het diafragma de thoracale holte binnen. Zuig voorzichtig terug op de spuit om eventuele resterende lucht uit de thoracale holte te verwijderen (zie figuur 1P).
  36. Verwijder de tape van de muis.
  37. Schakel isofluraan uit.
  38. Blijf ventileren met 100% zuurstof totdat de muis klaar lijkt om te ontwaken.
  39. Snijd voorzichtig de 2-0 zijden hechtdraad rond de snuit van de muis en extubeer de muis.
  40. Breng de muis over naar een schone kooi en controleer totdat deze volledig is hersteld. Euthanaseer de muis als er tekenen van ademhalingsmoeilijkheden aanwezig zijn.
  41. Zorg voor postoperatieve analgesie door subcutaan 10 μL (0,1 mg/kg) buprenorfine verdund in 90 μL steriele fosfaat gebufferde oplossing (PBS) te injecteren.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

De stappen van de chirurgische ingreep die in dit protocol worden beschreven, zijn samengevat en geïllustreerd in figuur 1. Kortom, voorafgaand aan de operatie worden muizen verdoofd en wordt het haar over de linker thorax verwijderd. Muizen worden geïntubeerd en mechanisch geventileerd om te overleven bij het doorbreken van de thoracale holte. Zacht weefsel boven de ribben wordt weggesneden en er ontstaat een klein cirkelvormig defect, dat de6e en7e ribben overspant. H...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Op plaatsen van verre metastase, zoals de long, geeft optische beeldvorming met hoge resolutie inzicht in de uitgebreide dynamiek van tumorcelmetastase. Door in vivo visualisatie van afzonderlijke kankercellen en hun interacties met het gastheerweefsel mogelijk te maken, is intravitale beeldvorming met hoge resolutie instrumenteel gebleken voor het begrijpen van de mechanismen die ten grondslag liggen aan metastase.

Hier wordt een verbeterd chirurgisch protocol beschreven voor de perm...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs onthullen geen belangenconflicten.

Dankbetuigingen

Dit werk werd ondersteund door de volgende subsidies: CA216248, CA013330, Montefiore's Ruth L. Kirschstein T32 Training Grant CA200561, METAvivor Early Career Award, het Gruss-Lipper Biophotonics Center en zijn Integrated Imaging Program, en Jane A. en Myles P. Dempsey. We willen de Analytical Imaging Facility (AIF) van het Einstein College of Medicine bedanken voor de ondersteuning van beeldvorming.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
1% (w/v) oplossing van enzym-actief detergentAlconox IncN/A geconcentreerd, anionisch detergent met protease-enzym voor handmatige en ultrasone reiniging
2 µm fluorescente microsferenInvitrogenF8827
5 mm dekglasElectron Microscopy Sciences72296-05
5% (w/v) oplossing van natriumhydroxideSigma-AldrichS8045
5% IsofluraanHenry Schein, Inc29405
5-0 gevlochten zijde met RB-1 snijnaaldEthicon, Inc.774B
7% (w/v) oplossing van citroenzuurSigma-Aldrich251275
8 mm roestvrijstalen raamkozijnN/AN/AOp maat gemaakt, Aanvullende figuur 2
9 cm 2-0 zijdebandEthicon, Inc.LA55G
5 mm wegwerpbiopsie-punchIntegra 33-35-SH
Blunt micro-dissectie schaarRobozRS-5980
KopervensterhulpmiddelN/AN/AOp maat gemaakt, Aanvullende figuur 3
BuprenorfineHospira0409-2012-32
Cautery penBraintree ScientificGEM 5917
Chlorhexidine gluconaat Becton, Dickinson and Company260100ChloraPrep Enkele stokje 1.75 mL
PersluchtbusFalconDPSJB-12
CyanoacrylaatkleefstofHenkel AdhesivesLOC1363589
Vezel-optisch verlichtingsapparaatO.C. White CompanyFL3000
KralensterilisatorCellPoint ScientificGER  5287-120VGerminator 500
Graefe forcepsRobozRS-5135
Infrarood lichtlampBraintree ScientificHL-1
InsulinespuitenBecton Dickinson329424
IsofluraanevaporatorSurgiVetVCT302
Jacobson naaldhouder met vergrendelingKalson SurgicalT1-140
Lange katoenen applicatorsMedline IndustriesMDS202055
NairChurch & Dwight Co., Inc.40002957
Neomycine/polymyxine B/bacitracineJohnson & Johnson501373005Antibioticumsalf
OogzalfDechra Veterinary Products17033-211-38
PapiertapeFisher ScientificS68702
MuisventilatorKent ScientificPS-02PhysioSuite
Rechthoekige dekglasCorning2980-225
Rodent intubatiestandaardBraintree ScientificRIS 100
Klein dier longinflatieballonHarvard Apparatus72-9083
Roestvrijstalen snijgereedschapN/AN/AOp maat gemaakt, Aanvullende figuur 1
Sulfamethoxazol en Trimethoprim oraal antibioticumHi-Tech Pharmacal Co.50383-823-16
SurgiSuite Multifunctionele chirurgische platform voor muizen, met verwarmingKent ScientificSURGI-M02Verwarmd chirurgisch platform
Tracheale katheterExelint International2674622 G katheter
Vakuum-opnamesysteem metalen sondeTed Pella, Inc.528-112

Referenties

  1. Mehlen, P., Puisieux, A. Metastasis: a question of life or death. Nature Reviews Cancer. 6 (6), 449-458 (2006).
  2. Lee, Y. T. Breast carcinoma: pattern of metastasis at autopsy. Journal of Surgical Oncology. 23 (3), 175-180 (1983).
  3. Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites. Nature Reviews Cancer. 2 (8), 563-572 (2002).
  4. Coste, A., Oktay, M. H., Condeelis, J. S., Entenberg, D. Intravital imaging techniques for biomedical and clinical research. Cytometry Part A. 95 (5), 448-457 (2019).
  5. DeClerck, Y. A., Pienta, K. J., Woodhouse, E. C., Singer, D. S., Mohla, S. The tumor microenvironment at a turning point knowledge gained over the last decade, and challenges and opportunities ahead: A white paper from the NCI TME network. Cancer Research. 77 (5), 1051-1059 (2017).
  6. Borriello, L., et al. The role of the tumor microenvironment in tumor cell intravasation and dissemination. European Journal of Cell Biology. 99 (6), 151098(2020).
  7. Hosseini, H., et al. Early dissemination seeds metastasis in breast cancer. Nature. 540 (7634), 552-558 (2016).
  8. Harper, K. L., et al. Mechanism of early dissemination and metastasis in Her2(+) mammary cancer. Nature. 540, 589-612 (2016).
  9. Risson, E., Nobre, A. R., Maguer-Satta, V., Aguirre-Ghiso, J. A. The current paradigm and challenges ahead for the dormancy of disseminated tumor cells. Nature Cancer. 1 (7), 672-680 (2020).
  10. Qian, B., et al. A distinct macrophage population mediates metastatic breast cancer cell extravasation, establishment and growth. PLoS One. 4 (8), 6562(2009).
  11. Qian, B. Z., et al. CCL2 recruits inflammatory monocytes to facilitate breast-tumour metastasis. Nature. 475 (7355), 222-225 (2011).
  12. Miyao, N., et al. Various adhesion molecules impair microvascular leukocyte kinetics in ventilator-induced lung injury. American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 290 (6), 1059-1068 (2006).
  13. Bernal, P. J., et al. Nitric-oxide-mediated zinc release contributes to hypoxic regulation of pulmonary vascular tone. Circulation Research. 102 (12), 1575-1583 (2008).
  14. Entenberg, D., et al. In vivo subcellular resolution optical imaging in the lung reveals early metastatic proliferation and motility. IntraVital. 4 (3), 1-11 (2015).
  15. Rodriguez-Tirado, C., et al. Long-term High-Resolution Intravital Microscopy in the Lung with a Vacuum Stabilized Imaging Window. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (116), e54603(2016).
  16. Looney, M. R., et al. Stabilized imaging of immune surveillance in the mouse lung. Nature Methods. 8 (1), 91-96 (2011).
  17. Entenberg, D., et al. A permanent window for the murine lung enables high-resolution imaging of cancer metastasis. Nature Methods. 15 (1), 73-80 (2018).
  18. Dunphy, M. P., Entenberg, D., Toledo-Crow, R., Larson, S. M. In vivo microcartography and subcellular imaging of tumor angiogenesis: a novel platform for translational angiogenesis research. Microvascular Research. 78 (1), 51-56 (2009).
  19. Harney, A. S., Wang, Y., Condeelis, J. S., Entenberg, D. Extended time-lapse intravital imaging of real-time multicellular dynamics in the tumor microenvironment. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (112), e54042(2016).
  20. Seynhaeve, A. L. B., Ten Hagen, T. L. M. Intravital microscopy of tumor-associated vasculature using advanced dorsal skinfold window chambers on transgenic fluorescent mice. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (131), e55115(2018).
  21. Entenbery, D., et al. Time-lapsed, large-volume, high-resolution intravital imaging for tissue-wide analysis of single cell dynamics. Methods. 128, 65-77 (2017).
  22. Ueki, H., Wang, I. H., Zhao, D., Gunzer, M., Kawaoka, Y. Multicolor two-photon imaging of in vivo cellular pathophysiology upon influenza virus infection using the two-photon IMPRESS. Nature Protocols. 15 (3), 1041-1065 (2020).
  23. Ritsma, L., Ponsioen, B., van Rheenen, J. Intravital imaging of cell signaling in mice. IntraVital. 1 (1), 2-10 (2012).
  24. Kedrin, D., et al. Intravital imaging of metastatic behavior through a mammary imaging window. Nature Methods. 5 (12), 1019-1021 (2008).
  25. Harney, A. S., et al. Real-time imaging reveals local, transient vascular permeability, and tumor cell intravasation stimulated by TIE2hi macrophage-derived VEGFA. Cancer Discovery. 5 (9), 932-943 (2015).
  26. Karagiannis, G. S., et al. Assessing tumor microenvironment of metastasis doorway-mediated vascular permeability associated with cancer cell dissemination using intravital imaging and fixed tissue analysis. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (148), e59633(2019).
  27. Karagiannis, G. S., et al. Neoadjuvant chemotherapy induces breast cancer metastasis through a TMEM-mediated mechanism. Science Translational Medicine. 9 (397), (2017).
  28. Dreher, M. R., et al. Tumor vascular permeability, accumulation, and penetration of macromolecular drug carriers. Journal of the National Cancer Institute. 98 (5), 335-344 (2006).
  29. Rizzo, V., Kim, D., Duran, W. N., DeFouw, D. O. Ontogeny of microvascular permeability to macromolecules in the chick chorioallantoic membrane during normal angiogenesis. Microvascular Research. 49 (1), 49-63 (1995).
  30. Hoshino, A., et al. Tumour exosome integrins determine organotropic metastasis. Nature. 527 (7578), 329-335 (2015).
  31. Ueki, H., et al. In vivo imaging of the pathophysiological changes and neutrophil dynamics in influenza virus-infected mouse lungs. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (28), 6622-6629 (2018).
  32. Kornfield, T. E., Newman, E. A. Measurement of retinal blood flow using fluorescently labeled red blood cells. eNeuro. 2 (2), (2015).
  33. Dasari, S., Weber, P., Makhloufi, C., Lopez, E., Forestier, C. L. Intravital microscopy imaging of the liver following leishmania infection: An assessment of hepatic hemodynamics. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (101), e52303(2015).
  34. Chaigneau, E., Roche, M., Charpak, S. Unbiased analysis method for measurement of red blood cell size and velocity with laser scanning microscopy. Frontiers in Neuroscience. 13, 644(2019).
  35. Kim, T. N., et al. Line-scanning particle image velocimetry: an optical approach for quantifying a wide range of blood flow speeds in live animals. PLoS One. 7 (6), 38590(2012).
  36. Presson, R. G., et al. Two-photon imaging within the murine thorax without respiratory and cardiac motion artifact. American Journal of Pathology. 179 (1), 75-82 (2011).
  37. Tabuchi, A., Mertens, M., Kuppe, H., Pries, A. R., Kuebler, W. M. Intravital microscopy of the murine pulmonary microcirculation. Journal of Applied Physiology. 104 (2), 338-346 (2008).
  38. Travis, W. D. Classification of lung cancer. Seminars in Roentgenology. 46 (3), 178-186 (2011).
  39. Scholten, E. T., Kreel, L. Distribution of lung metastases in the axial plane. A combined radiological-pathological study. Radiologica Clinica (Basel). 46 (4), 248-265 (1977).
  40. Braman, S. S., Whitcomb, M. E. Endobronchial metastasis. Archives of Internal Medicine. 135 (4), 543-547 (1975).
  41. Herold, C. J., Bankier, A. A., Fleischmann, D. Lung metastases. European Radiology. 6 (5), 596-606 (1996).
  42. Kimura, H., et al. Real-time imaging of single cancer-cell dynamics of lung metastasis. Journal of Cellular Biochemistry. 109 (1), 58-64 (2010).
  43. Thevenaz, P., Ruttimann, U. E., Unser, M. A pyramid approach to subpixel registration based on intensity. IEEE Transactions on Image Processing: A Publication of the IEEE Signal Processing Society. 7 (1), 27-41 (1998).
  44. Sharma, V. P. ImageJ plugin HyperStackReg V5.6. Zenodo. , (2018).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Meer artikelen verkennen

Longmetastaseintravitale beeldvormingoptisch venstertumorceldormantieseriële beeldvormingimplantatie van thoracisch venstermultifotonmicroscopieextravasatie van tumorcellenmicrocartografie
Een permanent venster voor het onderzoeken van kankermetastase naar de longen
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.