Methodenartikel

Van bloedplaatjes afgeleide extracellulaire vesikel functionalisatie van Ti-implantaten

DOI:

10.3791/62781

⸱

5 augustus 2021

 ,  ,  ,  ,  , 
1Cell Therapy and Tissue Engineering Group, Research Institute on Health Sciences (IUNICS), University of the Balearic Islands, 2Health Research Institute of the Balearic Islands (IdISBa), 3Fundació Banc de Sang i Teixits de les Illes Balears (FBSTIB), 4Department of Fundamental Biology and Health Sciences, University of the Balearic Islands

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hier presenteren we een methode voor de isolatie van extracellulaire blaasjes (EV's) afgeleid van de bloedplaatjeslysaten (PL) en hun gebruik voor het coaten van titanium (Ti) implantaatoppervlakken. We beschrijven de drop casting coating methode, de EV's release profiel van de oppervlakken, en in vitro biocompatibiliteit van EV's gecoat Ti oppervlakken.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Extracellulaire blaasjes (EV's) zijn biologische nanovesicles die een sleutelrol spelen in de celcommunicatie. Hun inhoud omvat actieve biomoleculen zoals eiwitten en nucleïnezuren, die een groot potentieel bieden in de regeneratieve geneeskunde. Meer recent hebben EV's afgeleid van Platelet Lysate (PL) een osteogene capaciteit getoond die vergelijkbaar is met PL. Bovendien worden biomaterialen vaak gebruikt in orthopedie of tandheelkundige restauratie. Hier bieden we een methode om Ti-oppervlakken te functionaliseren met PL-afgeleide EV's om hun osteogene eigenschappen te verbeteren.

EV's worden geïsoleerd van PL door grootte-uitsluitingschromatografie en daarna worden Ti-oppervlakken gefunctionaliseerd met PL-EV's door drop casting. Functionalisatie wordt bewezen door ev-afgifte en de biocompatibiliteit ervan door de lactaatdehydrogenase (LDH) release assay.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

EV's zijn membraanblaasjes (30-200 nm) die door elke cel worden uitgescheiden en spelen een sleutelrol in cel-naar-cel communicatie door hun lading af te leveren. Ze bevatten een verscheidenheid aan actieve biomoleculen die nucleïnezuren, groeifactoren of bioactieve lipiden kunnen bevatten1. Om deze redenen zijn EV's geëvalueerd op hun potentiële gebruik in therapeutica. Op het gebied van orthopedie en botregeneratie zijn EV's uit verschillende bronnen getest. Onder hen is aangetoond dat van bloedplaatjes afgeleide EV's een differentiatie-effect op stamcellen induceren met behoud van een laag cytotoxisch profiel2,3. Daarom is verder onderzoek nodig om de mogelijkheid te onderzoeken om EV's te combineren met biomaterialen om ze in de dagelijkse klinische praktijk te gebruiken.

Op titanium gebaseerde biomaterialen worden veel gebruikt als steigers voor botgenezende klinische interventies vanwege hun mechanische eigenschappen, hoge biocompatibiliteit en duurzaamheid op lange termijn4. Niettemin zijn Ti-implantaten een bio-inert materiaal en vertonen daarom een slecht vermogen om zich te hechten aan het omliggende botweefsel5. Om deze reden worden titaniummodificaties bestudeerd om hun prestaties te verbeteren door een meer functionele micro-omgeving op het oppervlak te bereiken4,6,7. In die zin kunnen EV's aan titanium worden verankerd door chemische8 of fysische interacties9,10. Geïmmobiliseerde EV's afgeleid van stamcellen of macrofagen verbeteren de bioactiviteit van Ti door cellulaire adhesie en proliferatie te bevorderen en zo een osteogeen effect te induceren8,9,10.

Dit artikel zal zich in detail richten op een drop casting-strategie voor het coaten van Ti-oppervlakken met PL-afgeleide EV's. Daarnaast zullen we het afgifteprofiel van EV's van het gecoate oppervlak in de loop van de tijd evalueren en de cellulaire biocompatibiliteit in vitro bevestigen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Platelet Lysate (PL) wordt verkregen zoals eerder beschreven in overeenstemming met institutionele richtlijnen3 met behulp van verse buffy jassen verstrekt door de IdISBa Biobank als uitgangsmateriaal. Het gebruik ervan voor het huidige project werd goedgekeurd door de Ethische Commissie (IB 1995/12 BIO).

1. EV's isoleren van PL

  1. Verwijdering van grotere lichamen
    1. Ontdooi PL bij kamertemperatuur.
    2. Centrifuge PL bij 1.500 x g gedurende 15 min bij 4 °C. Gooi de pellet weg omdat deze celresten bevat.
    3. Verzamel het supernatant en voer twee opeenvolgende centrifugaties uit bij 10.000 x g gedurende 30 minuten bij 4 °C.
      OPMERKING: De pellet komt overeen met grotere EV's zoals microvesicles en in dit geval wordt deze weggegooid.
    4. Filtreer het supernatant eerst door een poreus membraan van 0,8 μm en vervolgens door een poreus membraan van 0,2 μm.
      OPMERKING: Met deze stappen worden alle niet-gewenste EV's verwijderd.
    5. Pool de gefilterde PL en bewaar bij -20 °C tot gebruik.
  2. Chromatografie van maatuitsluiting
    1. Breng de kolom gekoppeld aan chromatografieapparatuur in evenwicht met het gewenste debiet met gefilterde PBS.
      OPMERKING: Het gebruikte debiet is afhankelijk van de kolomkarakteristieken; in dit geval is het ingesteld op 0,5 ml / min.
    2. Laad de verwerkte PL (5 ml) met een spuit op de apparatuur.
    3. Injecteer de PL in de kolom en begin met het verzamelen van 5 ml fracties in 15 ml buizen.
    4. Verzamel de verrijkte fracties van de EV's en bewaar ze bij -80 °C tot gebruik.
      OPMERKING: Wanneer u het experiment voor de eerste keer uitvoert, karakteriseer dan alle fracties door eiwitkwantificering en immunodetectie om degene te bepalen die is verrijkt met EV's3,11. In dit experiment wordt de 9e fractie verzameld.
    5. Was de chromatografische kolom met 30 ml 0,2% NaOH-oplossing en bewaar deze in 20% ethanoloplossing zodra deze in evenwicht is.

figure-protocol-1
Figuur 1: Schematisch diagram van de isolatie van bloedplaatjeslysaat (PL) extracellulair blaasje (EV's). PL wordt eerst gecentrifugeerd bij 1.500 x g en vervolgens bij 10.000 x g om grotere lichamen te verwijderen. Het supernatant wordt gefilterd door filters van 0,8 en 0,2 μm. Verwerkte PL wordt op de kolom geladen en EV's worden gescheiden door grootte-uitsluitingschromatografie. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

2. Karakterisering van EV's

OPMERKING: EV-karakterisering is noodzakelijk om functionele studies uit te voeren12. Elektronenmicroscopie of western blot-karakterisering zijn eerder gemeld13. Dit rapport zal zich richten op de essentiële karakteriseringstechnieken voor Ti oppervlakte functionalisatie.

  1. Nanoparticle Tracking Analyse (NTA)
    1. Verdun de EV's (1:1000) in 0,2 μm gefilterde PBS.
      OPMERKING: Te geconcentreerde monsters of te verdunde monsters zullen buiten bereik zijn voor NTA-bepaling en aanpassing is vereist.
    2. Laad 1 ml van de verdunde EV's met een spuit op de NTA-apparatuur en injecteer ze in de NTA-apparatuur.
    3. Volg het protocol van de fabrikant voor de bepaling van de deeltjesconcentratie en grootteverdeling.
  2. Eiwitconcentratie
    1. Bepaal de concentratie met behulp van 1 μL van de EV-oplossing. Meet de absorptie met een spectrofotometer bij een golflengte van 280 nm.
      OPMERKING: EV's moeten lage niveaus van eiwitten vertonen in vergelijking met het aantal deeltjes.
    2. Volg de instructies van de fabrikant om de absorptiemeting te verkrijgen met behulp van de spectrofotometer.

3. Titanium oppervlakte functionalisatie

OPMERKING: Bij deze methode worden bewerkte titaniumschijven, c.p. klasse IV, diameter van 6,2 mm en een hoogte van 2 mm gebruikt. De schijven kunnen worden gemanipuleerd met een Ti-pincet, maar het is belangrijk om geen krassen op het oppervlak te maken. Bovendien moet de bewerkte zijde gedurende het hele proces naar boven gericht zijn.

  1. Ti schijven wassen
    OPMERKING: Het volume van de oplossingen die worden gebruikt voor ti-wassen moet voldoende zijn om Ti-schijven te bedekken. Plaats Ti-schijven in een glazen bekerglas en giet er oplossingen op. Verwijder vervolgens de oplossing door te decanteren.
    1. Was Ti-implantaten met gedeïoniseerd (DI) water en gooi het water vervolgens weg.
    2. Was Ti-implantaten met ethanol 70% en decanteer vervolgens om de oplossing te verwijderen.
    3. Plaats de implantaten in DI-water en soniceer gedurende 5 minuten bij 50 °C. Gooi het water weg.
    4. Incubeer Ti implantaten in een 40% NaOH oplossing bij 50 °C gedurende 10 minuten met agitatie. Gooi de oplossing weg.
      LET OP: NaOH-oplossing warmt op tijdens de bereiding. De oplossing is corrosief en moet in een zuurkast worden gebruikt.
    5. Soniceer de implantaten in DI-water bij 50 °C gedurende 5 minuten en verwijder vervolgens het water.
    6. Voer verschillende wasbeurten uit met DI-water (ten minste 5) totdat het een neutrale pH bereikt. Controleer de pH met pH-indicatoren.
    7. Soniceer de implantaten in DI-water bij 50 °C gedurende 5 minuten en verwijder het water.
    8. Incubeer Ti-implantaten in een 50% HNO3-oplossing bij 50 °C gedurende 10 minuten met roeren. Verwijder de oplossing.
      LET OP: HNO3 is een corrosieve en oxiderende stof en moet in een zuurkast worden gebruikt.
    9. Soniceer de implantaten in DI-water bij 50 °C gedurende 5 minuten. Verwijder het water.
    10. Voer verschillende wasbeurten uit met DI-water (ten minste 5) totdat een neutrale pH is verkregen. Controleer de pH met pH-indicatoren.
    11. Soniceer de implantaten in DI-water bij 50 °C gedurende 5 minuten. Verwijder het water.
      OPMERKING: Op dit punt kan het experiment worden gestopt door Ti-implantaten op te slaan in een 70% ethanoloplossing.
  2. Ti passivering
    OPMERKING: Ti-passiveringsstappen worden uitgevoerd door Ti-schijven volledig te bedekken met de verschillende oplossingen in de onderstaande volgorde. Ti-schijven worden in een glazen beker geplaatst en oplossingen worden er voorzichtig op gegoten. Volumes die in alle wasstappen worden gebruikt, moeten de implantaten volledig bedekken en worden verwijderd via decanteren.
    1. Incubeer de Ti-implantaten in een 30% HNO3-oplossing gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur onder zacht roeren. Verwijder de oplossing.
    2. Voer verschillende wasbeurten uit met DI-water (ten minste 5) totdat het een neutrale pH bereikt. Controleer de pH met pH-indicatoren.
    3. Incubeer Ti-implantaten 's nachts bij kamertemperatuur in DI-water.
    4. Droog de implantaten af onder vacuümomstandigheden bij 40 °C gedurende 10 minuten.
  3. EV's drop casting
    OPMERKING: Voor celfunctionele studies is het belangrijk om in een celkweekkast te werken.
    1. Plaats de Ti-implantaten in een 96-putplaat, met de bewerkte kant naar boven gericht.
      OPMERKING: Als de implantaten ondersteboven worden gedraaid, kan een naald worden gebruikt om ze terug te zetten.
    2. Ontdooi de EV-oplossing en meng ze met agitatie. Gebruik een vortex om 3 s te pulseren.
    3. Deponeer de EV's op het Ti-oppervlak. In deze studie worden druppels van 40 μL EV-oplossing op de Ti geplaatst om maximaal 4 x 1011 EV's per implantaat te immobiliseren volgens de door NTA bepaalde concentratie.
    4. Plaats de platen met de Ti onder vacuümomstandigheden bij 37 °C totdat de druppels volledig droog zijn (~ 2 uur).
      OPMERKING: Pas de tijd aan afhankelijk van het aantal implantaten en het water dat in de vacuümkamer aanwezig is.

figure-protocol-2
Figuur 2: Schematisch diagram van Ti passivering en EV's functionalisatie door drop casting. Ti-implantaten worden eerst gepassiveerd door incubatie gedurende 30 minuten in een 30% HNO3-oplossing bij kamertemperatuur. Na verschillende wasbeurten met DI-water bereikt de pH neutraal. Vervolgens worden Ti-implantaten 's nachts bij kamertemperatuur geïncubeerd in DI-water. Daarna worden de implantaten afgedroogd onder vacuümomstandigheden bij 40 °C. Voor immobilisatie van EV's wordt 40 μL EV-oplossing op Ti-implantaten gedeponeerd. Vervolgens worden implantaten gedurende 2 uur in vacuüm geïncubeerd totdat EV's fysiek aan het oppervlak zijn gebonden. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

4. Ti oppervlaktekarakterisering

  1. Release studie
    1. Incubeer Ti-oppervlak met 200 μL gefilterd PBS bij 37 °C.
      OPMERKING: PBS wordt gefilterd om interferenties met de NTA-meting te voorkomen.
    2. Vervang de PBS op verschillende tijdstippen en bewaar bij -80 °C.
      OPMERKING: In deze studie werden 2-, 6-, 10- en 14-dagentijdpunten geanalyseerd.
    3. Analyseer opgeslagen PBS voor deeltjesstudies door NTA volgens de instructies van de fabrikant.
      OPMERKING: Deeltjesconcentratie in PBS op verschillende tijdstippen is een weergave van het afgifteprofiel van EV's in de loop van de tijd.
  2. Biocompatibiliteitsstudies
    OPMERKING: Menselijke navelstreng-afgeleide mesenchymale stamcellen (hUC-MSC) worden verkregen uit de IdISBa Biobank in overeenstemming met institutionele richtlijnen.
    1. Houd hUC-MSC in DMEM lage glucose aangevuld met 20% FBS tot gebruik. Verander het medium twee keer per week.
    2. Voor het zaaien van cellen, was de cellen tweemaal in kolven met 5 ml PBS.
    3. Trypsiniseren hUC-MSC door toevoeging van 1 ml trypsine-oplossing. Zorg ervoor dat het de monolaag van cellen volledig bedekt. Verwijder de trypsine-oplossing en plaats de celkweekkolf ongeveer 2 minuten op 37 °C. Bekijk celloslating onder de microscoop. Losgemaakte cellen zullen rond van vorm lijken en in suspensie zijn.
    4. Resuspend cellen in DMEM lage glucose met 1% EV's uitgeput FBS.
      OPMERKING: Bereid media aangevuld met 1% FBS en ultracentrifugeer vervolgens bij 120.000 x g gedurende 18 uur om FBS-EV's te verwijderen. Het is belangrijk om EV's te verwijderen om interferenties met bloedplaatjes EV's te voorkomen.
    5. Bepaal de celconcentratie door het aantal cellen met een Neubauer-kamer te tellen14.
    6. Breng hUC-MSC tot een concentratie van 50.000 cellen/ml.
    7. Zaai 200 μL van de celoplossing op de Ti-implantaten.
    8. Verzamel na 48 uur 50 μL media en voer de cytotoxische bepaling uit met behulp van lactaatdehydrogenase (LDH) activiteitskit, volgens het protocol van de fabrikant.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De methode die in dit artikel wordt gepresenteerd, maakt het mogelijk om EV's gefunctionaliseerde titaniumschijven te verkrijgen. EV's zijn fysiek gebonden aan het oppervlak, wat een aanhoudende afgifte in de loop van de tijd mogelijk maakt. Het aantal vrijgegeven EV's kan worden gemeten door NTA op dag 2, 6, 10 en 14. De eerste metingen, op dag 2, laten zien dat er ongeveer 109 EV's worden uitgebracht, gevolgd door een aanhoudende release op dag 6 (~ 108 EV's); dag 10 (~107 EV's), en dag...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit protocol is bedoeld om duidelijke instructies te geven voor de functionalisatie van EV's op Ti-oppervlakken. De gepresenteerde methode is gebaseerd op een drop casting-strategie, een physisorptietype van functionalisatie. Er bestaat een slechte bibliografie met betrekking tot de functionalisering van EV's op Ti-oppervlakken, hoewel er weinig studies zijn die verschillende voordelen aantonen door EV's op Ti10 te immobiliseren. Hoe dan ook, sommige van de onderzochte strategieën omvatten biochem...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit onderzoek werd gefinancierd door Instituto de Salud Carlos III, Ministerio de Economía y Competitividad, medegefinancierd door het ESF Europees Sociaal Fonds en het EFRO Europees Fonds voor Regionale Ontwikkeling (MS16/00124; CP16/00124; PI17/01605), de Direcció General d'Investigació, Conselleria d'Investigació, Govern Balear (FPI/2046/2017), en PROGRAMA JUNIOR del projecte TALENT PLUS, construyendo SALUD, generando VALOR (JUNIOR01/18), gefinancierd door de duurzame toerismebelasting van de Balearen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
0,8 µm spuitfilterSartorius16592K
1.5 mL Centrifuge tubeSPL life sciencesPLC60015
1mL spuitBD303174
96-well kweekplaatSPL life sciencesPLC30096
Absoluut ethanolScharlauET0006005PGebruikt om 20 %  ethanol te bereiden met Milli-Q® water
AKTA purifier SystemGE Healthcare8149-30-0014
Allegra X-15R CentrifugeBeckman Coutler392934SX4750A zwenkrotor
Centrifuge 5430 REppendorf5428000210F-45-48-11 rotor
Conische buis, conische bodem, 50mlSPL life sciencesPLC50050
Cytotoxiciteitsdetectiekit (LDH)Roche11644793001
Weggeefspuit 10 mlBecton DickinsonBDH307736
DMEM met lage glucose GlutamaxGIBCO21885025
Dulbecco's PBS (1x)Capricorn ScientificPBS-1A
Foetaal runderserum (FBS) Embrionic CertifiedGIBCO16000044
Filtropur S 0.2 µm spuitfilterSarstedt83.1826.001
HiPrep 16/60 Sephacryl S-400 HRGE Healthcare28-9356-04Voorgevormd kolom
human umbilical cord-derived mesenchymal stamcellen (hUC-MSC)IdISBa Biobank
Nanodrop 2000 spectrofotometerThermoFisherND-2000
NanoSight NS300 nanopartikeltrackinganalyseMalvernNS300Apparaat met ingebouwde laser bij λ= 532 nm en sCMOS-camera
NaaldTerumo946077135
Salpeterzuur 69,5%ScharlauAC16071000
Optima L-100 XP UltracentrifugeBeckman Coulter8043-30-1124SW-32Ti Rotor
Penicilline-Streptomycine-oplossing 100XBiowestL0022
pH-teststrips 4.5-10.0SigmaP-4536
Trombocyt Lysaat (PL)IdISBa BiobankVerkregen van  buffy-coats die na bloeddonaties worden weggegooid
Polypropyleen centrifugebuizenBeckman Coutler326823
Power wave HTBioTek10340763
Schroefdopbuis, 15 ml, (LxØ): 120 x 17 mm, PP, met opdrukSarstedt62554502
NatriumhydroxideSharlauSO04251000
Titanium implantaatreplica'sImplantmedia, SANATitanium graad IV. Diameter: 6,2 mm. Hoogte: 1,95 mm
Trypsine-EDTA 1 XBiowestL0930
Tryton X100SigmaT8787

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Van Niel, G., D'Angelo, G., Raposo, G. Shedding light on the cell biology of extracellular vesicles. Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 19 (4), 213-228 (2018).
  2. Torreggiani, E., et al. Exosomes: novel effectors of human platelet lysate activity. European Cells & Materials. 28, 137-151 (2014).
  3. Antich-Rosselló, M., et al. Platelet-derived extracellular vesicles promote osteoinduction of mesenchymal stromal cells. Bone and Joint Research. 9 (10), 667-674 (2020).
  4. Li, Y., et al. New developments of Ti-based alloys for biomedical applications. Materials. 7 (3), Basel, Switzerland. 1709-1800 (2014).
  5. Lan, W. C., et al. The potential of a nanostructured titanium oxide layer with self-assembled monolayers for biomedical applications: Surface properties and biomechanical behaviors. Applied Sciences. 10 (2), 590(2020).
  6. Jemat, A., Ghazali, M. J., Razali, M., Otsuka, Y. Surface modifications and their effects on titanium dental implants. BioMed Research International. 2015, 791725(2015).
  7. Damiati, L., et al. Impact of surface topography and coating on osteogenesis and bacterial attachment on titanium implants. Journal of Tissue Engineering. 9, 2041731418790694(2017).
  8. Chen, L., et al. Self-assembled human adipose-derived stem cell-derived extracellular vesicle-functionalized biotin-doped polypyrrole titanium with long-term stability and potential osteoinductive ability. ACS Applied Materials & Interfaces. 11 (49), 46183-46196 (2019).
  9. Wei, F., Li, M., Crawford, R., Zhou, Y., Xiao, Y. Exosome-integrated titanium oxide nanotubes for targeted bone regeneration. Acta Biomaterialia. 86, 480-492 (2019).
  10. Wang, X., et al. Exosomes influence the behavior of human mesenchymal stem cells on titanium surfaces. Biomaterials. 230, 119571(2020).
  11. Lozano-Ramos, I., et al. Size-exclusion chromatography-based enrichment of extracellular vesicles from urine samples. Journal of Extracellular Vesicles. 4, 27369(2015).
  12. Théry, C., et al. Minimal information for studies of extracellular vesicles 2018 (MISEV2018): a position statement of the International Society for Extracellular Vesicles and update of the MISEV2014 guidelines. Journal of Extracellular Vesicles. 7 (1), 1535750(2018).
  13. Liu, J., et al. Isolation and characterization of extracellular vesicles from adult schistosoma japonicum. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (135), e57541(2018).
  14. JoVE. Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. Using a Hemacytometer to Count Cells. JoVE Science Education Database. , JoVE. Cambridge, MA. (2021).
  15. Chouirfa, H., Bouloussa, H., Migonney, V., Falentin-Daudré, C. Review of titanium surface modification techniques and coatings for antibacterial applications. Acta Biomaterialia. 83, 37-54 (2019).
  16. Córdoba, A., Monjo, M., Hierro-Oliva, M., González-Martín, M. L., Ramis, J. M. Bioinspired quercitrin nanocoatings: A fluorescence-based method for their surface quantification, and their effect on stem cell adhesion and differentiation to the osteoblastic lineage. ACS Applied Materials and Interfaces. 7 (30), 16857-16864 (2015).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

op bloedplaatjes afgeleide EV sextracellulaire blaasjestitaniumfunctionaliseringdrop castinggrootte uitsluitingschromatografienanodeeltjes trackingbotregeneratieLDH release assayregeneratieve geneeskundebiomateriaalcoating

Gerelateerde artikelen