Methodenartikel

Het detecteren van virus- en speekseleiwitten van een leafhoppervector in de plantengastheer

2.7K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/63020

⸱

14 september 2021

 ,  ,  , 
1Vector-borne Virus Research Center, Fujian Province Key Laboratory of Plant Virology, Institute of Plant Virology, Fujian Agriculture and Forestry University

In dit artikel

Samenvatting

Dit protocol laat zien hoe de plantengastheer kan worden gebruikt om speekseleiwitten van leafhopper en plantaardige virale eiwitten te detecteren die worden vrijgegeven door leafhopper-vectoren.

Samenvatting

Insectenvectoren brengen horizontaal veel plantenvirussen van agrarisch belang over. Meer dan de helft van de plantenvirussen wordt overgedragen door hemipteraninsecten die piercing-zuigende monddelen hebben. Tijdens virale overdracht overbrugt het insectenspeeksel de virus-vector-gastheer omdat de speekselvectoren, virussen en de insecteneiwitten de immuunrespons van planten van insecten in plantengastheren activeren of onderdrukken. De identificatie en functionele analyses van speekseleiwitten worden een nieuw aandachtsgebied in het onderzoeksveld van arbovirus-gastheerinteracties. Dit protocol biedt een systeem om eiwitten in het speeksel van leafhoppers te detecteren met behulp van de plantengastheer. De leafhoppervector Nephotettix cincticeps besmet met het rijstdwergvirus (RDV) dient als voorbeeld. Het vitellogenine en het belangrijkste buitenste capside-eiwit P8 van RDV, gevectoreerd door het speeksel van N. cincticeps, kunnen tegelijkertijd worden gedetecteerd in de rijstplant waar N. cincticeps zich mee voedt . Deze methode is toepasbaar voor het testen van de speekseleiwitten die tijdelijk in de plantengastheer worden vastgehouden na insectenvoeding. Er wordt aangenomen dat dit detectiesysteem de studie van hemipteran-virus-plant of hemipteran-plant interacties ten goede zal komen.

Inleiding

De vector-host transmissiemodus van arbovirussen, een fundamenteel probleem, bevindt zich op de grens van de biologische wetenschap. Veel plantenvirussen van agrarisch belang worden horizontaal overgedragen door insectenvectoren1. Meer dan de helft van de plantenvirussen wordt overgebracht door hemipteran-insecten, waaronder bladluizen, witte vliegen, leafhoppers, planthoppers en trips. Deze insecten hebben verschillende kenmerken die hen in staat stellen om plantenvirussen efficiënt over te brengen1. Ze bezitten piercing-zuigende monddelen en voeden zich met het sap van floëem en xyleem, en scheiden hun speekselaf 1,2,3,4. Met de ontwikkeling en verbetering van technieken worden de identificatie en functionele analyses van speekselcomponenten een nieuwe focus van intensief onderzoek. De bekende speekseleiwitten in speeksel omvatten tal van enzymen, zoals pectinesterase, cellulase, peroxidase, alkalische fosfatase, polyfenoloxidase en sucrase, onder andere 5,6,7,8,9,10,11,12,13 . De eiwitten in speeksel omvatten ook elicitoren die de afweerreactie van de gastheer activeren, waardoor de prestaties van insecten veranderen, en effectoren die de afweer van de gastheer onderdrukken, wat de fitheid van insecten verbetert en componenten die pathologische reacties van de gastheer induceren14,15,16,17. Daarom zijn speekseleiwitten vitale materialen voor communicatie tussen insecten en gastheren. Tijdens de overdracht van virussen bevat het speeksel dat wordt afgescheiden door de speekselklieren van piercing-zuigende virulifere insecten ook virale eiwitten. Virale componenten gebruiken de stroom van speeksel om ze vrij te geven van het insect naar de gastheer van de plant. Daarom overbrugt het insectenspeeksel de virus-vector-gastheer tritrofe interactie. Het onderzoeken van de biologische functie van speekseleiwitten die worden uitgescheiden door virulifere insecten helpt om de relatie van virus-vector-gastheer te begrijpen.

Voor dierlijke virussen wordt gemeld dat het speeksel van muggen de overdracht en pathogeniciteit van westnijlvirus (WNV) en denguevirus (DENV) bemiddelt. Het speekseleiwit AaSG34 bevordert de replicatie en overdracht van het dengue-2-virus, terwijl het speekseleiwit AaVA-1 de overdracht van DENV- en Zika-virus (ZIKV) bevordert door autofagie18,19 te activeren. Het speekseleiwit D7 van muggen kan DENV-infectie in vitro en in vivo remmen via directe interactie met de DENV-virionen en recombinant DENV-enveloppe-eiwit20. In plantenvirussen induceert het begomovirus tomaat geelbladkrulvirus (TYLCV) het wittevliegspeekseleiwit Bsp9, dat de WRKY33-gemedieerde immuniteit van de plantengastheer onderdrukt, om de voorkeur en prestaties van witte vliegen te verhogen, waardoor uiteindelijk de overdracht van virussen21 toeneemt. Omdat studies naar de rol die speekseleiwitten van insecten spelen in plantengastheren zijn achtergebleven bij die van dierlijke gastheren, is een stabiel en betrouwbaar systeem om de speekseleiwitten in plantengastheren te detecteren dringend nodig.

Het plantenvirus dat bekend staat als rijstdwergvirus (RDV) wordt overgedragen door de leafhopper Nephotettix cincticeps (Hemiptera: Cicadellidae) met een hoge efficiëntie en op een aanhoudend vermeerderende manier22,23. RDV werd voor het eerst gemeld als overgedragen door een insectenvector en veroorzaakt een ernstige ziekte van rijst in Azië24,25. Het virion is icosaëdrisch en dubbellaags bolvormig en de buitenste laag bevat het P8 buitenste capsid-eiwit22. De circulatieve transmissieperiode van RDV in N. cincticeps is 14 dagen 26,27,28,29,30. Wanneer de RDV bij speekselklieren aankomt, worden virionen vrijgegeven in speeksel-opgeslagen holtes in de speekselklieren via een exocytose-achtig mechanisme23. De vitellogenine (Vg) is de voorloper van het dooiereiwit die essentieel is voor de ontwikkeling van eicellen bij vrouwelijke insecten31,32,33. De meeste insectensoorten hebben ten minste één Vg-transcript van 6-7 kb, dat codeert voor een voorlopereiwit van ongeveer 220 kDa. De eiwitvoorlopers van Vg kunnen meestal worden gesplitst in grote (140 tot 190 kDa) en kleine (<50 kDa) fragmenten voordat ze de eierstok18,19 binnendringen. Eerdere proteomische analyse onthulde de aanwezigheid van de peptiden afgeleid van Vg in het uitgescheiden speeksel van de leafhopper Recilia dorsalis, hoewel hun functie onbekend is (ongepubliceerde gegevens). Onlangs is gemeld dat Vg, dat oraal wordt uitgescheiden door planthoppers, functioneert als een effector om de afweer van planten te beschadigen34. Het is onbekend of de Vg van N. cincticeps ook met speekselstroom aan de plantengastheer kan worden vrijgegeven en vervolgens een rol in de plant kan spelen om de afweer van de plant te verstoren. Om aan te pakken of N. cincticeps speekseleiwitten, zoals Vg, gebruikt om de afweer van planten te remmen of te activeren, is de eerste stap het identificeren van eiwitten die tijdens het voeden aan de plant worden vrijgegeven. Het begrijpen van de methode om de speekseleiwitten in de plant te identificeren is mogelijk essentieel om de functie van speekseleiwitten en de interacties tussen Hemiptera en planten te verklaren.

In het hier gepresenteerde protocol wordt N. cincticeps als voorbeeld gebruikt om een methode te bieden om de aanwezigheid van speekseleiwitten in de plantengastheer te onderzoeken die door insectenvoeding worden geïntroduceerd. Het protocol beschrijft voornamelijk de verzameling en detectie van speekseleiwitten en is nuttig voor verder onderzoek op de meeste hemipterans.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

De niet-virulifere volwassen leafhoppers werden verspreid in het Vector-borne Virus Research Center in Fujian Agriculture and Forestry University, China.

1. Niet-virulifere insectenkweek

  1. Voed de volwassenen op rijstzaailingen op in een kubuskooi van 40 cm x 35 cm x 20 cm (lengte x breedte x hoogte). Houd één kant van de kooi bedekt met een insectenbestendig net voor ventilatie.
    1. Bewaar de kooien met leafhoppers in een incubator met een ingebouwde vochtigheidsregelaar op 26 °C met een relatieve vochtigheid van 60-75% onder een fotoperiode van 16 uur licht en 8 uur donker.
  2. Gebruik een aspirator om alle volwassenen voorzichtig uit hun kooi over te brengen naar een nieuwe kooi die elke week verse rijstzaailingen bevat.
    1. Laat meer dan 200 volwassenen paren en eieren leggen in de rijst.
    2. Bewaar de oude rijstzaailingen voor de nimfen om tevoorschijn te komen. Breng deze nieuwe niet-virulifere nimfen terug naar het 2-instar-stadium.

2. Virusverwerving en het verzamelen van virulifere insecten

  1. Breng de 2-instar niet-virulifere nimfen voorzichtig over in een glazen kweekbuis (2,5 cm in diameter bij 15 cm hoog) gedurende 1-2 uur voor uithongering met behulp van de aspirator.
    1. Laat de nimfen los in een kooi met een RDV-geïnfecteerde rijstplant die in een pot is gekweekt.
    2. Laat de nimfen zich 2 dagen voeden met de geïnfecteerde rijstplant.
      OPMERKING: Geef de rijstplant voorzichtig water en vermijd het wegwassen van de nimfen. De 2-instar nimfen zijn ongeveer 1,6-2 mm lang.
  2. Breng deze nimfen voorzichtig over naar een nieuwe kooi met verse virusvrije rijstzaailingen met een relatieve luchtvochtigheid van 60-75% onder een fotoperiode van 16 uur licht en 8 uur donker. Laat de nimfen zich gedurende 12 dagen voeden met de geïnfecteerde rijstplant om de circulerende overdrachtsperiode van RDV te voltooien.

3. Verzameling van speekseleiwitten met behulp van een voederkooi

  1. Bereid vijf kleine pijpachtige voerkooien voor (2,5 cm in diameter bij 4 cm hoog) waarin het ene uiteinde is bedekt met insectenbestendig gaas.
  2. Beperk 15-20 leafhoppers in elke voerkooi en bedek vervolgens het andere uiteinde van de kooi met een dunne schuimmat.
    1. Bevestig een rijstzaailing (5-6 cm hoog) tussen het einde van de kooi en een schuimmat met tapes. Zorg ervoor dat de leafhoppers in de voederkooi zich kunnen voeden met de rijstzaailingen die zijn blootgesteld aan de binnenkant van de kooi.
  3. Dompel de zaailingwortels onder in water zodat de rijstplant in leven blijft. Laat de leafhoppers zich er 2 dagen mee voeden.
  4. Haal de leafhoppers uit hun voederkooien en verzamel de rijstzaailingen waarmee ze zich hebben gevoed. Knip de delen van zaailingen buiten de kooi en herstel de voedingsgebieden van zaailingen.
    OPMERKING: Dit monster kan maximaal 3 maanden bij -80 °C worden bewaard, als het niet onmiddellijk wordt gebruikt voor detectie.

4. Reagensbereiding

  1. Los 15,1 g Tris-base, 94 g glycine en 5 g SDS op in 1 L steriel water om 5xTris-glycinebuffer te bereiden. Verdun 200 ml 5xTris-glycinebuffer met 800 ml steriel water om 1xTris-glycinebuffer te bereiden (zie tabel 1 voor buffersamenstelling).
  2. Los 80 g NaCl, 30 g Tris-base en 2 g KCl op in 1 L steriel water om een 10xTris-gebufferde zoutoplossing (TBS) buffer te bereiden. Autoclaaf de oplossing bij 121 °C gedurende 15 min.
  3. Los 8 g SDS, 4 ml ß-mercaptoethanol, 0,02 g broomfenolblauw en 40 ml glycerol op in 40 ml 0,1 M Tris-HCl (pH 6,8) om 4x eiwitmonsterbuffer te bereiden.
  4. Meng 800 ml Tris-glycinebuffer met 200 ml methanol om de transferbuffer voor te bereiden.
  5. Voeg 100 ml 10xTBS-oplossing en 3 ml Tween 20 tot 900 ml steriel water toe om de TBS-buffer met Tween 20 (TBST)-oplossing voor te bereiden.

5. Western blotting om het speeksel en virale eiwitten te detecteren

  1. Maal 0,1 g van de rijstmonsters met vloeibare stikstof totdat het weefsel een poeder wordt. Voeg 200 μL 4x eiwitmonsterbuffer toe aan het monster en kook het gedurende 10 minuten. Centrifugeer de monsters op 12.000 x g gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur.
    1. Verwijder het supernatant en plaats het in een nieuwe injectieflacon. Laad 10 μL van het monster in een SDS-PAGE-gel en voer het gedurende 45-60 minuten in Tris-glycinebuffer op 150 V uit.
      OPMERKING: Het residu na centrifugeren kan worden weggegooid.
  2. Doe een nitrocellulosemembraan van 0,45 μm en andere sandwichbenodigdheden gedurende 30 minuten in de transferbuffer.
    OPMERKING: Deze stap kan worden uitgevoerd voordat de gel zijn run heeft voltooid.
  3. Sandwich de gel en breng het gedurende 90-120 minuten over op 100 V in de transferbuffer.
  4. Neem het membraan en plaats het gedurende 20 minuten in een vetvrije droge melkblokkeringsoplossing in TBST-oplossing. Voeg het specifieke antilichaam tegen RDV P8 of Vg toe aan een 7% oplossing van vetvrije droge melk in TBST. Incubeer met het antilichaam voor het kleuren van het membraan gedurende 2 uur of 's nachts.
  5. Was het membraan drie keer met TBST-oplossing, met telkens 5 minuten wassen.
  6. Voeg de geit anti-konijn IgG als secundair antilichaam toe aan 7% vetvrije droge melk met TBST. Incubeer met het antilichaam gedurende 60-90 minuten bij kamertemperatuur.
  7. Was het membraan met TBST-oplossing driemaal gedurende 5 minuten per keer.
  8. Gebruik de ECL Western kit voor de chemiluminescente methode. Mix detectiereagentia 1 en 2 in de kit in een verhouding van 1:1 in een buis. Breng het gemengde reagens op het membraan en incubeer de vlek gedurende 5 minuten.
  9. Giet het overtollige reagens af en maak een colorimetrische foto van de chemiluminescente foto. Combineer ze om de ladder met eiwitbanden te zien.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Figuur 1 illustreert alle stappen in dit protocol: insectenkweek, virusverwerving, het verzamelen van speekseleiwitten via rijstvoeding en de western blot. De resultaten van de western blots toonden aan dat specifieke en verwachte banden van ongeveer 220 kDa werden waargenomen in de monsters van het voeden van rijst en speekselklieren van insecten op het membraan geïncubeerd met antilichamen tegen Vg. Daarentegen werd geen band waargenomen in het niet-voedende rijstmonster. Het resu...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Het speeksel dat direct wordt uitgescheiden door de speekselklieren van de piercing-zuigende insecten speelt een cruciale rol omdat het de weefsels van de gastheer en de cross-kingdom biologische factoren van de gastheer voorverteert en ontgift in de gastheren 1,3,4. De cross-kingdom biologische factoren, waaronder elicitors, effectoren en klein RNA, zijn van cruciaal belang voor de communicatie tussen insecten en gastheer

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

Dit werk werd ondersteund door subsidies van de National Natural Science Foundation of China (31772124 en 31972239) en Fujian Agriculture and Forestry University (Grant KSYLX014).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Reagents
Tris baseRocheD609K69032Voor de bereiding van 5×Tris-glycine buffer en 10×TBS buffer
glycineSigma-AldrichWXBD0677VVoor de bereiding van 5×Tris-glycine buffer
SDSSigma-AldrichSLCB4394Voor de bereiding van 5×Tris-glycine buffer
NaClSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10019318Voor de bereiding van 10×TBS buffer
KClSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10016318Voor de bereiding van 10×TBS buffer
ß-mercaptoethanolXiya ReagentB14492Voor de bereiding van 4× proteïne monster buffer
bromofenolblauwSigma-AldrichSHBL3668Voor de bereiding van 4× proteïne monster buffer
glycerolSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10010618Voor de bereiding van 4× proteïne monster buffer
methanolSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10014118Voor de bereiding van transfer buffer
Tween 20Coolaber SCIENCE&TeCHNoLoGYCT30111220Voor de bereiding van TBST
non-fat dry milkBecton.Dickinso and company252038Voor membraan blokkering, antilichamen verdunning
goat anti-rabbit IgGSangon BiotechD110058-0001Herkenning van de primaire antilichamen
ECL Western kitThermoFisher Scientific32209Chemiluminescerende substraat
nitrocellulose membraanPall Corporation25312915Voor proteïne transfer
Buffers en oplossingen
BufferSamenstellingOpmerkingen/Beschrijving
 5×Tris-glycine buffer15.1 g Tris base
94 g glycine
 5 g SDS in 1 L steriele water		 Stock oplossing
1×Tris-glycine buffer200 mL van 5×Tris-glycine buffer
800 mL steriele water		Werk oplossing, voor SDS-PAGE
10×Tris-buffered saline (TBS) buffer80 g NaCl
30 g Tris base
2 g KCl
in 1 L steriele water		Stock oplossing
TBS met Tween 20 (TBST) oplossing100 mL 10×TBS oplossing
3 mL Tween 20
900 mL steriele water		Werk oplossing
4× proteïne monster buffer8 g SDS
4 mL ß-mercaptoethanol
0.02 g bromofenolblauw
40 mL glycerol
in 40 mL 0.1 M Tris-HCl (pH 6.8)		Voor proteïne extractie
Transfer buffer800 mL Tris-glycine buffer
200 mL methanol		Voor proteïne transfer
Instrumenten
BromofenolblauwSigma-AldrichSHBL3668Voor de bereiding van 4x proteïne monster buffer
Constante temperatuur incubatorNingbo Saifu Experimental Instrument Co., Ltd.PRX-1200BVoor het fokken van leafhoppers
ElektroforeseTanon Science & Technology Co.,Ltd.Tanon EP300Voor SDS-PAGE
Elektroforese overdracht kern moduleBIO-RAD1703935Voor SDS-PAGE
glycerolSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10010618Voor de bereiding van 4x proteïne monster buffer
glycineSigma-AldrichWXBD0677VVoor de bereiding van 5x Tris-glycine buffer
goat anti-rabbit IgGSangon BiotechD110058-0001Herkenning van de primaire antilichamen
High-pass weefsel maal instrumentShanghai Jingxin Industrial Development Co., Ltd.JXFSIPRP-24Voor het malen van plantweefsels
KClSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10016318Voor de bereiding van 10x TBS buffer
methanolSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10014118Voor de bereiding van transfer buffer
Mini natte warmte overdracht gootBIO-RAD1703930Voor SDS-PAGE
NaClSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10019318Voor de bereiding van 10x TBS buffer
nitrocellulose membraanPall Corporation25312915Voor proteïne transfer
non-fat dry milkBecton.Dickinso and company252038Voor membraan blokkering, antilichamen verdunning
Pierce ECL Western kitThermoFisher Scientific32209Chemiluminescerende substraat
Proteïne kleur instrumentGE Healthcare bio-sciences ABAmersham lmager 600Voor het detecteren van proteïnen
SDSSigma-AldrichSLCB4394Voor de bereiding van 5x Tris-glycine buffer
Tris baseRocheD609K69032Voor de bereiding van 5x Tris-glycine buffer en 10×TBS buffer
Tween 20Coolaber SCIENCE&TeCHNoLoGYCT30111220Voor de bereiding van TBST
Verticale plaat elektroforese tankBIO-RAD1658001Voor SDS-PAGE
WaterbadShanghai Jinghong Experimental equipment Co., Ltd.XMTD-8222Voor het koken van de proteïne monsters
β-mercaptoethanolXiya ReagentB14492Voor de bereiding van 4x proteïne monster buffer

Referenties

  1. Hogenhout, S. A., Ammar el, D., Whitfield, A. E., Redinbaugh, M. G. Insect vector interactions with persistently transmitted viruses. Annual Review of Phytopathology. 46, 327-359 (2008).
  2. Cranston, P. S., Gullan, P. J. Phylogeny of insects. Encyclopedia of Insects. Resh, V. H., Carde, R. T. , Academic. Amsterdam. (2003).
  3. Ammar el, D., Tsai, C. W., Whitfield, A. E., Redinbaugh, M. G., Hogenhout, S. A. Cellular and molecular aspects of rhabdovirus interactions with insect and plant hosts. Annual Review of Entomology. 54, 447-468 (2009).
  4. Wei, T., Li, Y. Rice reoviruses in insect vectors. Annual Review of Phytopathology. 54, 99-120 (2016).
  5. Hattori, M., Konishi, H., Tamura, Y., Konno, K., Sogawa, K. Laccase-type phenoloxidase in salivary glands and watery saliva of the green rice leafhopper, Nephotettix cincticeps. Journal of Insect Physiology. 51 (12), 1359-1365 (2005).
  6. Ma, R., Reese, J. C., William, I. V., Bramel-Cox, P. Detection of pectinesterase and polygalacturonase from salivary secretions of living greenbugs, schizaphis graminum (Homoptera: aphididae). Journal of Insect Physiology. 36 (7), 507-512 (1990).
  7. Miles, P. W. Dynamic aspects of the chemical relation between the rose aphid and rose buds. Entomologia Experimentalis et Applicata. 37 (2), 129-135 (2011).
  8. Urbanska, A., Tjallingii, W. F., Dixon, A., Leszczynski, B. Phenol oxidising enzymes in the grain aphid's saliva. Entomologia Experimentalis et Applicata. 86 (2), 197-203 (1998).
  9. Miles, P. W., Peng, Z. Studies on the salivary physiology of plant bugs: detoxification of phytochemicals by the salivary peroxidase of aphids. Journal of Insect Physiology. 35 (11), 865-872 (1989).
  10. Will, T., van Bel, A. Physical and chemical interactions between aphids and plants. Journal of Experimental Botany. 57 (4), 729-737 (2006).
  11. Ma, R. Z., Reese, J. C., Black, W. C., Bramel-Cox, I. Chlorophyll loss in a greenbug-susceptible sorghum due to pectinases and pectin fragments. Journal of the Kansas Entomological Society. 71 (1), 51-60 (1998).
  12. Madhusudhan, V. V., Miles, P. W. Mobility of salivary components as a possible reason for differences in the responses of alfalfa to the spotted alfalfa aphid and pea aphid. Entomologia Experimentalis et Applicata. 86 (1), 25-39 (1998).
  13. Funk, C. J. Alkaline phosphatase activity in whitefly salivary glands and saliva. Archives of Insect Biochemistry & Physiology. 46 (4), 165-174 (2010).
  14. Hogenhout, S. A., Bos, J. I. Effector proteins that modulate plant-insect interactions. Current Opinion in Plant Biology. 14 (4), 422-428 (2011).
  15. Tomkins, M., Kliot, A., Maree, A. F., Hogenhout, S. A. A multi-layered mechanistic modelling approach to understand how effector genes extend beyond phytoplasma to modulate plant hosts, insect vectors and the environment. Current Opinion in Plant Biology. 44, 39-48 (2018).
  16. Huang, H. J., Lu, J. B., Li, Q., Bao, Y. Y., Zhang, C. X. Combined transcriptomic/proteomic analysis of salivary gland and secreted saliva in three planthopper species. Journal of Proteomics. , (2018).
  17. Hogenhout, S. A., Bos, J. I. Effector proteins that modulate plant--insect interactions. Current Opinion in Plant Biology. 14 (4), 422-428 (2011).
  18. Sun, P., et al. A mosquito salivary protein promotes flavivirus transmission by activation of autophagy. Nature Communications. 11 (1), 260(2020).
  19. Sri-In, C., et al. A salivary protein of Aedes aegypti promotes dengue-2 virus replication and transmission. Insect Biochemistry and Molecular Biology. 111, 103181(2019).
  20. Conway, M. J., et al. Aedes aegypti D7 saliva protein inhibits dengue virus infection. Plos Neglected Tropical Diseases. 10 (9), 0004941(2016).
  21. Wang, N., et al. A whitefly effector Bsp9 targets host immunity regulator WRKY33 to promote performance. Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 374 (1767), 20180313(2019).
  22. Omura, T., Yan, J. Role of outer capsid proteins in transmission of phytoreovirus by insect vectors. Advances in Virus Research. 54, 15-43 (1999).
  23. Chen, Q., Liu, Y., Long, Z., Yang, H., Wei, T. Viral release threshold in the salivary gland of leafhopper vector mediates the intermittent transmission of rice dwarf virus. Frontiers in Microbiology. 12, 639445(2021).
  24. Fukushi, T. Further studies on the dwarf disease of rice plant. Journal of the Faculty of Agriculture, Hokkaido Imperial University. 45 (3), 83-154 (1940).
  25. Miyazaki, N., et al. The functional organization of the internal components of rice dwarf virus. Journal of Biochemistry. 147, 843-850 (2010).
  26. Wei, T., Shimizu, T., Hagiwara, K., Kikuchi, A., Omura, T. Pns12 protein of rice dwarf virus is essential for formation of viroplasms and nucleation of viral-assembly complexes. Journal of General Virology. 87, 429-438 (2006).
  27. Chen, Q., Zhang, L., Chen, H., Xie, L., Wei, T. Nonstructural protein Pns4 of rice dwarf virus is essential for viral infection in its insect vector. Virology Journal. 12, 211(2015).
  28. Chen, Q., et al. Nonstructural protein Pns12 of rice dwarf virus is a principal regulator for viral replication and infection in its insect vector. Virus Research. 210, 54-61 (2015).
  29. Chen, Q., Zhang, L., Zhang, Y., Mao, Q., Wei, T. Tubules of plant reoviruses exploit tropomodulin to regulate actin-based tubule motility in insect vector. Scientific Reports. 7, 38563(2017).
  30. Wei, T., et al. The spread of Rice dwarf virus among cells of its insect vector exploits virus-induced tubular structures. Journal of Virology. 80 (17), 8593-8602 (2006).
  31. Mao, Q., et al. Insect bacterial symbiont-mediated vitellogenin uptake into oocytes to support egg development. mBio. 11 (6), 01142(2020).
  32. Tufail, M., Takeda, M. Molecular characteristics of insect vitellogenins. Journal of Insect Physiology. 54 (12), 1447-1458 (2008).
  33. Sappington, T. W., Raikhel, A. S. Molecular characteristics of insect vitellogenins and vitellogenin receptors. Insect Biochemistry and Molecular Biology. 28 (5-6), 277-300 (1998).
  34. Ji, R., et al. Vitellogenin from planthopper oral secretion acts as a novel effector to impair plant defenses. New Phytologist. , (2021).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Detectie van plantenvirussenRice Dwarf VirusWestern blotSDS PAGEtransmissie via Hemipteradetectie van vitellogeninevirus plantinteractieeiwitextractie

Gerelateerde artikelen