Verergering van myocardiale ischemie bij blootstelling aan deeltjes in atherosclerose diermodel

Samenvatting

Dit protocol beschrijft een samengesteld diermodel met blootstelling aan fijnstof (PM) dat myocardiale ischemie verergert met atherosclerose.

Samenvatting

De gezondheidsproblemen veroorzaakt door luchtvervuiling (vooral fijnstofvervuiling) krijgen steeds meer aandacht, vooral bij hart- en vaatziekten, wat gecompliceerde aandoeningen verergert en een slechte prognose veroorzaakt. Het eenvoudige blootstellingsmodel voor myocardiale ischemie (MI) of fijnstof (PM) is ongeschikt voor dergelijke studies van ziekten met meerdere oorzaken. Hier is een methode beschreven voor het construeren van een samengesteld model dat PM-blootstelling, atherosclerose en myocardiale ischemie combineert. ApoE^−/− muizen kregen gedurende 16 weken een vetrijk dieet om atherosclerose te ontwikkelen, tracheale instillatie van PM-standaardsuspensie werd uitgevoerd om de pulmonale blootstelling van PM te simuleren en de linker anterieur dalende kransslagader werd een week na de laatste blootstelling geligeerd. Tracheale instillatie van PM kan acute longblootstelling simuleren en tegelijkertijd de kosten van het experiment aanzienlijk verlagen; de klassieke linker anterieur dalende slagaderligatie met niet-invasieve tracheale intubatie en een nieuw hulpexpansieapparaat kan de overlevingskans van het dier garanderen en de moeilijkheidsgraad van de operatie verminderen. Dit diermodel kan redelijkerwijs de pathologische veranderingen van de patiënt van een hartinfarct verergerd door luchtvervuiling simuleren en een referentie bieden voor de constructie van diermodellen met betrekking tot studies met ziekten met meerdere oorzaken.

Inleiding

Luchtvervuiling is in verband gebracht met een hoge sterfte door alle oorzaken en droeg meer bij aan een aanzienlijke ziektelast dan de som van watervervuiling, bodemverontreiniging en beroepsmatige blootstelling¹. Een rapport van de WHO onthulde dat luchtvervuiling in de buitenlucht in 2016 wereldwijd 4,2 miljoen vroegtijdige sterfgevallen veroorzaakte in zowel steden als landelijke gebieden². 91% van de mensen wereldwijd woont op plaatsen waar de luchtkwaliteit de who-richtlijnlimieten overschrijdt². Verder wordt het fijnstof (PM) (≤2,5 μm in diameter, PM_2,5) erkend als de belangrijks....

Protocol

Alle hier beschreven dieractiviteiten zijn goedgekeurd door de Commissie Voor Dierethiek van het Instituut van Chinese Materia Medica, China Academy of Chinese Medical Sciences. Mannelijke ApoE^−/− muizen (C57BL/6 achtergrond) van 6-8 weken oud werden gebruikt voor het onderzoek.

1. Experimentele voorbereiding

1. Bereid Tribromoethanol anesthetica (15 mg/ml): los 0,75 g tribroomethanol op in 1 ml tert-amylalcohol (zie materiaaltabel). Na volledige oplossing verdunt u het tot 50 ml met steriele zoutoplossing. Bewaar de oplossing bij 4 °C in een steriele recipiënt en vermijd blootstelling aan....

Resultaten

De muizen werden 24 uur na de ligatie van de kransslagader geëuthanaseerd en het bloed werd verzameld na anesthesie. Muizen werden verdoofd met tribroomethanol (volgens stap 3.2) en het bloedmonster werd verzameld uit de retroorbitale sinus. Het hart werd geoogst en de mate van Ischemie werd onderzocht door 2,3,5-Trifenyltetrazoliumchloride (TTC) kleuring (Figuur 1). Normale weefsels worden rood wanneer de TTC reageert met succinaatdehydrogenase, terwijl de ischemische weefs.......

Discussie

De oprichting van een samengesteld diermodel is iets anders dan het enkele MI-model. Het handhaven van een hoge overlevingskans is een uitdaging bij de ontwikkeling van het composietmodel. De ernst van atherosclerose bij ApoE^−/− muizen zal ernstiger worden met de verlenging van de vetrijke voedingstijd⁷, en de zwakte van muizen leidt tot verhoogde mortaliteit. Daarom is het noodzakelijk om de toestand van de muizen tijdens het experiment voortdurend te controleren en de tijd voor het in.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
2,2,2-Tribromoethanol	Sigma-Aldrich	T48402
75% alcohol desinfecterend middel
Dierventilator	Shanghai Alcott Biotech	ALC-V8S
Wattenstaafjes			Steriele
Wattenstaafjes voor baby's			Steriele, ongeveer 3 mm in diameter
Kweekschaal	Corning	430597	150 mm x 25 mm
Dieseldeeltjes	National Institute of Standards Technology	1650b
Dissectieplank			Ongeveer 25 x 17 cm. De dissectieplank kan worden vervangen door een houten plank van dezelfde grootte
Dieet rijk aan vet voor muizen			Recept: eidooierpoeder 10%, reuzel 10%, sterol 1%, onderhoudsvoer 79%
Jodofoor desinfecterend middel
LED-schijnwerper			5 V, 3 W, met slangen en klemmen
Medische zijdegarensop	Shanghai Medical Suture Needle Factory Co., Ltd.	-	0-0
Medisch tape	3M	1527C-0
Microvasculaire hemostatische tang	Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory	W40350
Naaldhouders	Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory	JC32010
Normale zoutoplossing
Oogheelkundige schaar	Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory	Y00040
Oogheelkundige pincet, 10 cm, gebogen, met haken	Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory	JD1080
Oogheelkundige pincet, 10 cm, gebogen, met tanden	Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory	JD1060
Pipetpunten	Axygen	T-200-Y-R-S	0-200 μL
Pipet	eppendorf	3121000074	100 uL
Veiligheidsspeld			Ongeveer 4,5 cm lang, voor het maken van borstopeningsgereedschap
Kleine dierlijke iv-canules	Baayen healthcare suzhou	BAAN-322025	IV-KATHETER 22FG x 25 MM
Naald met draad	Shanghai Medical Suture Needle Factory Co., Ltd.	-	6-0, Nylondraad
Naald met draad	JinHuan Medical	F503	5-0
Spuit			1 mL
Tert-amylalcohol
Zoom-stereomicroscoop	Mshot	MZ62