Methodenartikel

Vergelijking van methoden voor het isoleren van entomopathogene schimmels uit bodemmonsters

DOI:

10.3791/63353

⸱

6 januari 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias, Instituto de Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, 2Laboratório de Taxonomia Bioquímica e Bioprospecção de Fungos/Coleção de Cultura de Fungos Filamentosos, Instituto Oswaldo Cruz, Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ), 3Departamento de Parasitologia Animal, Instituto de Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Entomopathogene schimmelkolonies worden geïsoleerd uit tropische bodemmonsters met tenebrio-aas , Galleria-aas en selectief kunstmatig medium, d.w.z. aardappeldextrose-agar verrijkt met gistextract aangevuld met chlooramfenicol, thiabendazool en cycloheximide (CTC-medium).

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Het doel van deze studie is om de effectiviteit van het gebruik van insectenaas te vergelijken met kunstmatig selectief medium voor het isoleren van entomopathogene schimmels (EPF) uit bodemmonsters. De bodem is een rijke habitat voor micro-organismen, waaronder EPF, met name behorend tot de geslachten Metarhizium en Beauveria, die geleedpotige plagen kunnen reguleren. Biologische producten op basis van schimmels zijn voornamelijk beschikbaar op de markt voor de bestrijding van geleedpotigen in de landbouw. Ondanks de hoge endemische biodiversiteit worden wereldwijd slechts enkele stammen gebruikt in commerciële bioproducten. In de huidige studie werden 524 bodemmonsters gekweekt op aardappel dextrose agar verrijkt met gistextract aangevuld met chlooramfenicol, thiabendazool en cycloheximide (CTC-medium). De groei van schimmelkolonies werd gedurende 3 weken waargenomen. Alle Metarhizium en Beauveria EPF werden morfologisch geïdentificeerd op geslachtsniveau. Bovendien werden sommige isolaten moleculair geïdentificeerd op soortniveau. Vierentwintig van deze 524 bodemmonsters werden ook onderzocht op EPF-voorkomen met behulp van de insectenaasmethode (Galleria mellonella en Tenebrio molitor). In totaal werden 51 EPF-stammen geïsoleerd (41 Metarhizium spp. en 10 Beauveria spp.) uit de 524 bodemmonsters. Alle schimmelstammen werden geïsoleerd uit akkerland of graslanden. Van de 24 monsters die ter vergelijking werden geselecteerd, was 91,7% positief voor EPF met Galleria-aas , 62,5% met Tenebrio-aas en 41,7% met CTC. Onze resultaten suggereerden dat het gebruik van insectenaas om de EPF uit de grond te isoleren efficiënter is dan het gebruik van het CTC-medium. De vergelijking van isolatiemethoden naast de identificatie en conservering van EPF heeft een positieve invloed op de kennis over biodiversiteit. De verbetering van de EPF-collectie ondersteunt wetenschappelijke ontwikkeling en technologische innovatie.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De bodem is de bron van verschillende micro-organismen, waaronder entomopathogene schimmels (EPF). Deze specifieke groep schimmels wordt herkend aan hun vermogen om geleedpotige gastheren, vooral insecten, te koloniseren en vaak te doden1. Na isolatie, karakterisering, selectie van virulente stammen en registratie worden EPF massaal geproduceerd voor geleedpotige plaagbestrijding, wat hun economische relevantie ondersteunt2. Dienovereenkomstig wordt de isolatie van EPF beschouwd als de eerste stap naar de ontwikkeling van een biopesticide. Beauveria spp. (Hypocreales: Cordycipitaceae) en Metarhizium spp....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Omdat de huidige studie toegang had tot Braziliaans genetisch erfgoed, werd het onderzoek geregistreerd bij het National System for the Management of Genetic Heritage and Associated Traditional Knowledge (Sisgen) onder de code AA47CB6.

1. Bodembemonstering

  1. Verzamel 800 g grond (met of zonder invallende secundaire plantenwortels) tot een diepte van 10 cm met behulp van een kleine schop. Bewaar ze in polypropyleen zakken bij kamertemperatuur tot het begin van het experiment.
    OPMERKING: Kleine wortels kunnen ook worden verzameld omdat EPF naar verluidt rhizosfeercompetentie heeft. Hoe sneller de verwerking van de ....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Een totaal van 524 bodemmonsters werden verzameld van grasland: veeweide (165 monsters), inheems tropisch bos (90 monsters), meer (42 monsters) en gecultiveerd / akkerland (227 monsters) tussen 2015 en 2018 in de staat Rio de Janeiro, Brazilië. Details over de geografische coördinaten van monsters die positief zijn voor EPF zijn gegeven in aanvullende tabel 1.

Van de 524 bodemmonsters werden 500 monsters alleen geanalyseerd met behulp van CTC-medium en 24 monsters werden gelij.......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Natuurlijke en agrarische bodemhabitats zijn typische omgevingen voor EPF22 en een uitstekend natuurlijk reservoir. In de huidige studie werden twee methoden van EPF-isolatie met behulp van insectenaas versus selectief medium behandeld. De eerste stap voor isolatie is het verzamelen van de bodemmonsters. Een goede opslag en identificatie van bodemmonsters zijn cruciaal. Informatie over de breedtegraad, lengtegraad, bodemtype en bioom is essentieel voor studies met epidemiologische, modellerings- e.......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben geen belangenverstrengeling.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deze studie werd gedeeltelijk gefinancierd door de Coordenacão de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) uit Brazilië, financieringscode 001, Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ) (projectnummer E-26/010.001993/2015), en Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) uit Brazilië.

....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
AutoclaafPhoenix Luferco9451
BioveiligheidskabinetAirstream ESCOAC2-4E3
ChloramfenicolSigma-AldrichC0378
KlimaatkamersEletrolabEL212/3
DekglasRBR3871
CycloheximideSigma-AldrichC7698
Drigalski-spatelMarienfeld1800024
GPS appGeolocatie app2.1.2005
Lactofenolblauw oplossingSigma-Aldrich61335
MicroscoopZeiss Axio star plus1169 149
MicroscoopcameraZeiss Axiocam 105 color426555-0000-000
MicroscoopsoftwareZen lite Zeiss 3.0
MicroscoopglasOlenk5-7105-1
MicrobuisjeBRANDZ336769-1PAK
PetrischalenKasviK30-6015
PipettipVattenVT-230-200C/VT-230-1000C
PipetHTL - LabmateproLMP 200 / LMP 1000
Kunststof pottenPrafesta descartáveis8314
Polypropyleen zakkenExtrusa38034273/5561
Aardappeldextrose-agarKasviK25-1022
Prism-software 9.1.2Graph Pad
SchopTramontina77907009
Tenebrio mollitorSafariQP98DLZ36
ThiabendazolSigma-AldrichT8904
Tween 80Vetec60REAVET003662
VortexBiomixerQL-901
GistextractKasviK25-1702

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Roberts, D. W., St. Leger, R. J. Metarhizium spp., cosmopolitan insect-pathogenic fungi: Mycological aspects. Advances in Applied Microbiology. 54, 1-70 (2004).
  2. do Nascimento Silva, J., et al.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Lokmethode voor insectenartificieel selectief mediumMetarhizium soortenBeauveria soortenCTC mediumisolatie van schimmelsmorfologische identificatiebiologische bestrijdingsmiddelen

Gerelateerde artikelen