De mechanische conflictvermijdingstest wordt gebruikt als een niet-reflexieve uitlezing van pijngevoeligheid bij muizen die kan worden gebruikt om affectieve-motiverende reacties in verschillende muispijnmodellen beter te begrijpen.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Mechanische conflictvermijdingstest om pijngedrag bij muizen te meten
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Pijn bestaat uit zowel zintuiglijke (nociceptieve) als affectieve (onaangename) dimensies. In preklinische modellen wordt pijn traditioneel beoordeeld met behulp van reflexieve tests die gevolgtrekkingen mogelijk maken met betrekking tot de nociceptieve component van pijn, maar weinig informatie geven over de affectieve of motiverende component van pijn. Het ontwikkelen van tests die deze componenten van pijn vastleggen, zijn daarom translationeel belangrijk. Daarom moeten onderzoekers niet-reflexieve gedragstests gebruiken om pijnperceptie op dat niveau te bestuderen. Mechanische conflictvermijding (MCA) is een gevestigde vrijwillige niet-reflexieve gedragstest, voor het bestuderen van motiverende reacties op een schadelijke mechanische stimulus in een 3-kamerparadigma. Een verandering in de locatievoorkeur van een muis, wanneer geconfronteerd met concurrerende schadelijke stimuli, wordt gebruikt om de waargenomen onaangenaamheid van fel licht versus tactiele stimulatie van de poten af te leiden. Dit protocol schetst een aangepaste versie van de MCA-test die pijnonderzoekers kunnen gebruiken om affectief-motiverende reacties in verschillende muispijnmodellen te begrijpen. Hoewel hier niet specifiek beschreven, gebruiken onze voorbeeld MCA-gegevens het intraplantaire complete Freund's adjuvans (CFA), gespaard zenuwletsel (SNI) en een fractuur / gietmodel als pijnmodellen om de MCA-procedure te illustreren.
Inleiding
Pijn is een complexe ervaring met zintuiglijke en affectieve componenten. Een verlaging van de drempel van pijnperceptie en overgevoeligheid voor thermische en/of mechanische stimuli zijn belangrijke kenmerken van deze ervaring, die stimulus-opgeroepen pijngedragstests kunnen vastleggen (zoals Hargreaves' test van warmtegevoeligheid en de von Frey-test van mechanische gevoeligheid)1,2. Hoewel dergelijke tests robuuste en reproduceerbare resultaten geven, worden ze beperkt door hun afhankelijkheid van reflexieve terugtrekking uit een waargenomen schadelijke stimulus. Dit heeft een voortdurende afhankelijkheid v....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle experimenten met het gebruik van muizen en de daarin gevolgde procedures werden goedgekeurd door de Institutional Animal Care and Use Committees van MD Anderson Cancer Center en Stanford University, in strikte overeenstemming met de National Institutes of Health's Guide for the Care and Use of Laboratory Animals.
1. MCA-constructie
- Constructiekamer 1 met de volgende afmetingen: 125 mm x 125 mm x 125 mm (breedte x diepte x hoogte) van ondoorzichtig wit 3 mm dik acryl gebruikt voor de zijwanden, vloer, plafond. Gebruik een helder acrylaat van 3 mm dik voor de voorwand. Lijm alle zijden ruim van tevoren....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
De MCA-test is met succes gebruikt met verschillende mechanistisch verschillende muispijnmodellen. Figuur 2 toont gegevens waarbij de uitkomstmaat van keuze het middelpunt van kamer 2 overschreed (figuur 2A). De gegevens verkregen door het gebruik van het halverwege punt versus ontsnapping in kamer 3 zijn zeer vergelijkbaar, ~ 40 s voor halverwege versus ~ 45 s voor kamer 3 ontsnapping in het gespaarde zenuwletsel (SNI) model van neuropathische pijn met 5 mm son.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Zoals met alle gedragstests, is een goede behandeling, randomisatie en blindering voor de behandeling van dieren overal essentieel. Gezien de multifactoriële input in complex gedrag en besluitvorming, is het noodzakelijk dat dieren zo consistent mogelijk worden behandeld, gewenning en getest, terwijl de nood wordt geminimaliseerd. Er moet ook voor worden gezorgd dat de timing van de muisplaatsing in kamer 1 wordt gereproduceerd, de LED-verlichting wordt ingeschakeld en de barrière wordt verwijderd, omdat verschillen hier.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben geen relevante belangenconflicten om bekend te maken.
Dankbetuigingen
GM wordt ondersteund door een NDSEG Graduate Fellowship. VLT wordt ondersteund door NIH NIGMS grant #GM137906 en de Rita Allen Foundation. AJS wordt ondersteund door subsidies van het Ministerie van Defensie W81XWH-20-1-0277, W81XWH-21-1-0197 en de Rita Allen Foundation. We zijn Dr. Alexxai Kravitz van de Washington University School of Medicine dankbaar voor het ontwerpen en vrij beschikbaar stellen van de 3D-printerbestanden voor de kamer 2-vloer en sondeplaat.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 32.8ft 3000K-6000K Tunable White LED Strip Lights, Dimmable Super Bright LED Tape Lights met 600 SMD 2835 LED's | Lepro | SKU: 410087-DWW-US | Voor verlichting kamer 1. https://www.lepro.com/32ft-dimmable-tunable-white-led-strip-lights.html |
| 3D geprinte 'spike bed' en 'kamer 2 vloer' | Shapeways | N/A | Optioneel, voor mechanische sondes als alternatief voor afgevlakte mappenpennen. |
| 70% ethanol | Verschillende | N/A | Om MCA tussen muizen schoon te maken. |
| Acryl Scharnier 2 | TAP Plastics | N/A | Voor het bevestigen van kamerdeksels aan achterwanden. https://www.tapplastics.com/product/plastics/handles_hinges_latches/acryl_hinge_2/122 |
| Chemcast Gegoten Acrylplaat, Helder | TAP Plastics | N/A | 3mm dik. Voor de voorwand van kamer 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_cast_clear/510 |
| Chemcast Gegoten Transparant Gekleurd Acryl, Transparant Donker Rood - 50% | TAP Plastics | N/A | 3mm dik. 50% lichttransmissie. Voor de wanden en deksels van kamers 2 en 3. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_transparent_colors/519 |
| Chemcast Doorschijnend en Ondoorzichtig Gekleurd Gegoten Acryl, Sign Ondoorzichtig Wit - 0.1% | TAP Plastics | N/A | 3mm dik. Voor de zijwanden en deksel van kamer 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_color/341 |
| Desinfectiemiddel (bijv. Quatricide) | Pharmacal Research Laboratories, Inc. | 65020F | Om MCA aan het einde van een test sessie te desinfecteren. |
| Droogwegmarkeringen en bord | Verschillende | N/A | Om experimentele info toe te voegen aan het begin van videobeelden. |
| Mappenpennen | Verschillende | N/A | Optioneel, voor mechanische sondes. Gebruik schuurpapier om scherpe punten te dempen voor gebruik. Kan worden gebruikt in plaats van 3D-geprinte onderdelen. |
| Papieren handdoeken | Verschillende | N/A | Om MCA schoon te maken/desinfecteren. |
| SCIGRIP Weld-On #3 Acrylcement | TAP Plastics | N/A | Voor het samenstellen van acrylplaten in kamers en het bevestigen van scharnieren. https://www.tapplastics.com/product/repair_products/plastic_adhesives/weld_on_3_cement/131 |
| Stopwatch | Verschillende | N/A | Om ontsnappingslatenties/verblijfstijden in real-time of van opgenomen video op te nemen. |
| Timer | Verschillende | N/A | Om ervoor te zorgen dat het aanzetten van LED's, het verwijderen van barrières en het voltooien van tests consistent worden getimed. |
| Videocamera | Verschillende | HDRCX405 Handycam Camcorder | Om muisgedrag in het MCA-apparaat op te nemen. Kan worden vervangen door elke consumentenvideocamera die 1080p-resolutie kan leveren. |
| Statieve | Famall | N/A | Elke statief die de camera op tafelhoogte kan houden voor het opnemen van MCA-beelden is acceptabel. |
Referenties
- Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia. Pain. 32 (1), 77-88 (1988).
- Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. Quantitative ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
