Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

5-Aminolevulinezuur-gemedieerde fotodynamische therapie op primaire bottumor en botmetastasen cellijnen

1K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/63644

⸱

10 mei 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory of Cell Biology, Department of Orthopaedic Surgery, University Hospital of Tübingen, 2Department of Orthopaedic Surgery, University Hospital of Tübingen

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Dit protocol presenteert een stapsgewijze methodologische benadering van het blootstellen van botmetastascellijnen en primaire bottumoren aan 5-aminolevulinezuur-gemedieerde fotodynamische therapie (PDT). De effecten op celmigratiepotentieel/invasiviteit, levensvatbaarheid, apoptose en senescentiepotentieel worden ook geanalyseerd na blootstelling aan PDT.

Samenvatting

Botmetastasen worden in verband gebracht met een slechte prognose en een lage kwaliteit van leven voor de getroffen patiënten. Fotodynamische therapie (PDT) komt naar voren als een niet-invasieve therapie die zich kan richten op lokale gemetastaseerde botlaesies. Dit artikel presenteert een in vitro methode om het PDT-effect in aanhangende cellijnen te bestuderen. Daartoe demonstreren we een stapsgewijze aanpak om zowel primaire (reuscelbottumor) als menselijke botmetastatische kankercellijnen (afgeleid van een primair invasief ductaal borstcarcinoom en niercarcinoom) te onderwerpen aan 5-aminolevulinezuur (5-ALA)-gemedieerde PDT.

Na 24 uur na 5-ALA-PDT-bestraling (blauw licht-golflengte 436 nm) werd het therapeutisch effect beoordeeld in termen van celmigratiepotentieel, levensvatbaarheid, apoptotische kenmerken en cellulaire groeistilstand (senescentie). Na 5-ALA-PDT-bestraling reageren van het bewegingsapparaat afgeleide cellijnen anders op dezelfde doses en blootstelling aan PDT. Afhankelijk van de mate van cellulaire schade veroorzaakt door blootstelling aan PDT, werden twee verschillende cellotsbestemmingen opgemerkt: apoptose en senescentie. Variabele gevoeligheid voor PDT-therapie tussen verschillende botkankercellijnen biedt nuttige informatie voor het selecteren van meer geschikte PDT-instellingen in klinische omgevingen. Dit protocol is ontworpen om het gebruik van PDT in de context van musculoskeletale neoplastische cellijnen te illustreren. Het kan worden aangepast om het therapeutische effect van PDT op verschillende kankercellijnen en verschillende fotosensibilisatoren en lichtbronnen te onderzoeken.

Inleiding

Therapeutische opties voor botmetastasen zijn nog steeds beperkt en uitdagend, ondanks voortdurende ontwikkelingen in de oncologische behandeling. De huidige standaardmethode is radiotherapie, die gepaard gaat met complicaties zoals lokaal erytheem, toxiciteit voor inwendige organen1 en onvoldoende fracturen2. Er is behoefte aan alternatieve antineoplastische therapieën, aangezien patiënten met botmetastasen vaak last hebben van pijn, hypercalciëmie en neurologische symptomen die resulteren in verminderde mobiliteit en verminderde kwaliteit van leven3. Recente bevindingen tonen aan dat PDT een veelbelovende, alternatieve, antineoplastische behandelingsoptie biedt om botlaesies direct aan te pakken, die alleen of ondersteunend voor radiotherapie kunnen worden gebruikt4.

Het mechanisme van PDT is in wezen gebaseerd op een energieoverdracht van een lichtgeëxciteerde lichtgevoelige verbinding (fotosensibilisator) naar weefselzuurstof. Deze fotosensibilisator werkt op nanoscopisch niveau op dezelfde manier als een condensator. Het kan energie opslaan in een grondtoestand wanneer het wordt bestraald met een geschikte golflengte van licht en geeft opgeslagen energie vrij wanneer het terugkeert van een opgewonden toestand naar de oorspronkelijke grondtoestand5. De vrijgekomen energie leidt tot twee fotochemische reacties: de ene is de omzetting van zuurstof in reactieve zuurstofradicalen door waterstof of een elektron over te dragen. De tweede is de productie van singlet-zuurstofdeeltjes door horizontale energieoverdracht van het fotosensibiliserende substraat naar lokale triplet-zuurstofdeeltjes6. Reactieve zuurstofradicalen en singlet-zuurstofmoleculen hebben zeer cytotoxische effecten op lokale tumorcellen en induceren vasculaire occlusie en lokale ontstekingsreactie door apoptose van endotheelcellen van tumorbloedvaten7.

Conventionele fotosensibilisatoren zijn derivaten van de porfyrinefamilie, zoals hematoporfyrinen en benzoporfyrinen8. Het aanbrengen van fotosensibiliserende stoffen met een hogere affiniteit op tumorweefsel kan de selectiviteit van PDT9 y verhogen. In het bijzonder kan 5-ALA, een biosynthetische voorloper van protoporfyrine IX, zich ophopen in tumorcellen zoals actinische keratose, basaalcelcarcinoom, blaastumor en gastro-intestinale kanker5. Verschillende toedieningsbenaderingen met behulp van 5-ALA kunnen ook de efficiëntie van PDT variëren in relatie tot tumorlokalisatie. Zo werd topisch gebruik van 5-ALA met de toepassing van PDT de eerstelijns dermatologische therapie tegen actinische keratose10. Recente resultaten voor botmetastasen van invasieve ductale borstkankercellijnen wijzen op mogelijke remming van celmigratie en inductie van apoptose na blootstelling aan PDT met 5-ALA11. Het gebruik van PDT in subfasciaal menselijk weefsel, zoals botweefsel, bevindt zich echter nog in de preklinische tot experimentele klinische fase, aangezien de werkzaamheid moet worden verbeterd. Toepassingen van nanodeeltjes met lichttherapie hebben al een grote impact in de tandheelkunde12. Het is dus waarschijnlijk dat de combinatie van het gebruik van nanodeeltjes met PDT het toepassingsgebied zal uitbreiden naar orthopedische oncologie.

Het volgende protocol beschrijft hoe beide cellen afkomstig van primaire bottumoren en botmetastasen, cellijnen kunnen worden voorbereid en onderworpen aan 5-ALA-gemedieerde PDT gedurende een vooraf bepaalde tijdsblootstelling. Een gedetailleerde beschrijving van het uitvoeren en beoordelen van het cellulaire migratiepotentieel, de vitaliteit en de veroudering na 5-ALA-PDT-bestraling is ook inbegrepen. Stapsgewijze instructies bieden een eenvoudige en beknopte aanpak om betrouwbare en reproduceerbare gegevens te verkrijgen. De voordelen, beperkingen en toekomstperspectieven van de PDT-benadering voor neoplastische botlaesies worden ook besproken.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Er werden drie verschillende soorten cellijnen gebruikt: "MAM" - een cellijn afkomstig van botmetastasen van niercelcarcinoom, "MAC" - botmetastasen van een invasief ductaal borstcarcinoom en "17-1012" - een reusachtige-celtumor van het bot. Merg-afgeleide mesenchymale stamcellen (MSC's) werden gebruikt als controlegroep. Institutionele en ethische goedkeuring werd verkregen voor de start van de studie (projectnummer: 008/2014BO2 - voor de kankercellijnen en projectnummer: 401/2013 BO2 voor MSC's).

1. Celcultuur

LET OP: Cultuurmedia kunnen vooraf worden voorbereid. De kweekbodem voor MAM en 17-1012 bestaat uit RPMI aangevuld met 10% (v/v) foetaal runderserum (FBS) en 2 mM L-glutamine. Het kweekmedium voor MAC en MSC's bestaat uit Dulbecco's gemodificeerd Eagle's medium (DMEM) met glutaminevervanger (zie de materiaaltabel), 4,5 g/L D-glucose aangevuld met 10% (v/v) FBS.

  1. Oogst en passage cellen totdat 80% samenvloeiing is bereikt.
  2. Was de cellen met 5 ml fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) en zuig de PBS met een pipet uit de kolf.
    OPMERKING: Deze stap zorgt voor de verwijdering van het resterende volledige medium dat proteaseremmers bevat.
  3. Voeg 3 ml 0,05% (v/v) trypsine-EDTA toe om de aanhangende cellen te dissociëren van de bodem van de kolf waarin ze zijn gekweekt.
  4. Incubeer de kolven gedurende 5 minuten bij 37 °C in een bevochtigde atmosfeer met 5 % CO2 .
  5. Bekijk de celloslating onder een fasecontrastmicroscoop.
    OPMERKING: De incubatietijd moet voor elk celtype worden aangepast. Voorkom celblootstelling aan trypsineoplossing gedurende langere perioden (>10 min).
  6. Stop de trypsinisatie door 3 ml kweekmedium toe te voegen.
    OPMERKING: Zorg ervoor dat u het juiste kweekmedium toevoegt voor elk celtype dat 10% (v/v) FBS bevat.
  7. Breng de losgemaakte cellen over in een centrifugeerbuis en centrifugeer ze gedurende 7 minuten bij 350 × g bij 7 °C.
  8. Gooi het bovenstaande weg.
  9. Resuspendeer de celpellet in 1 ml kweekmedium en tel de cellen met behulp van een hemocytometer zoals eerder beschreven13.

2. PDT-instelling en belichting

  1. Bereid het PDT-apparaat voor (zie de materiaaltabel) door alle kabels en accessoires aan te sluiten.
  2. Dim het licht in de kamer om onnodige lichtdissipatie te voorkomen.
  3. Plaats en stabiliseer de lichte vezel met behulp van ducttape direct op de putplaat.
    OPMERKING: Een gelijkmatige verdeling van de lichtvezels bovenop de putjes is gewenst om ervoor te zorgen dat alle cellen worden bestraald en dezelfde hoeveelheid energie ontvangen (Figuur 1).
  4. Zorg ervoor dat u de lichtvezel niet ernstig buigt of beschadigt, omdat dit kan leiden tot een vermindering van de lichtintensiteit.
  5. Bedek de putplaten met aluminiumfolie om lichtdissipatie te minimaliseren.
  6. Schakel het PDT-apparaat in door op de AAN/UIT-schakelaar te drukken.
  7. Plaats de kaart met een datalimiet in de sleuf aan de voorkant van het PDT-apparaat.
    OPMERKING: Bij het apparaat wordt één kaart met meetmeter geleverd die overeenkomt met een belichtingstijd van 300 s. Een extra programma van 2.000 s wordt automatisch geïntegreerd in het PDT-apparaat. Voor beide belichtingstijden wordt het licht geleverd in een continue outputmodus voor de aangegeven perioden.
  8. Zorg ervoor dat de timer op het display van de PDT-lightbox verandert in de voorgeschreven tijd die op de kaart met meter wordt aangegeven.
  9. Start de PDT-behandeling door op het ingebouwde voetpedaal te drukken.
    OPMERKING: Er is een automatische stopfunctie in het apparaat ingebouwd en het systeem werkt automatisch. Stop het lichtproces niet en verwijder de lichtvezel niet voordat de cyclus is voltooid. Aan het einde van de lichtcyclus wordt de sluiter van de lichtbron gesloten en wordt er geen licht meer geleverd.

3. Migratie test

  1. Zaadcellen als volgt: 2 × 104 cellen - MAC, 1 × 104 cellen - MAM, 3 x 104 - 17-1012 en 2,5 × 104 - MSC's in elke 2-kamer kweekinzetstuk geïntegreerd in ondoorzichtige platen met 6 putjes met F-bodem.
  2. Incubeer de cellen bij 37 °C, 5% CO2 gedurende 24 uur. Verwijder de inzetstukken daarna.
    OPMERKING: Om een startreferentiepunt voor de migratie en de initiële onbevooroordeelde spleetgrootte te hebben, wordt een aparte plaat gebruikt, die niet wordt onderworpen aan verdere blootstelling aan 5-ALA-PDT (stappen 3.3-3.4), maar in plaats daarvan direct wordt gekleurd en gekwantificeerd (stappen 3.5-3.12).
  3. Vervang het medium door vers FBS-vrij medium dat 1 mM 5-ALA bevat.
  4. Incubeer de cellen bij 37 °C, 5% CO2 gedurende 4 uur.
    OPMERKING: Als controles moeten extra putjes gelijktijdig worden afgedekt met medium zonder 5-ALA.
  5. Onderwerp de cellen aan PDT met blauw licht (436 nm, 36 J/cm2) in een continue uitvoermodus voor vooraf gedefinieerde tijdsbestekken van 300 s of 2,000 s, zoals aangegeven in sectie 2.
    OPMERKING: Platen die niet worden blootgesteld aan PDT-blootstelling moeten als controles worden gebruikt.
  6. Incubeer de cellen bij 37 °C, 5% CO2 gedurende 24 uur.
    OPMERKING: Controleer de cellen regelmatig om de mate van migratie voor elk celtype te beoordelen. Dit moet voor elke cellijn worden geoptimaliseerd.
  7. Was de cellen met 1,5 ml PBS en verwijder de PBS daarna volledig.
  8. Fixeer de cellen door de cellen toe te voegen en te incuberen met 1,5 ml 4% (v/v) paraformaldehyde in PBS gedurende 10 minuten.
  9. Voeg 1,5 ml 70% (v/v) ethanol toe en incubeer gedurende 10 min.
  10. Gooi de ethanol weg en laat de platen 10 minuten aan de lucht drogen bij kamertemperatuur.
  11. Incubeer de cellen met 1,5 ml 0,2% (v/v) Coomassie blauwe kleurstof in 90% (v/v) ethanol gedurende 20 min.
  12. Was de borden af met dubbel gedestilleerd water.
    OPMERKING: Om de platen grondig te wassen en het resterende vuil te verwijderen, dompelt u de platen 2-3 keer volledig onder in schoon, dubbel gedestilleerd water.
  13. Laat de platen 24 uur aan de lucht drogen bij kamertemperatuur.
    OPMERKING: In dit stadium kunnen de gedroogde platen minimaal enkele weken bij kamertemperatuur worden bewaard.
  14. Visualiseer en fotografeer de migratie van cellen naar openingen met een omgekeerde fasecontrastmicroscoop met een 10-voudige vergroting.
    OPMERKING: Observeer en fotografeer de migratie van levende cellen gedurende maximaal 24 uur na blootstelling aan 5-ALA-PDT. Vaste cellen kunnen echter later worden opgeslagen en gefotografeerd.
  15. Exporteer de afbeeldingen in het gewenste formaat en kwantificeer de hiaten met behulp van software voor het verwerken en analyseren van wetenschappelijke afbeeldingen zoals eerder beschreven14.

4. Levensvatbaarheidstest

  1. Zaai alle cellen met een dichtheid van 1,5 × 104 in platen met 96 putjes in 50 μL kweekmedium.
  2. Incubeer de cellen bij 37 °C, 5% CO2 gedurende 24 uur in een standaard celkweekincubator.
  3. Voeg nog eens 50 μL FBS-vrije kweekmedia met 5-ALA toe in een eindconcentratie van 1 mM.
  4. Incubeer de cellen bij 37 °C, 5% CO2 gedurende 4 uur in een standaard celkweekincubator.
    OPMERKING: Gebruik een 2x concentratie, aangezien de cellen al bedekt zijn met 50 μL kweekmedium. Een controle met kweekmedium moet worden opgenomen.
  5. Onderwerp de cellen aan PDT-blootstelling met blauw licht (436 nm, 36 J/cm2) in een continue uitvoermodus voor vooraf gedefinieerde tijdsbestekken van 300 s of 2,000 s, zoals aangegeven in sectie 2.
    OPMERKING: Een negatieve controle die niet is blootgesteld aan PDT-blootstelling moet ook worden opgenomen.
  6. Incubeer de bestraalde cellen bij 37 °C, 5% CO2 gedurende 24 uur in een standaard celkweekincubator.
  7. Voeg 15 μl MTS-reagens toe aan de cellen en incubeer de cellen gedurende 90 minuten bij 37 °C, 5% CO2.
  8. Meet de absorptie met een spectrofotometerlezer bij een golflengte van 490 nm.

5. Cellulaire groeistop/senescentietest (β-Galactosidase( β-Gal) activiteit)

OPMERKING: Alle reagentia en buffers die hier worden gebruikt, werden meegeleverd in de testkit (zie de materiaaltabel).

  1. Zaai de cellen met een dichtheid van 1,5 × 104 in platen met 96 putjes in 100 μL kweekmedium. Incubeer de cellen gedurende 24 uur, 37 °C, 5% CO2 in een standaard celkweekincubator.
  2. Voeg 100 μl vers FBS-vrij medium met 5-ALA toe in een eindconcentratie van 1 mM en incubeer gedurende 4 uur bij 37 °C, 5% CO2.
    OPMERKING: Als controles moeten afzonderlijke putjes gelijktijdig worden afgedekt met vers medium zonder 5-ALA fotosensibilisator.
  3. Onderwerp de cellen aan PDT-blootstelling met blauw licht (436 nm, 36 J/cm2) in een continue uitvoermodus voor vooraf gedefinieerde tijdsbestekken van 300 s of 2,000 s, zoals aangegeven in sectie 2.
    OPMERKING: Er moet ook een negatieve bedieningsplaat worden meegeleverd die niet is blootgesteld aan PDT.
  4. Incubeer de cellen gedurende 24 uur bij 37 °C, 5% CO2 in een standaard celkweekincubator.
  5. Gooi het medium weg en was de cellen twee keer met PBS.
  6. Bedek de cellen met 100 μl 1x cellysebuffer en incubeer gedurende 5 minuten bij 4 °C.
  7. Centrifugeer het lysaat bij 350 × g 1 gedurende 10 minuten bij 4 °C en vang het supernatant op.
  8. Pipetteer 50 μL van het bovenstaande op een nieuwe plaat met 96 putjes en voeg nog eens 50 μL 2x assaybuffer toe.
  9. Plaats de nieuwe plaat met 96 putjes gedurende 1,5 uur in een broedmachine van 37 °C.
    OPMERKING: De patés moeten worden beschermd tegen licht om fotobleken te voorkomen.
  10. Breng 50 μl van het mengsel over in een ondoorzichtige plaat met 96 putjes en voeg 200 μl stopoplossing toe.
  11. Meet de absorptie met een fluorescentie-microplaatlezer bij 360 nm excitatie/465 nm emissie.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Na blootstelling aan 5-ALA PDT vertoonde de MSC-controlegroep geen significant effect in termen van migratie na bestraling met 5-ALA PDT (Figuur 2A, i, v, ix). Daarentegen vertoonden MAC-cellen (Figuur 1B en Figuur 2A, iii, vii, xi) en 17-1012 (Figuur 1B en Figuur 2A, ii, vi, x) cellen een ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Ondanks de huidige behandelingsopties is de therapeutische respons bij kanker variabel en pleit voor nieuwe benaderingen of zelfs combinatietherapieën om botmetastasen te behandelen met behoud van de initiële weefselstructuur. In deze context is PDT een veelbelovend alternatief. Vanuit een simplistisch oogpunt bestaat PDT uit twee basiscomponenten: (1) een niet-toxische lichtgevoelige kleurstof die fotosensibilisator (PS) wordt genoemd en (2) een externe lichtbron met de juiste golflengt...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben geen belangenconflicten te onthullen.

Dankbetuigingen

We danken onze co-auteurs van de oorspronkelijke publicaties voor hun hulp en steun.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
300 s metered card for PDTIlluminOss Medical Inc., East Providence, Rhode Insland, USAn/ahttp://www.illuminoss.com
5-aminolevulinic acid (5-ALA) photosensitizerSigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USAA779310 mg
6 Well platesGreiner Bio-One, Frickenhausen, Germany657160
8 Well Chamber SlidesSARSTEDT AG & Co. KG, Munich, Germany94.6140.802
96 Well plates (F-buttom)Greiner Bio-One, Frickenhausen, Germany655180
CellTiter 96 Aqueous One
Solution Cell Proliferation
Assay (MTS-Assay)		Promega, Fitchburg,
Wisconsin, USA		G3580
Cellular Senescence AssayBiotrend Chemikalien GmbH, Köln, GermanyCBA-231Kwantitatieve senescentie-geassocieerde ß-galactosidase assay
Coomassie Brilliant Blue R250Sigma-Aldrich, St Louis, Missouri, USA350550.5% (w/v)
Culture-Inserts 2Wellibidi GmbH, Gräfelfing, Germany80209
DMEM (1x) + GlutaMax-ILife Technologies, Carlsbad, Kalifornien, USA31966-021
Fetal bovine serum (FBS)Sigma-Aldrich, St Louis, Missouri, USAF7524
Fluorescence microplate readerPromega, Madison, Wisconsin, USAGlowMAx®,
GM3510
HemocytometerHecht Assistent, Sondheim, Deutschland4042
ImageJNational Institutes of Health, Be-thesda, Maryland, USAImageJ (versie: 1.53a)Software voor het verwerken en analyseren van wetenschappelijke beelden; https://imagej.net/
Inverse phase-contrast microscopeLeica, Wetzlar, GermanyDM IMBRE 100
Methanol AnulaR NormapurVWR, Fontenay-Sous-Bois, France20847.307
ParaformaldehydSigma-Aldrich, St Louis, Missouri, USA158127Poeder, 95% zuiverheid
PDT device (light box and accesories)IlluminOss Medical Inc., East Providence, Rhode Insland, USAn/aBlauw licht 436 nm, 36 J/cm2 http://www.illuminoss.com
Penicillin-StreptomycinThermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA15140-12210.000 U/mL Penicillin
10.000 μg/mL Streptomycin
Phosphate-buffered saline (PBS)Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA10010-015
RPMI 1640Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA21875034
Spectrophotomete/ microplate readerBioTek Instruments GmbH, Bad Friedrichshall, GermanyEL800
Trypan Blue dye 0.4%Sigma-Aldrich, St Louis, Missouri, USAT8154
Trypsin-EDTA 10xSigma-Aldrich, St Louis, Missouri, USAT4174

Referenties

  1. Milano, M. T., Constine, L. S., Okunieff, P. Normal tissue tolerance dose metrics for radiation therapy of major organs. Seminars in Radiation Oncology. 17 (2), 131-140 (2007).
  2. Higham, C. E., Faithfull, S. Bone health and pelvic radiotherapy. Clinical Oncology. 27 (11), 668-678 (2015).
  3. von Moos, R., et al. Pain and health-related quality of life in patients with advanced solid tumours and bone metastases: integrated results from three randomized, double-blind studies of denosumab and zoledronic acid. Supportive Care in Cancer. 21 (12), 3497-3507 (2013).
  4. Stewart, F., Baas, P., Star, W. What does photodynamic therapy have to offer radiation oncologists (or their cancer patients). Radiotherapy and Oncology. 48 (3), 233-248 (1998).
  5. Dolmans, D. E. J. G. J., Fukumura, D., Jain, R. K. Photodynamic therapy for cancer. Nature Reviews Cancer. 3 (5), 380-387 (2003).
  6. Kwiatkowski, S., et al. Photodynamic therapy-mechanisms, photosensitizers and combinations. Biomedicine and Pharmacotherapy. 106, 1098-1107 (2018).
  7. Huang, Z., et al. Photodynamic therapy for treatment of solid tumors--potential and technical challenges. Technology in Cancer Research and Treatment. 7 (4), 309-320 (2008).
  8. Kou, J., Dou, D., Yang, L. Porphyrin photosensitizers in photodynamic therapy and its applications. Oncotarget. 8 (46), 81591-81603 (2017).
  9. Josefsen, L. B., Boyle, R. W. Photodynamic therapy: novel third-generation photosensitizers one step closer. British Journal of Pharmacology. 154 (1), 1-3 (2008).
  10. Dragieva, G., et al. A randomized controlled clinical trial of topical photodynamic therapy with methyl aminolaevulinate in the treatment of actinic keratoses in transplant recipients. British Journal of Dermatology. 151 (1), 196-200 (2004).
  11. Sachsenmaier, S. M., et al. Assessment of 5-aminolevulinic acid-mediated photodynamic therapy on bone metastases: an in vitro study. Biology. 10 (10), 1020(2021).
  12. Mitsiadis, T. A., Woloszyk, A., Jiménez-Rojo, L. Nanodentistry: combining nanostructured materials and stem cells for dental tissue regeneration. Nanomedicine. 7 (11), 1743-1753 (2012).
  13. Ricardo, R., Phelan, K. Counting and determining the viability of cultured cells. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (16), e752(2008).
  14. Nunes, J. P. S., Dias, A. A. M. ImageJ macros for the user-friendly analysis of soft-agar and wound-healing assays. BioTechniques. 62 (4), 175-179 (2017).
  15. Dai, T., et al. Concepts and principles of photodynamic therapy as an alternative antifungal discovery platform. Frontiers in Microbiology. 3, 120(2012).
  16. Chen, X., Zhao, P., Chen, F., Li, L., Luo, R. Effect and mechanism of 5-aminolevulinic acid-mediated photodynamic therapy in esophageal cancer. Lasers in Medical Science. 26 (1), 69-78 (2011).
  17. Bacellar, I. O., Tsubone, T. M., Pavani, C., Baptista, M. S. Photodynamic efficiency: from molecular photochemistry to cell death. International Journal of Molecular Sciences. 16 (9), 20523-20559 (2015).
  18. Song, Y. S., Lee, B. Y., Hwang, E. S. Dinstinct ROS and biochemical profiles in cells undergoing DNA damage-induced senescence and apoptosis. Mechanisms of Ageing and Development. 126 (5), 580-590 (2005).
  19. Faber, J., Fonseca, L. M. How sample size influences research outcomes. Dental Press Journal of Orthodontics. 19 (4), 27-29 (2014).
  20. Anker, H. S. Biological aspects of cancerby Julian Huxley. Review. Perspectives in Biology and Medicine. 2 (2), 246(1959).
  21. Alizadeh, A. A., et al. Toward understanding and exploiting tumor heterogeneity. Nature Medicine. 21 (8), 846-853 (2015).
  22. McGranahan, N., Swanton, C. Clonal heterogeneity and tumor evolution: past, present, and the future. Cell. 168 (4), 613-628 (2017).
  23. Dai, Z., et al. Research and application of single-cell sequencing in tumor heterogeneity and drug resistance of circulating tumor cells. Biomarker Research. 8 (1), 60(2020).
  24. Barron, G. A., Moseley, H., Woods, J. A. Differential sensitivity in cell lines to photodynamic therapy in combination with ABCG2 inhibition. Journal of Photochemistry and Photobiology. 126, 87-96 (2013).
  25. Perry, R. R., et al. Sensitivity of different human lung cancer histologies to photodynamic therapy. Cancer Research. 50 (14), 4272-4276 (1990).
  26. Choi, B. -H., Ryoo, I. -G., Kang, H. C., Kwak, M. -K. The sensitivity of cancer cells to pheophorbide a-based photodynamic therapy is enhanced by NRF2 silencing. PLoS One. 9 (9), 107158(2014).
  27. Du, K. L., et al. Preliminary results of interstitial motexafin lutetiuç mediated PDT for prostate cancer. Lasers in Surgery and Medicine. 38 (5), 427-434 (2006).
  28. Gunaydin, G., Gedik, M. E., Ayan, S. Photodynamic therapy-current limitations and novel approaches. Frontiers in Chemistry. 9, 691697(2021).
  29. Fisher, C., et al. Photodynamic therapy for the treatment of vertebral metastases: a phase I clinical trial. Clinical Cancer Research. 25 (19), 5766-5776 (2019).
  30. Cochrane, C., Mordon, S. R., Lesage, J. C., Koncar, V. New design of textile light diffusers for photodynamic therapy. Materials Science and Engineering: C. 33 (3), 1170-1175 (2013).
  31. Wen, J., et al. Mitochondria-targeted nanoplatforms for enhanced photodynamic therapy against hypoxia tumor. Journal of Nanobiotechnology. 19 (1), 440(2021).
  32. Li, W. -P., Yen, C. -J., Wu, B. -S., Wong, T. -W. Recent advances in photodynamic therapy for deep-seated tumors with the aid of nanomedicine. Biomedicines. 9 (1), 69(2021).
  33. Ozdemir, T., Lu, Y. -C., Kolemen, S., Tanriverdi-Ecik, E., Akkaya, E. U. Generation of singlet oxygen by persistent luminescent nanoparticle-photosensitizer conjugates: a proof of principle for photodynamic therapy without light. ChemPhotoChem. 1 (5), 183-187 (2017).
  34. Abrahamse, H., Hamblin, M. R. New photosensitizers for photodynamic therapy. The Biochemical Journal. 473 (4), 347-364 (2016).
  35. Kim, M. M., Darafsheh, A. Light sources and dosimetry techniques for photodynamic therapy. Photochemistry and Photobiology. 96 (2), 280-294 (2020).
  36. Saravana-Bawan, S., David, E., Sahgal, A., Chow, E. Palliation of bone metastases-exploring options beyond radiotherapy. Annals of Palliative Medicine. 8 (2), 168-177 (2019).
  37. Wise-Milestone, L., et al. Local treatment of mixed osteolytic/osteoblastic spinal metastases: is photodynamic therapy effective. Breast Cancer Research and Treatment. 133 (3), 899-908 (2012).
  38. Dentro, S. C., et al. Characterizing genetic intra-tumor heterogeneity across 2,658 human cancer genomes. Cell. 184 (8), 2239-2254 (2021).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

BotentumorcellijnenIn vitro PDTcelmigratiecelviabiliteitinductie van apoptosecellulaire senescentiekankercellijnen

Dit artikel is gepubliceerd

Video binnenkort beschikbaar

Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.