Methodenartikel

Bepaling van bindingsaffiniteit (KD) van radioactief gelabelde antilichamen tegen geïmmobiliseerde antigenen

DOI:

10.3791/63927

⸱

23 juni 2022

 ,  ,  , 
1Department of Radiology and Biomedical Imaging, Yale University

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hier wordt een methode beschreven om de bindingsaffiniteit (KD) van radioactief gelabelde antilichamen tegen geïmmobiliseerde antigenen te bepalen. KD is de evenwichtsdissociatieconstante die kan worden bepaald uit een verzadigingsbindingsexperiment door de totale, specifieke en niet-specifieke binding van een radioactief gelabeld antilichaam in verschillende concentraties aan zijn antigeen te meten.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Het bepalen van bindingsaffiniteit (KD) is een belangrijk aspect van de karakterisering van radioactief gelabelde antilichamen (rAb). Typisch wordt bindingsaffiniteit weergegeven door de evenwichtsdissociatieconstante, KD, en kan worden berekend als de concentratie van antilichamen waarbij de helft van de antilichaambindingsplaatsen bij evenwicht bezet zijn. Deze methode kan worden gegeneraliseerd naar elk radioactief gelabeld antilichaam of andere eiwit- en peptidesteigers. In tegenstelling tot celgebaseerde methoden is de keuze van geïmmobiliseerde antigenen bijzonder nuttig voor het valideren van bindingsaffiniteiten na langdurige opslag van antilichamen, het onderscheiden van bindingsaffiniteiten van fragmentantigeenbindende regio (Fab) armen in bispecifieke antilichaamconstructies en het bepalen of er variabiliteit is in antigeenexpressie tussen verschillende cellijnen. Deze methode omvat het immobiliseren van een vaste hoeveelheid antigeen naar gespecificeerde putten op een breekbare 96-putplaat. Vervolgens werd de niet-specifieke binding in alle putten geblokkeerd met runderserumalbumine (BSA). Vervolgens werd de rAb in een concentratiegradiënt aan alle putten toegevoegd. Er werd gekozen voor een reeks concentraties om de rAb verzadiging te laten bereiken, d.w.z. een concentratie van antilichamen waarbij alle antigenen continu gebonden zijn door de rAb. In aangewezen putten zonder geïmmobiliseerd antigeen kan een niet-specifieke binding van de rAb worden bepaald. Door niet-specifieke binding af te trekken van de totale binding in de putten met geïmmobiliseerd antigeen, kan de specifieke binding van de rAb aan het antigeen worden bepaald. De KD van de rAb werd berekend uit de resulterende verzadigingsbindingscurve. Als voorbeeld werd bindingsaffiniteit bepaald met behulp van radioactief gelabelde amivantamab, een bispecifiek antilichaam voor epidermale groeifactorreceptor (EGFR) en cytoplasmatische mesenchymale-epitheliale overgang (cMET) eiwitten.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Radioactief gelabelde antilichamen (rAb) hebben een verscheidenheid aan toepassingen in de geneeskunde. Hoewel de meerderheid in de oncologie wordt gebruikt als beeldvorming en therapeutische middelen, zijn er beeldvormingstoepassingen voor reumatologie-gerelateerde ontsteking, cardiologie en neurologie1. Imaging rAbs heeft een hoge gevoeligheid om laesies te detecteren en heeft het potentieel om te helpen bij de selectie van patiënten voor behandeling 2,3,4,5. Ze worden ook gebruikt voor therapie vanwege hun specificiteit voor hun respectieve antigenen. In een strategie die bekend staat als theranostica, wordt dezelfde rAb gebruikt voor zowel beeldvorming als behandeling6.

Idealiter is het antilichaam dat is gekozen voor radiolabeling een antilichaam waarvan al is bewezen dat het een hoge bindingsaffiniteit en specificiteit heeft met behulp van niet-radioactief gelabelde methoden. Radiolabeling van antilichamen kan worden bereikt via directe chemische modificatie van antilichamen met een radionuclide dat stabiele covalente bindingen vormt (bijv. radioactief jodium), of indirect via conjugatie met chelaatvormers die vervolgens coördineren met radiometalen 7,8. Directe radiolabeling zoals met radioactief jodium wijzigt specifiek tyrosine- en histidineresiduen op het antilichaam. Als deze residuen belangrijk zijn voor antigeenbinding, dan zou deze radioconjugatie de bindingsaffiniteit veranderen. Omgekeerd zijn er meerdere gevestigde protocollen voor de conjugatie en indirecte radiolabeling van antilichamen. Een veel voorkomende chelator die wordt gebruikt om zirkonium-89 (89Zr) te binden voor PET-beeldvorming van antilichamen is bijvoorbeeld de p-isothiocyanatobenzyl-desferrioxamine (DFO), die willekeurig wordt geconjugeerd aan lysineresiduen van het antilichaam 9,10. Als er lysineresiduen in het antigeenbindende gebied zijn, kan conjugatie op deze plaatsen sterisch de antigeenbinding belemmeren en daarom de antilichaam-antigeenbinding in gevaar brengen. De verschillende radioconjugatiemethoden die worden gebruikt voor indirecte of directe radiolabeling van antilichamen kunnen dus mogelijk de immunoreactiviteit beïnvloeden, gedefinieerd als het vermogen van het antilichaam radioconjugaat om te binden aan zijn antigeen 7,11. Locatiespecifieke conjugatiemethoden kunnen deze beperking omzeilen, maar deze technieken vereisen antilichaamtechnologie om extra cysteïneresiduen of expertise in enzymatische reacties op koolhydraatresiduen op te nemen 12,13,14,15,16. Zodra een antilichaam radioactief is gelabeld, is het belangrijk om te testen of immunoreactiviteit behouden blijft als onderdeel van de karakterisering van de rAb. Een manier om immunoreactiviteit te meten is het bepalen van de bindingsaffiniteit van de rAb.

Het doel van dit protocol is om een proces te beschrijven voor het bepalen van de bindingsaffiniteit voor rAbs met behulp van een gevestigde radioligand saturatietest om rAb-antigeenbinding te kwantificeren. De bindingstrend is weergegeven in figuur 1. De hoeveelheid antigeen gebonden zal toenemen naarmate meer rAb wordt toegevoegd aan een vaste hoeveelheid geïmmobiliseerd antigeen. Zodra alle antigeenbindplaatsen verzadigd zijn, zal een plateau worden bereikt en zal het toevoegen van meer rAbs geen effect hebben op de hoeveelheid gebonden antigeen. In dit model is de evenwichtsdissociatieconstante (KD) de concentratie van antilichamen die de helft van de antigeenreceptoren inneemt17. De KD geeft aan hoe goed een antilichaam zich bindt aan zijn doelwit met een lagere KD die overeenkomt met een hogere bindingsaffiniteit. Eerder werd gemeld dat een ideale rAb een KD van 1 nanomolair of minder18 zou moeten hebben. Recentere rAbs zijn echter ontwikkeld met KD in het lage nanomolaire bereik en worden geschikt geacht voor niet-invasieve beeldvormingstoepassingen 19,20,21,22. Een andere parameter die kan worden bepaald in de radioligand-verzadigingstest van rAbs is Bmax, wat overeenkomt met de maximale hoeveelheid antigeenbinding. Bmax kan worden gebruikt om het aantal antigeenmoleculen te berekenen indien nodig.

figure-introduction-1
Figuur 1: Representatieve verzadigingsbindingscurve. Het percentage antigeen gebonden wordt uitgezet tegen toenemende concentraties antilichamen toegevoegd aan een vaste hoeveelheid antigeen. Pop-outs tonen binding op verschillende punten. De concentratie en binding die overeenkomen met respectievelijk KD en Bmax worden weergegeven. Deze figuur is gemaakt met BioRender.com. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Deze test is met name belangrijk voor radioactief gelabelde bispecifieke antilichaamconstructen om de KD te bepalen voor elke fragmentantigeenbindende regio (Fab) arm van de radioactief gelabelde bispecifieke antilichaambinding met hun respectieve antigenen. Dit protocol kan worden gebruikt om de KD van elke Fab-arm afzonderlijk op geïmmobiliseerde antigenen te bepalen om onafhankelijk te karakteriseren of de bindingsaffiniteit van elke Fab-arm voor zijn respectieve antigeen werd beïnvloed na radioconjugatie. Dit protocol wordt aangetoond door het gebruik van radioactief gelabelde amivantamab, een bispecifiek antilichaam voor epidermale groeifactorreceptor (EGFR) en cytoplasmatische mesenchymale-epitheliale overgang (cMET) eiwitten19. Radioactief gelabelde enkelarmige antilichamen, waarbij de ene Fab-arm bindt aan EGFR (α-EGFR) of aan cMET (α-cMET) en de andere Fab-arm een isotypecontrole is, werden ook gebruikt als voorbeelden19. Dit protocol is ook geschikt voor elk radioactief gelabeld antilichaam met een bekend antigeen dat kan worden geïmmobiliseerd. In dit protocol wordt een verdunningsreeks van de rAb toegevoegd aan een vaste hoeveelheid geïmmobiliseerd antigeen in aangewezen putten die specifiek zijn voor elke Fab-arm van de rAb. De rAb wordt ook toegevoegd aan putjes die alleen zijn geblokkeerd met runderserumalbumine (BSA), zonder antigeen, om niet-specifieke binding te bepalen. Om de specifieke binding te bepalen, wordt de niet-specifieke binding aan geïmmobiliseerd antigeen afgetrokken van de totale rAb-binding. De resulterende verzadigingsbindingscurve wordt vervolgens gebruikt om KD te bepalen, zoals hierboven beschreven.

Een voordeel van deze methode is een hogere reproduceerbaarheid bij het gebruik van gezuiverde antigenen in vergelijking met het gebruik van cellijnen als bron van antigenen, aangezien antigeenexpressieniveaus kunnen worden beïnvloed tijdens celkweek en dat verschillende cellijnen variabele niveaus van antigeenexpressie hebben. In het geval van radioactief gelabelde bispecifieke antilichamen zijn cellijnen die slechts één van de antigenen tot expressie brengen zonder de andere mogelijk niet beschikbaar, wat het karakteriseren van de bindingsaffiniteit van de individuele Fab-armen zeer uitdagend zou maken. Met name het belangrijkste voordeel van de radioligand saturatie-assaymethode ten opzichte van niet-radioactief gelabelde methoden is de specifieke karakterisering van de bindingsaffiniteit van de rAb zonder de bijdrage van de niet-geconjugeerde fractie van de rAb. Voor zover de auteurs weten, zijn er momenteel geen zuiveringstechnieken om de rAb te scheiden van zijn oorspronkelijke ongeconjugeerde antilichaam. Gezien de relatief kleine omvang van de chelator en radionuclide is hun bijdrage aan het totale molecuulgewicht van de rAb onbeduidend in grootte-uitsluitingschromatografie. Het product dat wordt gegenereerd door een radiolabelingstechniek is dus bijna altijd een mengsel van de rAb en het oorspronkelijke niet-geconjugeerde antilichaam. Het karakteriseren van bindingsaffiniteit met behulp van de radioactief gelabelde verzadigingstest zorgt ervoor dat het geteste product uitsluitend de rAb is.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

OPMERKING: Raadpleeg figuur 2 voor een grafische weergave van het protocol.

figure-protocol-1
Figuur 2: Schema van het protocol. Rij- en kolomlabels worden aangegeven als leidraad voor het instellen van de breekbare 96-well plaat. De verwachte binding wordt weergegeven in een voorbeeldput voor het antigeen en het BSA. De gebogen pijl duidt de rAb aan die naar verwachting alleen met BSA uit putten zal worden weggespoeld. Deze figuur is gemaakt met BioRender.com. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

1. Buffervoorbereiding

  1. Bereid 50 ml immobilisatiebuffer (waterige oplossing van 50 mM Na2CO3; pH = 9,0).
    1. Weeg 191 mg NaHCO3 en 23,9 mg Na2CO3 af op weegpapier en breng over op een conische buis van 50 ml. Voeg 40 ml 18 MΩ water en vortex toe om op te lossen. Stel de pH indien nodig in op 9,0 voordat u het totale volume met 18 MΩ water op 50 ml brengt.
  2. Bereid ongeveer 200 ml wasbuffer (fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS) met 0,05% Tween-20) door 200 ml PBS en vervolgens 100 μL Tween-20 toe te voegen aan een fles van 250 ml.
  3. Bereid 50 ml bindingsbuffer (PBS met 0,05% Tween-20 en 0,1% runderserumalbumine (BSA)).
    1. Weeg 50 mg BSA af op weegpapier en breng over op een conische buis van 50 ml. Voeg 50 ml PBS en vervolgens 25 μl Tween-20 toe aan de buis. Vortex voorzichtig mengen.
  4. Bereid 50 ml blokkeringsbuffer voor (3% BSA in PBS).
    1. Weeg 1,5 g BSA af op weegpapier en breng over op een conische buis van 50 ml. Voeg 50 ml PBS toe en vortex voorzichtig om te mengen.
      OPMERKING: Alle buffers worden aanbevolen om maximaal 1 week bij 4 °C te worden bewaard voor het beste resultaat.

2. Immobilisatie van antigeen

  1. Verdun het antigeen in immobilisatiebuffer tot een concentratie van 5 μg/ml.
  2. Voeg 100 μL per put antigeen toe aan de bodem van 24 putten van een breekbare plaat met 96 putten en een vlakke bodem in een array van 8 x 3 (kolommen 1-3 voor rijen A-H). Bedek de plaat met afdichtingstape.
    OPMERKING: Zorg ervoor dat het oppervlak van de putplaat is behandeld om de adsorptie van gemengde hydrofobe en hydrofiele domeinen te maximaliseren. Deze voorbehandelde platen zijn in de handel verkrijgbaar.
  3. Incubeer 's nachts bij 4 °C.
  4. Was het bord de volgende dag 3x met wasbuffer.
    1. Keer de plaat stevig om in de gootsteen om de vloeistof weg te gooien en tik op de plaat op een stapel papieren handdoeken om de overtollige vloeistof te verwijderen.
    2. Voeg met behulp van een meerkanaalspoptiet 300 μL per putje wasbuffer toe aan putten die het antigeen bevatten. Verwijder de vloeistof zoals beschreven in punt 2.4.1. Herhaal de wasstap in totaal drie keer.

3. Blokkeren van niet-specifieke sites met BSA

  1. Voeg met behulp van een meerkanaalspion 300 μL per put blokkeerbuffer toe aan de 24 met antigeen beklede putten en 24 lege putten van de 96-putplaat (kolommen 1-6 voor rijen A-H).
  2. Incubeer de plaat gedurende 1 uur bij omgevingstemperatuur.
  3. Was de plaat met 300 μL per putje wasbuffer in totaal drie keer. Raadpleeg stap 2.4 voor een gedetailleerde beschrijving van het wassen van de plaat.
     

4. Seriële verdunningen en toevoeging van de rAb-oplossing

LET OP: De volgende stappen hebben betrekking op radioactiviteit. Stappen mogen alleen worden uitgevoerd door mensen met een stralingsveiligheidstraining. Onderzoekers moeten de handschoen verdubbelen en stappen uitvoeren met voldoende afscherming.

  1. Synthetiseer de rAb die wordt onderzocht met behulp van de methode van keuze. De rAbs die als voorbeeld werden gebruikt, werden gesynthetiseerd zoals eerder beschreven19.
    OPMERKING: Dit protocol richt zich op de karakterisering van een rAb eenmaal radioactief gelabeld.
  2. Maak 8 x 3-voudige seriële verdunningen (aangewezen voor rijen A-H op de plaat) van de rAb in de bindingsbuffer.
    OPMERKING: De concentraties van de seriële verdunningen variëren voor elke rAb. Details worden besproken in de sectie Discussie. Als de verdunningsfactor verandert, moet het volume dat nodig is voor elke verdunning opnieuw worden berekend om te zorgen voor voldoende volume voor 1) binding van de rAb in elke put, 2) het zaaien van de volgende verdunning en 3) het aliquoteren van een rAb-standaardoplossing voor gammatellingen om de radioactiviteit van de totale rAb die aan elke put wordt toegevoegd te meten.
    1. Bereken het volume voorraad rAb dat nodig is om een oplossing van 1,2 ml van de eerste concentratie te maken (etiket als A).
    2. Voeg 800 μL bindingsbuffer toe aan microcentrifugebuizen met het label B, C, D, ... aan H. Voeg 1,2 ml minus het in stap 4.2.1 berekende volume van de bindingsbuffer toe aan een microcentrifugebuis met het label A.
    3. Tel het volume voorraad rAb berekend in 4.2.1 op bij buis A. Vortex voorzichtig te mengen en draai vervolgens naar beneden met behulp van een mini-microcentrifuge om alle vloeistof op de bodem van de buis te verzamelen.
    4. Voeg 400 μL toe van buis A naar buis B. Vortex om te mengen en vervolgens af te draaien met behulp van een mini-microcentrifuge. Herhaal het toevoegen van B naar C, C naar D, ..., G naar H.
  3. Voeg 100 μL per put van elke verdunning toe aan drie putjes geïmmobiliseerd met antigeen en drie putjes geblokkeerd met alleen BSA. Voeg bijvoorbeeld verdunning A toe aan putjes A1-A3 (antigeen) en A4-A6 (BSA).
  4. Voeg 100 μL van elke verdunning toe aan microcentrifugebuizen met het label A std - H std. Bewaar deze buizen als rAb-normen die moeten worden getest in de gammateller.
  5. Incubeer de plaat gedurende 1 uur bij 37 °C met zacht wiegen.

5. Wasplaten en testradioactiviteit

  1. Label microcentrifugebuizen voor elke put (A1 tot A6, B1 tot B6 ... via H1-H6). Gebruik indien gewenst twee verschillende gekleurde markers om monsters te kleuren - één voor putten bedekt met antigeen en één voor putten met alleen BSA.
  2. Aspirateer de rAb uit elke put met behulp van een vacuümaspirator.
  3. Voeg met behulp van een meerkanaalspoptie 300 μL wasbuffer toe aan elke put. Zuig de wasbuffer op. Herhaal de was in totaal vijf keer.
  4. Breek de putten uit elkaar in de juiste microcentrifugebuizen.
  5. Tel de radioactiviteit in de buizen met behulp van een gammateller. Tel eerst de buizen met het antigeen (H1, H2, H3 tot A1, A2, A3) en vervolgens die met alleen BSA (H4, H5, H6 tot A4, A5, A6). Om interferentie te minimaliseren, telt u afzonderlijk de normen voor elke verdunning (H std tot A std) op een ander tijdstip.

6. Data-analyse

OPMERKING: De aanvullende bestanden bevatten bijbehorende spreadsheet- en statistische analysesjablonen voor het analyseren en plotten van de gegevens.

  1. Bereken in een spreadsheet de totale, specifieke en niet-specifieke binding voor elk voorbeeld (zie de spreadsheetsjabloon die als aanvullend bestand is bijgevoegd).
    1. Bereken "Gebonden activiteit" als de tellingen per minuut (CPM) van het monster (verkregen uit de gammateller) gedeeld door de CPM van de juiste standaard. Bereken "% Gebonden" als Gebonden Activiteit maal 100.
    2. Bereken "Total Bound, mol/L" door "% Bound" te vermenigvuldigen met de concentratie (mol/L) van de toegevoegde rAb. Bereken "Total Bound, mol" door "Total Bound, mol/L" te vermenigvuldigen met het volume rAb toegevoegd in liters (0,0001 L).
    3. Bereken "Specifieke Binding, mol" door "Totaal gebonden, mol" van de BSA-verdunningen van de antigeenverdunningen af te trekken, zodat A1 paart met A4, A2 met A5, A3 met A6, B1 met B4, enz.
    4. Bereken "Niet-specifieke binding, mol" door "Specifieke binding, mol" af te trekken van "Totale binding, mol" voor elke put.
  2. Zet in de statistische analyse plotting software de concentratie van rAb toegevoegd (nmol/L) op de x-as versus binding (mol) op de y-as. Maak afzonderlijke groepen om te plotten in drievoudige totale binding, specifieke binding en niet-specifieke binding. Voer een niet-lineaire fitanalyse uit door de volgende parameters in de gebruikte software te selecteren (Tabel met materialen; zie de statistische analysesjabloon die als aanvullend bestand is bijgevoegd).
    1. Selecteer Nieuwe analyse. Selecteer onder XY-analyses de optie Niet-lineaire regressie (curve fit). Zorg ervoor dat alle gegevens zijn geselecteerd onder Welke gegevenssets analyseren? en selecteer vervolgens OK.
    2. Selecteer op het tabblad Model onder Binding - Verzadiging de optie Eén site - Specifieke binding. Selecteer op het tabblad Vertrouwen de optie 'dubbelzinnige' pasvormen identificeren. Laat alle andere parameters als standaard staan en selecteer OK.
      OPMERKING: Hiermee worden de KD en Bmax berekend voor de totale, specifieke en niet-specifieke binding. De KD van de specifieke binding is de KD in nmol/L van de rAb gebonden aan het antigeen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deze methode berekent bindingsaffiniteit (KD) voor een rAb op basis van de verzadigingsbindingstest waarbij verschillende concentraties rAb werden toegevoegd aan een vaste hoeveelheid geïmmobiliseerd antigeen. De bindingscurve moet logaritmische groei volgen waar deze aanvankelijk steil is en vervolgens plateaus als het antigeen verzadigd is. Om ervoor te zorgen dat de vastgestelde KD nauwkeurig is, moeten de concentraties rAb hoog genoeg zijn om verzadiging te bereiken. Voor deze test werden radioa...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Als onderdeel van de ontwikkeling van rAbs is het belangrijk om ervoor te zorgen dat een rAb specifiek bindt aan zijn doel met een hoge bindingsaffiniteit. Het bepalen van de bindingsaffiniteit kan aangeven of de immunoreactiviteit van de rAb wordt beïnvloed door radioconjugatie via de radioligand saturatietest met behulp van geïmmobiliseerd antigeen. Het bepalen van de rAb-binding aan BSA kan worden gebruikt om niet-specifieke binding te kwantificeren om de specifieke binding aan het geïmmobiliseerde antigeen nauwkeurig...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben geen belangenverstrengeling.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs bedanken 3D Imaging voor de productie van [89Zr]Zr-oxalaat en Dr. Sheri Moores van Janssen Pharmaceuticals voor het leveren van antilichamen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Bovine Serum Albumin (BSA)Sigma-AldrichA9647
Gamma CounterHidexHidex Automatic Gamma Counter
GraphPad Prism SoftwareGraphPadversie 9.2; gebruikt voor statistische analyses in dit onderzoek
Immuno Breakable MaxiSorp 96-well platesThermo Scientific473768
Microplate Sealing TapeCorning4612
Microsoft ExcelMicrosoft
Phosphate Buffered Saline (PBS)Gibco14190144
Sodium BicarbonateJT Baker3506-01
Sodium CarbonateSigma-AldrichS7795
Tween-20Sigma-AldrichP7949

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Krecisz, P., Czarnecka, K., Krolicki, L., Mikiciuk-Olasik, E., Szymanski, P. Radiolabeled Peptides and Antibodies in Medicine. Bioconjugate Chemistry. 32 (1), 25-42 (2021).
  2. Dun, Y., Huang, G., Liu, J., Wei, W. ImmunoPET imaging of hematological malignancies: From preclinical promise to clinical reality. Drug Discovery Today. 27 (4), 1196-1203 (2022).
  3. Lohrmann, C., et al. Retooling a Blood-Based Biomarker: Phase I assessment of the high-affinity CA19-9 antibody HuMab-5B1 for immuno-pet imaging of pancreatic cancer. Clinical Cancer Research. 25 (23), 7014-7023 (2019).
  4. Pandit-Taskar, N., et al. A phase I/II study for analytic validation of 89Zr-J591 immunoPET as a molecular imaging agent for metastatic prostate cancer. Clinical Cancer Research. 21 (23), 5277-5285 (2015).
  5. Rousseau, C., et al. Initial clinical results of a novel immuno-PET theranostic probe in human epidermal growth factor receptor 2-negative breast cancer. Journal of Nuclear Medicine. 61 (8), 1205-1211 (2020).
  6. Moek, K. L., et al. Theranostics using antibodies and antibody-related therapeutics. Journal of Nuclear Medicine. 58 (2), 83-90 (2017).
  7. Chomet, M., van Dongen, G., Vugts, D. J. State of the art in radiolabeling of antibodies with common and uncommon radiometals for preclinical and clinical immuno-PET. Bioconjugate Chemistry. 32 (7), 1315-1330 (2021).
  8. Kumar, K., Ghosh, A. Radiochemistry, production processes, labeling methods, and immunoPET imaging pharmaceuticals of Iodine-124. Molecules. 26 (2), 414(2021).
  9. Vosjan, M. J., et al. Conjugation and radiolabeling of monoclonal antibodies with zirconium-89 for PET imaging using the bifunctional chelate p-isothiocyanatobenzyl-desferrioxamine. Nature Protocols. 5 (4), 739-743 (2010).
  10. Zeglis, B. M., Lewis, J. S. The bioconjugation and radiosynthesis of 89Zr-DFO-labeled antibodies. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (96), e52521(2015).
  11. Wei, W., et al. ImmunoPET: concept, design, and applications. Chemical Reviews. 120 (8), 3787-3851 (2020).
  12. Tavaré, R., et al. An effective immuno-PET imaging method to monitor CD8-dependent responses to immunotherapy. Cancer Research. 76 (1), 73-82 (2016).
  13. Tavaré, R., et al. Engineered antibody fragments for immuno-PET imaging of endogenous CD8+ T cells in vivo. Proceedings of the National Academy of Sciences. 111 (3), 1108-1113 (2014).
  14. Zeglis, B. M., et al. Chemoenzymatic strategy for the synthesis of site-specifically labeled immunoconjugates for multimodal PET and optical imaging. Bioconjugate Chemistry. 25 (12), 2123-2128 (2014).
  15. Zeglis, B. M., et al. Enzyme-mediated methodology for the site-specific radiolabeling of antibodies based on catalyst-free click chemistry. Bioconjugate Chemistry. 24 (6), 1057-1067 (2013).
  16. Kristensen, L. K., et al. Site-specifically labeled 89Zr-DFO-trastuzumab improves immuno-reactivity and tumor uptake for immuno-PET in a subcutaneous HER2-positive xenograft mouse model. Theranostics. 9 (15), 4409-4420 (2019).
  17. Maguire, J. J., Kuc, R. E., Davenport, A. P. Radioligand binding assays and their analysis. in Receptor Binding Techniques. Davenport, A. P. , Humana Press. 31-77 (2012).
  18. Davenport, A. P., Russell, F. D. Radioligand bindsing assays: theory and practice. Current Directions in Radiopharmaceutical Research and Development. Mather, S. J. , Springer. Netherlands. 169-179 (1996).
  19. Cavaliere, A., et al. Development of [89Zr]ZrDFO-amivantamab bispecific to EGFR and c-MET for PET imaging of triple negative breast cancer. European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 48 (2), 383-394 (2021).
  20. Marquez, B. V., et al. Evaluation of (89)Zr-pertuzumab in breast cancer xenografts. Molecular Pharmaceutics. 11 (11), 3988-3995 (2014).
  21. Marquez-Nostra, B. V., et al. Preclinical PET imaging of glycoprotein non-metastatic melanoma B in triple negative breast cancer: feasibility of an antibody-based companion diagnostic agent. Oncotarget. 8 (61), 104303-104314 (2017).
  22. Ghai, A., et al. Development of [(89)Zr]DFO-elotuzumab for immunoPET imaging of CS1 in multiple myeloma. European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 48 (5), 1302-1311 (2021).
  23. McKnight, B. N., et al. Imaging EGFR and HER3 through (89)Zr-labeled MEHD7945A (Duligotuzumab). Scientific Reports. 8 (1), 1-13 (2018).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

EquilibriumsdissociatieconstanteVerzadigingsbindingSpecifieke bindingGammacounterSeri le verdunningBlokkeringsbufferAntigeencoating

Gerelateerde artikelen