Methodenartikel

Visualisatie van de morfologische kenmerken van neuromusculaire overgang in rat mediale gastrocnemiusspier

DOI:

10.3791/63954

⸱

17 mei 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Acupuncture and Moxibustion, China Academy of Chinese Medical Sciences

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Het protocol toont een methode om ruimtelijke correlatie tussen de pre-synaptische terminals, post-synaptische receptoren en peri-synaptische Schwann-cellen in de mediale gastrocnemius-spier van de rat te onderzoeken met behulp van fluorescerende immunohistochemie met verschillende biomarkers, namelijk neurofilament 200, vesiculaire acetylcholinetransporter, alfa-bungarotoxine en S100.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De neuromusculaire junctie (NMJ) is een complexe structuur die dient voor de signaalcommunicatie van het motorneuron naar de skeletspier en bestaat uit drie essentiële histologische componenten: de pre-synaptische motor axonterminals, post-synaptische nicotine-acetylcholinereceptoren (AchR's) en peri-synaptische Schwann-cellen (PSC's). Om de morfologische kenmerken van NMJ aan te tonen, werd de mediale gastrocnemiusspier van de rat geselecteerd als het doelweefsel en onderzocht met behulp van meerdere fluorescerende kleuring met verschillende soorten biomarkers, waaronder neurofilament 200 (NF200) en vesiculaire acetylcholinetransporter (VAChT) voor de motorische zenuwvezels en hun pre-synaptische terminals, alfa-bungarotoxine (α-BTX) voor de post-synaptische nicotine-AchR's, en S100 voor de PSC's. In deze studie werd kleuring uitgevoerd in twee groepen: in de eerste groep werden monsters gekleurd met NF200, VAChT en α-BTX, en in de tweede groep werden monsters gekleurd met NF200, α-BTX en S100. Er werd aangetoond dat beide protocollen de gedetailleerde structuur van NMJ effectief kunnen aantonen. Met behulp van de confocale microscoop werden morfologische kenmerken van de pre-synaptische terminals, post-synaptische receptoren en PSC gezien en hun Z-stacks-afbeeldingen werden gereconstrueerd in een driedimensionaal patroon om de ruimtelijke correlatie tussen de verschillende etiketteringen verder te analyseren. Vanuit het perspectief van de methodologie bieden deze protocollen een waardevolle referentie voor het onderzoeken van de morfologische kenmerken van NMJ onder fysiologische omstandigheden, die ook geschikt kunnen zijn om de pathologische verandering van NMJ, zoals perifeer zenuwletsel en regeneratie, te evalueren.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Als drie essentiële structurele componenten van de neuromusculaire junctie (NMJ)1,2,3,4, zijn morfologische aspecten van de pre-synaptische motor axonterminals, post-synaptisch membraan met nicotine-acetylcholinereceptoren (AchR's) en peri-synaptische Schwann-cellen (PSC's) uitgebreid onderzocht. Dunne secties en hele monsters van de skeletspieren zijn onderzocht met verschillende histologische technieken, zoals elektronenmicroscopie 5,6, confocale microscopie 7,8 en lichtbladmicroscopie 9,10. Hoewel de morfologische kenmerken van NMJ door deze technieken vanuit verschillende aspecten zijn aangetoond, is confocale microscopie ter vergelijking nog steeds een ideale keuze voor beeldvorming van de gedetailleerde morfologie van NMJ.

Onlangs zijn er veel nieuwe technologieën ontwikkeld voor het tonen van de structurele componenten van NMJ. Thy1-YFP transgene fluorescerende muizen zijn bijvoorbeeld direct gebruikt om motorische axonen en motoreindplaten in vivo en in vitro10,11 te observeren. Bovendien is intraveneuze injectie van fluorescerende α-BTX toegepast om de ruimtelijke verdeling van motorische eindplaten in hele skeletspieren van wild-type en transgene fluorescerende muizen te onthullen, door gebruik te maken van weefsel optische clearingbehandeling voor onderzoek met lichtplaatmicroscopie 9,12. Naast de pre- en post-synaptische elementen die met deze geavanceerde methoden kunnen worden bekeken, kunnen de PSC's echter niet tegelijkertijd worden gedemonstreerd.

Accumulerend bewijs geeft aan dat PSC's, als de perifere gliacellen, nauw verbonden zijn met de pre-synaptische terminals die bijdragen aan de ontwikkeling en stabiliteit van NMJ, de modulatie van synaptische activiteit van de NMJ onder fysiologische toestand, en de regeneratie van de NMJ na zenuwletsel 13,14,15 . Gezien de cellulaire architectuur van NMJ, is dit protocol een goede kandidaat om tegelijkertijd de PSC's, pre- en post-synaptische elementen te labelen en wordt het mogelijk gebruikt om de integriteit en plasticiteit van de NMJ onder normale en pathologische omstandigheden te evalueren. Vergelijk bijvoorbeeld de intensiteit van NMJ, morfologie en volume van post-synaptische motoreindplaten, innervatie en denervatie van NMJ en het aantal PSC's in spieren met fysiologische en pathologische status.

De gastrocnemiusspier is de grootste spier die de uitstulping in de kuit vormt, die gemakkelijk kan worden ontleed door de huid en de biceps femoris-spier uit de ledemaat te verwijderen. De spier wordt vaak gekozen om spieratrofie, neuromusculaire degeneratie, spierprestaties en motorische eenheidskracht ex vivo of in vivote beoordelen 16,17,18. De techniek is echter ook geschikt voor het onthullen van de morfologische kenmerken van NMJ van verschillende skeletspieren. Tegelijkertijd kunnen de dikke spiersecties een completere morfologie en hoeveelheid NMJ onthullen in vergelijking met dunne secties 7,8 en geplaagde spiervezels19.

In lijn met deze studies werd de mediale gastrocnemiusspier van de rat geselecteerd als het doelweefsel in deze studie en werd gesneden met een dikte van 80 μm voor meerdere fluorescerende kleuring met verschillende soorten biomarkers volgens de structurele componenten van NMJ. Hier werden neurofilament 200 (NF200)20,21, vesiculaire acetylcholinetransporter (VAChT)22, alfa-bungarotoxine (α-BTX)23,24 en S10025,26 gebruikt om respectievelijk zenuwvezels, pre-synaptische terminals, post-synaptische AchR's en PSC's te labelen. Bovendien werd de achtergrond van spierweefsel en cellulaire kernen verder bestreden met falloïdine en DAPI.

In deze studie verwachten we een verfijnd protocol te ontwikkelen voor het gelijktijdig kleuren van de cellulaire architectuur van NMJ met hun bijbehorende biomarkers op dikkere vaste monsters, wat handiger is voor gebruik in confocale microscopie en helpt om veel meer informatie te verkrijgen over de gedetailleerde structuur van de PSC's, pre- en post-synaptische elementen, evenals hun ruimtelijke correlatie met elkaar. Vanuit het perspectief van de methodologie kan dit protocol nuttig zijn om de morfologische kenmerken van NMJ onder normale en pathologische omstandigheden te evalueren.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deze studie werd goedgekeurd door de Ethische Commissie van het Instituut voor Acupunctuur en Moxibustion, China Academy of Chinese Medical Sciences (goedkeuring nr. 2021-04-15-1). Alle procedures werden uitgevoerd in overeenstemming met de National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (National Academy Press, Washington, D.C., 1996). Drie volwassen mannelijke ratten (Sprague-Dawley, gewicht 230 ± 15 g) werden gebruikt. De ratten werden gehuisvest in een 12 uur licht/donker cyclus met gecontroleerde temperatuur en vochtigheid en met vrije toegang tot voedsel en water. De instrumenten en materialen voor dit onderzoek zijn weergegeven in figuur 1.

1. Perfusie

  1. Injecteer 250 mg/kg tribroomethanoloplossing intraperitoneaal om euthanasie van de ratten te induceren.
  2. Zodra de ademhaling stopt, opent u de thoracale holte om toegang te krijgen tot het hart met behulp van een schaar en een tang. Breng een intraveneuze katheter van de linker hartkamer in de richting van de aorta en snijd vervolgens de rechter oorschelp.
  3. Perfuseer de experimentele ratten in de kap. Begin met perfuseren met 100 ml 0,9% normale zoutoplossing totdat het bloed dat uit de rechter oorschelp komt helder is, en blijf dan doordringen met 250-300 ml 4% paraformaldehyde in 0,1 M fosfaatbuffer (PB, pH 7,4) gedurende ongeveer 10 minuten totdat de staart moeilijk te buigen is.

2. Regionale anatomie

  1. Verwijder na perfusie de huid van de bilaterale achterpoot met behulp van een chirurgisch mes (figuur 2A) en stel de bilaterale heupzenuw en de mediale gastrocnemiusspier bloot (figuur 2B).
  2. Ontleed de bilaterale mediale gastrocnemiusspier voorzichtig uit de achterste ledemaat met behulp van een mes (figuur 2C) en postfixeer de hele spier in 10 ml 4% paraformaldehyde in 0,1 M PB gedurende 2 uur.
  3. Verwijder de spier uit de oplossing en cryoprotecteer de spier in 10 ml sucrose in 0,1 M PB gedurende 1 dag bij 4 °C totdat de spier volledig in de oplossing is ondergedompeld.

3. Cryosectie van de spier

  1. Zodra het spierweefsel in de oplossing is ondergedompeld, fixeert u het op een vriesstadium van een glijdend microtoomsysteem met behulp van bevroren sectiemedium. Snijd de spier horizontaal langs de lange as van de spier met een dikte van 80 μm.
  2. Plaats zeven cryo-secties per put op een ordelijke manier in een kweekplaat met zes putten met 10 ml van 0,1 M PB (pH 7,4) met een borstel.
    OPMERKING: De secties zijn zo geplaatst dat de secties in verschillende putten naast elkaar liggen, waardoor de secties die voor verschillende vlekken worden gebruikt consistenter zijn.

4. Meerdere fluorescerende kleuren met NF200, VAChT, α-BTX en Pha

OPMERKING: Meerdere fluorescerende kleuring met NF200, VAChT, α-BTX en Pha werd toegepast om respectievelijk de zenuwvezels, pre-synaptische terminals, post-synaptische nicotine-acetylcholinereceptoren en spiervezels te onthullen.

  1. Incubeer vier secties per put met 1,5 ml 0,1 M PB met 75 μL 10% Triton X-100 (0,5%) en 45 μL normaal ezelserum (3%) op een orbitale shaker bij 20 tpm gedurende 30 minuten.
  2. Breng de secties over in 1,5 ml gemengde oplossing van primaire antilichamen die konijn anti-NF200 (1:1.000), geitenanti-VAChT (1:500) bevatten in 0,1 M PB (pH 7,4) met 1% normaal ezelserum en 0,5% Triton X-100, en incubeer 's nachts bij 4 °C. Was de volgende dag de secties 3x gedurende 5 minuten elk in 0,1 M PB (pH 7,4) op een orbitale shaker bij 20 rpm.
  3. Incubeer de secties in 1,5 ml gemengde oplossing van secundaire antilichamen met ezel anti-konijn AF488 (1:500) en ezel anti-geit AF546 (1:500), evenals de biomarkers van α-BTX, AF647 (1:500) en falloidine 350 (1:500) in 0,1 M PB (pH 7,4) met 1% normaal ezelserum en 0,5% Triton X-100 gedurende 1 uur bij kamertemperatuur. Bescherm tegen licht.
  4. Na 3x 5 minuten wassen in 0,1 M PB (pH 7,4), monteer je de secties op microscoopglaasjes. Breng dekglas aan op de secties met 50% glycerine in gedestilleerd water ter observatie.

5. Meerdere fluorescerende kleuren met NF200, S100, α-BTX en DAPI

OPMERKING: De procedures zijn vergelijkbaar met die van stap 4; het belangrijkste verschil is tussen de primaire antilichamen en hun overeenkomstige secundaire antilichamen.

  1. Gebruik de volgende primaire antilichamen: kip anti-NF200 (1:6.000), konijn anti-S100 (1:2.500) in stap 4.2 en hun bijbehorende secundaire antilichamen: ezel anti-kip AF488 (1:500) en ezel anti-konijn AF546 (1:500), evenals de biomarkers van α-BTX AF647 (1:500) en DAPI (1:50000) in stap 4.3.

6. Observatie en analyses

  1. Observeer het monster en maak foto's met behulp van een confocaal beeldvormingssysteem uitgerust met de volgende objectieve lenzen: 20x lens met NA van 0,75 en 40x lens met NA van 0,95.
  2. Gebruik excitatie- en emissiegolflengten van 350 nm (Pha), 488 nm (NF200), 546 nm (VAChT en S100), 647 nm (α-BTX) of DAPI die overeenkomen met de meervoudige fluorescerende kleuring. Stel de resolutie van het vastleggen van afbeeldingen in op 640 x 640 pixels.
    OPMERKING: De resolutie van 640 x 640 pixels is gekozen omdat de afbeeldingen zijn vastgelegd in Z-stacks. Een resolutie van 1024 x 1024 pixels resulteert in langzame beeldvorming en fotobleaching in Z-stacks.
  3. Stel het beginpuntsvlak en het eindpuntsvlak in. Stel de stapgrootte in op 1 μm of 2 μm. Kies dieptepatroon, afbeeldingsopname en Z-serie.
  4. Voor de beelden met een lagere vergroting die met 20x zijn gemaakt, legt u 40 beelden (Z-stacks) vast in stapgrootte van 2 μm van elke 80 μm dikke sectie met behulp van een gaatje van 105 μm. Kies de projectie-/topografiemodus en de intensiteitsprojectie over de Z-as om alle beelden in één focus te integreren.
  5. Voor de hogere vergrotingsbeelden die met 40x zijn gemaakt, legt u 80 beelden (Z-stacks) vast in stapgrootte van 1 μm van elke 80 μm dikke sectie met zoom ingesteld op 2 en een 105 μm pinhole. Integreer alle afbeeldingen in één focus.
  6. Reconstrueer de beelden in het driedimensionale patroon met het beeldverwerkingssysteem zoals eerder beschreven in27.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Na meerdere fluorescerende kleuring werd de overeenkomstige etikettering ordelijk aangetoond op de 80 μm dikke delen van de rat mediale gastrocnemius-spier met NF200-positieve zenuwvezels, VAChT-positieve pre-synaptische terminals, α-BTX-positieve post-synaptische AchR's, S100-positieve PSC's, falloidine-positieve spiervezels en DAPI-gelabelde cellulaire kernen (figuur 3 en figuur 4).

Er werd aangetoond dat NF200-positieve zenuwvezels...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

We hebben de technische details beschreven die nodig zijn voor het uitvoeren van succesvolle meervoudige kleuring van spierplakken en het gebruik van fluorescerende immunohistochemie voor het onthullen van de morfologische kenmerken van NMJ op de dikke delen van de mediale gastrocnemiusspier van de rat. Door deze benadering te gebruiken, kunnen de fijne details en ruimtelijke correlatie van de PSC's en pre- en post-synaptische elementen worden geanalyseerd en gewaardeerd onder confocale microscopie, en verder gereconstru...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs verklaren geen belangenconflicten.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deze studie werd gefinancierd door het CACMS Innovation Fund (Nr. CI2021A03407), National Natural Science Foundation of China (nr. 82004299) en de fundamentele onderzoeksfondsen voor de Central Public Welfare Research Institutes (nr. ZZ13-YQ-068; ZZ14-YQ-032; ZZ14-YQ-034; ZZ201914001; ZZ202017006; ZZ202017015).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
4',6-diamidino-2-phenylindole dihydrochlorideThermoFisherD3571
Confocal laser scanning microscopeOlympusFV1200
Donkey anti-chicken AF488Jackson149973 (703-545-155)
Donkey anti-goat AF546ThermoFisherA11056
Donkey anti-rabbit AF488ThermoFisherA21206
Donkey anti-rabbit AF546ThermoFisherA10040
Frozen Section MediumThermoFisherNeg-50Kleurloos
Microscope cover glassCitotest10212450C
MicrotomeYamatoREM-710
Neurofilament 200Sigma-AldrichN4142Konijn
Neurofilament 200Abcamab4680Kip
Normaal ezelsserumJackson ImmunoResearch Laboratories017-000-1210 ml
Normale zoutoplossingShandong Hualu Pharmaceutical Co.LtdH37022750250 ml
ParaformaldehydeMacklinP804536500 g
Phalloidin AF350ThermoFisherA22281
Precisie peristaltische pompLongerBT100-2J
S100-b2;Abcamab52642Konijn
Natriumfosfaat d-basisch dodecahydraatMacklinS818118500 g
Natriumfosfaat monobasisch dihydraatMacklinS817463500 g
SucroseMacklinS818046500 g
Superfrost plus microscoopglazenThermoFisher4951PLUS-001E
Triton X-100Solarbio Life Sciences9002-93-1100 ml
Vesiculair acetylcholinetransporterMiliporeANB100Geit
b1;-bungarotoxin AF647-conjugaatThermoFisherB35450

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kawabuchi, M., et al. The spatiotemporal relationship among Schwann cells, axons and postsynaptic acetylcholine receptor regions during muscle reinnervation in aged rats. TheAnatomical Record. 264 (2), 183-202 (2001).
  2. Nishimune, H., Shigemoto, K. Practical anatomy of the neuromuscular junction in health and disease. Neurologic Clinics. 36 (2), 231-240 (2018).
  3. Guarino, S. R., Canciani, A., Forneris, F. Dissecting the extracellular complexity of neuromuscular junction organizers. Frontiers in Molecular Biosciences. 6, 156(2020).
  4. Cruz, P. M. R., Cossins, J., Beeson, D., Vincent, A. The neuromuscular junction in health and disease: molecular mechanisms governing synaptic formation and homeostasis. Frontiers in Molecular Neuroscience. 13, 610964(2020).
  5. Matthews-Bellinger, J., Salpeter, M. Fine structural distribution of acetylcholine receptors at developing mouse neuromuscular junctions. The Journal of Neuroscienc : the Official Journal of the Society for Neuroscience. 3 (3), 644-657 (1983).
  6. Desaki, J., Uehara, Y. Formation and maturation of subneural apparatuses at neuromuscular junctions in postnatal rats: a scanning and transmission electron microscopical study. Developmental Biology. 119 (2), 390-401 (1987).
  7. Marques, M., Santo Neto, H. Imaging neuromuscular junctions by confocal fluorescence microscopy: individual endplates seen in whole muscles with vital intracellular staining of the nerve terminals. Journal of Anatomy. 192, 425-430 (1998).
  8. Magill, C. K., et al. Reinnervation of the tibialis anterior following sciatic nerve crush injury: a confocal microscopic study in transgenic mice. Experimental Neurology. 207 (1), 64-74 (2007).
  9. Yin, X., et al. Spatial distribution of motor endplates and its adaptive change in skeletal muscle. Theranostics. 9 (3), 734-746 (2019).
  10. Cai, R., et al. Panoptic imaging of transparent mice reveals whole-body neuronal projections and skull-meninges connections. Nature Neuroscience. 22 (2), 317-327 (2019).
  11. Feng, G., et al. Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP. Neuron. 28 (1), 41-51 (2000).
  12. Chen, W. T., et al. In vivo injection of -bungarotoxin to improve the efficiency of motor endplate labeling. Brain and Behavior. 6 (6), 00468(2016).
  13. Sugiura, Y., Lin, W. Neuron-glia interactions: the roles of Schwann cells in neuromuscular synapse formation and function. Bioscience Reports. 31 (5), 295-302 (2011).
  14. Alvarez-Suarez, P., Gawor, M., Proszynski, T. J. Perisynaptic schwann cells - The multitasking cells at the developing neuromuscular junctions. Seminars in Cell & Developmental Biology. 104, 31-38 (2020).
  15. Walker, C. L. Progress in perisynaptic Schwann cell and neuromuscular junction research. Neural Regeneration Research. 17 (6), 1273-1274 (2022).
  16. Michaud, M., et al. Neuromuscular defects and breathing disorders in a new mouse model of spinal muscular atrophy. Neurobiology of Disease. 38 (1), 125-135 (2010).
  17. Sharma, S., et al. Heat-induced endoplasmic reticulum stress in soleus and gastrocnemius muscles and differential response to UPR pathway in rats. Cell Stress Chaperones. 26 (2), 323-339 (2021).
  18. Raikova, R., Celichowski, J., Angelova, S., Krutki, P. A model of the rat medial gastrocnemius muscle based on inputs to motoneurons and on an algorithm for prediction of the motor unit force. Journal of Neurophysiology. 120 (4), 1973-1987 (2018).
  19. Marinello, M., et al. Characterization of neuromuscular junctions in mice by combined confocal and super-resolution microscopy. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (178), e63032(2021).
  20. Perrot, R., Berges, R., Bocquet, A., Eyer, J. Review of the multiple aspects of neurofilament functions, and their possible contribution to neurodegeneration. Molecular Neurobiology. 38 (1), 27-65 (2008).
  21. Yuan, A., Rao, M. V., Nixon, R. A. Neurofilaments and neurofilament proteins in health and disease. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 9 (4), 018309(2017).
  22. Petrov, K. A., Proskurina, S. E., Krejci, E. Cholinesterases in tripartite neuromuscular synapse. Frontiers in Molecular Neuroscience. 14, 811220(2021).
  23. Karlin, A. Emerging structure of the nicotinic acetylcholine receptors. Nature Reviews. Neuroscience. 3 (2), 102-114 (2002).
  24. Rudolf, R., Straka, T. Nicotinic acetylcholine receptor at vertebrate motor endplates: Endocytosis, recycling, and degradation. Neuroscience Letters. 711, 134434(2019).
  25. Barik, A., Li, L., Sathyamurthy, A., Xiong, W. C., Mei, L. Schwann cells in neuromuscular junction formation and maintenance. The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 36 (38), 9770-9781 (2016).
  26. Kang, H., Tian, L., Thompson, W. J. Schwann cell guidance of nerve growth between synaptic sites explains changes in the pattern of muscle innervation and remodeling of synaptic sites following peripheral nerve injuries. Journal of Comparative Neurology. 527 (8), 1388-1400 (2019).
  27. Wang, J., et al. A new approach for examining the neurovascular structure with phalloidin and calcitonin gene-related peptide in the rat cranial dura mater. Journal of Molecular Histology. 51 (5), 541-548 (2020).
  28. Hughes, B. W., Kusner, L. L., Kaminski, H. J. Molecular architecture of the neuromuscular junction. Muscle Nerve. 33 (4), 445-461 (2006).
  29. Boehm, I., et al. Comparative anatomy of the mammalian neuromuscular junction. Journal of Anatomy. 237 (5), 827-836 (2020).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Fluorescent kleuringconfocale microscopiez stapel beeldvormingSchwanncellenacetylcholinereceptorenneurofilament 200vesiculaire acetylcholinetransporter

Gerelateerde artikelen