Het huidige protocol beschrijft een eenvoudige procedure voor het verwerven en analyseren van de topografie van epicraniële visueel opgewekte potentialen met 32-meerkanaals dunne-filmelektroden in de muis.
Methodenartikel
Het huidige protocol beschrijft een eenvoudige procedure voor het verwerven en analyseren van de topografie van epicraniële visueel opgewekte potentialen met 32-meerkanaals dunne-filmelektroden in de muis.
Visual evoked potentials (VEP) maken de karakterisering van de visuele functie in preklinische muismodellen mogelijk. Er bestaan verschillende methoden om VEP's bij muizen te meten, van niet-invasief EEG, subcutane enkelvoudige elektroden en ECoG tot volledig invasieve intracorticale meerkanaals visuele cortexopnames. Het kan nuttig zijn om een globale, topografische karakterisering op EEG-niveau van visuele reacties te verkrijgen voorafgaand aan lokale intracorticale micro-elektrodemetingen in acute experimentele omgevingen. Een use case is bijvoorbeeld het beoordelen van wereldwijde cross-modale veranderingen in VEP-topografie in doofheidsmodellen voordat de effecten ervan op lokaal intracorticaal niveau worden bestudeerd. Multichannel epicraniaal EEG is een robuuste methode om een dergelijke overzichtsmaat van corticale visuele activiteit te verkrijgen. Meerkanaals epicraniaal EEG biedt vergelijkbare resultaten door middel van een gestandaardiseerde, consistente benadering om bijvoorbeeld cross-modale, pathologische of leeftijdsgerelateerde veranderingen in de corticale visuele functie te identificeren. De huidige studie presenteert een methode om de topografische verdeling van flash-evoked VEP's te verkrijgen met een 32-kanaals dunne-film EEG-elektrode-array bij verdoofde muizen. Gecombineerd met analyse in het tijd- en frequentiedomein, maakt deze benadering een snelle karakterisering en screening mogelijk van de topografie en visuele basiseigenschappen van de corticale visuele functie van muizen, die kunnen worden gecombineerd met verschillende acute experimentele instellingen.
Muizen zijn een preklinisch model van degeneratieve processen van het gezichtsvermogen en oogheelkundige ziekten 1,2,3,4. Visual evoked potentials (VEP's) worden vaak gebruikt om de corticale visuele functie te meten en bijvoorbeeld om visuele degeneratie in pathologische modellen te beoordelen 5,6. De VEP-latentie, geleidingstijd, amplitude, multifocale kenmerken of ruimtelijke scherpte van corticale visueel opgewekte potentialen bieden diagnostische informatie over de functionele integriteit van het visuele systeem 7,8,9.
Bij muizen kunnen corticale visuele evoked potentialen worden gemeten op verschillende ruimtelijke schalen met methoden van verschillende complexiteit, van niet-invasief EEG, onderhuidse naaldelektroden en schedelgeïmplanteerde schroeven, tot volledig invasieve intracraniële benaderingen met epicorticale ECoG, tot intracorticale elektrode-opnames 10,11,12,13,14,15,16,17 . Deze methoden hebben verschillende sterke en zwakke punten. Een laag aantal elektroden geeft bijvoorbeeld slechts beperkte informatie over de corticale VEP-verdeling, terwijl subcutane naaldelektroden vaak geen consistente opnamelocaties garanderen. Bovendien vereisen geïmplanteerde schroeven of volledig invasieve methoden beschadiging, penetratie of verwijdering van de schedel en verstrekken ze vaak alleen lokale informatie.
Bij acute experimenten is vaak een eerste globaal overzicht van de corticale visuele functie gewenst, wat uiteindelijk wordt gevolgd door verdere experimentele stappen en vergeleken met lokale intracorticale opnames. Eén mogelijke use case wordt bijvoorbeeld eerst gebruikt om de effecten op EEG-niveau van visuele crossmodale reorganisatie van doofheid of gehoorverlies op VEP-topografie en corticale visuele activiteit te onderzoeken18,19 voordat de effecten op lokaal intracorticaal niveau worden bestudeerd.
Meerkanaals EEG-opnames met dunne-film multi-elektrode-arrays kunnen een gesystematiseerde VEP-topografie van de muizenschedelopleveren 20,21,22,23,24. Dergelijke epicraniale opnames kunnen voordelen hebben ten opzichte van ECoG-opnames door de integriteit van de schedel intact te laten en directe manipulatie van het corticale oppervlak te vermijden. Bovendien bieden dunne-film multi-elektroden een gestandaardiseerde elektrodeconfiguratie, waardoor de visueel opgewekte spatio-temporele hersenactiviteit kan worden vergeleken tussen experimenten die vergelijkbaar zijn met een gestandaardiseerd EEG-systeem bij mensen25. Een gestandaardiseerd raamwerk vergemakkelijkt ook het gebruik van gemeenschappelijke EEG-analysetoolboxen (bijv. Fieldtrip, Chronux, EEGLAB en ERPLAB) om het EEG van muizen te analyseren in het tijd- en frequentiedomein of in termen van connectiviteit 26,27,28,29,30,31.
Dit protocol beschrijft een procedure voor topografische VEP-opnames bij muizen met behulp van een 32-kanaals dunne-filmelektrode. Dit kan worden gebruikt als onderdeel van acute experimenten, gevolgd door aanvullende experimentele stappen, zoals intracorticale micro-elektrode-opnames van specifieke hersengebieden. Hier wordt gedemonstreerd hoe epicraniële flits opgewekte VEP's betrouwbaar kunnen worden opgenomen met 32-kanaals dunne-filmelektroden van de muis. Daarnaast wordt een voorbeeldige analyse van topografische VEP-opnames in het tijd- en frequentiedomein gepresenteerd.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Alle dieren werden behandeld en gehuisvest volgens de Duitse (TierSchG, BGBl. I S. 1206, 1313) en Europese Unie (ETS 123; Richtlijn 2010/63/EU) richtsnoeren voor dierproeven. De dierproeven werden goedgekeurd door de Duitse staatsautoriteiten (Nedersaksische Staatsbureau voor Consumentenbescherming en Voedselveiligheid, LAVES) en werden gecontroleerd door de dierenwelzijnsfunctionaris van de universiteit. Voor de huidige studie werd een 3 maanden oude mannelijke C57BL/6J-muis gebruikt.
1. Gegevens van dieren
2. Inductie van algemene anesthesie
3. Fysiologische monitoring en onderhoud van algemene anesthesie
4. Plaatsing van de elektrode en instelling van de opname
5. EEG-registratie en VEP-meting
6. Voltooiing van het experiment, verwijdering van de elektrode en reiniging van de elektrode
7. Basis VEP-signaalverwerking: tijd- en frequentiedomein
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Het registreren van visueel opgewekte potentialen met meerkanaals EEG maakt het mogelijk om de topografie van VEP-amplitudes, latenties of frequentiecomponenten bij muizen te beoordelen. Figuur 2A toont een voorbeeld van een door flits opgewekte VEP-topografie opgenomen met een epicraniaal 32-kanaals EEG van een 3 maanden oude mannelijke C57BL/6J-muis. De sterkste visueel opgeroepen activiteit vindt plaats in het occipitale gebied boven de visuele cortex.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Dit artikel beschrijft een methode voor het registreren van epi-craniaal meerkanaals EEG met dunne-film elektroden en hoe een consistente topografische weergave van visueel opgewekte potentialen in de muis kan worden verkregen. Hier hebben we voorbeeldig binoculaire flitsstimulatie laten zien, maar deze benadering kan ook worden toegepast met andere soorten visuele stimuli (d.w.z. monoculaire, ruimtelijke roosters, focaal gezichtsveld) met behulp van bijvoorbeeld een groter scherm.
<...Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De auteurs verklaren geen tegenstrijdige financiële belangen of andere belangenconflicten.
Dit werk werd ondersteund door de Duitse Onderzoeksstichting (Deutsche Forschungsgemeinschaft, Cluster of Excellence 2177 "Hearing4all", projectnummer 390895286).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Bepanthen 5% Dexpantheol | Bayer | Ophtamic gel | |
| Cheetah software 5.11 | Neuralnyx | Version 5.11 | Opnamesoftware voor neurofysiologische signalen |
| Digital Lynx SX | Neuralynx | Digital Lynx 16SX | Opnamesysteem |
| ECG differentiële versterker | Otoconsult | WDA2 V1.0 | |
| Elektrisch scheerapparaat | Aesculap | GT420 | |
| Elektrodehouder | TSE Systems | 430005-HE | |
| Onderzoekslamp | Heine | HL 5000 | Koud lichtbronlamp |
| Verwarmingskussen + Temperatuurregelsysteem | CWE | TC-1000 Muis | |
| Histoacryl 0,5 mL | B.Braun | Weefselkleefstof | |
| Infrarood gloeilamp | Sanitas | SIL 06 | |
| Ketamine 10% | WDT | Ketaminohydrochloride | |
| LED stroboscope | Monarch | Nova Strobe PBL | Visuele stimulatie |
| Matlab 2021a | The Mathworks | 2021a | Stimulus controle en analyse |
| Moria Vaatklem | Fine Science Tools | 18320-11 | |
| Muis EEG-elektrode | NeuroNexus | H32 (Reticulair) | 32-kanaals EEG-elektrode. Dikte: 20 μm; lengte: 8,6 mm; breedte 6,8 mm. Platinasites: 500 μm diameter |
| Muisframe | op maat gemaakt | Informatie op aanvraag beschikbaar | |
| Multifunctioneel I/O-apparaat | National Instruments | PCIe-6353 met BNC 2090A | Analoge stimulusgeneratie, uitvoer en trigger |
| NaCl 0,9% | B.Braun | Isotone, steriele, niet-pyrogeen | |
| Neuralynx HS36 | Neuralynx | HS-36 | Headstage |
| Neuronexus-sondeconnector | Neuralynx | ADPT-HS36-N2T-32A | Elektrodeconnector |
| Oscilloscoop | Tektronix | TDS 2014B | |
| Progent Intensieve Reiniger | Menicon | Eiwitverwijderaar en desinfecterende oplossing voor stijve gasdoorlatende lenzen | |
| Opname-pc | HP | HP Z800 | Opname-pc |
| Rimadyl (Carprofen) | Zoetis | Carprofen | |
| Siliconen olie M 1000 | Carl Roth | 4045.1 | |
| Zilverdraad | Science Products | AG-8W | Diameter 203 µm; ECG en referentie-elektrode |
| Geluiddichte kamer | IAC acoustics | ||
| Stereotactische micromanipulator | TSE Systems | 430005-M/P | Voor EEG-elektrodeplaatsing |
| Stimulatie-pc | Dell | Dell Precision T5810 | Stimulatie-pc |
| Chirurgisch microscoop | Zeiss | Op-Mi Focus | |
| Chirurgisch plakband | 3M | 1527-0 | 1,25 cm x 9,1 m |
| Thilo-Tears 3 mg/g | Alcon Pharma GmbH | Ophtamic gel | |
| Vaselin Lichtenstein | Winthrop | Witte vaselinezalf | |
| Xylazin 2% | Bernburg | Xylazinohydrochloride | |
| Xylocaine Spray (10 mg/druppel) | Aspen | Lidocaïne |
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken
Toestemming aanvragen