Een experimenteel model van een hartinfarct voor het bestuderen van hartherstel en remodellering bij knock-outmuizen

Samenvatting

Hier beschrijven we een experimenteel model van een hartinfarct, een echocardiografieprocedure om cardiale remodellering en functie te bestuderen, en procedures voor het kwantificeren van fibrose en hypertrofie in rood gekleurde en met rhodamine bevlekte secties van picrosirius, evenals de grootte van het infarct en de expansie-index in plakjes gekleurd met Masson's trichroom.

Samenvatting

Hart- en vaatziekten zijn de meest voorkomende doodsoorzaak in westerse landen, waarbij acuut myocardinfarct (MI) de meest voorkomende vorm is. Dit artikel beschrijft een protocol voor het bestuderen van de rol van galectine 3 (Gal-3) in de temporele evolutie van hartgenezing en -remodellering in een experimenteel diermodel van MI.

De beschreven procedures omvatten een experimenteel model van MI met een permanente coronaire ligatuur bij mannelijke C57BL/6J (controle) en Gal-3 knock-out (KO) muizen, een echocardiografieprocedure om cardiale remodellering en systolische functie in vivo te bestuderen, een histologische evaluatie van interstitiële myocardiale fibrose met picrosirius rood gekleurde en rhodamine-geconjugeerde lectine-gekleurde secties voor het bestuderen van myocytenhypertrofie door het dwarsdoorsnedegebied (MCSA), en de kwantificering van de grootte van het infarct en cardiale remodellering (dunner worden van het litteken, dikte van het septum en expansie-index) door planimetrie in plakjes gekleurd met Masson's trichroom en trifenyltetrazoliumchloride. Gal-3 KO-muizen met MI vertoonden een verstoorde cardiale remodellering en een toename van de littekenverdunningsratio en de expansie-index. Bij het begin van MI werden ook de myocardfunctie en cardiale remodellering ernstig aangetast. 4 weken na MI werd ook de natuurlijke evolutie van fibrose bij Gal-3 KO-muizen met een infarct beïnvloed.

Samenvattend is het experimentele model van MI een geschikt model voor het bestuderen van de temporele evolutie van hartherstel en -remodellering bij muizen met de genetische deletie van Gal-3 en andere diermodellen. Het ontbreken van Gal-3 beïnvloedt de dynamiek van hartherstel en verstoort de evolutie van cardiale remodellering en functie na MI.

Inleiding

Myocardinfarct (MI) is de meest voorkomende vorm van hart- en vaatziekten. Na MI ondergaat het myocardium seriële morfologische en functionele veranderingen, waaronder de genezing van de MI-infarctzone, ventriculaire remodellering (VR) en myocardiale disfunctie¹. De genezing van MI is een dynamisch en goed georkestreerd proces dat gepaard gaat met diepgaande inflammatoire infiltratie die eindigt in de vorming van een fibrotisch litteken ^2,3. Het experimentele model van MI bij muizen wordt momenteel gebruikt voor het bestuderen van hartremodellering onde....

Protocol

OPMERKING: Alle experimenten die in dit protocol worden beschreven, zijn goedgekeurd door het Animal Care and Research Committee van de Universiteit van Buenos Aires (CICUAL), in overeenstemming met het Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals 13 van de National Research Council (VS)¹³. Gebruik voor de experimenten mannelijke, op leeftijd afgestemde C57BL/6J en Gal-3 KO-muizen (8-10 weken oud) met een gewicht van 30-35 g, die een betere manipulatie voor operaties mogelijk maken. Geef de dieren ad libitum toegang tot water en voedsel. De Gal-3 KO-muiz....

Resultaten

Post-MI overleving en autopsie
Gedurende 4 weken follow-up werd 17% (4/23) van de C57-muizen versus 40% (8/20) van de Gal-3 KO-muizen dood aangetroffen. De autopsie werd uitgevoerd; de dode Gal-3 KO-muizen vertoonden grotere harten dan de C57-muizen (Figuur 1), en 38% van de C57-muizen vergeleken met 32% van de Gal-3 KO-muizen had macroscopische borststolsels die direct verband hielden met hartruptuur. Dit laats.......

Discussie

Het experimentele model van MI door permanente ligatuur van de kransslagader wordt gebruikt voor het bestuderen van een breed scala aan pathofysiologische mechanismen van hartherstel en -remodellering ^5,14,17. Dit artikel geeft een overzicht van de verschillende methoden die momenteel in dit laboratorium worden gebruikt voor het bestuderen van de temporele evolutie van hartherstel en de effecten.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
8-0 zijdedraad	Ethicon
C57BL/6J muizen	Department of Bioresources of the Faculty of Veterinary of the University of Buenos Aires, Argentinië
Forceps
Hardvard 386 ademhalingstoestel	Hardvard company
Verwarmingskussen			onderhoud dier's temperatuur tijdens chirurgie
Image Pro-Plus 6.0	Media Cybernetics		Beeldanalysesoftware
Ketamine	Holiday
Masson Trichrome	BIOPUR
Picrosirius rood	BIOPUR
Spreiders
Rodent Ventilator Model 683	Harvard Apparatus		Mechanisch ademhalingstoestel
Schaar
Stereoscopisch vergrootglas	Arcano
Vivid 7 machine (General Electric Medical Systems, Horten, Noorwegen)	General Electric		Elke trackingsoftware kan worden gebruikt met dit protocol
WGA nr. RL-1022, Vector Laboratories, Burlingame	Vector Laboratories
Xylazine	Pro-Ser