Method Article

Een gevoelige visuele methode voor de detectie van waterstofsulfide producerende bacteriën

DOI:

10.3791/64201

⸱

June 27th, 2022

 , 
1Department of Microbiology, School of Life Science and Technology, China Pharmaceutical University, 2National Experimental Teaching Demonstration Center of Biopharmaceuticals, China Pharmaceutical University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hier presenteren we een protocol om waterstofsulfide producerende bacteriën te detecteren met een aangepast protocol dat wordt gebruikt voor bismutsulfide (BS) precipitatie. De belangrijkste voordelen van deze methode zijn dat deze gemakkelijk te evalueren is en geen gespecialiseerde apparatuur vereist.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Waterstofsulfide (H2S) is een giftig gas geproduceerd door bacteriën in de proteolyse van zwavelhoudende aminozuren en eiwitten dat een belangrijke rol speelt in de menselijke gezondheid. De H2S-productietest is een van de belangrijke bacteriële biochemische identificatietests. De traditionele methoden zijn niet alleen vervelend en tijdrovend, maar ook vatbaar voor remming van bacteriegroei als gevolg van het toxische effect van zware metaalzouten in zwavelhoudend medium, wat vaak tot negatieve resultaten leidt. Hier hebben we een eenvoudige en gevoelige methode ontwikkeld om H2S in bacteriën te detecteren. Deze methode is een aangepaste versie van bismutsulfide (BS) precipitatie die 96-well transparante microtiterplaten gebruikt. Bacteriecultuur werd gecombineerd met bismutoplossing die L-cysteïne bevatte en gedurende 20 minuten gekweekt, aan het einde waarvan een zwart neerslag werd waargenomen. De visuele detectiegrens voor H 2 S was0,2mM. Op basis van de visuele kleurverandering kan de eenvoudige, hoge doorvoer en snelle detectie van H2S-producerende bacteriën worden bereikt. Samenvattend kan deze methode worden gebruikt om H2S-productie in bacteriën te identificeren.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Waterstofsulfide producerende bacteriën kunnen zwavelhoudende aminozuren en eiwitten gebruiken om waterstofsulfide (H2S) te produceren. De productie van H2S komt meestal voor in gramnegatieve Enterobacteriaceae-familiebacteriën en ook in leden van Citrobacter spp., Proteus spp., Edwardsiella spp. en Shewanella spp.1. Deze bacteriën hebben het vermogen om sulfaat te reduceren tot waterstofsulfide (H2S) om energie te verkrijgen. Waterstofsulfide is betrokken bij de ontwikkeling van bacteriële resistentie tegen geneesmiddelen. H2 S beschermt bacteriën tegen de toxicite....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Bacteriestammen

OPMERKING: Voor dit experiment werden negen standaardstammen gebruikt, waaronder Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Fusobacterium nucleatum, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa PAO1, Aeromonas hydrophila YJ-1, Proteus vuigaris en Klebsiella pneumoniae (tabel 1). Salmonella paratyphi A, Fusobacterium nucleatum, Pseudomonas aeruginosa en Proteus vuigaris kunnen H2S produceren, zoals beschreven ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Detectie van waterstofsulfide producerende bacteriën
De prestaties van de H2S-test werden onderzocht met behulp van zuivere culturen van geselecteerde bacteriestammen, zoals vermeld in tabel 1. De resultaten gaven aan dat Salmonella paratyphi B, Fusobacterium nucleatum, Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa en Proteus vuigaris H2S kunnen produceren met zwart BS-neerslag, terwijl Salmonella paratyphi A, Staphylococcu.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De waterstofsulfideproductietest is een van de conventionele fenotypische tests voor de identificatie en differentiatie van bacteriestammen. Veel bacteriesoorten kunnen waterstofsulfide produceren in hun natuurlijke omgeving, zoals waterwater. Deze bacteriesoorten omvatten Salmonella sp., Citrobacter sp., Proteus sp., Pseudomonas sp., sommige stammen van Klebsiella sp., Escherichia coli en sommige soorten anaerobe Clostridia15,16

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs verklaren geen belangenverstrengeling te hebben.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deze studie werd ondersteund door de Priority Academic Program Development of Jiangsu Higher Education Institutions (PAPD) en het Teaching Reform Research Project van de China Pharmaceutical University (2019XJYB18).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Bismuth (III)chlorideShanghai Macklin Biochemical Co., Ltd7787-60-2
EDTANanjing Chemical Reagent Co., Ltd60-00-4
Enterococcus faecalis ATCC 19433
Fusobacterium nucleatum ATCC 25586
Klebsiella pneumoniae ATCC 43816
L-cysteineAmresco52-90-4
Proteus vuigaris CMCC 49027
Salmonella paratyphi ACMCC50001
Salmonella paratyphi BCMCC50094
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Triethanolamine-HClShanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.637-39-8

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Thompson, L. S. The group of hydrogen sulphide producing bacteria. Journal of Medical Research. 42 (184), 383-389 (1921).
  2. Ono, K., et al. Cysteine hydropersulfide inactivates β-lactam antibiotics with formation o....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Hydrogen Sulfide DetectionH2S Producing BacteriaBismuth Sulfide PrecipitationVisual Detection MethodMicrotiter Plate AssayBacterial Biochemical IdentificationSulfur Amino Acid MetabolismBlack Precipitate FormationHigh Throughput ScreeningBacterial Culture Assay

Related Articles