aRabies is een acute, progressieve, virale encefalitis. Het kogelvormige etiologische agens behoort tot het geslacht Lyssavirus, waarvan er ten minste 17 wereldwijd hondsdolheid veroorzaken (behalve in Antarctica). Het hondsdolheidsvirus is het belangrijkste lid van deze diverse RNA-virussen. Alle zoogdieren zijn gevoelig, waarbij vleermuizen en mesocarnivoren belangrijke reservoirs zijn. Overdracht vindt voornamelijk plaats na een beet. Als kwintessentiale neurotrope agentia, bewegen virionen zich centripetaalver na afzetting via axonen van de periferie naar het centrale zenuwstelsel (CZS) voor replicatie, vervolgens naar de speekselklieren en worden uitgescheiden in speeksel. Wereldwijd zijn honden verantwoordelijk voor het grootste aantal menselijke sterfgevallen door hondsdolheid, waardoor jaarlijks tienduizenden doden vallen. Met het oog op zoönotische dimensies zijn laboratoriummethoden essentieel voor toegepast onderzoek en melding, preventie en controle van ziekten bij mensen, gedomesticeerde dieren en wilde dieren. Het doel achter deze verzameling van negen onderling samenhangende artikelen is om methoden te introduceren die inzicht bieden in het voorkomen, de detectie, pathobiologie, epidemiologie, beheer en verbetering van biologische producten voor hondsdolheid.
Hoe wordt hondsdolheid beoordeeld? Hondsdolheid zou een aanmeldingsplichtige ziekte moeten zijn, met passende verzameling, analyse en epidemiologische interpretatie van gegevens. Tegenwoordig worden de meeste gevallen gemeld op basis van passieve surveillance, gebaseerd op dieren die mensen blootstellen. Hoewel het redelijk eenvoudig lijkt om de veilige vangst, beperking, sedatie en euthanasie van een klinische verdachte (d.w.z. een bijtende hond voor hondsdolheidsdiagnose) te visualiseren, is dit niet zo eenvoudig voor sommige wilde dieren. Zo was Taiwan een gebied dat als 'vrij' van hondsdolheid werd beschouwd, oorspronkelijk op basis van uitgebreide surveillance bij gedomesticeerde dieren. Echter, erkend de belangrijkheid van andere dierlijke reservoirs, richtten onderzoekers op het eiland hun aandacht op de wilde fauna. Zoals Hsu et al. beschrijven, biedt de gerichte verzameling van stervende en dode vleermuizen een kans voor de detectie van unieke lyssavirussoorten in Taiwan1. Dergelijke inspanningen hebben de taxonomische breedte van dit virale geslacht uitgebreid en hebben een redelijk schema geboden voor andere beoordelingen in Azië.
Welke weefsels zijn nodig voor lyssavirusdiagnose? Naast de afleidingen van relevante surveillancemethoden en correcte soortidentificatie, is veilige en gepaste weefselselectie van het grootste belang voor de gevoelige en specifieke diagnose van hondsdolheid. Sinds de 19de eeuw werd het centrale zenuwstelsel (CZS) gewaardeerd als een primair weefsel. Dieren werden geëuthanaseerd, hun karkassen werden naar het laboratorium gestuurd, schedels werden geopend, hersenen werden verwijderd en delen werden microscopisch onderzocht op virale inclusies. Echter, het verzenden van hele dieren is niet praktisch, met name bij grootlichamige zoogdieren zoals vee. Bovendien zijn niet alle delen van de hersenen even nuttig voor diagnose. Jarvis et al. beschrijven veilige en praktische necropsiemethoden voor zowel kleine als grote zoogdieren die het risico op blootstelling minimaliseren en de verwerkingstijden verkorten2. De toepassing van dergelijke bioveiligheidsaanbevelingen en de concentratie op de hersenstam en het cerebellum zullen praktijken voor moderne laboratoriumgebaseerde surveillance van hondsdolheid bij dieren verbeteren.
Welke opties worden gebruikt voor virale antigeendetectie? Voor routinematige lyssavirusdiagnose wordt sinds het midden van de 20ste eeuw een directe fluorescente antilichaamtest (DFA) gebruikt voor het observeren van virale inclusies in CZS-weefsel. Hoewel zeer gevoelig en specifiek, vereist de DFA-test een fluorescerende microscoop en gebruikt aceton als weefselfixatief. Patrick et al. beschrijven het gebruik van een directe, snelle immunohistochemische test (drit) die afhankelijk is van de verzameling van hersenstam, formalinefixatie van weefselindrukken, het gebruik van monoklonale of polyklonale antilichamen geconjugeerd met biotine en de detectie van virale inclusies door lichtmicroscopie, in minder dan 1 uur3. De drit heeft een vergelijkbare gevoeligheid en specificiteit als de DFA-test en is geschikt voor decentrale, verbeterde laboratoriumgebaseerde surveillance onder veldcondities. Voor omgevingen met beperkte middelen is een lineaire flowassay (LFA) een andere methode voor snelle diagnose die minimale technische expertise vereist, zoals gerapporteerd door Mauti et al.. Positieve teststroken uit het veld kunnen naar een centraal laboratorium worden gestuurd voor bevestiging4.
Behalve antigeendetectie, zijn andere methoden geschikt voor lyssavirusdiagnose? De DFA-, drit- en LFA-tests zijn nuttig voor de detectie van virale antigenen in postmortem CZS-weefsels. Echter, hersenweefsels kunnen ontbonden zijn. Bovendien, in vermoedelijke menselijke gevallen, zijn antemorte tests wenselijk en kunnen alternatieve klinische monsters zoals CSF omvatten. Als zodanig zijn moleculaire tests zeer nuttig om kleine hoeveelheden virale nucleïnezuren te detecteren. Marston et al. en Wang et al. beschrijven een real-time en respectievelijk geneste polymerasekettingreactietechniek die respectievelijk snel, gevoelig en specifiek is5,6. Dergelijke zorgvuldige aandacht voor detail om monstercontaminatie te minimaliseren en goed primerontwerp maken primaire diagnose mogelijk over het spectrum van uiteenlopende lyssavirussen.
Eenmaal gediagnosticeerd, is conventionele microscopie voldoende voor moderne inzichten in de pathobiologie van lyssavirus? Het gebruik van alleen tweedimensionale microscopische methoden kan resulteren in het missen van kritische in vivo elementen in context en complexiteit. Echter, met behulp van lange vrijwerkende objectieven, kunnen virus-geïnfecteerde weefsels worden afgebeeld door conventionele confocale laserscanningmicroscopie met hoge resoluties, zoals beschreven door Zaeck et al., om de verspreiding van pathogenen en betere details over virale pathogenese, verspreiding, tropisme en neuro-invasie te visualiseren