Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Spontaan muizenmodel van anaplastische schildklierkanker

2.4K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/64607

⸱

3 februari 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1State Key Laboratory of Biotherapy and Cancer Center, West China Hospital, Sichuan University and Collaborative Innovation Center, 2Division of Thyroid Surgery, Laboratory of Thyroid and Parathyroid Disease, Frontiers Science Center for Disease-Related Molecular Network, Department of General Surgery, West China Hospital, Sichuan University, 3Department of Ultrasound, West China Hospital of Sichuan University, Sichuan University, 4Department of Otolaryngology-Head & Neck Surgery and University of Arizona Cancer Center, University of Arizona, 5Center for Translational Medicine, Shenzhen Bay Laboratory, 6Division of Laboratory Medicine/Research Centre of Clinical Laboratory Medicine, West China Hospital, Sichuan University

In dit artikel

Samenvatting

Hier presenteren we een standaard pijplijn om murine ATC-tumoren te verkrijgen door spontane genetisch gemanipuleerde muismodellen. Verder presenteren we tumordynamiek en pathologische informatie over de primaire en uitgezaaide laesies. Dit model zal onderzoekers helpen om tumorigenese te begrijpen en medicijnontdekkingen te vergemakkelijken.

Samenvatting

Anaplastische schildklierkanker (ATC) is een zeldzame maar dodelijke maligniteit met een sombere prognose. Er is dringend behoefte aan meer diepgaand onderzoek naar de carcinogenese en ontwikkeling van ATC, evenals therapeutische methoden, omdat standaardbehandelingen in wezen uitgeput zijn bij ATC-patiënten. De lage prevalentie heeft echter grondige klinische studies en het verzamelen van weefselmonsters belemmerd, zodat er weinig vooruitgang is geboekt bij het creëren van effectieve behandelingen. We gebruikten genetische manipulatie om een voorwaardelijk induceerbaar ATC-muizenmodel (mATC) te maken in een C57BL / 6-achtergrond. Het ATC-muizenmodel werd gegenotypeerd door TPO-cre/ERT2; BrafCA/wt; Trp53 ex2-10/ex2-10 en geïnduceerd door intraperitoneale injectie met tamoxifen. Met het muizenmodel onderzochten we de tumordynamiek (tumorgrootte varieerde van 12,4 mm 2 tot 32,5 mm2 na 4 maanden inductie), overleving (de mediane overlevingsperiode was 130 dagen) en metastase (longmetastasen traden op in 91,6% van de muizen) curven en pathologische kenmerken (gekenmerkt door Cd8, Foxp3, F4/80, Cd206, Ki67 en Caspase-3 immunohistochemische kleuring). De resultaten gaven aan dat spontane mATC zeer vergelijkbare tumordynamiek en immunologische micro-omgeving bezit als menselijke ATC-tumoren. Concluderend, met een hoge gelijkenis in pathofysiologische kenmerken en uniforme genotypen, loste het mATC-model het tekort aan klinisch ATC-weefsel en heterogeniteit van monsters tot op zekere hoogte op. Daarom zou het de mechanisme- en translationele studies van ATC vergemakkelijken en een benadering bieden om het behandelingspotentieel van kleine moleculaire geneesmiddelen en immunotherapiemiddelen voor ATC te onderzoeken.

Inleiding

Schildklierkanker is een van de meest voorkomende endocriene maligniteiten1, afkomstig van het schildklierepitheel. In de afgelopen jaren is de incidentie van schildklierkanker wereldwijd snel toegenomen2. Schildklierkanker kan worden onderverdeeld in verschillende typen op basis van de mate van tumorceldifferentiatie. Op basis van klinisch gedrag en histologie worden schildkliercarcinomen onderverdeeld in goed gedifferentieerde carcinomen, waaronder papillair schildkliercarcinoom (PTC) en folliculair schildkliercarcinoom (FTC), slecht gedifferentieerd carcinoom (PDTC) en ongedifferentieerd of anaplastisch carcinoom van de schildklier (ATC)3. In tegenstelling tot PTC, een veel voorkomend type met mild gedrag en een betere prognose4, is ATC een zeldzame en zeer agressieve maligniteit die goed is voor 2% tot 3% van alle schildkliertumoren5. Hoewel ATC zeldzaam is, is het verantwoordelijk voor ongeveer 50% van de schildklierkankergerelateerde sterfgevallen, met sombere overleving (6-8 maanden)6,7. Meer dan 50% van de ATC-gevallen wordt gediagnosticeerd als longmetastase8. Naast de agressieve aard van ATC is er in de kliniek een beperkte effectieve behandeling ontwikkeld. Daarom hebben ATC-patiënten een sombere prognosevan 9,10,11. Dit suggereert dat verdere diepgaande studies dringend nodig zijn naar de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan de ontwikkeling van ATC en behandeling.

De tumorigenese van ATC is een dynamisch gededifferentieerd proces. De moeilijkheid om menselijke tumormonsters te verzamelen in elke fase van klinische studies heeft het begrip van het ontwikkelingsmechanisme van goed gedifferentieerde tot ongedifferentieerde carcinomen belemmerd. Daarentegen bevordert het gebruik van murine ATC-modellen (mATC) de verzameling van mATC-monsters in het hele tumorigeneseverloop. Daarom kunnen we de mechanismen van tumorvorming beter begrijpen door het dynamische gededifferentieerde proces te analyseren. Bovendien heeft de heterogeniteit van klinische ATC-monsters ook bijgedragen aan de moeilijkheid om het moleculaire mechanisme te begrijpen. Niettemin deelden muizen dezelfde genetische achtergronden en werden ze in vergelijkbare leefomgevingen gehouden, waardoor de consistentie van elke tumor werd gewaarborgd. Dit vergemakkelijkt het verkennen van de gegeneraliseerde rol van ATC-ontwikkeling12,13,14. Bovendien is mATC een in situ tumormodel dat de invloed van de anatomische locatie en weefselspecifieke micro-omgeving kan herstellen. Als zodanig, in vergelijking met veelgebruikte immunodeficiënte muizen, is mATC een spontaan muizenmodel met een intact immuunsysteem en immuunmicro-omgeving.

Daarom construeerden we voorwaardelijk geïnduceerde mATC met de C57BL / 6-stam, een muizenmodel dat in staat is om de pathologische kenmerken van gededifferentieerd schildkliercarcinoom te reproduceren. Op basis van dit model gaven we een kort overzicht van de moleculaire basis, constructie-ideeën, pathologische kenmerken en toepassingen van mATC. Daarnaast observeerden en rapporteerden we tumorgroei, overlevingstijd, metastase en pathologische kenmerken van mATC. Wij geloven dat dit een informatica-overzicht zal zijn om andere onderzoekers te helpen dit model gemakkelijker te gebruiken.

We construeerden een voorwaardelijk induceerbaar mATC-model, zoals voor het eerst gerapporteerd door McFadden15; aanvankelijk bouwden we muizen: TPO-cre/ERT2, Braf flox/wt en Trp53flox/wt. Specifiek omvatten TPO-cre / ERT2-muizen de humane schildklierperoxidase (TPO) -promotor (een schildklierspecifieke promotor), die de expressie van een cre-ERT2-fusiegen aandrijft (een cre-recombinase gefuseerd met een menselijk oestrogeenreceptorligandbindend domein). Cre-ERT2 is meestal beperkt tot het cytoplasma en komt alleen in de kern wanneer het wordt blootgesteld aan tamoxifen, wat cre ertoe aanzet recombinante enzymactiviteit uit te oefenen. Wanneer de muizen worden gekruist met muizen die loxP-geflankeerde sequenties dragen, verwijdert cre-gemedieerde recombinatie na tamoxifen-inductie de floxed sequenties in de schildkliercellen om het doel te bereiken van knock-out of knock-out in specifieke genen.

Bovendien zijn Braf flox/wt muizen een knock-in allel van menselijke Braf gebaseerd op het cre-loxP systeem. Brafflox/wt murine transcript is gecodeerd door endogene exonen 1-14 en loxP-geflankeerde menselijke exonen 15-18. Na cre-gemedieerde excisie van de floxed regio's, worden het mutante exon 15 (gemodificeerd met een V600E aminozuursubstitutie gekoppeld aan constitutief actieve BrafV600E in menselijke kankers) en de endogene exonen 16-18 gebruikt om de transcripten te genereren. Bovendien zijn Trp53 flox/wt muizen knockout allelen van menselijke Trp53 en hebben loxP sites die exonen 2-10 van Trp53 flankeren. Wanneer gekruist met muizen met een cre-recombinase, verwijdert cre-gemedieerde recombinatie de floxed sequentie om Trp53 uit te schakelen. Vervolgens werden TPO-cre/ERT2, Braf flox/w en Trp53flox/wt muizen gekruist om TB (TPO-cre/ERT2; Brafflox/wt) muizen en TBP (TPO-cre/ERT2; Brafflox/wt; Trp53flox/wt) muizen, die kunnen worden gebruikt om PTC en ATC te genereren. Na ongeveer 8 weken werden de muizen geïnduceerd door een intraperitoneale (i.p.) toediening van 150 mg/kg tamoxifen opgelost in maïsolie gedurende twee toedieningen. Tumorgroei kon worden gevolgd door hoogfrequente echografie (het eerste tijdstip van echografie werd geregistreerd als dag 0). De eerste echografie werd 40 dagen na introductie van tamoxifen uitgevoerd.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

De hier beschreven dierprocedures werden uitgevoerd met de goedkeuring van de Animal Ethics Committee van het West China Hospital, Sichuan University, Chengdu, Sichuan, China.

1. Inductie van TBP-muizen

  1. Identificeer het genotype van muizen
    1. Scheid na ongeveer 3 weken de vrouwelijke muizen van de mannelijke muizen. Gebruik tegelijkertijd de oormerkklem om een oormerk te bevestigen. Plaats de oormerken in de onderste helft en op het middelste derde deel van het oor en zorg ervoor dat u het gebied met de hoogste concentratie haarvaten vermijdt.
    2. Houd de muizen voorzichtig maar veilig in bedwang. Grijp stevig aan de basis van de muizenstaart. Plaats de muizen op een oppervlak dat hen in staat stelt om te grijpen.
    3. Plaats de vrije hand voorzichtig maar stevig over de schouders en pak dan snel het nekvel tussen duim en wijsvinger vast. Houd de staart vast met de pink.
    4. Swab de staart met alcohol. Gebruik een steriele schaar om het huidmonster <5 mm te knippen en in een schone monstercontainer met een label te doen. Het is niet nodig om de vacht van de muizen te verwijderen. Comprimeer de staart met steriele sponzen om hemostase te bereiken.
    5. Lyseer vervolgens de muizenstaart en voer polymerasekettingreactie (PCR) uit om het genotype te identificeren.
      OPMERKING: Na het knippen van een muizenstaart moet het oppervlak van de schaar worden afgeveegd met alcoholkatoen om wederzijdse besmetting van genen tussen muizenstaarten te voorkomen. Nadat ze in hun kooi zijn geplaatst, moeten de muizen gedurende 5 minuten worden bekeken om te zoeken naar tekenen van bloeding op de wondplaats. Zie tabel 1 voor de lijst met primers en de PCR-instellingen die in dit onderzoek zijn gebruikt.
  2. Tamoxifen-geïnduceerde TBP-muizen
    1. Weeg 0,3 g tamoxifen af en los het op in 15 ml maïsolie door middel van echografie (vermogen = 20%, duur = 20 min, temperatuur = 4 °C), in een concentratie van 20 mg / ml. Bewaren bij 4 °C.
      OPMERKING: Tamoxifen is gevoelig voor licht en moet in een bruine container worden geplaatst.
    2. Weeg de muizen na ongeveer 8 weken met een elektronische weegschaal en geef ze een i.p. injectie met tamoxifen in een dosis van 150 mg / kg, tweemaal toegediend met een interval van 1 week.

2. Dissectie en beeldvorming van schildkliertumoren en gemetastaseerde tumoren van muizen

  1. Voorbereiding
    1. Bereid de dissectiegereedschappen voor: steriele schaar en tang, steriel mes, 75% alcoholspuitfles, 20 cm straightedge, vernier remklauwen, papieren handdoeken en alcoholkatoen.
    2. Oplossing voor het fixeren van muisweefsel: bereid 4% paraformaldehyde weefselfixatieoplossing.
    3. Reinig een schaal van 10 cm gevuld met ongeveer 10 ml steriele fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) voor tijdelijke weefselopslag en was het bloed op het oppervlak van het weefsel.
  2. Schildklier extractie
    1. Euthanaseer de muizen met koolstofdioxide met een stroomsnelheid van 2,0 l/min gedurende 5 minuten. Verwijder de muizen uit de kooi en voer cervicale dislocatie uit.
    2. Plaats de muis op het ontleedbord met de ventrale kant naar boven en het hoofd weg van de experimentator en bevestig de ledematen op het ontleedbord met steriele spuitnaalden. Voor een gemakkelijkere verwijdering van schildklierweefsel, gebruikt u een andere steriele spuitnaald om het hoofd te fixeren.
    3. Desinfecteer de hals met drie afwisselende rondes van een chloorhexidine of povidon-jodium scrub gevolgd door 75% alcohol. Maak vervolgens een kleine incisie boven het midden van het sleutelbeen met een steriele schaar en tang.
    4. Ga door met de incisie middellijn tot aan de mond. Zoek de submandibulaire klier en verwijder deze om de anatomische locatie van de schildklier bloot te leggen, die in de buurt van het schildklierkraakbeen en de luchtpijp is geplaatst.
    5. Zoek de schildklier, ontleed de schildklier voorzichtig van de rest van het nekgebied met een steriele schaar en plaats de verwijderde schildklier vervolgens in een schaal van 10 cm gevuld met 10 ml steriele PBS.
      OPMERKING: Tijdens het verwijderen van de schildklier, wees voorzichtig en langzaam en vermijd het snijden van de nek bloedvaten. Als de nekvaten worden doorgesneden, wordt de nek onmiddellijk gevuld met bloed en moet het bloed onmiddellijk worden verwijderd met alcoholsponzen om de anatomische locatie van de schildklier bloot te leggen. Voordat u het schildklierweefsel verwijdert, moet u zorgvuldig de kenmerken van de linker- en rechterlobben van de schildklier (grootte, vorm, enz.) observeren om te voorkomen dat u na verwijdering geen onderscheid kunt maken tussen de linker- en rechterlobben van de schildklier.
    6. Verwijder bij steriele PBS het bloed van het oppervlak van het schildklierweefsel met een steriele schaar en knip de luchtpijp voorzichtig af. Leg vervolgens het schildklierweefsel op een steriele doek en meet de grootte van de linker- en rechterlobben van de schildklier met vernier-remklauwen.
    7. Verdeel de linker- en rechterlobben van de schildklier in twee delen met een steriel mes. Doe een deel in 2 ml 4% paraformaldehyde-oplossing voor fixatie en doe het andere deel in vloeibare stikstof voor conservering.
  3. Extractie van long en lever
    1. Desinfecteer de buik met drie afwisselende rondes van een chloorhexidine of povidon-jodium scrub en 75% alcohol. Knijp vervolgens net boven de penis van de muis en maak een kleine incisie, snijd langs de middellijn van de buik naar het subclaviabot en stel de buikholte bloot.
    2. Zoek de lever in het bovenste deel van de buik en verwijder deze voorzichtig. Plaats de lever in steriele PBS.
    3. Snijd het diafragma voorzichtig langs de ribben om de thoracale holte bloot te leggen. Pak vervolgens het borstbeen vast en trek omhoog om de ruimte nog breder te maken. Zoek de long en verwijder deze. Plaats de verwijderde long in steriele PBS.
    4. Observeer grof of er uitzaaiingen zijn in de longen en lever. Tel het aantal uitzaaiingen en neem een digitaal record. Gebruik daarna een steriel mes om de long- en leverweefsels in twee delen te verdelen. Doe een deel in 3 ml 4% paraformaldehyde-oplossing voor fixatie en een ander deel in vloeibare stikstof voor conservering.
    5. Weefseluitdroging
      1. Doe de tissues in de uitdrogingsdoos. Leg de dehydratiebox als volgt in de mand bij gradiëntalcoholuitdroging: 70% alcohol gedurende 1 uur; 80% alcohol gedurende 1 uur; 95% alcohol gedurende 30 min; 95% alcohol gedurende 30 min; watervrije ethanol I gedurende 30 minuten; watervrije ethanol II gedurende 30 minuten; xyleen I gedurende 20 minuten; xyleen II gedurende 20 minuten; paraffine I gedurende 30 min; paraffine II gedurende 1 uur; paraffine III gedurende 30 min.
    6. Sluit de met was geïmpregneerde weefsels in de insluitmachine in.
      1. Doe de gesmolten was eerst in het insluitframe. Voordat de was stolt, verwijdert u het weefsel uit de uitdrogingsdoos en plaatst u het in het insluitframe en bevestigt u vervolgens het label.
      2. Laat de was afkoelen bij -20 °C op de vriestafel. Nadat de was is gestold, verwijdert u het wasblok van het insluitframe en snijdt u het bij.
    7. Leg het bijgesneden wasblok op een paraffinesnijder, ingesteld op een dikte van 5 μm en een afmeting van 2 cm x 2 cm. Laat de secties na het snijden drijven op een strooier met warm water van 45 °C om het weefsel plat te maken. Pak de tissue op met een glaasje en bak de plakjes 2 uur in een oven op 65 °C.
    8. Nadat het water is opgedroogd en de was is gesmolten, verwijdert u de dia met het weefsel en gebruikt u deze voor hematoxyline en eosine (HE) en immunohistochemische (IHC) kleuring16. Zorg ervoor dat de secties op de dia's zijn geplakt voor vlekken.

3. HE-kleuring van de primaire tumor en long

  1. Was verwijderen
    1. Zet de dia's met de secties in xyleen gedurende 10 min.
    2. Ga in watervrije alcohol (100%) (twee flessen) gedurende ongeveer 3 minuten elk.
    3. Ga naar 95% alcohol (twee flessen) gedurende ongeveer 3 minuten elk.
    4. Ga ongeveer 3 minuten naar 80% alcohol.
    5. Ga ongeveer 3 minuten naar 50% alcohol.
    6. Ga in het kraanwater en spoel de alcohol ongeveer 1 minuut weg.
  2. Kleuring
    1. Verplaats de dia's gedurende 8 minuten in hematoxyline.
    2. Verplaats de dia's gedurende 1 minuut in het water om de hematoxyline weg te spoelen; Het weefsel verandert van blauw naar rood.
    3. Verplaats de dia's in 1% zoutzuuralcohol gedurende ongeveer 30 s.
    4. Verplaats de glijbanen in het water en was gedurende 5 minuten.
    5. Verplaats de dia's gedurende 90 s in eosine en was ze vervolgens gedurende 5 minuten met water.
    6. Verplaats de dia's in 50% alcohol, 80% alcohol, 95% alcohol (twee flessen) en watervrije alcohol (100%) (twee flessen), gedurende elk 1 minuut.
    7. Verplaats de dia's gedurende 5 minuten in xyleen.
    8. Nadat de dia's droog zijn, sluit u ze af met neutrale hars.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

We hebben mATC geïnduceerd om tumorgroei, overlevingstijd van muizen en pathologische kenmerken te onderzoeken. Na inductie werden de muizen onmiddellijk geofferd en werden monsters (schildklier, longen en lever) verzameld zodra een van de volgende aandoeningen werd gevonden: 1) ademnood veroorzaakt door tumorcompressie; 2) verminderde eetlust en abnormale vocalisatie; 3) ongewoon lethargie; en 4) gewichtsverlies van meer dan 20%. Tijdens het bemonsteringsproces ontdekten we dat alle muizen (12/12) met succes tumoren vor...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Kritieke stappen binnen het protocol voor schildkliertumordissectie
Tijdens dissectie moet de anatomische locatie van de schildklier correct worden begrepen. De schildklier is een vlindervormige klier aan de dorsale kant van de submandibulaire klier in de buurt van het schildklierkraakbeen en de luchtpijp. Tijdens de procedure werd het doorsnijden van de bloedslagaders aan beide zijden van de nek zorgvuldig vermeden.

Modificatie en probleemoplossing van het mATC-ras...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben geen belangenconflicten te melden.

Dankbetuigingen

Dit werk werd ondersteund door het National Key Research Development Program van China (2021YFA1301203); de National Natural Science Foundation of China (82103031, 82103918, 81973408, 82272933); het Clinical Research Incubation Project, West China Hospital, Sichuan University (22HXFH019); het International Cooperation Project van het Chengdu Municipal Science and Technology Bureau (2020-GH02-00017-HZ); Natuurwetenschappelijke Stichting van Sichuan, 2022NSFSC1314; het "1.3.5 project for disciplines of excellence, West China Hospital, Sichuan University" (ZYJC18035, ZYJC18025, ZYYC20003, ZYJC18003); en Sichuan Science and Technology Program (2023YFS0098).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
100x Citraat antigeen retrieval oplossing (PH 6,0)MXBCat# MVS-0101
50x EDTA antigeen retrieval oplossing(pH 9,5)ZSGB-GIOCat# ZLI-9071
Brafflox/wt muizenSamenwerking met Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China
Caspase-3BeyotimeCat# AC033
CD8Cell Signaling TechnologyCat# 98941; RRID:AB_2756376
CD206Cell Signaling TechnologyCat# 24595; RRID:AB_2892682
Kamer voor anesthesie-inductieRWDlifescience
Verbeterde DAB kleuringskitMXBCat# DAB-2031
Eosine kleuringsoplossingZSGB-GIOCat# ZLI-9613
F4/80AbcamCat# 100790; RRID:AB_10675322
Foxp3Cell Signaling TechnologyCat# 12653; RRID:AB_2797979
Volledig gesloten weefsel dehydratorLeica BiosystemsASP300S
Hematoxyline kleuringsoplossingZSGB-GIOCat# ZLI-9610
HistoCore Arcadia volledig automatische weefsel inbeddingsmachineLeica Biosystems
Ki67BeyotimeCat# AF1738
Roterende SnijderRWDlifescience Minux S700
SPlink detectie kits (Biotine-Streptavidine HRP detectiesystemen)ZSGB-GIOCat# SP-9001
TPO-cre/ERT2 muizenSamenwerking met Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China
Trp53flox/wt muizenSamenwerking met Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China
Ultrasoon celbrekerNingbo Xinyi Ultrasound Equipment Co., LtdJY92-IIN
Ultrasound gelKepplerKL-250
Ultrasound systeemVisualSonicsVevo 3100

Referenties

  1. Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2019. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 69 (1), 7-34 (2019).
  2. Parenti, R., Salvatorelli, L., Magro, G. Anaplastic thyroid carcinoma: Current treatments and potential new therapeutic options with emphasis on TfR1/CD71. International Journal of Endocrinology. 2014, 685396(2014).
  3. Baldini, E., et al. In vitro and in vivo effects of the urokinase plasminogen activator inhibitor WX-340 on anaplastic thyroid cancer cell lines. International Journal of Molecular Sciences. 23 (7), 3724(2022).
  4. Haugen, B. R. American Thyroid Association Management guidelines for adult patients with thyroid nodules and differentiated thyroid cancer: what is new and what has changed. Cancer. 123 (3), 372-381 (2015).
  5. O'Neill, J. P., Shaha, A. R. Anaplastic thyroid cancer. Oral Oncology. 49 (7), 702-706 (2013).
  6. Simoes-Pereira, J., Capitao, R., Limbert, E., Leite, V. Anaplastic thyroid cancer: Clinical picture of the last two decades at a single oncology referral centre and novel therapeutic options. Cancers. 11 (8), 1188(2019).
  7. Fagin, J. A., Wells, S. A. Biologic and clinical perspectives on thyroid cancer. The New England Journal of Medicine. 375 (11), 1054-1067 (2016).
  8. Neff, R. L., Farrar, W. B., Kloos, R. T., Burman, K. D. Anaplastic thyroid cancer. Endocrinology and Metabolism Clinics of North America. 37 (2), 525-538 (2008).
  9. Lareau, C. A., et al. Droplet-based combinatorial indexing for massive-scale single-cell chromatin accessibility. Nature Biotechnology. 37 (8), 916-924 (2019).
  10. Guo, H., et al. Single-cell methylome landscapes of mouse embryonic stem cells and early embryos analyzed using reduced representation bisulfite sequencing. Genome Research. 23 (12), 2126-2135 (2013).
  11. Mooijman, D., Dey, S. S., Boisset, J. -C., Crosetto, N., van Oudenaarden, A. Single-cell 5hmC sequencing reveals chromosome-wide cell-to-cell variability and enables lineage reconstruction. Nature Biotechnology. 34 (8), 852-856 (2016).
  12. Smallridge, R. C., Marlow, L. A., Copland, J. A. Anaplastic thyroid cancer: molecular pathogenesis and emerging therapies. Endocrine-Related Cancer. 16 (1), 17-44 (2009).
  13. Charles, R. -P. Overview of genetically engineered mouse models of papillary and anaplastic thyroid cancers: enabling translational biology for patient care improvement. Current Protocols in Pharmacology. 69, 1-14 (2015).
  14. Tuttle, R. M., Haugen, B., Perrier, N. D. Updated American joint committee on cancer/tumor-nodemetastasis staging system for differentiated and anaplastic thyroid cancer (8th Edition): What changed and why. Thyroid. 27 (6), 751-756 (2017).
  15. McFadden, D. G., et al. p53 constrains progression to anaplastic thyroid carcinoma in a Braf-mutant mouse model of papillary thyroid cancer. Protocols of the National Academy of Sciences. 111 (16), 1600-1609 (2014).
  16. Gunda, V., et al. Combinations of BRAF inhibitor and anti-PD-1/PD-L1 antibody improve survival and tumour immunity in an immunocompetent model of orthotopic murine anaplastic thyroid cancer. British Journal of Cancer. 119 (10), 1223-1232 (2018).
  17. He, Y., et al. High-resolution ultrasonography for the analysis of orthotopic ATC tumors in a genetically engineered mouse model. Journal of Visualized Experiments. (188), e64615(2022).
  18. Zhang, L., et al. Novel recurrent altered genes in Chinese patients with anaplastic thyroid cancer. The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 106 (4), 988-998 (2021).
  19. Luo, H., et al. Pan-cancer single-cell analysis reveals the heterogeneity and plasticity of cancer-associated fibroblasts in the tumor microenvironment. Nature Communications. 13 (1), 6619(2022).
  20. Luo, H., et al. Characterizing dedifferentiation of thyroid cancer by integrated analysis. Science Advances. 7 (31), (2021).
  21. Knostman, K. A. B., Jhiang, S. M., Capen, C. C. Genetic alterations in thyroid cancer: the role of mouse models. Veterinary Pathology. 44 (1), 1-14 (2007).
  22. Kim, C. S., Zhu, X. Lessons from mouse models of thyroid cancer. Thyroid. 19 (12), 1317-1331 (2009).
  23. Champa, D., Di Cristofano, A. Modeling anaplastic thyroid carcinoma in the mouse. Hormones and Cancer. 6 (1), 37-44 (2015).
  24. Cabanillas, M. E., Ryder, M., Jimenez, C. Targeted therapy for advanced thyroid cancer: kinase inhibitors and beyond. Endocrine Reviews. 40 (6), 1573-1604 (2019).
  25. Ljubas, J., Ovesen, T., Rusan, M. A systematic review of phase II targeted therapy clinical trials in anaplastic thyroid cancer. Cancers. 11 (7), 943(2019).
  26. Huang, N. -S., et al. An update of the appropriate treatment strategies in anaplastic thyroid cancer: a population-based study of 735 patients. International Journal of Endocrinology. 2019, 8428547(2019).
  27. Subbiah, V., et al. Dabrafenib and trametinib treatment in patients with locally advanced or metastatic BRAF V600-mutant anaplastic thyroid cancer. Journal of Clinical Oncology. 36 (1), 7-13 (2018).
  28. Baldini, E., et al. Effects of selective inhibitors of Aurora kinases on anaplastic thyroid carcinoma cell lines. Endocrine-Related Cancer. 21 (5), 797-811 (2014).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Trefwoorden

MuizenkankermodelTumordynamiekGenetische ModificatieTumormetastaseImmunohistochemische KleuringExtractie van de SchildklierTumormicro omgevingTamoxifeeninductieOverlevingscurve
Spontaan muizenmodel van anaplastische schildklierkanker
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleid

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.