$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Een virale pandemie veroorzaakt door een nieuw bèta-coronavirus1 (d.w.z. 2019-nCoV), dat later werd genoemd als ernstig acuut respiratoir syndroom coronavirus 2 (SARS-CoV-2)2 (hierna voornamelijk het virus genoemd), met een longcluster en ernstige acute ademnood, ontstond eind 2019 in de stad Wuhan, China,3. Vanwege de snelle wereldwijde overdracht van mens op mens, het hoge infectiepercentage, het hoge sterftecijfer en de ernstige levensbedreigende bijwerkingen4, evolueerde virologisch onderzoek5 tijdens de pandemie snel om de genomische organisatie en structuur van het virus te identificeren 5,6. De symptomen van COVID-19 7,8 zijn onder meer hoge koorts, een droge hoest en gegeneraliseerde pijn9. Belangrijk is dat verschillende serotypen van het virus leiden tot verschillende ernst van de ziekte10. Bovendien kunnen asymptomatische dragers het virus mogelijk verspreiden. Gewoonlijk vertonen COVID-19-virusdeeltjes onder de microscoop knotsachtige uitsteeksels gevormd door spike-eiwitten11. Om de verspreiding van deze nieuwe ziekteverwekker tegen te gaan, moet de opsporing van gevallen daarom tijdig en efficiënt zijn. De ultragevoelige, snelle en selectieve detectie van het virus in de vroege stadia van virale infectie is dus cruciaal geworden 2,11. Sociale/fysieke afstand is nodig omde overdracht van het virus te voorkomen. Gezondheidsinstanties leggen de nadruk op de ontwikkeling van slimme diagnostische hulpmiddelen en nanosystemen13. Inderdaad, zoals gesuggereerd door gezondheidsinstanties, zijn gerichte en massale tests14,15 vereist en is er nog steeds vraag naar.
In principe zijn lopende biologische diagnosemethoden zoals reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) het beste middel voor de massale identificatie van SARS-CoV-2, zoals bij het aan het respiratoir syndroom in het Midden-Oosten gerelateerde coronavirus (MERS-CoV)16 en SARS-CoV-117. In deze context hangt de huidige standaardidentificatie van SARS-CoV-2-besmetting af van de verbetering van infectiespecifieke kenmerken18,19. Bovendien moet rekening worden gehouden met de variatie in SARS-CoV-2-infectie volgens het gebied, de leeftijd, het ras en het geslacht. Met het uiteindelijke doel om levens te redden, is het van cruciaal belang om snelle diagnosetools te bouwen voor point-of-care (POC)20,21-gebruik.
In deze context hebben reguliere strategieën zoals fluorescentie in situ hybridisatie (FISH), eiwitimmunosorbentonderzoek (ELISA), op microsferen gebaseerde methoden, elektrochemische tests en MRI, PET en NIRFOI22 een lage gevoeligheid voor lage virusniveaus, lage selectiviteit en een lage hergebruikcapaciteit; Bovendien hebben dergelijke procedures nadelen, waaronder dure diagnostische systemen voor biosensoren, niet-herbruikbare reagentia en de vereiste van hoogopgeleide arbeidskrachten23. Daarom kunnen deze inzichtelijke technieken niet worden gezien als snelle, redelijke, uitzonderlijk specifieke of gevoelige POC-methoden 24,25. Merk op dat er verschillende soorten biosensoren op basis van DNA en immunizers zijn die gebruik maken van samengestelde, capacitieve en elektrische technieken 18,26,27,28. Elektrische DNA-biosensoren, die een hoog reactievermogen hebben, eenvoudig kunnen worden verkleind en afstembaar zijn29,30, zijn bijvoorbeeld geproduceerd voor de detectie van Ebola31, Zika, MERS-CoV en SARS-CoV 32,33,34. Evenzo is er effectief een field-impact semiconductor (FET) biosensor gemaakt voor het detecteren van het spike-eiwit van het virus met behulp van bepaalde antilichamen (monoklonaal) die zijn geïmmobiliseerd op met grafeen beglaasde apparaten35,36. Desalniettemin is deze nieuwe strategie minder gevoelig dan RT-PCR. Bovendien is er meer recentelijk een met nanodeeltjes gereduceerd grafeenoxide (GrO)-bedekte 3D-terminalgebaseerde detectiekader voor het virus ontwikkeld, dat een lage identificatielimiet heeft (2,8 × 10-15 M); in ieder geval is de voorgestelde complexe biosensorstructuur35 getest met betrekking tot POC-gebruik en vergeleken met andere bestaande biosensorstrategieën die worden gebruikt voor de detectie van het virus 35,37,38.
In deze studie hebben we een verkleinde en herbruikbare GrO-gebaseerde DIDC-biosensor ontworpen en gefabriceerd voor het identificeren van het virusspike-eiwit zonder de hierboven beschreven beperkingen voor andere biosensoren. Deze biosensor maakt detectie op femtogramniveau (fg) mogelijk binnen 3 s18,27 responstijd. Om dit onderzoek te voltooien, werden GrO-nanovlokken gekozen voor een betere respons en selectiviteit, wat betekent dat lage concentraties van het virusantigeeneiwit uit orofaryngeale of nasofaryngeale uitstrijkjes kunnen worden gedetecteerd. GrO is een geschikt, synthetisch betrouwbaar, consistent en geleidend materiaal dat nuttig kan worden gebruikt voor biosensing-toepassingen 2,39,40,41. Daarnaast werd een monoklonale IgG-antilichaamlabelvrije hybridisatiebenadering gebruikt, gericht op het virusspike S1-eiwit. De gefabriceerde SARS-CoV-2-GrO-DIDC biosensor is herbruikbaar na geavanceerde behandeling en reiniging met piranha-oplossing. Deze ultrasnelle, gevoelige, selectieve, labelvrije en herbruikbare biosensor kan worden gebruikt voor biosensing van klinische monsters en gepersonaliseerde toepassingen in de gezondheidszorg 26,42,43,44.