Het protocol hield zich aan de Australische code van de Australian National Health and Medical Research Council voor de verzorging en het gebruik van dieren voor wetenschappelijke doeleinden18. De Animal Ethics Committee van de University of Western Australia heeft het protocol prospectief goedgekeurd (RA3/100/1596). Schapen zijn afkomstig van de Ridgefield-boerderij van de University of Western Australia (UWA) (2018-2020). De schapen werden 2-3 weken voorafgaand aan de chirurgische ingreep geïntroduceerd in de AAALAC-geaccrediteerde UWA Large Animal Facility. Schapen werden aanvankelijk binnenshuis gehuisvest in gedeelde hokken met verhoogde vloer, met enkele hokken die in de peri-operatieve periode werden gebruikt. Schapen kregen pellets, haverkaf en lupinen met een mineralenmix berekend op lichaamsgewicht. De kamers werden gecontroleerd op temperatuur (20,5-21,5 °C) en op een licht-donkercyclus van 12:12 uur gehouden. Pijn en welzijn werden in de postoperatieve periode tweemaal daags gedurende 7 dagen geëvalueerd, daarna dagelijks tot voltooiing van de studie. Gecontroleerde postoperatieve parameters omvatten tekenen van pijn, orbitale verstrakking, ademhalingsinspanning, temperatuur, hartslag, de operatieplaats, eetlust en waterinname, activiteit, kreupelheid, vachtconditie, fecale consistentie, vroeggeboorte, gedrag en tekenen van zwangerschapstoxemie. De scores die aan elke parameter werden toegekend, leidden waar nodig tot een interventie.
OPMERKING: Er waren twee chirurgische herstelprocedures nodig: ooivoorbereiding, chirurgische benadering en sluiting, en ooiherstel zijn hetzelfde voor beide chirurgische ingrepen. De eerste procedure is de chirurgische creatie van de middenrifbreuk bij het foetale lam. De tweede procedure is voor het plaatsen van het foetale interventie- en drukbewakingsapparaat. De onderzoeksopzet vereiste twee overlevingsoperaties om ervoor te zorgen dat de buikinhoud na het ontstaan van de middenrifbreuk in de borstholte kon komen, zodat longhypoplasie kon ontstaan vóór de daaropvolgende interventieoperatie.
1. Chirurgische creatie van de middenrifbreuk bij het foetale lam
- Voorbereiding van de ooi
- Bij een zwangerschapsduur van ~80 dagen premediceert u de ooi met een intramusculaire injectie van acepromazine (0,04 mg/kg) en morfine (0,3 mg/kg).
- Induceer anesthesie intraveneus met ketamine (5 mg/kg) en midazolam (0,25 mg/kg).
- Intubeer de ooi-luchtpijp met een endotracheale tube (8 mm binnendiameter [ID]). Handhaaf anesthesie met isofluraan (1%-3% in zuurstof) toegediend door overdrukventilatie (10-12 ademhalingen/min, ademvolume 8-10 ml/kg).
- Zorg voor ooimonitoring met een elektrocardiogram (ECG), invasieve arteriële bloeddruk via een arteriële oorkatheter, verlopen CO2, perifere zuurstofverzadiging en temperatuur tijdens de operatie.
- Leg de ooi in rugligging op de brancard. Lus touwen om de poten van de ooi en maak ze voorzichtig vast aan de tafel.
- Scheer wol van de buik en flank van de ooi en knip het dan dicht bij de huid.
- Verwijder vuil en lanoline van de buik, flank en lies van de ooi met water en zeep.
- Geef cefazoline (20 mg/kg) tijdens de operatie elke 90 minuten intraveneus.
- Breng de ooi op een brancard over naar de operatiekamer.
- Verplaats de ooi van de transportbrancard naar de operatietafel.
- Plaats de ooi in dorsale liggende positie op de operatietafel.
- Bevestig alle ledematen aan de operatietafel met zachte touwbanden.
- Aseptische bereiding van de blootgestelde buik: 3 keer wassen met 4% chloorhexidine chirurgische scrub en verontreinigde oplossing tussen elke wasbeurt verwijderen met 70% alcohol.
- Voltooi de steriele bereiding door lichtjes 10% jodiumoplossing op de buik, flank en liezen te spuiten.
- Bedek de ooi met een steriel gefenestreerd chirurgisch laken, zodat alleen de plaats van de abdominale incisie zichtbaar is. Zorg ervoor dat alle chirurgische instrumenten, katheters, spuiten en oplossingen die tijdens de operatie worden gebruikt, steriel zijn.
- Chirurgische aanpak
- Breng lijnblokkade tot lokale anesthesie door lokale subcutane en spierinfiltratie van bupivacaïne (5%; 9,5 ml) met een spuit van 10 ml en een naald van 22 g.
- Stel de baarmoeder bloot door een para-middellijn abdominale incisie (8-11 cm) door de huid van de ooi, het onderhuidse weefsel en de lijn alba gemaakt met een chirurgisch mes van maat 10 met cauterisatie zoals vereist om incisiebloedingen te minimaliseren.
- Ontstaan van een middenrifbreuk
- Lokaliseer het hoofd / de borstkas van de foetus via palpatie.
- Bedek de baarmoeder met steriele plasticfolie.
- Gebruik een chirurgische schaar om een venster (6 cm x 4 cm) in de plasticfolie te maken.
- Maak een incisie in de baarmoeder van 5-7 cm door de baarmoeder en de vruchtzak met cauterisatie, vermijd baarmoederbloedvaten en placenta-zaadlobben.
- Exteïriseer het hoofd en de voorpoten van de foetus.
- Gebruik Babcock baarmoederklemmen om de randen van de baarmoederincisie af te dichten en steriel plastic om de foetale buik te wikkelen om verlies van vruchtwater te voorkomen.
- Plaats de foetus op zijn rechterzij en bevestig een tweede steriele plasticfolie over de uitwendige foetus om verlies van warmte en vocht te verminderen. Identificeer de intercostale ruimte tussen de9e en 10eribben aan de linkerkant en knip met een chirurgische schaar een gat in de plasticfolie om toegang te krijgen tot de beoogde foetale incisieplaats.
- Breng lijnblokkade tot stand bij de foetus door lokale subcutane en spierinfiltratie van bupivacaïne (5%; 0,25 ml verdund tot 0,5 ml met steriele zoutoplossing; 1 ml steriele spuit en 27 g naald) in de 9e intercostale ruimte onmiddellijk grenzend aan de bovenrand van de 10e rib om subcostale vaten te vermijden.
- Gebruik een steriele spuit van 60 ml om de blootgestelde foetale huid te baden met warme Hartmann-oplossing (5-10 ml elke 5-10 minuten) om de foetale huid vochtig te houden tijdens de volgende stappen.
- Maak een linker posterolaterale thoracotomie door een huidincisie van 2-4 cm met elektrocauterisatie te maken in de 9e intercostale ruimte direct grenzend aan de schedelrand van de 10e rib.
- Gebruik hemostaten van muggen om het onderhuidse weefsel, de intercostale spieren en het pleuramembraan botweg te ontleden om toegang te krijgen tot het middenrif.
- Gebruik twee kleine muggenhemostaten om het middenrif aan elk uiteinde van de beoogde 1 cm lange herniaplaats op te pakken en het middenrif craniaal op te tillen om het uit de buurt van de onderliggende maag, lever en milt te houden.
- Maak een incisie van 1 cm tussen de twee hemostaten met behulp van een kleine schuine schaar.
- Laat de hemostaten los die het middenrif vasthouden.
- Gebruik een atraumatische Potts-tang om de maag superieur door het gat in het middenrif te trekken.
- Gebruik een enkele band van resorbeerbaar 5-0 polydioxanon-monofilament (RB-1 taps toelopende puntnaald) om de 9een 10eribben voorzichtig te omhullen om de foetale ribben te bestrijden, waarbij de onderliggende long wordt vermeden.
- Sluit de incisie van de thoracotomie met een matrashechting (resorbeerbaar 5-0 polydioxanon-monofilament).
- Chirurgische sluiting
- Breng de foetus terug naar de vruchtzak.
- Intraoperatieve meloxicam (0,25 mg/kg; subcutaan) toedienen aan de ooi voor postoperatieve analgesie.
- Vervang verloren vruchtwater door verwarmde Hartmann-oplossing (~50 ml) samen met intra-amniotisch piperacilline/tazobactam (1000 mg/125 mg).
- Plaats de tegenoverliggende oppervlakken van het chorioamnion en de aangrenzende baarmoederwanden en gebruik een resorbeerbare polyglactine 910 gevlochten 2-0 hechtdraad met een omgekeerde matrashechting om de baarmoeder en vruchtzak samen te sluiten.
- Sluit de linea alba, het onderhuidse weefsel en de huid van de ooi (respectievelijk resorbeerbaar polydioxanonmonofilament 1, resorbeerbaar poliglecaprone 25 monofilament 3-0 en niet-resorbeerbaar polypropyleen monofilament 2-0).
- Herstel en monitoring van ooien
- Spuit de buikwond postoperatief in met waterdichte verbandretentietape en bedek deze met een verband om het risico op postoperatieve wondinfectie te verminderen.
- Breng een transdermale fentanylpleister (100 μg/uur) aan op de lies voor aanvullende postoperatieve analgesie.
- Herstel de ooi en extubeer wanneer u spontaan ademhaalt en laat hem dan wakker worden.
- Controleer ooien dagelijks tot de bevalling voor een foetale interventieoperatie.
- Verwijder hechtingen na 14 dagen.
2. Plaatsing van het foetale interventie- en drukbewakingsapparaat
- Voorbereiding van de ooi op foetale interventiechirurgie na 101 dagen zwangerschap
- Injecteer medroxyprogesteron (1 ml) intramusculair op ~85 dagen zwangerschap (termijn ~147 dagen) om het risico op vroeggeboorte te verminderen.
- Gebruik dezelfde anesthesie- en chirurgische voorbereidingsprocedure die wordt gebruikt voor de eerste operatie voor het maken van het middenrif.
- Volg de chirurgische benadering in de stappen 2.1.2.2 en 2.1.2.3, vergelijkbaar met de stappen 1.2.1-1.2.2.
- Breng lijnblokkade tot lokale anesthesie door lokale subcutane en spierinfiltratie van bupivacaïne (5%; 9,5 ml) met een spuit van 10 ml en een naald van 22 g.
- Met een para-midline abdominale incisie (8 - 11 cm) grenzend aan de abdominale incisie die wordt gebruikt voor de operatie voor het maken van het middenrif, stelt u de baarmoeder bloot met een door de huid van de ooi, onderhuids weefsel en linea alba gemaakt met een chirurgisch mes van maat 10 met cauterisatie zoals vereist om incisiebloedingen te minimaliseren.
- Dien bovendien oxytetracycline (20 mg/kg) intramusculair toe aan de ooi om foetale antimicrobiële bescherming te bieden tegen het chronisch geïmplanteerde bewakingsapparaat.
- Activering van het apparaat
- Drukmeter19 activeren.
- Klemdrukmeetslang met hemostaten.
- Plaats het hele apparaat in een steriele kom met een mengsel van 0.08% perazijnzuur en 1% waterstofperoxide gedurende ten minste 1 uur, zorg ervoor dat het hele apparaat bedekt is.
- Verplaats het apparaat met behulp van een steriele klem gedurende ten minste 10 minuten voorafgaand aan de implantatie van de foetus naar een steriele kom met steriel water. Zorg ervoor dat het hele apparaat bedekt is met steriel water.
- Chirurgische benadering en foetale interventie
- Exteterrariseer het hoofd van de foetus door middel van hysterotomie met behulp van dezelfde chirurgische benadering die werd gebruikt voor de eerste operatie, maar met aangrenzende baarmoederincisies (stappen 1.1-2.2).
- Houd het uitwendige foetale hoofd en de nek in het steriele plastic laken gewikkeld om verlies van temperatuur en vocht te minimaliseren.
- Instrumenteer de luchtpijp met een katheter voor drukmetingen (Figuur 1).
- Volg voor een niet-afgesloten luchtpijp de stappen 2.3.3.2-2.3.3.3.
- Intubeer het foetale lam met een 5 Franse (1,67 mm ID) zuigkatheter met de afzuigconnector verwijderd tot een diepte van 14 cm in de mondhoek van het lam.
- Sluit het externe uiteinde van de katheter met een connector van 1,59 mm (buitendiameter, OD) tot 3,18 mm (OD) aan op de 30 cm lange siliconenslang van 3,18 mm (ID).
- Volg voor een afgesloten luchtpijp de stappen 2.3.3.5-2.3.3.6.
- Intubeer het foetale lam met een 3.0 microcuff endotracheale tube met de connector verwijderd tot een diepte van 14 cm tot een hoek van de mond van het lam.
- Sluit het externe uiteinde van de katheter met een connector van 3,18 mm (OD) tot 3,18 mm (OD) aan op een 30 cm lange siliconenslang van 3,18 mm (ID).
- Sluit het andere uiteinde van de 30 cm lange siliconenslang van 3.18 mm (ID) aan op het drukmeetapparaat door middel van een connector van 3.18 mm (OD) tot 1.59 mm (OD) op het drukmeetapparaat.
- Hecht de katheter vast in de mondhoek en nek van het lam (niet-resorbeerbaar nylon monofilament 4-0).
- Bevestig het drukmeetapparaat op de huid van het lam op de borst (niet-resorbeerbaar nylon monofilament 4-0) (Figuur 2).
- Sluit de chirurgische incisies van de foetus en de ooi volgens de eerste operatie voor het creëren van een middenrifbreuk (stappen 1.4-1.5).
- Testapparaat
- Test of het apparaat signaal uitzendt19.
- Herstel en monitoring van ooien
- Herstel de ooi volgens de eerste operatie.
- Controleer ooien dagelijks tot aan de levering.
- Geef een tweede dosis medroxyprogesteron (0,5 ml) intramusculair op ~120 dagen zwangerschap.
- Geef betamethason (5,7 mg) intramusculair 48 uur en 24 uur voor de keizersnede om de rijping van de foetus voor postnatale zorg te bevorderen.
- Lamsvlees bezorgen
- Bij ~142 dagen dracht (termijn ~147-150 dagen), ooi premediceren door intramusculaire injectie van acepromazine (0,03 mg/kg) en morfine (0,3 mg/kg).
- Induceer anesthesie intraveneus met thiopental (10-15 mg/kg), intubeer de ooi met een endotracheale tube (maat 8,5 mm) en handhaaf de anesthesie door isofluoraan met de juiste controle volgens eerdere anesthetica.
- Ga verder met de chirurgische bevalling van de foetus via hysterotomie zoals bij eerdere operaties, met ooi in dorsale lighouding (stappen 1.1 - 2.2).
- Verwijder het bewakingsapparaat. Reinig het apparaat met water en 70% ethanol.
- Dood de ooi op humane wijze met een intraveneuze injectie van 160 mg/kg pentobarbiton-natriumoplossing.
- Reanimeer en ventileer het lam gedurende 2-3 uur en dood het vervolgens op humane wijze (160 mg/kg pentobarbiton-natriumoplossing, intraveneuze injectie).
- Gegevens
- Download gegevens naar een laptop en analyseer19. Filter de drukgegevens met behulp van een venster van 6 uur. Bereken het verschil in druk tussen vruchtwater en tracheale druk.