In deze studie wordt een rattenmodel van inductie van parodontitis gepresenteerd via een combinatie van retentieve ligatuur en repetitieve injecties van lipopolysaccharide afgeleid van Porphyromonas gingivalis, gedurende 14 dagen rond de eerste maxillaire kiezen. De ligatie- en LPS-injectietechnieken waren effectief in het induceren van peridontitis, resulterend in alveolair botverlies en ontsteking.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Inductie van parodontitis via een combinatie van ligatuur en lipopolysaccharide-injectie in een rattenmodel
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Parodontitis (PD) is een veel voorkomende, chronische immuunontstekingsziekte van het parodontium, die resulteert in een verlies van gingivaal zacht weefsel, parodontale ligament, cementum en alveolair bot. In deze studie wordt een eenvoudige methode van PD-inductie bij ratten beschreven. We geven gedetailleerde instructies voor het plaatsen van het ligatuurmodel rond de eerste maxillaire kiezen (M1) en een combinatie van injecties met lipopolysaccharide (LPS), afgeleid van Porphyromonas gingivalis aan de mesio-palatale kant van de M1. De inductie van parodontitis werd gedurende 14 dagen gehandhaafd, waardoor de accumulatie van bacteriën, biofilm en ontsteking werd bevorderd. Om het diermodel te valideren, werd IL-1β, een belangrijke ontstekingsmediator, bepaald door een immunoassay in de gingivale creviculaire vloeistof (GCF) en werd het alveolaire botverlies berekend met behulp van cone beam computed tomography (CBCT). Deze techniek was effectief in het bevorderen van gingivarecessie, alveolair botverlies en een toename van IL-1β-niveaus in de GCF aan het einde van de experimentele procedure na 14 dagen. Deze methode was effectief in het induceren van PD en kon dus worden gebruikt in studies naar ziekteprogressiemechanismen en toekomstige mogelijke behandelingen.
Inleiding
Parodontitis (PD) is de zesde meest voorkomende volksgezondheidsaandoening wereldwijd, die ongeveer 11% van de totale bevolking treft, een geavanceerde, onomkeerbare en destructieve vorm van parodontitis 1,2. PD is een ontstekingsproces dat de gingivale en parodontale weefsels aantast, wat resulteert in gingivarecessie, apicale migratie van het junctionele epitheel met pocketontwikkeling en het verlies van alveolair bot3. Bovendien wordt PD geassocieerd met verschillende systemische ziekten, waaronder hart- en vaatziekten, obesitas, diabetes en reumatoïde artritis, waarvoor omgevings- e....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
OPMERKING: Het experimentele protocol van de studie werd goedgekeurd door het Ethisch Comité voor dierproeven van het Gezondheidsonderzoeksinstituut van de Balearen (CEEA-UIB; referentienummer 163/03/21).
1. Dieranesthesie en procedurevoorbereiding
- Steriliseer alle chirurgische instrumenten (aluminium mondgags, dental explorer, diamantlans, chirurgische schaar, microchirurgische tang, een micronaaldhouder, een hollenbackcarver, een periostale microchirurgische lift en microchirurgische schaar) (5 min bij 135 °C) vóór de operatie.
- Bereid alle oplossingen voor die nodig zijn voor de procedure in steriele o....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Een tijdlijn van de experimentele stappen is weergegeven in figuur 1. Figuur 2A toont een afbeelding van het mandibula na chirurgische ingreep, met ligatuurplaatsing rond de sulcus van de M1 op tijdstip 0 van het experiment. Figuur 2B laat zien hoe, na 14 dagen van de procedure, de ligatuur rond de M1 de gingivale sulcus binnendringt, waardoor ontsteking van de gingiva en infiltrerende accumulatie ontstaat.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Deze methode beschrijft de inductie van PD bij ratten na een gecombineerde techniek van Pg-LPS-injecties en ligatuurplaatsing rond de M1, waaruit blijkt dat significante veranderingen in de parodontale weefsels en het alveolaire bot binnen 14 dagen na deze methode kunnen worden geïnduceerd.
Tijdens deze procedure moet aandacht worden besteed aan verschillende kritieke stappen. Tijdens de anesthesie en de voorbereiding van de procedure is het beoordelen van de juiste anesthesie tijdens.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs verklaren geen belangenverstrengeling.
Dankbetuigingen
Dit werk werd ondersteund door Fundació Universitat-Empresa de les Illes Balears (Proof of concept call 2020), door het Instituto de Salud Carlos III, Ministerio de Economía y Competividad, medegefinancierd door het ESF Europees Sociaal Fonds en het EFRO Europees Fonds voor Regionale Ontwikkeling (contract met M.M.B; FI18/00104) en door de Direcció General d'Investigació, Conselleria d'Investigació, Govern Balear (contract met M.M.F.C; FPI/040/2020). De auteurs bedanken Dr. Anna Tomás en Maria Tortosa voor hun hulp bij de experimentele chirurgie en het platform van IdISBa. Tot slot, dank aan ADEMA School of Dentistry voor de toegang tot de CBCT-scanner.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Adsorbent paper point nº30 | Proclinc | 8187 | |
| Aprotinine | Sigma-Aldrich | A1153 | |
| Atipamezole | Dechra | 573751.5 | Revanzol 5 mg/mL |
| Gevlochten zijden ligatuur (5/0) | Laboratorio Arago Sl | 613112 | |
| Buprenorfine | Richter pharma | 578816.6 | Bupaq 0.3 mg/mL |
| Cone-beam computed tomografie (CBCT) Scanner | MyRay | hyperion X9 | Model Hyperion X9 |
| CTAn software | SkyScan | Versie 1.13.4.0 | |
| Tandheelkundig explorer | Proclinc | 99743 | |
| Diamanten lancetvormige slijpsteen | Dentaltix | IT21517 | |
| Dieet voor voedingsonderhoud | Sodispain research | ROD14 | |
| Verwarmd chirurgisch platform | PetSavers | ||
| Hollenback mes | Hu-FRIEDY | HF45234 | |
| Hypodermische naald | BD | 300600 | 25G X 5/8” - 0,5 X 16 MM |
| Isofluraan | Karizoo | Isoflutek 1000mg/g | |
| Ketamine | Dechra | 581140.6 | Anesketin 100 mg/mL |
| Lipopolysaccharide afgeleid van P.Gingivalis | InvivoGen | TLRL-PGLPS | |
| Methanol | Fisher Scientific | M/4000/PB08 | |
| Micro naald holter | Fehling Surgical Instruments | KOT-6 | |
| Microchirurgische pincet | KLS Martin | 12-384-06-07 | |
| microchirurgische schaar | S&T microsurgical instruments | SDC-15 RV | |
| Monitor iMEC 8 Vet | Mindray | ||
| Multiplex bead immunoassay | Procartaplex, Thermo fisher Scientific | PPX-05 | |
| Paraformaldehyde (PFA) | Sigma-Aldrich | 8187151000 | |
| Periostale microchirurgische elevator | Dentaltix | CU19112468 | |
| Fenylmethylsulfonylfluoride (PMSF) | Roche | 10837091001 | |
| Fosfaat buffer oplossing (PBS) | Capricorn Scientific | PBS-1A | |
| PhosSTOP | Roche | 4906845001 | Commerciële fosfatase remmer tablet |
| Kunststof injectieflacon | SPL Lifesciencies | 60015 | 1.5mL |
| Zoutoplossing | Cinfa | 204024.3 | |
| Stereo Microscoop | Zeiss | Model SteREO Discovery.V12 | |
| Chirurgische loep met led licht | Zeiss | ||
| Chirurgische schaar | Zepf Surgical | 08-1701-17 | |
| Spuit | BD plastipak | 303172 | 1mL |
| Veeterinaire tandheelkundige micromotor | Eickemeyer | 174028 | |
| Xylazin | Calier | 20102-003 | Xilagesic 20 mg/mL |
Referenties
- Carvalho, J. D. S., et al. Impact of citrus flavonoid supplementation on inflammation in lipopolysaccharide-induced periodontal disease in mice. Food and Function. 12 (11), 5007-5017 (2021).
- Nazir, M. A.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
