Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Een silicosemuismodel dat tot stand komt door herhaalde inademing van kristallijn silicastof

3.1K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/64862

⸱

6 januari 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Dit protocol beschrijft een methode voor het opstellen van een muismodel van silicose door herhaalde blootstelling aan silicasuspensies via een neusinfuus. Dit model kan efficiënt, gemakkelijk en flexibel het pathologische proces van menselijke silicose nabootsen met een hoge herhaalbaarheid en economie.

Samenvatting

Silicose kan worden veroorzaakt door blootstelling aan respiratoir kristallijn silicastof (CSD) in een industriële omgeving. De pathofysiologie, screening en behandeling van silicose bij mensen zijn allemaal uitgebreid bestudeerd met behulp van het muissilicosemodel. Door muizen herhaaldelijk CSD in hun longen te laten inhaleren, kunnen de muizen de klinische symptomen van menselijke silicose nabootsen. Deze methodologie is praktisch en efficiënt in termen van tijd en output en veroorzaakt geen mechanisch letsel aan de bovenste luchtwegen als gevolg van een operatie. Bovendien kan dit model met succes het acute/chronische transformatieproces van silicose nabootsen. De belangrijkste procedures waren als volgt. Het gesteriliseerde CSD-poeder van 1-5 μm werd volledig gemalen, gesuspendeerd in zoutoplossing en gedurende 30 minuten in een ultrasoon waterbad gedispergeerd. Muizen onder isofluraan-geïnduceerde anesthesie schakelden gedurende ongeveer 2 seconden over van oppervlakkige snelle ademhaling naar diepe, langzame aspiratie. De muis werd in de palm van een hand geplaatst en de duimtop raakte zachtjes de liprand van de kaak van de muis om de luchtweg recht te trekken. Na elke uitademing ademden de muizen de silicasuspensie druppel voor druppel in door één neusgat, waardoor het proces binnen 4-8 s werd voltooid. Nadat de ademhaling van de muizen was gestabiliseerd, werd hun borst gestreeld en gestreeld om te voorkomen dat de geïnhaleerde CSD zou worden opgehoest. De muizen werden vervolgens teruggebracht naar de kooi. Concluderend kan dit model CSD kwantificeren langs de typische fysiologische doorgang van kleine deeltjes in de longen, van de bovenste luchtwegen naar de terminale bronchiolen en longblaasjes. Het kan ook de terugkerende blootstelling van werknemers als gevolg van het werk nabootsen. Het model kan door één persoon worden uitgevoerd en heeft geen dure apparatuur nodig. Het simuleert handig en effectief de ziektekenmerken van menselijke silicose met een hoge herhaalbaarheid.

Inleiding

Werknemers worden onvermijdelijk blootgesteld aan onregelmatig kristallijn silicastof (CSD), dat kan worden ingeademd en giftiger is in tal van beroepscontexten, waaronder mijnbouw, aardewerk, glas, kwartsverwerking en beton 1,2. Een chronische aandoening bij het inademen van stof, bekend als silicose, veroorzaakt progressieve longfibrose3. Volgens epidemiologische gegevens is de incidentie van silicose de afgelopen decennia wereldwijd afgenomen, maar de laatste jaren neemt het toe en treft het jongere mensen 4,5,6

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle procedures volgden de richtlijnen van de National Institutes of Health's Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (NIH-publicatie nr. 8023, herzien in 1978) en werden goedgekeurd door de Institutional Animal Care and Use Committee van de Medical School van de Anhui University of Science and Technology.

1. Muizen beheren en voeren

  1. Wijs 20 gezonde C57BL/6 mannelijke muizen toe aan de experimentele of voertuiggroepen in een verhouding van 1:1. Laat de muizen 1 week wennen aan de nieuwe omgeving.
  2. Zorg voor een constante lichttijd van 12 uur per dag. Gebruik een tijdschakelaar voor nauwkeurige ti....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

De potentiële pathogenese van silicose bij muizen werd onderzocht met behulp van de voorgestelde methode. We ontdekten dat het lichaamsgewicht van de muizen in de experimentele groep significant afnam ten opzichte van de controlegroep en dat het lichaamsgewicht langzaam herstelde na stopzetting van de blootstelling. Vanwege de geoptimaliseerde dosis die hier werd gebruikt, werd in dit experiment geen sterfte waargenomen bij aan silica blootgestelde muizen. Het technische stappenplan van herhaalde neusdruppel naar CSD wor.......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Silicose muismodellen zijn cruciaal voor het bestuderen van de pathogenese en behandeling van silicose. Dit protocol beschrijft een methode voor het opstellen van een model van silicose bij muizen door herhaalde nasale blootstelling. Deze methode maakt het mogelijk om de pathologische kenmerken van silicose geïnduceerd door verschillende blootstellingstijden te bestuderen. Muizen werden verdoofd aan een beademingsapparaat en hun ademhalingsfrequentie werd gecontroleerd. De aanvankelijke korte, snelle ademhaling vertraagd.......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs verklaren dat er geen sprake is van belangenverstrengeling.

Dankbetuigingen

Deze studie werd ondersteund door het University Synergy Innovation Program van de provincie Anhui (GXXT-2021-077) en het Anhui University of Science and Technology Graduate Innovation Fund (2021CX2120).

....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
0.5 mL tubeBiosharpBS-05-M
10% formalin neutral fixativeNanchang Yulu Experimental Equipment Co.NA
Adobe IllustratorAdobe NA
Alcohol disinfectantXintai Kanyuan Disinfection Products Co.NA
CD68Abcamab125212
Citrate antigen retrieval solutionbiosharp life scienceBL619A
DAB chromogenic kitNJJCBioW026-1-1
Dimethyl benzeneWest Asia Chemical Technology (Shandong) CoNA
Enhanced BCA protein assay kitBeyotime BiotechnologyP0009
Hematoxylin and Eosin (H&E)Beyotime BiotechnologyC0105S
HRP substrateMillipore CorporationP90720
HRP-conjugated Affinipure Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)ProteintechSa00001-2
Iceacetic acidWest Asia Chemical Technology (Shandong) CoNA
ImageJNIHNA
IsofluraneRWD Life ScienceR510-22
Masson's Trichrome stain kitSolarbioG1340
MethanolMacklinNA
MicrotubesMilliporeAXYMCT150CS
NF-κB p65Cell Signaling Technology8242S
Oscillatory thermostatic metal bathAbsonNA
Paraffin embedding machinePrecision (Changzhou) Medical Equipment Co.PBM-A
Paraffin SlicerJinhua Kratai Instruments Co.NA
Phosphate buffer (PBS) BiosharpBL601A
Physiological saline The First People's Hospital of Huainan CityNA
PipettesEppendorfNA
PMSFBeyotime BiotechnologicalST505
Polarized light microscopeOlympusBX51
Precision balanceAcculabALC-110.4
Prism7.0GraphPad Version 7.0
PVDF membranesMillipore3010040001
RIPA lysis bufferBeyotime BiotechnologyP0013B
RODI IOT intelligent multifunctional water purification systemRSJRODI-220BN
Scilogex SK-D1807-E 3D ShakerScilogexNA
SDS-PAGE gel preparation kitBeyotime BiotechnologyP0012A
Silicon dioxidSigma#BCBV6865
Sirius red stainingNanjing SenBeiJia Biological Technology Co., Ltd.181012
Small animal anesthesia machineAnhui Yaokun Biotech Co., Ltd.ZL-04A
Universal Pipette Tips (0.1–10 µL)KIRGENKG1011
Universal Pipette Tips (100–1000 µL)KIRGENKG1313
Universal Pipette Tips (1–200 µL)KIRGENKG1212
Vortex mixer VWRNA
ZEISS GeminiSEM 500Zeiss GermanySEM 500
β-actinBiossbs-0061R

Referenties

  1. Olsson, A., Kromhout, H. Occupational cancer burden: the contribution of exposure to process-generated substances at the workplace. Molecular Oncology. 15 (3), 753-763 (2021).
  2. The Lancet Respiratory. The world is failing on silicosis. The Lanc....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Meer artikelen verkennen

Longfibroseintranasale toedieninglonghistologieMasson-kleuringimmunohistochemische kleuringWestern blotmacrofaagactivatie