Het protocol is ontwikkeld en getest met 12 dijbeenmonsters die zijn ontvangen via een lichaamsdonatieprogramma. De monsters werden vers verkregen en opgeslagen bij -20 °C in het Biomechanics and Implants Laboratory van Flinders University (Tonsley, Zuid-Australië, Australië). Het botvocht werd gedurende het hele experiment op peil gehouden. De donoren waren blanke vrouwen (66-80 jaar oud). Ethische goedkeuring werd verkregen van de Social and Behavioural Research Ethics Committee (SBREC) van Flinders University (Project # 6380).
1. Planning van een monsterspecifieke belastingsstap
- Scan het dijbeenmonster met behulp van een klinische CT-scanner die gericht is op een plakdikte en een pixelgrootte in het vlak van ongeveer 0,5-0,7 mm. Deze stap kan worden uitgevoerd door een deskundige radioloog in elke openbare beeldvormingsfaciliteit met behulp van standaard vooraf opgenomen beeldvormingsprotocollen voor botvisualisatie.
- Scan samen met het monster een CT-densitometriekalibratiefantoom met vijf bekende concentraties dikaliumwaterstoffosfaat (K2HPO4, equivalente dichtheidsbereik ongeveer tussen 59 mg∙cm−3 en 375 mg∙cm−3).
- Segmenteer de botgeometrie van de klinische CT-beelden15, vergelijk de gesegmenteerde geometrie van het bot en breng de isotrope materiaaleigenschappen element voor element in kaart met de gekalibreerde botdichtheidswaarden met behulp van de dichtheid-tot-elastische modulusrelatie gerapporteerd door Schileo et al.8. Sla het net op voor verdere analyse in de eindige-elementensoftware. Voltooi elke stap door de relevante richtlijnen te volgen die bij de segmentatie- en eindige-elementensoftware worden geleverd.
- Importeer het net in de eindige-elementensoftware. Beperk het distale uiteinde van 3-6 mm van het model volledig. Oefen een nominale kracht van 1.000 N uit, 8° geadducteerd vanaf de as van de femurschacht in het coronale vlak en door het midden van de femurkop. Deze belastingstoestand bootst een statische eenbeenhoudingstaak (orthoload.com) na.
- Los het eindige-elementenmodel op met behulp van de ingebouwde PCG-oplosser (convergentietolerantie: 1 x 10−7).
OPMERKING: Hier werd de eindige-elementensoftware ANSYS gebruikt.- Genereer een elemententabel met de eerste en derde hoofdspanningscomponenten op het zwaartepunt van het element door de volgende opdrachten uit te voeren:
/BERICHT1
ETABLE,, EPTO1,1
ETABLE,, EPTO3,3
- Bereken de rekverhouding tussen de eerste en derde hoofdrekcomponenten in het model en de botopbrengstspanning in spanning (0,73% rek) en compressie (1,04% rek)8 (Figuur 1) door de volgende commando's uit te voeren:
SMULT,RFT,EPTO1, ,1/0.0074,1,
SMULT, RFT,EPTO3, ,1/0.0104,1,
- Schaal de nominale kracht met de piekspanningsverhouding in zowel spanning als compressie, en gooi de grootste van de twee weg om een schatting van de breukbelasting te verkrijgen. Bepaal de belastingstoename als 1/4 van de berekende breukbelasting1.

Figuur 1: De berekening van de breukbelasting. De eindige-elementenspanningskaart, de vergelijkingen die worden gebruikt om de nominale kracht om te zetten in de breukbelasting (links) en het belastingsschema met het dijbeen (midden rechts), de distale aluminium (rechtsboven) kom en de polyethyleen drukkoker (rechtsonder). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
2. Voorbereiding van het dijbeenmonster (figuur 2)
- Haal het preparaat uit de vriezer (-20 °C).
- Ontdooi bij kamertemperatuur (RT) gedurende 24 uur en bewaar het monster in een waterdichte plastic zak gewikkeld in absorberend materiaal gedrenkt in een fysiologische oplossing om het botvocht op peil te houden.
- Snijd de femurdiafyse op 180 mm van de proximale femurkop.
- Centreer de femurkop op de verticale as van de uitlijninstallatie door de concaafvormige polyethyleen drukkoker (Figuur 2D) en de dijbeenkop uit te lijnen.
- Lijn het vlak met de femurhals en de diafyse-as uit met het frontale vlak (Figuur 2).
- Draai de diafysaire as naar 8° adductie zodat de verticale as de oriëntatie van de heupreactiekracht weergeeft tijdens een statische stand met één been (Figuur 2).
- Bereid het tandcement voor volgens de instructies van de fabrikant.
- Pot het distale uiteinde van het preparaat in een aluminium potbeker van 55 mm diep en vul de aluminium beker met tandheelkundig cement. Wacht niet minder dan 30 minuten totdat het cement volledig is uitgehard.
- Bewaar het preparaat bij -20 °C.

Figuur 2: De uitlijninstallatie. Een frontale (links) en laterale (rechts) foto van de uitlijninstallatie met (A) het frame, (B) de aluminium potbeker, (C) een synthetisch dijbeenmodel en (D) de bolvormige drukbus. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
3. Assemblage van de compressiefase
OPMERKING: De buitenafmetingen van de compressietrap zijn 245 mm diameter, 576 mm hoogte en 14 kg gewicht, exclusief het monster. De compressiefase bestaat uit twee hoofdonderdelen: de compressiekamer en de actuator, die als volgt zijn geassembleerd:
- Compressie kamer
- Monteer de polyethyleen drukcontactdoos (104 mm diameter, 60 mm hoogte) aan de onderkant van de aluminium cilinder (203 mm diameter, 3 mm wanddikte), die aan één uiteinde (onderkant) wordt afgesloten door een gelaste aluminium plaat.
- Bedieningssleutel
- Monteer de bovenstructuur met behulp van de schijf, de drie staven, de driehoekige plaat en de verticale rail (Figuur 3).
- Monteer het vijzelmechanisme (slag: 150 mm, maximale belasting: 10.000 N, overbrengingsverhouding: 27:1, verplaatsing per omwenteling: 0,148 mm) op de driehoekige plaat.
- Monteer de hoekadapter op de lineaire rail.
- Monteer de wrijvingsarme x-y-tafel op de hoekadapter.
- Monteer de load cell met zes vrijheidsgraden (maximale meetfout: 0,005%; maximale kracht: 10.000 N; maximaal koppel: 500 Nm) op de wrijvingsarme tafel door het x-z-vlak van de loadcel uit te lijnen met het frontale vlak van de bovenconstructie.
- Sluit de actuatorschroef aan op de hoekadapter.

Figuur 3: De op maat gemaakte radiotransparante compressietrap. Een foto (links) en een model (rechts) van de compressietrap. (A) de compressiekamer, een 3 mm dikke aluminium cilinder die aan de onderkant is gesloten; (B) de actuatoreenheid met de bovenconstructie; C) het vijzelmechanisme; (D) de wrijvingsarme x-y-tafel; en (E) de zesassige load cell worden weergegeven en aangegeven op het model. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
4. Opzetten van het experiment
- Ontdooi het monster gedurende 24 uur bij RT en bewaar het in een waterdichte plastic zak gewikkeld in absorberend materiaal gedrenkt in een fysiologische oplossing om het botvocht op peil te houden.
- Monteer het aluminium kompreparaat op de loadcel door het frontale vlak van het sample uit te lijnen met dat van de actuator.
- Monteer de bovenste structuur, inclusief het sample, in de compressiekamer. Zorg ervoor dat de heupkop is uitgelijnd met de bolvormige holte op de polyethyleen drukkoker. Zorg ervoor dat de heupkop vastzit, maar slap is in de bolvormige holte van de drukkoker.
- Plaats de compressiefase op de rotatiefase van de micro-CT-scanner bij Imaging and Medical Beamline (IMBL).
- Sluit de load cell (fout < 0,005%; maximale kracht: 10.000 N; maximaal koppel: 500 Nm) aan op de spanningsversterker.
- Sluit de spanningsversterker via USB aan op een laptop die is uitgerust met de applicatiesoftware die bij de loadcel wordt geleverd.
- Bedien het schroefmechanisme in de compressiefase door het sample naar beneden te bewegen in de richting van de drukcontactdoos en tegelijkertijd de reactiekracht te bewaken die wordt gemeten door de load cell in de laptop. Stop het schroefmechanisme zodra een drukkracht gelijk aan 100 N is bereikt. Ontlaad het sample tot 50 N voorspanning.
- Selecteer de lensgekoppelde scintillator "Ruby" (http://archive.synchrotron.org.au/31-australian-synchrotron/imbl/811-preparation-for-imaging-experiments).
- Stel het gezichtsveld in op 76,31 mm x 64,39 mm, wat voor de arraygrootte van 2.560 x 2.160 pixels een pixelgrootte van 29,81 μm oplevert.
- Stel de as van de roterende werktafel in op 8 mm (horizontaal) vanaf de as van het gezichtsveld (off-set scanmodus) om het gezichtsveld uit te breiden tot 145,71 mm x 64,39 mm bij een pixelgrootte van 29,81 μm.
- Stel de scanparameters in op een straalenergie van 60 keV, een rotatiestap van 0,1°, twee batches van 180° rotatie (off-set scanning), een belichtingstijd van 50 μs en een framegemiddelde van twee per rotatiepositie.
- Stel de scan in om vijf opeenvolgende, verticaal gestapelde scans te verkrijgen, met elk een verticale verschuiving van 26 mm, zodat de totale hoogte van het gescande volume 132,2 mm is voor een totale scantijd van 30 minuten.
5. Mechanisch testen met gelijktijdige microstructurele beeldvorming
- Voer twee keer micro-CT-beeldvorming (pixelgrootte: 0,03 mm) uit in de referentietoestand (genomen als een spanningsvrije toestand).
- Pas de krachttoename toe door het vijzelmechanisme handmatig te bedienen met een constante snelheid van ongeveer 1 s per ronde (0.1-0.2 mm/s).
- Voer micro-CT-beeldvorming uit.
- Herhaal stap 5.2 en stap 5.3 tot aan het veroorzaken van de breuk van het monster, zoals aangegeven door een plotselinge daling van de reactiekracht.
- Voer micro-CT-beeldvorming uit van het gebroken monster.
- Stitch de 1.800 projectiebeelden (2.560 pixels x 896 pixels groot, 76,8 mm x 26,88 mm, breedte x hoogte, 32-bits floating point beelden). Het proces voegt twee projectiebeelden (gemaakt in de horizontale off-set scanmodus) en de vijf verticaal verschoven beelden samen, waardoor één projectiebeeld wordt geproduceerd.
- Reconstrueer het volume van de afbeeldingen met doorsnede (4.407 afbeeldingen, elke afbeelding is 4.888 x 4.888 pixels groot) en sla ze op als 32-bits drijvendekommabestanden in . TIFF-formaat (neemt 392 GB schijfruimte in beslag).
- Pas een 3 x 3 Gaussiaans filter toe om ruis te verminderen. Converteer de afbeeldingen naar 8-bits (256 grijswaarden, opgeslagen in bitmapformaat, die ongeveer 100 GB per volume in beslag nemen).
OPMERKING: Bij dit werk werd de verwerking van de beelden uitgevoerd met behulp van software die beschikbaar is bij de Australian Synchrotron onder begeleiding van de operator van de IMBL.
6. Berekening van de verplaatsing en het rekveld
- Subsample de dwarsdoorsnedebeelden met vier (120 μm/pixel) om de rekentijd te verkorten.
- Registreer in de ruimte de beelden van het monster onder belasting stijf samen met die van het monster in de onbelaste referentietoestand. Gebruik de distale diafyse als doel van de co-registratie (Aanvullend Dossier 1 en Aanvullend Dossier 2).
- Driedimensionale oppervlaktemodellen maken (. STL-bestanden) voor visualisatie na binarisatie van de micro-CT-beelden11.
- Registreer het beeldvolume elastisch ten opzichte van het referentievolume met behulp van een rastergrootte gelijk aan 50 pixels (SDER = 0,076% rekfout, BoneDVC, https://bonedvc.insigneo.org/dvc/) om de verplaatsingen op de knooppunten van het raster te bepalen.
- Zet het raster om in een eindige-elementenmodel. Pas de door BoneDVC berekende knooppuntverplaatsing toe op het model. Los het model op om de rektensor over het gehele botvolume te bepalen.
- Herhaal de analyse in het gebied met de hoogste rekniveaus met behulp van de afbeeldingen met volledige resolutie.
- Wijs de DVC-rektoewijzingen toe aan de afbeeldingen met volledige resolutie met behulp van kubische interpolatie met de interp3-functie (Matlab)2.
- Visualiseer de verplaatsingen, rek en microstructurele beelden voor visualisatie en animatie van grote volumes (Matlab)2.
7. Beoordeling
- Geef de permanente vervorming van het bot (schade) weer door de beelden die zijn verkregen in de onbelaste omstandigheden en na de breukover elkaar heen te leggen 2.
- Geef de progressieve microstructurele vervorming van het bot weer door de driedimensionale modellen over elkaar heen te leggen in onbelaste omstandigheden, bij toenemende belastingsniveaus en na de fractuur2.
- Geef de spanning van het bot weer op de plaats van de breuk2.
- Analyseer de vervormingsenergie, stijfheid en verplaatsing met behulp van beschrijvende statistiek en regressiemethoden2.