Methodenartikel

Het verzamelen van zelfgeïnitieerde gedragsgegevens van ratten om tekorten na een beroerte te karakteriseren

2.3K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/64967

⸱

15 maart 2024

 ,  , 
1Department of Behavior Analysis, College of Health and Public Service, University of North Texas

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Er wordt een systeem gepresenteerd voor het verkrijgen van gegevens van zelf geïnitieerde individuele gedragssessies binnen een sociale koloniekooi. De werkzaamheid van dit systeem wordt aangetoond met behulp van een geautomatiseerde beoordeling van het bereik van vaardigheden, waardoor motorische stoornissen na een beroerte, mogelijke gedragsveranderingen in verband met motivatie, circadiane variaties en andere innovatieve afhankelijke variabelen kunnen worden gekarakteriseerd.

Samenvatting

Gedragstesten in rattenmodellen worden vaak gebruikt voor verschillende doeleinden, waaronder psychologisch, biomedisch en gedragsonderzoek. Veel traditionele benaderingen omvatten individuele, één-op-één testsessies tussen een enkele onderzoeker en elk dier in een experiment. Deze opzet kan zeer tijdrovend zijn voor de onderzoeker en hun aanwezigheid kan de gedragsgegevens op ongewenste manieren beïnvloeden. Bovendien legt traditionele kooien voor rattenonderzoek een gebrek aan verrijking, lichaamsbeweging en socialisatie op die normaal gesproken typisch zouden zijn voor de soort, en deze context kan ook de resultaten van gedragsgegevens vertekenen. Het overwinnen van deze beperkingen kan de moeite waard zijn voor verschillende onderzoekstoepassingen, waaronder de studie van niet-aangeboren hersenletsel. Hier wordt een voorbeeldmethode gepresenteerd voor het automatisch trainen en testen van individueel rattengedrag in een koloniekooi zonder de aanwezigheid van mensen. Radiofrequentie-identificatie kan worden gebruikt om sessies af te stemmen op de individuele rat. De validatie van dit systeem vond plaats in de voorbeeldcontext van het meten van bekwame motorische prestaties van de voorpoten voor en na een beroerte. Traditionele kenmerken van gedragsstoornissen na een beroerte en nieuwe maatregelen die door het systeem mogelijk worden gemaakt, worden gemeten, waaronder het slagingspercentage, verschillende aspecten van trekkracht, boutanalyse, initiatiepercentage en patronen, sessieduur en circadiane patronen. Deze variabelen kunnen automatisch worden verzameld met enkele beperkingen; Hoewel het apparaat experimentele controle van blootstelling, timing en praktijk verwijdert, produceerde de validatie een redelijke consistentie in deze variabelen van dier tot dier.

Inleiding

Gedragstraining en testen met rattenmodellen zijn belangrijk in talloze onderzoeksgebieden, van de verkenning van cognitieve processen tot ziektetoestanden en meer1. Meestal wordt deze training en testen uitgevoerd met individuele dieren in één-op-één-sessies, waarbij een onderzoeker het dier handmatig uit hun huiskooi haalt en ze tijdelijk in een soort apparaat plaatst. Helaas zijn er verschillende moeilijkheden en beperkingen aan deze aanpak. Ten eerste kan gedragstesten veel tijd in beslag nemen voor onderzoekers, en wanneer training nodig is, wordt die tijdsvereiste nog groter. Ten tweede heeft deze benadering automatisch invloed op de verkregen gegevens - of verwart deze zelfs mogelijk, zoals elders is vastgesteld2. Deze verwarringen zijn vooral opvallend bij het overwegen van verrijkingsgerelateerde variabelen. In het bijzonder worden laboratoriumratten traditioneel gehuisvest in kleine kooien die net groot genoeg zijn voor een of twee ratten3, en als er geen loopwielen zijn, kunnen ze een leven lang gaan zonder zinvolle mogelijkheden om te oefenen. Bovendien kan geïsoleerde huisvesting een belangrijke bron van stress zijn bij een sociale soort zoals de rat4. Sommige van deze welzijnsgerelateerde nadelen hebben waarschijnlijk een impact op de fysiologie van ratten 5,6, wat de ontwikkeling van soorttypische gedragsexpressie kan verhinderen4 en van invloed kan zijn op de kwaliteit van knaagdiermodellen zoals toegepast op menselijke contexten.

Onderzoekers hebben de afgelopen jaren verschillende soorten oplossingen voor deze problemen gezocht. Het eenvoudigste type oplossing was het automatiseren van gedragstesten en training 7,8,9,10, waardoor het niet meer nodig is dat een enkele onderzoeker zich over een enkel dier hoeft te houden. Een aanvullende oplossing was het automatiseren van de overdracht van dieren naar proefkamers11,12, waardoor menselijke betrokkenheid verder werd weggenomen. Ten slotte zijn er verschillende opstellingen onderzocht die het mogelijk maken om dieren te huisvesten in koloniekooien met andere dieren en met meer ruimte voor verkenning en verrijking13. Ondanks deze voordelen kunnen dergelijke kolonie-opstellingen de inspanningen om individueel gedifferentieerde gedragsgegevens te verzamelen beperken of bemoeilijken (zie inspanningen om computervisie te gebruiken)14,15. Als individuele gedragsgegevens nodig zijn, kan het ook moeilijker of complexer zijn om dieren te identificeren en op te halen uit koloniekooien voor gedragssessies. Op dit moment bestaan er weinig systemen voor het verzamelen van individuele gedragsgegevens van (verrijkte) kolonies die 16,17,18 huisvesten.

Deze nadelen kunnen specifiek van invloed zijn op onderzoek naar de gedragseffecten van niet-aangeboren hersenletsel. Ten eerste is het duidelijk dat de aanwezigheid en/of het geslacht van mensen en de hanteringspraktijken van invloed zijn op het gedrag van knaagdieren 2,19, en deze variabelen kunnen het gedrag van ratten vóór vs. na een beroerte. Ten tweede kunnen de menselijke gedragsresultaten na een beroerte worden verslechterd door vrijwillig verminderde betrokkenheid bij de aanbevolen dosering van revalidatieoefeningen20. Momenteel hebben knaagdierexperimenten de neiging om dit soort context niet te modelleren, omdat ratten niet vrij zijn om te kiezen om deel te nemen aan of zich te onthouden van gedragssessies.

Dit artikel introduceert een protocol dat is ontworpen om individuele gedragstesten te vergemakkelijken in het kader van verrijkte koloniekooien. Deze aanpak pakt niet alleen de beperkingen van de huidige praktijken aan, maar opent ook wegen voor de verkenning van innovatieve maatregelen. Er is een tourniquet voor één rat (ORT) ontwikkeld die aan een koloniekooi kan worden bevestigd, waardoor dieren zelfstandig gedragskamers kunnen betreden en hun eigen trainings- en testsessies kunnen starten. Het systeem is betaalbaar; elke ORT kan tegen lage kosten worden geassembleerd (met toegang tot een 3D-printer). In het verleden werd de validatie van dit systeem uitgevoerd met behulp van een eenvoudige operante kamer, wat aantoont dat dieren consequent konden worden getraind om een eenvoudige operante hendelpers uit te voeren zonder de aanwezigheid van een experimentator16. De vraag of deze configuratie van toepassing is op andere scenario's blijft echter onbeantwoord. Het doel is om de effectiviteit te valideren van de eerder vastgestelde ORT-kolonie-kooiopstelling voor het trainen en kwantificeren van vaardig reikgedrag dat relevant is voor motorische stoornissen na een beroerte. De configuratie werd gebruikt om nieuwe variabelen te genereren die doorgaans niet worden onderzocht in onderzoek naar beroertes. Deze variabelen omvatten prestatiestatistieken voor de vaardigheidsbereiktaak en metingen van zelfinitiatie, die relevant kunnen zijn voor motivatie en besluitvorming. Bovendien werden door een beroerte veroorzaakte veranderingen in de circadiane patronen van dagelijkse zelfinitiatie gedurende de gehele periode van 24 uur effectief gedetecteerd.

Protocol

Alle procedures en dierverzorging zijn goedgekeurd door de institutionele commissie voor dierenverzorging en -gebruik van de Universiteit van Noord-Texas (IACUC) en hebben zich gehouden aan de gids van de National Institutes of Health voor de verzorging en het gebruik van proefdieren. Volwassen mannelijke en vrouwelijke Long-Evans-ratten (400-800 g, 1,5 jaar oud), die in de huidige studie werden gebruikt, werden gehuisvest in koloniekooien.

1. Voorbereiding van de apparatuur

  1. Verkrijg of monteer de tourniquet met één rat (ORT) volgens de ontwerpbestanden en instructies voor de constructie (zie aanvullend bestand 1 en aanvullend coderingsbestand 1). Zie Butcher et al.16 voor meer details.
    OPMERKING: ORT's zijn specifiek voor de grootte van ratten, dus een koloniekooi moet dieren bevatten die ongeveer even groot zijn. Als men geen ORT's zelf in elkaar wil zetten, kunnen ze voorgemonteerd worden gekocht (zie Materiaaltabel).
  2. Verkrijg en bevestig een radiofrequentie-identificatielezer (RFID, zie Materiaaltabel) en verkrijg en injecteer dieren met RFID-tags.
    OPMERKING: Bij het injecteren van RFID full duplex (FDX) tags moet de oriëntatie loodrecht op de RFID-antenne staan terwijl de rat door de ORT loopt. Bij deze validatie werden tags subcutaan geïmplanteerd tussen het schouderblad op een vlak evenwijdig aan de wervelkolom.
  3. Bevestig de RFID-antenne aan de buis van de ORT.
  4. Construeer en/of verkrijg de gedragsapparaat(en) en koloniekooien die geschikt zijn voor de experimentele vraag. In dit voorbeeld werd op maat gemaakte koloniekooi21,22 gebruikt in combinatie met in de handel verkrijgbare operante kamers (zie Materiaaltabel), hoewel theoretisch alle apparatuur zou kunnen worden gebruikt.
    OPMERKING: Competitie van in kolonies gehuisveste dieren voor toegang tot de gedragsapparatuur(en) via de ORT moet worden overwogen. Anticipeer erop dat je één ORT + gedragsapparaat nodig hebt voor elke 4 tot 6 dieren.
  5. Bevestig de ORT(s) tussen het gedragsapparaat en de kooi van de kolonie.
  6. Snijd een portaalgat in het gedragsapparaat en de koloniekooi met behulp van een Dremel roterend gereedschap (zie Materiaaltabel) of een soortgelijk instrument. De inwendige diameter moet gelijk zijn aan de buitendiameter van de aangelegde ORT-tunnel.
    OPMERKING: De ORT moet een paar centimeter worden verhoogd om te kunnen werken, dus er is een klein platform of standaard nodig om de kooi van de kolonie en de hoogte van het apparaat uit te lijnen.
  7. Installeer een RFID-systeem om dieren te lezen terwijl ze door de ORT gaan en, indien gewenst, te integreren met het gedragsapparaat.

2. Preoperatieve gedragstraining

  1. Zorg voor een cohort ratten van dezelfde grootte en introduceer ze in de kooi van de kolonie.
    OPMERKING: Dieren die op grote schaal geïsoleerd of met weinig soortgenoten zijn gefokt of gehuisvest, kunnen meer moeite hebben met het verkennen van de kamer, vooral als het gaat om het doorkruisen van sociale delen van de kooi van de kolonie. Dieren moeten al vroeg in hun leven worden blootgesteld aan groepskooien om deze valkuil te vermijden.
  2. Verwijder de toegang tot elke manipulanda binnen het gedragsapparaat en stel de kamer in om gemiddeld elke 60 s automatisch beloningen te leveren wanneer deze bezet is.
    OPMERKING: Deze studie gebruikte sucrosewater (30% tot 40%) als beloning, maar gezoete gecondenseerde melk is ook effectief.
  3. Train alle ratten om regelmatig via de ORT de gedragsapparaat(en) te betreden.
  4. Controleer minstens één keer per dag de gegevens om er zeker van te zijn dat alle dieren de ORT binnenkomen. Als dieren niet binnenkomen, steek dan een voorwerp ter grootte van een pen in het vergrendelingsmechanisme om te voorkomen dat het tijdelijk wordt vergrendeld, zodat dieren vrijer kunnen verkennen. Als er nog steeds geen dieren binnenkomen, verwijder dan het tourniquet en bevestig een tijdelijke zijwand om vrije tunneltoegang tot de kamer mogelijk te maken.
  5. Zodra alle dieren regelmatig de kolk binnenkomen, plaatst u het slot (en tourniquet) terug en beoordeelt u opnieuw.
    OPMERKING: Dieren kunnen ook de ORT en de kamer bezetten als tijdelijk uitstel van andere ratten. Een manier om dit soort monopolisering van de kamer te voorkomen, is door een extra ORT aan te sluiten die een brug slaat naar een eenvoudige isolatiekamer.
  6. Introduceer de manipulandum - de trekhendel, in dit voorbeeldgeval - en stel deze in op de hoogste gevoeligheid. Steek het handvat net binnen de doos (tot 2 cm) of net buiten de doos.
    NOTITIE: Schilderstape kan reikpogingen oproepen als deze aan de achterkant van het handvat wordt bevestigd, net buiten bereik.
  7. Verminder de frequentie waarmee de beloning (d.w.z. 30% sucrosewater) automatisch wordt toegediend (bijv. elke 90-120 s). Onthoud dat elke beloning kan worden gebruikt die past bij de behoeften van de onderzoeker en de voorkeuren van de dieren.
  8. Controleer de gegevens dagelijks om er zeker van te zijn dat alle dieren hebben geleerd om de hendel te activeren. Aas de hendel en/of verander het insteekniveau totdat alle dieren trekken.
  9. Stop met het automatisch leveren van beloningen, zodat ze alleen beschikbaar zijn via activering van de trekhendel.
  10. Indien eerder ingebracht, trekt u de hendel elke dag in (op voorwaarde dat alle ratten op dat intrekniveau blijven trekken) met 0,25 mm tot 0,5 mm totdat de hendel in zijn definitieve positie is, 1 cm tot 1,25 cm buiten de kamer.
    OPMERKING: De exacte positie van de hendel is afhankelijk van de grootte van de ratten. Zorg ervoor dat u een positie kiest die resulteert in de gewenste bereiktopografie.
  11. Start een percentiel of ander trainingsprogramma om de vereiste trekkrachten om de hendel te activeren geleidelijk te verhogen.
    OPMERKING: Deze studie gebruikte een percentielschema dat het criterium voor versterking vaststelt op het bovenste kwartiel van de vorige 15 reacties. Als alternatief kan een stapsgewijze verhoging van het trekcriterium worden gebruikt7.
  12. Zodra dieren op betrouwbare wijze het uiteindelijke criteriumbereik van 120 g trekken bereiken, verwijdert u het percentieltrainingsprogramma en stelt u het criterium voor handvatactivering vast op een constante van 120 g.
  13. Verzamel basisgegevens bij deze krachtvereiste totdat de slagingspercentages gedurende ongeveer een week stabiel (niet-trending) zijn.

3. Beroerte induceren

  1. Chirurgisch beroerte induceren bij alle gekooide dieren van de kolonie tegelijkertijd.
    OPMERKING: Om de beroerte op te wekken werd een endothelian-1-model van de beroerte gebruikt, dat elders is beschreven23.
  2. Laat dieren 3-7 dagen herstellen in traditionele kooien, individueel geïsoleerd.

4. Postoperatief gedragstesten

  1. Breng de dieren na herstel terug naar de kooi van de kolonie met het aan ORT bevestigde vaardigheidsbereikapparaat.
  2. Voer de gedragstest uit en houd de trekvereisten op het einde van 120 g (volg stap 2) totdat er voldoende gegevens zijn verzameld om tekorten na een beroerte te evalueren (van één tot meerdere dagen).
  3. Implementeer alle onafhankelijke variabelen na een beroerte of herstel gedurende de daaropvolgende dagen terwijl de dieren de kamer betreden.

Resultaten

De dieren werden getraind en getest met vier vrouwelijke ratten in één koloniekooi en vier mannelijke ratten in een aparte koloniekooi. Alle ratten leerden in vier dagen of minder door de ORT's te gaan. De vier vrouwelijke ratten bereikten >85% succesvolle aanvallen bij de vereiste kracht van 120 g in ongeveer 6 weken training en de mannelijke ratten bereikten hetzelfde criterium in 10 weken (vergeleken met ongeveer 3 weken met standaardtraining met ratten met een handicap)7. Deze trainingsduur werd aanzienlijk verlengd vanwege verschillende hardware- en softwareproblemen die continue probleemoplossing vereisten, tussen week 2 en 6. Toen deze problemen eenmaal waren verholpen, verliep de training soepel en wordt verwacht dat de daaropvolgende trainingstijdlijnen vergelijkbaar zullen zijn met de huidige literatuur7. De mannelijke ratten werden ook langer getraind om meer mogelijkheden te bieden voor één mannelijke rat om te beginnen met trekken; Hij deed dit echter nooit en werd na week 7 uitgesloten van verdere analyse en operatie. Zodra de prestaties van de rat stabiel waren in de uitgangswaarde, werden voor elke kooi 5 dagen aan basislijngegevens van vóór de beroerte verkregen. De gegevens waren beperkt tot dagen waarop de ORT de hele dag verbonden bleef met de kooi (op sommige dagen moesten de veehouderijgerelateerde tijdelijke verbindingen worden afgesloten). Voor de vrouwelijke kooi waren de basisdagen 7, 8, 9, 10 en 12 dagen vóór de beroerte. Voor de mannen waren de basisdagen 8, 9, 10, 11 en 13 dagen vóór de beroerte.

Tijdens hun beroerte-inductieoperaties werden de dieren in deze validatie tegelijkertijd geïmplanteerd met elektroden die waren aangesloten op draadloze ontvangende chips in hun basale voorhersenen (coördinaten -5,8 mm anterieur/posterieur, 0,7 mm links mediaal/lateraal, 8,3 mm dorsaal/ventraal) of hun ventrale tegmentale gebied (coördinaten -2,3 mm anterieur/posterieur, 3,3 mm links mediaal/lateraal, 7,0 mm dorsaal/ventraal). Deze implantaten waren voor gebruik in een volgend herstelexperiment en zijn niet relevant voor de hier gerapporteerde validatie van de koloniekooi-ORT. De implantaten waren zo ontworpen dat de huid eroverheen kon worden gesloten, met de ontvangende chips onderhuids onder de linkerarm.

Eén vrouwelijk dier stierf tijdens de inductie van een beroerte. Een ander vrouwtje begon enkele dagen na herstel achteruit te gaan, omdat ze na een beroerte nooit aan de hendel had getrokken. Na haar euthanasie bleek dat ze waarschijnlijk ergens na haar beroerte een hersenbloeding had gehad. Deze twee dieren werden volledig geëlimineerd uit de dataset, inclusief de beoordeling vóór de beroerte.

Na de beroerte begonnen de dieren niet onmiddellijk opnieuw met het regelmatig trekken aan de hendel, hoewel ze de kamer bleven binnenkomen via de ORT en moesten worden aangemoedigd via korte sessies van handmatige vormgeving (d.w.z. verminderde hendelafstand en leverde beloningen op afhankelijk van het naderen of proberen om aan de hendel te trekken). Vrouwelijke ratten trokken niet gedurende dag 4-7 na de beroerte en kregen daarom extra hendelaas (d.w.z. een beetje pindakaas op de hendel) en handmatige vormgeving op dag 8-11. Ze begonnen op dag 11 autonoom te trekken. Mannetjes mochten herstellen tot dag 6 op basis van eerdere ervaringen met de vrouwtjes. Ze trokken niet tijdens dag 6 na de beroerte. Ze kregen op dag 7 extra aas. Ze begonnen autonoom te trekken op de8e dag na de beroerte. Zodra de dieren opnieuw in contact kwamen met wapening voor trekpogingen, werd het aanvullende aas of vormgeving gestaakt en werden gegevens na de slag verzameld. Mannetjes trokken niet genoeg op dag 8 voor een volledige analyse van de meer complexe afhankelijke variabelen (circadiane metingen en pauzeren na de wedstrijd), dus mochten ze blijven trekken op de 9e, 10e en 11edag onder hetzelfde criterium. De 8e, 10e en 11edag waren volledige dagen. De eerste dag van trekken na een beroerte werd gebruikt voor alle analyses, behalve de circadiane analyse en de analyse van pauzes tussen aanvallen; Voor deze analyse zijn de ene dag voor de vrouwen en de drie volledige dagen voor de mannen gebruikt. Voor analyse na een beroerte gaven de twee vrouwelijke ratten 55 en 844 trekken op één dag, en de drie mannelijke ratten 536, 153 en 190 trekken in drie dagen.

De gegevens werden geordend op basis van pulls en bouts. Om te voorkomen dat trillingen als gevolg van de apparatuur zelf worden geregistreerd, werden de trekkrachten gemeten met behulp van een drempel van 5 g met een hysterese van +/- 1 g. Een trekkracht werd geregistreerd wanneer het dier een druk van meer dan 6 g uitoefende en stopte wanneer het handvat een kracht van minder dan 4 g registreerde. Dieren hadden de neiging om te trekken in vlagen van verschillende snelle trekken. Zodra een enkele trekkracht 120 g bereikte, werd wapening geleverd. Een aanval werd beschouwd als een cluster van trekkrachten waarvan de pieken allemaal minder dan 1 s van elkaar gescheiden waren. Deze drempel werd geselecteerd op basis van eerdere gegevens, die aangaven dat er van nature een cluster tussen piekintervallen onder 1 s ontwikkelde en dat andere interpiekintervallen betrouwbaar veel langer waren. Ratten zouden over het algemeen vele malen achter elkaar trekken voordat ze de feeder bezoeken, zelfs wanneer eerdere trekbewegingen in de aanval de feeder hebben geactiveerd.

In totaal werden 7 afhankelijke variabelen geanalyseerd. Er werd een gepaarde t-toets uitgevoerd tussen basislijngemiddelden en metingen na een beroerte, die worden gerapporteerd in Figuur 1, Figuur 2 en Figuur 3. Deze cijfers geven ook gegevens van individuele dieren weer om een indruk te geven van de variatie tussen dagen en tussen individuen voor elke meting die te verwachten is.

Figuur 1 toont de prestaties voor en na een beroerte langs verschillende prestatiemaatstaven die typisch zijn voor beoordelingen van het bereik van vaardigheden 7,8,10. Alle gegevens na een beroerte werden samengevoegd tot één enkel datapunt, zelfs als het enkele dagen duurde om voldoende onderzoeken te verzamelen. Het protocol en het geautomatiseerde, zelfgeïnitieerde systeem beoordeelden met succes het slagingspercentage per aanval, de gemiddelde kracht per trek en het trekken per wedstrijd, die allemaal gevoeligheid voor de slag vertoonden met verschillende gradaties van statistische significantie.

Figuur 2 toont twee nieuwe variabelen die voortkomen uit de opstelling van de koloniekooi-ORT: sessie-initiaties en cumulatieve sessieduur. Verrassend genoeg had een beroerte geen invloed op het initiëren van sessies. Vrouwen begonnen op betrouwbare wijze meer sessies dan mannen, zowel voor als na een beroerte, maar geen van beide veranderde hun snelheid na een beroerte. Omgekeerd nam de duur die in de kamer werd doorgebracht voor de meeste ratten toe, misschien als gevolg van het verminderde slagingspercentage van aanvallen (met als resultaat een lager aantal beloningen)

Sessie-initiatie (die een keuze vertegenwoordigt tussen verrijking en sociale beloningen beschikbaar in de koloniekooi en voedselversterking) en de duur van de tijd in de kamer (in het geval van een geconditioneerde plaatsvoorkeur met de waarde van beloning) kunnen ook worden genomen als indices van motivatie 24,25,26,27. Aanvullende op motivatie gebaseerde metingen werden opgenomen, zoals "inspanning" zoals gekwantificeerd door pulls per sessie minuut28 en pauzes tussen periodes29, die te zien zijn in figuur 3. Deze variabelen werden beïnvloed door een beroerte. Zoals verwacht nam het aantal pulls per sessieminuut af en nam de duur van de pauzes tussen de periodes toe. De veranderingen in deze laatste maatregel waren echter complex. De verdeling van de pauzes leek chaotischer te worden, inclusief meer lange pauzes, een paar zeer lange pauzes en ook meer korte pauzes. Dit kan duiden op een storing in de oorspronkelijke geschoolde motoreenheid; Als dat zo is, kan het een gemakkelijk meetbare index van hetzelfde zijn.

Ondanks de kleine groepsgrootte werd een onderzoek uitgevoerd om te bepalen of een van de gemeten variabelen correlaties vertoonde met het slagingspercentage, wat mogelijk hun functionele betekenis impliceert. Shapiro Wilk-tests werden uitgevoerd om te beoordelen of de gegevens gelijk verdeeld waren over het slagingspercentage van de variabelen, de gemiddelde piektrekkracht, de aanval per minuut, de cumulatieve sessieduur, de pauzes tussen de aanvallen en de trekbewegingen per periode. De Shapiro Wilk-test gaf aan dat de verdeling van sommige variabelen significant afweek van de normaliteit. Daarom werden de rangordecorrelaties van Spearman uitgevoerd om de relatie te bepalen tussen het slagingspercentage voor of na een beroerte en de volgende variabelen: gemiddelde piek, trekaanval per minuut, cumulatieve sessieduur, pauzes tussen aanvallen en pulls per aanval. Er waren geen andere variabelen vóór de slag dan de gemiddelde trekkracht significant gecorreleerd met het slagingspercentage (zie tabel 1). Na een beroerte vertoonden de meeste variabelen ook geen betekenisvolle correlatie met het slagingspercentage, behalve de gemiddelde trekkracht (tabel 1).

Ten slotte maakt de ORT niet alleen een analyse mogelijk van bekwaam motorisch gedrag, maar ook van de circadiane patronen. Figuur 4 toont het aandeel van elk uur voor elke kooi waarin de ORT zich bevond, weergegeven als een gemiddelde over de basislijn- en post-beroertedagen. De blauwe lijn in de figuur geeft een gemiddelde telling aan van het aantal inzendingen per uur gedurende de dag. Vóór een beroerte zouden dieren zich 's ochtends op hoge niveaus bezighouden met de vaardige reikwijdtetaak, waardoor hun duur gedurende de dag werd verkort. Een paar uur voor het aangaan van de lichten piekte de betrokkenheid weer (vrouwtjes) of nam heel licht toe (mannetjes) voordat hij stopte kort nadat de lichten aangingen. Deze bimodale circadiane verdeling veranderde volledig na een beroerte. Dieren waren 's ochtends minder bezig en hun tijd in de kamer piekte later op de dag. Een dergelijk patroon kan een weerspiegeling zijn van de algemene slaap- en circadiane stoornissen die vaak worden waargenomen na een beroerte 30,31,32,33.

figure-results-1
Figuur 1: Meten van de typische prestatieveranderingen in bekwaam bereik na een slag met behulp van de ORT-procedure. De prestaties van bekwaam bereik voor en na de slag werden gemeten. Dagelijkse gemiddelden per dier voor het slagingspercentage per aanval, de gemiddelde kracht per trek en het aantal trekken per aanval worden weergegeven gedurende 5 dagen vanaf de basislijn en één dag na de beroerte (links) en tussen een gemiddelde van de basislijn en één dag na de beroerte (na de beroerte) met gerapporteerde gepaarde t-tests. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-2
Afbeelding 2: Verschillende zelf-geïnitieerde sessieparameters laten verschillende tendensen zien om te veranderen na een beroerte. De maatregelen van zelfinitiatie voor vaardige reikwijdtesessies voor en na een beroerte werden mogelijk gemaakt door de ORT-procedure. Dagelijkse gemiddelden per dier voor sessie-initiaties en cumulatieve dagelijkse sessieduur worden weergegeven gedurende 5 dagen vanaf de basislijn en één dag na de beroerte (links) en tussen een gemiddelde van de basislijn en één dag na de beroerte (na de beroerte) met gerapporteerde gepaarde t-tests. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-3
Figuur 3: Motivatie-gerelateerde variabelen veranderen na een beroerte. De prestatiemetingen van vaardigheidsgedragssessies voor en na een beroerte met betrekking tot motivatie werden bepaald. Dagelijkse gemiddelden per dier voor de pauzeduur tussen periodes en het dagelijkse aantal aanvallen per sessieminuut worden weergegeven gedurende 5 dagen vanaf de basislijn en één dag na de beroerte (links) en tussen een gemiddelde van de basislijn en één dag na de beroerte (na een beroerte) met gerapporteerde gepaarde t-tests. Pauzes tussen periodes veranderden in termen van deze dagelijkse gemiddelden, maar nog opvallender was dat de verdeling van individuele pauzelengtes na een slag ook aan beide kanten van het gemiddelde veranderde. Individuele pauzelengtes worden voor alle dieren gepoold en weergegeven als verdelingen op een log-as (uiterst rechts). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-4
Figuur 4: Circadiane patroonvorming van zelf geïnitieerde sessies verandert na een beroerte. De metingen van circadiane patroonvorming van zelf-geïnitieerde vaardigheidsvaardigheidsgedragssessies vóór (links) en na (rechts) beroerte voor alle dieren, vrouwtjes en mannetjes werden bepaald. Deze gegevens omvatten alle ingangen en alle tijden van kamerbezetting per kooi, gemiddeld over dagen vóór en na de beroerte. Het gemiddelde van de twee kooien wordt vervolgens opnieuw gemiddeld om de totale verdelingen weer te geven (bovenste rij). Patronen vóór de beroerte omvatten een hoge betrokkenheid in de ochtend, die gedurende de wakkere periode afnam met een nieuwe piek net voor de slaapfase. Patronen na een beroerte laten zien dat de sessieduur gedurende de dag toeneemt en piekt vóór de slaapfase. Ratten waren op omgekeerde lichtcycli in hun woonkamer. De periode waarin de lichten aan zijn, wordt grijs gearceerd weergegeven om de normale inactieve periode van de rat aan te geven. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Correlaties
VariabelenVergelijking variabeleSpearman
nVoor Stroke rspNa een beroerter sp
Gemiddelde trekkrachtSlagingspercentage51<0,001-0.9750.005
Trekaanval per minuutSlagingspercentage50.30.624-0.1540.805
Cumulatieve sessieduurSlagingspercentage5-0.10.8730.5640.322
Pauzes tussen periodesSlagingspercentage5-0.60.2850.2050.741
Trekt per BoutSlagingspercentage50.10.873-0.8210.089

Tabel 1: Spearman-correlatiecoëfficiënten tussen variabelen. Spearman's rangordecorrelaties werden uitgevoerd om de relatie tussen het slagingspercentage voor of na een beroerte te bepalen en de volgende variabelen werden bepaald: gemiddelde piek, pull-aanval per minuut, cumulatieve sessieduur, pauzes tussen aanvallen en pulls per bout. Voorafgaand aan de correlatie werden Shapiro Wilk-tests uitgevoerd om te beoordelen of het slagingspercentage van alle testvariabelen gelijk was, en gaven aan dat sommige variabelen aanzienlijk afweken van de normaliteit. Geen enkele andere variabelen vóór de slag dan de gemiddelde trekkracht waren significant gecorreleerd met het slagingspercentage. Deze tabel geeft de resultaten weer van de Spearman-correlatiecoëfficiënten (ρ) die zijn beoordeeld als er een verband was tussen het slagingspercentage en vijf testvariabelen.

Aanvullend bestand 1: Stappen voor het bouwen van de ORT. Instructies voor het printen en bouwen van een "One Rat Turnstile". Inbegrepen in de instructies zijn een lijst met alle benodigde materialen en stap-voor-stap instructies (met afbeeldingen). Het bestand bevat ook aanwijzingen voor het bevestigen van een microschakelaar om in- en uitgangen te registreren, evenals de bedrading en programmering voor het aansluiten van een RFID-lezer. Klik hier om dit bestand te downloaden.

Aanvullend coderingsbestand 1: Dit omvat alle componenten die nodig zijn voor het 3D-printen van de "One Rat Turnstile". Dit bestand kan rechtstreeks worden gebruikt of worden geraadpleegd met behulp van de instructies in aanvullend bestand 1. Alle componenten in dit bestand moeten worden geschaald met behulp van het "liniaal"-stuk dat is meegeleverd (zie aanvullend bestand 1 voor meer details). Klik hier om dit bestand te downloaden.

Discussie

Dit protocol heeft meerdere toepassingen. Ten eerste, en het meest in het algemeen, is de ORT ontwikkeld met als doel geautomatiseerde gedragstraining en gegevensverzameling met één onderwerp mogelijk te maken in de context van sociale, verrijkte huisvesting. Hoewel deze studie het idee testte om typische gedragsmetingen te verzamelen en uit te werken in de context van een beroerte, kan hetzelfde worden gedaan voor andere toepassingen en gedragstaken. Zelfs de maatregelen die in deze validatie zijn verzameld, kunnen indien nodig worden aangepast om alternatieve versterkingsschema's, alternatief gedrag, enz. op te nemen. Ten tweede evalueerde deze studie het vermogen van het systeem om gegevens te verzamelen met betrekking tot de aantasting van het bereik van vaardigheden na een beroerte. Het huidige protocol is eerder gevalideerd voor het aanleren en meten van basishendeldrukken16. De huidige gegevens tonen aan dat het een geldige benadering is voor het verzamelen van gegevens over beroerte-gerelateerde motorische tekorten, en dat maatregelen die typerend zijn voor traditionele beoordelingen van het bereik van vaardigheden, evenals nieuwe maatregelen mogelijk zijn. Bij het oplossen van problemen met het ORT-systeem van de koloniekooi was een grote vraag of de dieren zelf gedragssessies met voldoende frequentie zouden initiëren, en of ze dit zouden doen in verschillende experimentele contexten, vooral na een beroerte. Er werd ontdekt dat alle of bijna alle dieren kunnen worden aangemoedigd om voldoende deel te nemen aan eenvoudige operante procedures en nu voor gedragstesten na een beroerte. Perioden na een beroerte vereisten enige handmatige vormgeving, maar dieren keerden snel terug naar betrokkenheid bij de gedragstaak zonder aanwezigheid van de onderzoeker.

Tijdens het oplossen van problemen zijn verschillende procedurele punten ontdekt die de kans op succes vergroten, en deze zijn in het protocol geïntegreerd. Deze omvatten de noodzaak om de ORT te schalen op basis van de grootte van de rat en om ervoor te zorgen dat dieren van vergelijkbare grootte zijn en in een sociale context worden grootgebracht. Bovendien werd ontdekt dat een enkele ORT het meest effectief is voor het huisvesten van 4-6 ratten vanwege de mogelijke hoge concurrentie voor de kamer. Het is vermeldenswaard dat deze competitie niet meer stress lijkt te veroorzaken in vergelijking met traditionele methoden; Een eerder experiment registreerde verlaagde cortisolspiegels in de opstelling van de koloniekooi, in tegenstelling tot traditionele gedragstests16. Bovendien werd vastgesteld dat, voor timide dieren, het verwijderen van het tourniquet of het ontgrendeld laten ervan tijdens de eerste trainingsfase helpt om meerdere ratten samen de kamer te laten verkennen.

Hoewel deze benadering effectief is bij het beoordelen van motorische tekorten na een beroerte, is het essentieel om enkele beperkingen te erkennen. Ten eerste is het mogelijk dat dieren na een beroerte niet onmiddellijk opnieuw beginnen met trekken en kunnen ze een paar sessies van handmatige vormgeving en/of aas nodig hebben. Met deze en andere specifieke benaderingen kan volledige automatisering van training en testen moeilijker zijn. Dit is echter geen beperking die uniek is voor de opstelling van de ORT-koloniekooi, en dieren in door de onderzoeker geïnitieerde gedragssessies hebben vaak hetzelfde probleem.

Een andere beperking is de mogelijkheid om de kamers te gebruiken voor andere doeleinden dan waarvoor ze bedoeld zijn. Anekdotisch werden verschillende gevallen waargenomen waarin dieren de gedragskamers binnengingen en een aanzienlijke hoeveelheid tijd binnen doorbrachten zonder actief deel te nemen aan de gedragstaak. Dit gebeurde wel eens bij alle dieren, maar vooral bij de mannetjes. Dit kan simpelweg zijn geweest omdat de ORT een beetje privacy bood aan dieren wanneer ze niet sociaal betrokken wilden zijn. Dat gezegd hebbende, het toevoegen van "alleen" kamers aan de koloniekooi met behulp van andere ORT's vermindert dit probleem.

Er werd ook waargenomen dat dieren af en toe stopten in de tunnel met de ORT halfopen en daar voor langere tijd bleven. Dit is de reden dat het het beste is om de RFID-lezer dicht bij de gedragskamer te hebben, zodat het dier pas wordt geregistreerd als ze volledig zijn binnengekomen. Er zou kunnen worden gespeculeerd dat het vertoeven in de ORT op dezelfde manier aangenaam is als een knijpkoker. In ieder geval blijven dieren daar niet hangen op een manier die het verzamelen van gegevens zou verhinderen, vooral wanneer er alternatieve ORT-aangehechte isolatiekamers beschikbaar zijn.

Een andere beperking is dat zelf-geïnitieerde sessies moeilijker kunnen zijn om de gedragssessietijd of gedragsresponsmogelijkheden tussen individuen in groepen gelijk te trekken. Deze beperking kan met name relevant zijn voor beroertegerelateerde studies, gezien de relatie tussen cumulatieve trainingstijd en herstel. Deze beperking kan echter op zijn minst gedeeltelijk worden aangepakt. Als een experiment dit vereist, is het mogelijk om veel gedragsapparaten te programmeren om sessies te beëindigen wanneer een doelduur of het beoogde aantal reacties is bereikt (d.w.z. door beëindiging van beloningen of intrekking van het manipulandum). Deze oplossing pakt geen enkele neiging van individuen aan om hun doelen niet te bereiken. Maar nogmaals, die beperking is niet uniek voor deze opstelling.

Deze opzet heeft ook het voordeel dat gedragstraining of blootstelling gedurende de dag kan plaatsvinden in plaats van op een paar beperkte tijden. Dit kan in verschillende contexten nuttig zijn; Specifiek bij een beroerte kan het worden gebruikt om het doseringseffect van gedragsrevalidatiebenaderingen te onderzoeken.

Ten slotte kan de ORT waarschijnlijk niet worden gebruikt voor aversieve procedures zoals sociale nederlaag, gedwongen zwemmen, geconditioneerde angst, enz. De ORT vereist dat het gedragsparadigma smakelijk is; Anders zullen de dieren waarschijnlijk gewoon de gedragskamers vermijden.

Ondanks de beperkingen voegt deze procedure aanzienlijke voordelen toe aan de momenteel beschikbare gedragsparadigma's voor ratten. Ten eerste maakt de opstelling het mogelijk om continu gegevens met een hoge doorvoer te verzamelen, terwijl de experimentator tijd vrijmaakt. Hoewel het belangrijk is om de apparatuur en de dieren voortdurend in de gaten te houden, hoeven onderzoekers slechts gedurende korte perioden van de dag aanwezig te zijn. Het uitvoeren van gedragssessies voor 8 dieren zou 4-10 uur dagelijkse sessies hebben vereist met behulp van de traditionele aanpak. De ORT-koloniekooibenadering reduceert niet alleen die tijd tot praktisch nul (uitgaande van een werkend en geautomatiseerd apparaat), maar maakt het ook mogelijk om gegevens in het weekend te verzamelen met weinig behoefte aan extra aanwezigheid; Een dergelijke voortdurende beschikbaarheid van gedragsactiviteiten in het weekend verhoogt ook de totale verrijking die beschikbaar is voor dieren.

Het ORT-koloniekooiprotocol biedt zowel datavoordelen als logistieke voordelen. Er zijn veel afhankelijke variabelen beschikbaar die traditioneel niet mogelijk zijn, waaronder tempo, duur of andere parameters van zelf geïnitieerde sessies zoals die hier worden onderzocht. Circadiane variabelen worden vaak gemeten met behulp van loopwielen; Dit protocol maakt het echter mogelijk om zowel naar patronen als naar keuzeparameters in andere soorten gedrag te kijken. De ORT kan zelfs worden gebruikt om koloniekooien met elkaar te verbinden en visuele of olfactorische toegang te bieden tot het andere geslacht, waardoor het niet alleen mogelijk wordt om de motivatie te beoordelen, maar ook de circadiane patronen van het nastreven van partners. Deze studie heeft verschillende nieuwe afhankelijke variabelen gekarakteriseerd die nuttig kunnen zijn bij onderzoek naar beroertes, waaronder circadiane variabelen en initiatiegerelateerde variabelen die kunnen helpen bij het onderzoeken van translationele vragen die verband houden met of in de context van het verlies van motivatie en depressie die kunnen optreden na een beroerte34,35. Hoewel hier niet behandeld, zouden andere belangrijke beroerte-relevante variabelen, zoals kwalitatieve analyses van reikkinematica, ook gemakkelijk moeten kunnen worden aangepakt met dit ORT-koloniekooiprotocol via bewegingsgeactiveerde camera's.

Ten slotte is een belangrijk voordeel van dit protocol het vermogen om dieren het grootste deel van hun leven in grote, verrijkte en sociale omgevingen te laten verblijven. Vooruitgang op het gebied van dierenwelzijn is belangrijk in basislaboratoria, niet alleen om ethische redenen, maar ook om wetenschappelijke redenen. Dieren die kunnen bewegen en socialiseren, zouden moeten dienen als betere modellen voor ziektetoestanden die van nature geen beperking of ontbering met zich meebrengen. Verder betekent het zelfvoorzienende karakter van de gedragssessies in dit protocol dat mensen niet aanwezig hoeven te zijn terwijl gedragsgegevens worden verzameld. De aanwezigheid van mensen in een laboratorium kan gedragsgegevens beïnvloeden, soms differentieel, afhankelijk van de mens in kwestie, hoe goed ze zijn getraind en hoe ze met dieren omgaan 2,19. Dergelijke ongecontroleerde en variabele effecten op de gegevens kunnen met het huidige protocol tot een minimum worden beperkt.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben geen conflicten te onthullen.

Dankbetuigingen

Dit werk werd gedeeltelijk gefinancierd door de Beatrice H. Barrett-schenking voor onderzoek naar neuro-operante relaties aan de Universiteit van Noord-Texas (UNT). We zijn dankbaar voor de inbreng en hulp van alle leden van het Neuroplasticity and Repair Laboratory, in het bijzonder Valerie Rojas, Mary Kate Moore, Cameron Scallon en Hannah McGee.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
3D printer Overleg met lokale makerspace
boutBoltdepot13466-32 of 8-32 door  0.5"
boutBoltdepot13486-32 of 8-32 door  0.75"
deur scharnierXJS (Amazon)43398-162341" kast roestvrijstalen deurscharnier set; Optioneel (als "perfect scharnier" niet is afgedrukt)
boorElke elektrische boor werkt
veerNieko (Amazon)50456AKies en pas veer aan op basis van ORT-grootte en gewenste spanning
gekristalliseerde suiker
vastzetmoerenBoltdepot25516-32 of 8-32
meetlint
microcontrollerArduinoA000066Arduino Uno
microschakelaarSparkfunKW4-Z5Fmini microschakelaar (SPDT-rolhendel)
One Rat Turnstile (ORT)VulintusNeem contact op met het bedrijf om een offerte aan te vragen als deze niet zelf is te monteren
Operant Chambers naar wens voor gedragsbeoordeling: Voor dit experiment gebruikten we geautomatiseerde isometrische trekkamers van Vulintus VulintusGeen cat #: neem contact op met VulintusNeem contact op met Vulintus voor een offerte
PLA-filament OVERTURE (Amazon)UK-MATTEPLA17511
plexiglasLesnlok (Amazon)B09P74K7BRhelder, 1/8" dik, op maat gesneden
plexiglas snijder
python programmaPython Software Foundationsoftware op aanvraag beschikbaar
RFID-lezerPriority 1 DesignRFIDRW-E-USBMet antenne
RFID-tagUnified Information DevicesUC-1485-10
staafBoltdepot23632gesneden tot > 3.5"
Roterend gereedschapGebruikt om gat te boren in apparaat en koloniekooien voor ORT; elk hardware bruikbaar
schuurpapierHSYMQ (Amazon)TOMPOL-1118-1915-11
doppensetElke doppenset werkt
soldeerbout
superlijm234790
draadPlusivo (Amazon)EAN0721248989789

Referenties

  1. Whishaw, I. Q., Kolb, B. The behavior of the laboratory rat: A handbook with tests. , Oxford university press. (2004).
  2. Sorge, R. E., et al. Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents. Nature Methods. 11 (6), 629-632 (2014).
  3. Ottesen, J. L., Weber, A., Gürtler, H., Mikkelsen, L. F. New housing conditions: Improving the welfare of experimental animals. Alternatives to Laboratory Animals. 32 (Suppl 1B), 397-404 (2004).
  4. Arakawa, H. Ethological approach to social isolation effects in behavioral studies of laboratory rodents. Behavioural Brain Research. 341, 98-108 (2018).
  5. Simpson, J., Kelly, J. P. The impact of environmental enrichment in laboratory rats-behavioural and neurochemical aspects. Behavioural Brain Research. 222 (1), 246-264 (2011).
  6. Van Praag, H., Kempermann, G., Gage, F. H. Neural consequences of enviromental enrichment. Nature Reviews Neuroscience. 1 (3), 191-198 (2000).
  7. Hays, S. A., et al. The isometric pull task: A novel automated method for quantifying forelimb force generation in rats. Journal of Neuroscience Methods. 212 (2), 329-337 (2013).
  8. Wong, C. C., Ramanathan, D. S., Gulati, T., Won, S. J., Ganguly, K. An automated behavioral box to assess forelimb function in rats. Journal of Neuroscience Methods. 246, 30-37 (2015).
  9. Sindhurakar, A., Butensky, S. D., Carmel, J. B. Automated forelimb tasks for rodents: Current advantages and limitations, and future promise. Neurorehabilitation and Neural Repair. 33 (7), 503-512 (2019).
  10. Sindhurakar, A., et al. An automated test of rat forelimb supination quantifies motor function loss and recovery after corticospinal injury. Neurorehabilitation and Neural Repair. 31 (2), 122-132 (2017).
  11. Gallistel, C., et al. Screening for learning and memory mutations: A new approach. Acta psychologica Sinica. 42 (1), 138(2010).
  12. Fenrich, K. K., et al. Improved single pellet grasping using automated ad libitum full-time training robot. Behavioural Brain Research. 281, 137-148 (2015).
  13. Brenneis, C., et al. Automated tracking of motion and body weight for objective monitoring of rats in colony housing. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 56 (1), 18-31 (2017).
  14. Pereira, T. D., et al. Sleap: A deep learning system for multi-animal pose tracking. Nature Methods. 19 (4), 486-495 (2022).
  15. Lauer, J., et al. Multi-animal pose estimation, identification and tracking with deeplabcut. Nature Methods. 19 (4), 496-504 (2022).
  16. Butcher, G., et al. An apparatus for automatically training and collecting individualized behavioral data with socially housed rodents. Journal of Neuroscience Methods. 365, 109387(2022).
  17. Winter, Y., Schaefers, A. T. A sorting system with automated gates permits individual operant experiments with mice from a social home cage. Journal of Neuroscience Methods. 196 (2), 276-280 (2011).
  18. Rivalan, M., Munawar, H., Fuchs, A., Winter, Y. An automated, experimenter-free method for the standardised, operant cognitive testing of rats. PLOS One. 12 (1), e0169476(2017).
  19. Deacon, R. M. Housing, husbandry and handling of rodents for behavioral experiments. Nature Protocols. 1 (2), 936-946 (2006).
  20. Lang, C. E., Lohse, K. R., Birkenmeier, R. L. Dose and timing in neurorehabilitation: Prescribing motor therapy after stroke. Current Opinion in Neurology. 28 (6), 549(2015).
  21. Inventing a supercage for rats. Butcher, G., Becker, A., Davidson, A., Baltazar, M., Armshaw, J., Cruz, S. Poster presentation at Association for Behavior Analysis International Conference, Chicago, IL, , (2019).
  22. Engineering an enriched environment operant chamber and its implications. Davidson, A., et al. Poster Presented at the Texas Association for Behavior Analysis Annual Conference, , Worth, TX. (2019).
  23. Windle, V., et al. An analysis of four different methods of producing focal cerebral ischemia with endothelin-1 in the rat. Experimental Neurology. 201 (2), 324-334 (2006).
  24. Reppucci, C. J., Veenema, A. H. The social versus food preference test: A behavioral paradigm for studying competing motivated behaviors in rodents. MethodsX. 7, 101119(2020).
  25. Borland, J. M., et al. A novel operant task to assess social reward and motivation in rodents. Journal of Neuroscience Methods. 287, 80-88 (2017).
  26. Tzschentke, T. M. Review on cpp: Measuring reward with the conditioned place preference (cpp) paradigm: Update of the last decade. Addiction Biology. 12 (3-4), 227-462 (2007).
  27. Salamone, J. D., Correa, M. Neurobiology and pharmacology of activational and effort-related aspects of motivation: Rodent studies. Current Opinion in Behavioral Sciences. 22, 114-120 (2018).
  28. Shull, R. L. Bouts, changeovers, and units of operant behavior. European Journal of Behavior Analysis. 12 (1), 49-72 (2011).
  29. Gottlieb, E., et al. The bidirectional impact of sleep and circadian rhythm dysfunction in human ischaemic stroke: A systematic review. Sleep Medicine Reviews. 45, 54-69 (2019).
  30. Lo, E. H., et al. Circadian biology and stroke. Stroke. 52 (6), 2180-2190 (2021).
  31. Meng, H., Liu, T., Borjigin, J., Wang, M. M. Ischemic stroke destabilizes circadian rhythms. Journal of Circadian Rhythms. 6 (1), 1-13 (2008).
  32. Stern, R. A., Bachman, D. L. Depressive symptoms following stroke. The American Journal of Psychiatry. 148 (3), 351-356 (1991).
  33. Rapolienė, J., Endzelytė, E., Jasevičienė, I., Savickas, R. Stroke patients motivation influence on the effectiveness of occupational therapy. Rehabilitation Research and Practice. 2018, (2018).
  34. Robinson, R. G., Jorge, R. E. Post-stroke depression: A review. American Journal of Psychiatry. 173 (3), 221-231 (2016).
  35. Faraji, J., et al. Sex-specific stress and biobehavioral responses to human experimenters in rats. Frontiers in Neuroscience. 16, 965500(2022).

Herprints en machtigingen

Tags

Gedragsanalyse bij rattenzelfinitieel gedragcolony housinggeautomatiseerde gedragsgegevensprestaties van de geschoolde voorpootradiofrequentie-identificatietrekkrachtanalysecircadiane patronengedragsverrijking
Het verzamelen van zelfgeïnitieerde gedragsgegevens van ratten om tekorten na een beroerte te karakteriseren
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.