Methodenartikel

Kenmerken van pijnveranderingen bij ratten met zenuwbeschadiging binnen 24 uur na eenmalige Tuina-interventie

1.4K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/65593

⸱

26 januari 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Acupuncture-Moxibustion and Tuina, Beijing University of Chinese Medicine, 2Beijing Hospital

In dit artikel

Samenvatting

We presenteren een protocol met behulp van de tuina-manipulatiesimulator om de tuina-therapie "Three-Manipulation and Three-Acupoint" tuina-therapie uit te voeren voor ratten met kleine chronische vernauwingsletsels en evalueren de effectieve pijnstillende tijdstippen van tuina binnen 24 uur door pijnveranderingen te testen door middel van gedragsanalyse en veranderingen in ontstekingsfactorexpressie met behulp van enzymgekoppelde immunosorbenttest.

Samenvatting

Van Tuina, als uitwendige behandelmethode van de traditionele Chinese geneeskunde, is in klinisch en fundamenteel onderzoek bewezen dat het een pijnstillend effect heeft op perifere neuropathische pijn (pNP). Het optimale tijdstip voor het pijnstillende effect van tuina kan echter variëren afhankelijk van verschillende letselsensaties, wat van invloed is op de verkenning van het initiatiemechanisme van tuina-analgesie.

Het onderzoek gebruikte kleine chronische vernauwingsletsel (kleine CCI) modelratten om pNP te simuleren en gebruikte de intelligente tuina-manipulatiesimulator om de drie methoden (puntdrukken, plukken en kneden) en drie acupunten (Yinmen BL37, Chengshan BL57 en Yanglingquan GB34) voor het uitvoeren van tuina-therapie te simuleren. De studie evalueerde de veranderingen in pijn binnen 24 uur en het optimale tijdstip voor de werkzaamheid van tuina-analgesie bij ratten met kleine CCI-modellen door koudegevoeligheidsdrempel (CST), mechanische onttrekkingsdrempel (MWT) en thermische terugtrekkingslatentie (TWL) te testen. Bovendien evalueerde de studie veranderingen in de expressie van IL-10 en TNF-α door middel van Elisa-detectie. De resultaten tonen aan dat tuina zowel onmiddellijke als aanhoudende pijnstillende effecten heeft. Voor de drie verschillende letselgevoeligheidsdrempels van CST, MWT, TWL en twee cytokines van IL-10 en TNF-α is de pijnstillende werkzaamheid van tuina binnen 24 uur na interventie significant verschillend op verschillende tijdstippen.

Inleiding

Perifere neuropathische pijn (pNP) verwijst naar pijn veroorzaakt door een laesie of ziekte van het perifere somatosensorische zenuwstelsel, die zich manifesteert als een reeks symptomen en tekenen, met hyperalgesie als een van de belangrijkste symptomen 1,2. Hyperalgesie is een verhoogde ervaring van pijn veroorzaakt door een schadelijke stimulus, waaronder speldenprik, kou en hitte3. Er zijn grote epidemiologische studies uitgevoerd, die aantonen dat pNP de meest voorkomende is, met een prevalentie van 6,9%-10% bij neuropathischepijn4. pNP kan worden veroorzaakt door meerdere ziekten, waaronder beschadiging van de zenuw, postherpetische neuralgie, pijnlijke diabetische polyneuropathie, multiple sclerose, beroerte, kanker, enz.5. Tegenwoordig is medicatie de belangrijkste methode voor de behandeling van pNP, maar het effect is niet ideaal; En de bijwerkingen zijn aanzienlijk, wat de belangrijkste reden is voor de hoge economische last voor individuen en de samenleving6.

Tuina is een groene, economische, veilige en effectieve uitwendige behandelmethode van de traditionele Chinese geneeskunde7. Veel klinische studies hebben het pijnstillende effect van tuina op pNP bewezen, en basisstudies hebben de onmiddellijke en cumulatieve pijnstillende effecten van tuina 8,9 geverifieerd. Het belangrijkste cumulatieve analgetische mechanisme van tuina is het verminderen van de niveaus van ontstekingsfactoren en het remmen van de activering van gliacellen10,11. Het eerdere onderzoek bevestigde het cumulatieve pijnstillende effect van tuina en vond differentieel tot expressie gebrachte genen (DEG's) in de dorsale wortelganglia (DRG) en spinale dorsale hoorn (SDH) van ratten met heupzenuwbeschadiging na 20 keer tuina-behandeling, voornamelijk gerelateerd aan eiwitbinding, drukrespons en neuronale projectie12. In recente studies is bevestigd dat tuina een onmiddellijk pijnstillend effect heeft en dat 1-voudige tuina-interventie de hyperalgesie van kleine CCI-ratten zou kunnen verlichten en vooral thermische hyperalgesie effectiever zou kunnen verlichten13. Het optimale tijdstip voor het pijnstillende effect van tuina kan echter variëren, afhankelijk van het letselgevoel (kou, hitte, mechanisch), wat van invloed is op de verkenning van het initiatiemechanisme van tuina-analgesie.

Inflammatoire mediatoren kunnen pijnreceptoren sensibiliseren en activeren, wat leidt tot verminderde ontladingsdrempels en ectopische afscheidingen, wat bijdraagt aan perifere sensibilisatie14,15. Na perifere zenuwbeschadiging is TNF-α een initiator van de ontstekingsreactie, die de synthese van ontstekingsfactoren zoals IL-10 en IL-1β kan bevorderen, directe weefselontstekingsschade kan veroorzaken, lokale zenuwuiteinden kan stimuleren en pijn kan veroorzaken 16,17,18. Tuina kan pijnstillende effecten bereiken door de expressie van ontstekingsfactoren zoals TNF-α, IL-10, IL-6 en IL-1β 19,20,21 te verminderen. De studie selecteerde kleine CCI-modelratten om klinische pNP te simuleren en selecteerde verschillende tijdstippen voor gedragstesten van koude, thermische en mechanische stimulatiepijn na een 1-voudige tuina-interventie door koudegevoeligheidsdrempel (CST), mechanische terugtrekkingsdrempel (MWT), thermische terugtrekkingslatentie (TWL), en kies IL-10 en TNF-α in het serum door enzymgekoppelde immunosorbenttest (ELISA), om het tijdstip te selecteren waarop het pijnstillende effect van Tuina significant is, wat een basis vormt voor de studie van het initiatiemechanisme van Tuina-analgesie in het latere stadium.

Protocol

Het Comité voor Dierenbescherming en Gebruik van de Beijing University of Chinese Medicine (BUCM-4-2022082605-3043) keurde alle procedures goed die in deze studie werden gebruikt.

1. Dieren en onderzoeksopzet

  1. Verkrijg 49 mannelijke Sprague-Dawley (SD) ratten van 8 weken oud, met een gewicht van 200 ± 10 g.
  2. Gebruik een willekeurige getallentabelmethode om de ratten te verdelen in een schijnoperatiegroep (n = 7), een modelgroep (n = 7), en onmiddellijk na de tuina-groep (n = 7), 6 uur na de tuina-groep (n = 7), 12 uur na de tuina-groep (n = 7), 18 uur na de tuina-groep (n = 7) en 24 uur na de tuina-groep (n = 7).

2. Opstelling van een rattenmodel van kleine CCI (figuur 1)

OPMERKING: De methode voor het modelleren van de kleine CCI was zoals beschreven in eerdere studies 22,23,24.

  1. Laat adaptieve voeding van SD-rat gedurende 7 dagen toe. Laat de rat 2-3 uur vasten voordat hij gaat modelleren.
  2. Plaats de rat in een doos gevuld met 3-5% isofluraan voor anesthesie door een anesthesieapparaat. Breng na verdoving een oogheelkundige zalf aan op beide ogen om uitdroging te voorkomen.
  3. Bevestig de rat in buikligging op een tafel, scheer de vacht van het rechterheupgewricht en desinfecteer het gebied met jodium (Figuur 1B).
  4. Bevestig het chirurgische vlak van anesthesie door in de teen te knijpen. Maak een huidincisie van ongeveer 0,5-1 cm langs de looprichting van de heupzenuw, scheid de spierlaag botweg en leg de onderkant van de piriformis-spier volledig bloot (Figuur 1C).
  5. Bind losjes een resorbeerbare chromen darmhechting (type 4-0) rond de zenuw zonder de bloedcirculatie van extraneurale vaten te onderbreken. Stel de heupzenuw van ratten uit de schijngroep gedurende 3 minuten bloot zonder ligatie (Figuur 1A,D,E).
  6. Gebruik een spuit zonder naald om 1 druppel 0,9% natriumchloride-oplossing op de heupzenuw aan te brengen om deze te resetten. Hecht laag voor laag een geschikte hoeveelheid ontstekingsremmend medicijn zoals amoxicillinepoeder, hecht de spierlaag met 1 hechting en hecht de huid met 2 hechtingen (Figuur 1F).
    OPMERKING: Zorg er van stap 2.3 tot stap 2.6 voor dat 2%-3% isofluraan in de mond en neus van de ratten stroomt om de anesthesie te behouden.
  7. Houd de rat warm en wacht tot hij wakker wordt. Breng de ratten terug naar de broedruimte.

3. Intelligente interventie in de simulator van de tuinamanipulatie (Figuur 2)

OPMERKING: De behandeling begon op de 7edag nadat het model was vastgesteld.

  1. Stel de instrumentparameters in op een stimulatiekracht van 4 N, een stimulatiefrequentie van 60 keer/min en een temperatuur van 36 °C op de bedieningsinterface van de computer. Plaats de rat in de ratfixator en leg de locatie van de acupunten van de achterpoten bloot (Figuur 2A, zelf ontwikkelde machine, patent nr. ZL 2023 20511277.5)25.
  2. Activeer het instrument om de puntpers-, pluk- en kneedmethoden uit te voeren (Tabel 1). Klik op de punten Aanwijzen, Plukken en Kneden die op het computerscherm worden weergegeven in de volgorde op de Yinmen (BL37), Chengshan (BL57) en Yanglingquan (GB34) punten (Tabel 2) aan de modelzijde van de rat van de tuina-groep (Figuur 2B, C)26.
    1. Voer voor de tuinagroep één interventie eenmaal per dag uit gedurende 1 dag, met een kracht van 4 N, een frequentie van 60 keer/min en in totaal 9 minuten per punt per methode.
    2. Houd de schijn- en modelgroepen 9 minuten in bedwang, met hetzelfde aantal keren als de tuina-groep.

4. Gedragsmatige meting

OPMERKING: Na de interventie werden de drempel voor koudegevoeligheid (CST), mechanische terugtrekkingsdrempel (MWT) en thermische terugtrekkingslatentie (TWL) getest in respectievelijk de 5 tuina-subgroepen, de modelgroep en de schijnoperatiegroep. De testtijd voor de model- en schijngroepen is hetzelfde als die voor de tuina-groep (d.w.z. 24 uur).

  1. Koudegevoeligheidsdrempel (CST)
    1. Plaats de rat op een intelligente pijndetector met koude en warme platen met een oppervlaktetemperatuur van 4 ± 1 °C (klik op START > SET) en dek deze af met een doorzichtige plastic kooi.
    2. Observeer de verkennende activiteiten van de ratten gedurende 5 minuten totdat ze zijn geacclimatiseerd aan de doorzichtige plastic kooi.
    3. Observeer en noteer het aantal voetliften aan de operatieve zijde van de achterpoot binnen de volgende 5 minuten.
      OPMERKING: Het aantal voetliften veroorzaakt door veranderingen in de activiteit of houding van de rat is niet inbegrepen.
  2. Mechanische onttrekkingsdrempel (MWT)
    1. Leg de rat op het bodemoppervlak als een raster (0,5 cm × 0,5 cm) in een testdoos gedurende 15-30 minuten voordat u gaat testen.
    2. Verplaats de sonde van de pijn (type EVF 5) naar het midden van het rechter achterste plantaire gebied van de rat, verhoog de druk lineair met de hand en noteer de drempel die op het instrumentenscherm wordt weergegeven wanneer de rat zijn voeten optilt en likt. Meet 5 keer onafgebroken, met een meetinterval van telkens 10 minuten.
  3. Thermische onttrekkingslatentie (TWL)
    1. Plaats de rat in een testbox met een glazen bodem en laat hem 15 minuten wennen voordat u met de test begint.
      OPMERKING: De latente periode van thermische contractie voetreflex werd gedetecteerd met behulp van een thermisch stimulatie pijninstrument (PL200 type).
    2. Stel parameters in: de maximale testtijd is 30 s en de intensiteit is 50%. Klik op de knoppen START en richting.
    3. Verplaats de infraroodsonde naar het midden van het rechter achterste plantaire gebied van de rat en start de detectie.
    4. Noteer de latentie van de voetterugtrekkingsreflex wanneer de rat zijn voeten optilt en likt. Meet de latentie 5 keer onafgebroken, met een interval van 10 minuten tussen elke meting.

5. ELISA

  1. Verdoof de rat met een dosis van 35 ml/100 g 4% chloorhydraat voor intraperitoneale injectie-anesthesie na gedragstesten. Snijd de huid en spieren in de lengterichting langs het midden van de buik van de rat om de inwendige organen bloot te leggen.
  2. Gebruik een ballast en naaldhouder voor pure scheiding, identificeer de abdominale aorta, neem vers bloed af en bewaar een monster voor testen. Gebruik een scheidingsbuisje om het serum te scheiden. Neem het serummonster voor onmiddellijke detectie, of verpak het apart en bewaar het in de koelkast bij -80 ° C.
    OPMERKING: Laat het bloedmonster voor het scheiden 30 minuten agglutineren.
  3. Bereid het serum van ratten voor op het testproces en bewaar ze gedurende ten minste 30 minuten bij kamertemperatuur (RT).
  4. Zet lege putjes en standaard monsterputjes op voor het te testen monster. Voeg in totaal 50 μl van de standaardmonsters toe aan de enzymgekoppelde plaat. Voeg eerst 40 μL verdunningsmiddel toe en voeg vervolgens 10 μL monster toe aan het te testen monsterputje.
    OPMERKING: Bij het toevoegen van monsters is het noodzakelijk om ze toe te voegen aan de bodem van het enzym-gelabelde putje, ervoor te zorgen dat ze de wand van het putje zo min mogelijk raken, en voorzichtig te schudden en goed te mengen. De lege put bevat geen monsters of met enzymen gelabelde reagentia en de andere stappen zijn hetzelfde. De uiteindelijke verdunning van het monster is 5 keer.
  5. Nadat u de plaat met een afdichtingsfolie hebt verzegeld, plaatst u deze 30 minuten in een incubator van 37 °C.
  6. Verdun 30 keer de geconcentreerde wasoplossing met gedestilleerd water en zet opzij.
  7. Verwijder de afdichtingsfolie, giet de vloeistof uit het putje en schud het droog. Vul elk putje met wasmiddel, laat het 30 s staan en giet het dan uit. Herhaal deze stap 5 keer en schud het ten slotte droog.
  8. Voeg mierikswortelperoxidase-gelabelde avidine toe (100 μL per putje).
  9. Voeg 50 μL kleurontwikkelaar A toe aan elk putje en voeg vervolgens 50 μL kleurontwikkelaar B toe. Schud en meng voorzichtig en plaats het 10 minuten in het donker in een omgeving van 37 °C.
  10. Voeg 50 μL van de stopoplossing per putje toe om de reactie te beëindigen.
    OPMERKING: Op dit punt wordt de blauwe kleur geel.
  11. Zet de lege putjes op nul en meet de optische dichtheid (OD-waarde) van elk putje in volgorde bij een golflengte van 450 nm.

Resultaten

CST: Vergeleken met de modelgroep was het aantal voetliften in de groep 6 uur na tuina significant verminderd, en het verschil was statistisch significant (P < 0,05). Vergeleken met de schijngroep was het aantal voetliften in de modelgroep significant toegenomen en was het verschil statistisch significant (P < 0,05) (Tabel 3, Figuur 3).

MWT: Vergeleken met de modelgroep was de MWT van elke subgroep van tuina significant hoger dan die van de modelgroep, behalve voor 18 uur na tuina, en de MWT van de 24 uur na tuina was significant hoger dan die van de modelgroep, met een statistisch significant verschil (P < 0,05). Vergeleken met de sham operation groep was de MWT in de modelgroep significant lager, met een statistisch significant verschil (P < 0,01) (Tabel 3, Figuur 4).

TWL:
Vergeleken met de modelgroep was er een significante toename direct na tuina, 6 uur na tuina en 18 uur na tuina, met een statistisch significant verschil. Vergeleken met de sham operation groep nam de modelgroep significant af, met een statistisch significant verschil (P < 0,01) (Tabel 3, Figuur 5)

ELISA
IL-10: Vergeleken met de modelgroep was er een significante afname 6 uur en 24 uur na tuina, met een statistisch significant verschil (P < 0,01) (Tabel 4, Figuur 6).

TNF-α: Vergeleken met de modelgroep was er een significante afname direct na tuina (**P < 0,01), 6 uur na tuina (**P < 0,01) en 24 uur na tuina (**P < 0,05), met een statistisch significant verschil (Tabel 4, Figuur 6)

figure-results-1
Figuur 1: Opstelling van een rattenmodel van kleine CCI. (A) Een chromische darmhechting (4-0). (B) Voorbereiding van de huid. (C) Incisie. (D) Blootleggen van de heupzenuw. (E) Resorbeerbare chromische darmhechting (type 4-0) rond de zenuw. (F) Het hechten van de spierlaag en de huid. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-2
Figuur 2: Intelligente tuina manipulatie simulator behandeling. (A) De Intelligente Tuina Manipulatie Simulator (patent nr. ZL ZL 2023 20511277.5). (B) De posities van Yinmen (BL37), Chengshan (BL57) en Yanglingquan (GB34). (c) Stimuleren van Yinmen (BL37). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-3
Figuur 3: Resultaten van de koudegevoeligheidsdrempel (CST) van ratten in elke groep. *P < 0,05, vergeleken met de modelgroep, #P <0,05, vergeleken met de schijngroep. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-4
Figuur 4: Resultaten van de mechanische ontwenningsdrempel (MWT) van ratten in elke groep. *P <0,05, vergeleken met de modelgroep, #P < 0,05, vergeleken met de schijngroep. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-5
Figuur 5: Resultaten van thermische terugtrekkingslatentie (TWL) van ratten in elke groep. *P < 0,05, **P < 0,01, vergeleken met de modelgroep; #P <0,05, ##P < 0,01, vergeleken met de schijngroep. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-6
Figuur 6: Veranderingen in serum IL-10 en TNF-α niveaus van ratten in elke groep (Gemiddelde ± SD, n = 7), "*P<0.05, **P<0.01, vergeleken met de modelgroep. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Drie-methodeMethodenClassificatiesFuncties
Punt-persenOpwarmen en ontstoppenOpwarming van meridianen en deblokkeren van collateralen
PlukkenOntspanningInwerken op de zenuwstam en het behandelen van gevoelloosheid of pijn in de ledematen
KnedenOntspanningVerlichten van spierspasmen

Tabel 1: Drie stimuleringsmethoden.

Drie-acupuntAcupuntenMeridianenZenuwenSpieren
Yinmen (BL37)Blaasmeridiaan van voet-taiyangHeupzenuw stamDe spier van de biceps femoris
Chengshan (BL57)SchenbeenzenuwGastrocnemius spier
Yanglingquan (NL34)Galblaasmeridiaan van voet-ShaoyangGemeenschappelijke peroneale zenuwVoorste scheenbeenspieren

Tabel 2: Drie acupunten gebruikt in dit onderzoek.

VoorwendenModelTuina
0 uur6 uur12 uur18 uur24 uur
CST12,8 ± 2,3825 ± 5.15#19,6 ± 10,9913,2 ± 2,49*16,4 ± 8,4117 ± 5.5719 ± 8,34
MWT69,47 ± 10,3540.63 ± 9.65##44,19 ± 10,7246,58 ± 9,4742.83 ± 11.4140,1 ± 5,5948,33 ± 8,7*
TWL12.06 ± 3.458.16 ± 2.09##12.09 ± 3.86**10.07 ± 2.7*9,44 ± 2,5210,42 ± 2,49**9,72 ± 2,29

Tabel 3: CST-, MWT- en TWL-resultaten van ratten in elke groep (gemiddelde ± SD, n = 7). *P<0.05, **P<0.01, vergeleken met de modelgroep; #P<0.05, ##P<0.01, vergeleken met de schijngroep.

VoorwendenModelTuina
0 uur6 uur12 uur18 uur24 uur
IL-1055,10 ± 1,37**70.27 ± 6.2267,28 ± 1,2861,41 ± 3,36**67,98 ± 1,8569,03 ± 6,2957.16 ± 1.30**
TNF-α311,52 ± 13,45**339,33 ± 24,50309,47 ± 8,37**309,99 ± 14,95**334,62 ± 21,85319,22 ± 10,38316,24 ± 8,72*

Tabel 4: Veranderingen in serum IL-10- en TNF-α-spiegels van ratten in elke groep (gemiddelde ± SD, n = 7, pg/ml). *P < 0,05, **P < 0,01, vergeleken met groepsmodel (*P < 0,05, **P < 0,01.)

Discussie

De studie gebruikte het kleine CCI-model om pNP te simuleren veroorzaakt door klinisch ischiaszenuwletsel. Het kleine CCI-model omvat de continue, chronische compressie en fixatie van de zenuwstam door ligatie, vergezeld van de geleidelijke zwelling van de ligatuur, wat resulteert in oedeem in de heupzenuw en het vormen van stabiele chronische pijn in 3-5 dagen 27,28. In de voorstudie ontdekte de onderzoeksgroep dat de kleine CCI-modelgroep op de 7edag na het modelleren stabieler was dan de klassieke modelgroep, waardoor deze geschikter was voor experimenteel ontwerp op korte termijn. Daarom hebben we dit tijdstip gekozen voor de tuina interventie.

Het eerdere onderzoek heeft geverifieerd dat de intelligente tuina-manipulatiesimulator (dier) effectief pijn kan verlichten bij ratten met heupzenuwbeschadiging na 20 sessies tuina-behandeling met behulp van de "Drie-Methode en Drie-Acupunt"29,30,31. Bovendien ontdekte de onderzoeksgroep dat tuina eenmaal de pijnovergevoeligheidssymptomen van kleine CCI-ratten effectief kan verlichten, met name de thermische hyperalgesie13. De studie hanteert de methoden voor puntpersen, plukken en kneden als de drie behandelingsmethoden. De puntpersmethode is een opwarmings- en deblokkeringstechniek die de functie heeft om meridianen op te warmen en collateralen te deblokkeren. De plukmethode is een ontspanningstechniek die inwerkt op de zenuwstam en gevoelloosheid of pijn in de ledematen kan behandelen. De kneedmethode is een ontspanningstechniek die spierspasmen kan verlichten, vermoeidheid kan elimineren en pijn in het geblesseerde gebied kan verlichten (tabel 1). De studie selecteert Yinmen (BL37), Chengshan (BL57) en Yanglingquan (GB34) als de drie acupunten voor behandeling (tabel 2). Volgens het principe van acupuntselectie langs meridianen en lokaal in acupunctuur en moxibustie, behoren drie acupunten tot de blaasmeridiaan van voet-Taiyang en de galblaasmeridiaan van voet-Shaoyang. Volgens anatomische zenuwlokalisatie bevindt Yinmen (BL37) zich op de heupzenuw en zijn vertakkingen, Chengshan (BL57) bevindt zich op de scheenbeenzenuw en Yanglingquan (GB34) bevindt zich op de gemeenschappelijke peroneale zenuw. Afhankelijk van de locatie van de anatomische spier bevinden de drie acupunten zich rond de biceps femoris-spier, de gastrocnemius-spier en de voorste scheenbeenspieren (tabel 2). Daarom kunnen door de tussenkomst van de drie methoden en drie acupunten de relevante gebieden van acupunt-zenuw-spier worden gestimuleerd. In deze studie werden, na het vormen van stabiele chronische pijn en één interventie met tuina, gedragsveranderingen in pijn gedetecteerd, wat verder verifieerde dat tuina een onmiddellijk pijnstillend effect heeft en verschillende therapeutische betekenistijdstippen heeft voor verschillende letselreceptoren, wat therapeutische ondersteuning biedt voor de volgende stap in de studie van het initiatiemechanisme van tuina-analgesie.

De studie gebruikte CST, MWT en TWL als indicatoren om de werkzaamheid van tuina voor verschillende letselsensaties te onderzoeken. De klinische manifestaties van geïnduceerde pijn bij pNP omvatten voornamelijk hyperalgesie en allodynie, namelijk door koude en warme stimulatie geïnduceerde pijn en mechanische tactiel-geïnduceerde pijn4. Momenteel zijn de klassieke kwantitatieve gedragsonderzoeksindicatoren voor deze twee pijnsensaties CST, MWT en TWL. Bij CST-tests is de koudeplaattest, de ZH-6C intelligente pijntester met koude en warme plaat die in dit experiment wordt gebruikt, relatief objectief, minder beïnvloed door omringende omgevingsfactoren, heeft een constante temperatuur en heeft een hoge precisie32,33. In fundamenteel onderzoek worden Von Frey-filamenten vaak gebruikt om MWT te schatten, wat een van de klassieke indicatoren is voor het evalueren van neuropathische pijn. Het is voornamelijk gericht op acupunctuurpijn veroorzaakt door mechanische stimulatie om mechanische, tactiele, geïnduceerde pijn bij knaagdieren te evalueren34,35. De Hargreaves-test maakt gebruik van een thermische pijnstimulator om de reactie van knaagdieren op thermische pijngevoeligheid te detecteren en te evalueren en wordt gebruikt om het herstel van pijngevoeligheid of thermische pijnrespons na zenuwbeschadiging te evalueren om te observeren of de achterpoten van het dier een vernauwingsreactie hebben als gevolg van hitte. Het instrument detecteert de beweging van de achterpoten van het dier36 en de controller schakelt automatisch de infraroodstoptimer34 uit, die bekend staat als TWL. Experimenten tonen aan dat de gevoeligheid van kleine CCI-modelratten voor TWL optimaal is38. Daarom is de kwantitatieve onderzoeksmethode voor het gedrag van kleine CCI-modelratten deze keer het gebruik van een koudplaatexperiment, elektronische mechanische prikapparatuur en thermische prikapparatuur om te detecteren.

De significante tijdstippen van curatieve effecten op verschillende nociceptieve sensaties na vroege tuina-interventie zijn verschillend. Momenteel is voorlopig onderzoek gedaan naar de klinische werkzaamheid en het mechanisme van tuina-analgesie. Ons eerdere onderzoek richtte zich vooral op het pijnstillende mechanisme na een bepaald aantal tuina. In de afgelopen 2 jaar is er onderzoek gedaan naar het pijnstillende mechanisme in de beginfase van tuina om te onderzoeken hoe tuina-analgesie wordt geïnitieerd. In deze studie werden "drie methoden en drie acupunten" gebruikt om eenmaal in te grijpen bij kleine CCI-modelratten. Vervolgens werden 5 tijdstippen geselecteerd voor CST-, MWT- en TWL-detectie om de veranderingen in temperatuur en mechanisch tactiel gevoel van kleine CCI-modelratten te observeren. Deze studie gebruikte ELISA om veranderingen in serum IL-10- en TNF-α-spiegels van ratten te detecteren na gedragstesten. De resultaten toonden aan dat na één interventie met tuina, vergeleken met de modelgroep, beide direct verbeterden. Dit bevestigde nogmaals de eerdere onderzoeksresultaten dat tuina een onmiddellijke pijnstillende werking had. Voor verschillende soorten pijnsensaties zijn de tijdstippen waarop het pijnstillende effect significant is echter niet hetzelfde. In termen van CST was er statistische significantie 6 uur na tuina; In termen van MWT was er statistische significantie 24 uur na tuina; In termen van TWL was er significante statistische significantie 6 uur na tuina, en significante statistische significantie onmiddellijk en 18 uur na tuina; In termen van serum IL-10-niveau was er een significante afname 6 uur na tuina en 24 uur na tuina, met een statistisch significant verschil. In termen van serum TNF-α niveau was er een significante afname onmiddellijk na tuina, 6 uur na tuina en 24 uur na tuina, met een statistisch significant verschil. Het geeft aan dat hoewel het pijnstillende effect van tuina kan worden gehandhaafd, er een significante vertraging is in het tijdstip van werkzaamheid voor door koude stimulatie geïnduceerde pijn en mechanisch tactiele-geïnduceerde pijn, en het is onmiddellijk effectief en heeft een meer significante en blijvende werkzaamheid voor door thermische stimulatie geïnduceerde pijn. Ons laboratorium onderzoekt verder de veranderingen in eiwitten en genen die verband houden met de transient receptor potential (TRP)-eiwitten en genen die verband houden met koude, warme en mechanische gevoeligheid, evenals andere ontstekingsfactoren zoals TGF-β en IL-6, om het pijnstillende initiatiemechanisme van tuina verder te onderzoeken.

Samenvattend kan op basis van de resultaten van deze studie worden geconcludeerd dat de tijdstippen waarop de door tuina aangetaste eiwitten of routes kunnen functioneren, kunnen verschillen, wat resulteert in verschillende tijdstippen voor significante pijnstillende effecten. Verder diepgaand onderzoek is nodig om het initiatiemechanisme van tuina-analgesie te verkennen en een basis te bieden voor klinisch onderzoek naar de werkzaamheid van tuina.

Openbaarmakingen

Er worden geen belangenconflicten, financieel of anderszins, verklaard door de auteurs.

Dankbetuigingen

De auteurs hebben financiering ontvangen voor onderzoek, schrijven en publicatie van dit artikel van de National Natural Science Foundation of China (nrs. 82074573 en 82274675) en de Beijing Natural Science Foundation (nr. 7232278).

Materialen

```html
Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Anesthesia machineRuiwode Life Technology Co., Ltd., Shenzhen, ChinaR500Apparatuur voor dierlijke respiratoire anesthesie
Chromic intestinal sutureShandong Boda Medical Products Co., Ltd., ChinaBD210903Een absorberbare chirurgische hechtdraad, hoofdzakelijk gemaakt van collageeneiwit, verwerkt uit de darmen van gezonde jonge geiten
Electronic Von Frey instrumentBioseb, USABIO-EVF5Een instrument voor het detecteren van mechanische onttrekkingsdrempel
Intelligent cold and hot plate pain detectorAnhui Zhenghua Biological Instrument Equipment Co., Ltd, China.ZH-6CEen instrument voor het detecteren van koudgevoeligheidsdrempel
IsofluraneRuiwode Life Technology Co., Ltd., Shenzhen, ChinaR510-22-10Een anestheticum
Multi-function full-wavelength microplate readerMolecular Devices (Shanghai) Co., Ltd.SpectraMax M2Een instrument voor het detecteren van optische dichtheid (OD)
Thermal analgesia deviceChengdu Techman Software Co., Ltd., ChinaPL-200Een instrument voor het detecteren van thermische onttrekkingslatentie
```

Referenties

  1. IASP taxonomy. ISAP. , Available from: https://www.iasp-pain.org/resources/terminology/#.2022 (2022).
  2. Baron, R., Binder, A., Wasner, G. Neuropathic pain: diagnosis, pathophysiological mechanisms, and treatment. Lancet Neurol. 9 (8), 807-819 (2010).
  3. Colloca, L., et al. Neuropathic pain. Nat Rev Dis Primers. 3, 17002(2017).
  4. Liu, Z., et al. A review on the mechanism of tuina promoting the recovery of peripheral nerve injury. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 6652099(2021).
  5. Scholz, J., et al. The IASP classification of chronic pain for ICD-11: chronic neuropathic pain. Pain. 160 (1), 53-59 (2019).
  6. Finnerup, N. B., et al. Pharmacotherapy for neuropathic pain in adults: a systematic review and meta-analysis. Lancet Neurol. 14 (2), 162-173 (2015).
  7. Field, T. Massage therapy research review. Complement. Ther Clin Pract. 24, 19-31 (2016).
  8. Gok Metin, Z., et al. Aromatherapy massage for neuropathic pain and quality of life in diabetic patients. J Nurs Scholarsh. 49, 379-388 (2017).
  9. Izgu, N., et al. Effect of aromatherapy massage on chemotherapy-induced peripheral neuropathic pain and fatigue in patients receiving oxaliplatin: An open label quasi-randomized controlled pilot study. Cancer Nurs. 42, 139-147 (2019).
  10. Li, Y., et al. Mild mechanic stimulate on acupoints regulation of CGRP-positive cells and microglia morphology in spinal cord of sciatic nerve injured rats. Front Integr Neurosci. 13, 58(2019).
  11. Liu, Z. F., et al. Tuina for peripherally-induced neuropathic pain: A review of analgesic mechanism. Front Neurosci. 16, 1096734(2022).
  12. Lv, T., et al. Using RNA-seq to explore the repair mechanism of the three methods and three-acupoint technique on DRGs in sciatic nerve injured rats. Pain Res Manag. 2020, 7531409(2020).
  13. Xing, F., et al. MZF1 in the dorsal root ganglia contributes to the development and maintenance of neuropathic pain via regulation of TRPV1. Neural Plast. 2019, 2782417(2019).
  14. Cohen, S. P., Mao, J. Neuropathic pain: mechanisms and their clinical implications. BMJ. 348, 7656(2014).
  15. Tao, Y., et al. Effect of Bo'fa method on the expression of IL-1β in peripheral serum and 5-HT2A in spinal cord of CCI model rats. Global Traditional Chinese Medicine. 10, 905-909 (2017).
  16. Yang, J., et al. Study on curative effect of Duhuo Jisheng decoction combined with Tuina in patients with lumbar disc herniation and changes of TXB2, TNF-α and IL-1β. Chin Arch Tradit Chin Med. 38, 44-46 (2020).
  17. Yao, C., et al. Effects of acupressure at 'Shenshu' (BL 23)on lumbar intervertebral disc degeneration and related pain in aging rats. Chin J Tradit Chin Med Pharm. 37, 4360-4365 (2022).
  18. Wang, H., et al. Exploring the mechanism of immediate analgesic effect of 1-time tuina intervention in minor chronic constriction injury rats using RNA-seq. Front Neurosci. 16, 1007432(2022).
  19. Yao, C., et al. Exploring the mechanism of tuina-induced central analgesia in rats with lumbar disc herniation based on the p38MAPK signaling pathway. Chin J Tradit Chin Med Pharm. 38 (07), 3348-3352 (2023).
  20. Li, P. Study on the effects of modified Chuanqianghuo Decoction combined with tuina and physiotherapy on shoulder joint function and inflammation in patients with shoulder joint pain. New Chinese Medicine. 54 (13), 93-97 (2022).
  21. Ding, C., et al. Clinical efficacy of acupuncture and moxibustion, tuina and external application of traditional Chinese medicine on lumbar disc herniation and serum TXB2, IL-1β, Comparison of IL-10 levels. Advances in Modern Biomedicine. 21 (14), 2730-2734 (2021).
  22. Bennett, G. J., Xie, Y. K. A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man. Pain. 33, 87-107 (1988).
  23. Grace, P. M., et al. A novel animal model of graded neuropathic pain: Utility to investigate mechanisms of population heterogeneity. J Neurosci Methods. 193, 47-53 (2010).
  24. Wang, H., et al. Comparison of the characteristics of minor and classic CCI models. J Chin J Comp Med. 32 (10), 1-7 (2022).
  25. Zhang, Y., et al. An intelligent massage and tuina technique simulator. , Beijing. CN219398169U,19393681 (2023).
  26. Jia, D. Effects of three methods and three points stimulation on sensory function in rats with sciatic nerve injury. , Available from: https://kns.cnki.net (2017).
  27. Grace, P. M., et al. Adoptive transfer of peripheral immune cells potentiates allodynia in a graded chronic constriction injury model of neuropathic pain. Brain Behav Immun. 25 (3), 503-513 (2011).
  28. MacDonald, D. I., et al. Silent cold-sensing neurons contribute to cold allodynia in neuropathic. Brain. 144 (6), 1711-1726 (2021).
  29. Pan, F., et al. Chinese tuina downregulates the elevated levels of tissue plasminogen activator in sciatic nerve injured Sprague-Dawley rats. Chinese J Integr Med. 23 (8), 617-624 (2017).
  30. Lv, T., et al. An investigation into the rehabilitative mechanism of tuina in the treatment of sciatic nerve injury. Evid Based Complement Alternat Med. 2020, 5859298(2020).
  31. Lv, T., et al. Applying RNA sequencing technology to explore repair mechanism of Tuina on gastrocnemius muscle in sciatic nerve injury rats. Chin Med J. 135 (19), 2378-2379 (2022).
  32. Ruan, Y., et al. An effective and concise device for detecting cold allodynia in mice. Sci Rep. 8 (1), 14002(2018).
  33. Kim, S. O., Kim, H. J. Berberine ameliorates cold and mechanical allodynia in a rat model of diabetic neuropathy. J Med Food. 16 (6), 511-517 (2013).
  34. Deuis, J. R., Dvorakova, L. S., Vetter, I. Methods used to evaluate pain behaviors in rodents. Front Mol Neurosci. 10, 284(2017).
  35. Ruscheweyh, R., et al. Long-term potentiation in spinal nociceptive pathways as a novel target for pain therapy. Mol Pain. 7, 20(2011).
  36. Hargreaves, K., et al. A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia. Pain. 32 (1), 77-88 (1988).
  37. Cheah, M., et al. Assesment of thermal pain sensation in rats and mice using the hargreaves test. Bio Protoc. 7 (16), 2506(2017).
  38. Challa, S. R. Surgical animal models of neuropathic pain: pros and cons. Int J Neurosci. 125 (3), 170-174 (2015).

Herprints en machtigingen

Tags

Tuina analgesieneuropathische pijnchronic constriction injurypijndrempelskoudegevoeligheidsdrempelmechanische terugtrekdrempelthermische terugtreklaatheidcytokeenexpressienervus ischiadicus letselrattenpijnmodel
Kenmerken van pijnveranderingen bij ratten met zenuwbeschadiging binnen 24 uur na eenmalige Tuina-interventie
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.