$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Alle procedures die in deze studie op de ratten werden uitgevoerd, voldeden aan de National Standard for Laboratory Animal Welfare and Ethics Review Guidelines (2018), officieel aangenomen door de Volksrepubliek China, en Guide for the Care and Use of Laboratory Animals van de National Academies Press15. Dit protocol bestaat uit drie hoofdstappen. Ten eerste worden de rattenjassen op maat gemaakt en gepast op basis van de individuele lichaamsvormen van ratten met verschillende gewichten. Vervolgens wordt acupunctuurmanipulatie uitgevoerd volgens standaardprocedures. Ten slotte worden de ratten in hun jassen opgehangen terwijl de naalden op hun plaats blijven om tegemoet te komen aan de noodzaak van gelijktijdige interventies bij ratten binnen dezelfde groep.
1. Pre-needling voorbereiding
- Productie van het rattenjack
- Weeg de ratten en meet hun lichaamsvorm voordat je hun jassen maakt. Om de geschiktheid van dit protocol voor ratten met verschillende gewichten te verifiëren, selecteert u ratten met een gewicht van 220 g, 300 g, 400 g en 520 g voor onafhankelijke metingen van hun lichaamsafmetingen, met metingen van a tot f, zoals afgebeeld in figuur 2.
OPMERKING: De correlatie tussen de lichaamsverhoudingen van ratten en de bijbehorende jasmaten wordt ook weergegeven in figuur 2. De relevante parameters voor de lichaamslengte van ratten met verschillende gewichten zijn opgenomen in tabel 1.
- Knip een rechthoekig stuk dikke, donkere stof om een rattenjas te maken. Gebruik de stof met een ongevouwen breedte die gelijk is aan de omtrek gemeten rond het dikste deel van de buik van de rat. De lengte van de stof is gelijk aan de afstand van de neuspunt van de rat tot de basis van zijn staart (zie figuur 2).
- Vouw de stof dubbel en knip de linkerbovenhoek af in een hoek van ongeveer 45°-65° om een rechter trapezium te vormen (zie figuur 3A).
- Naai de twee kanten aan de linkerkant strak vast met katoenen draad. Raadpleeg Afbeelding 1B en Afbeelding 3B voor richtlijnen.
- Knip twee kleine gaatjes, één aan elke kant van de stof, waar de bovenste en onderste ledematen van de rat doorheen kunnen (zie figuur 3C). De afstand tussen de twee bovenste ledematen bepaalt de afstand tussen de bovenste gaten van de rattenjas. De afstand tussen de twee onderste ledematen bepaalt de afstand tussen de onderste gaten van de rattenjas.
- Gebruik de longitudinale afstand tussen de oksel van de rat en de voorkant van het darmbeen om te dienen als de afstand tussen de bovenste en onderste gaten van de rattenjas. Gebruik de omtrek van het schoudergewricht om de omtrek van het bovenste gat in de rattenjas te bepalen. Gebruik de omtrek van het heupgewricht voor de omtrek van het onderste gat in het rattenjasje.
- Naai naast elk gat een lange stoffen riem die kan worden gekruist en strak om het lichaam kan worden gewikkeld vanaf het openingsuiteinde van de jas om de rat vast te zetten.
- Methode voor het dragen van rattenjassen
- Draag handschoenen voordat u doorgaat met het aankleden van de rat in de jas. Begin met het vasthouden van het middelste en achterste deel van de rattenjas met één hand op tafel. Houd met de andere hand de staart van de rat uit zijn voerkooi en plaats deze voorzichtig in de jas.
- Terwijl de rat naar voren beweegt, zal zijn kop het hoofddeksel van de jas bereiken. Gebruik nu beide handen om de linker en rechter bovenste ledematen voorzichtig uit de gaten in de jas te trekken.
- Pak het bindtouw van het openingsuiteinde van de jas, kruis het van links naar rechts en wikkel het stevig om de romp van de rat. Bind het stevig vast aan de andere kant van de stam om een goede fixatie te garanderen. Nadat u de bovenste ledematen van de rat in bedwang hebt gehouden, herhaalt u dezelfde procedure om de onderste ledematen te fixeren.
- Neem voorzorgsmaatregelen om te voorkomen dat u wordt gebeten of gekrabd door de klauwen van de rat wanneer u zijn ledematen uit de gaten van de jas trekt. Zorg ervoor dat de strakheid van het touw op de juiste manier is afgesteld, d.w.z. niet te strak om lokale ischemie van ledematen en hypoxie bij ratten te veroorzaken, en niet te los, zodat de rat gemakkelijk kan ontsnappen (zie video 1).
- Bevestigingsrek en S-vormige ijzeren haken
- Het bevestigingsrek bestaat uit twee zware ijzeren bakken (24 cm lang, 12 cm breed en 2 cm hoog) en een ijzeren zuil (60 cm lang) die stevig op elk dienblad is gelast. Bevestig een massieve ijzeren stok (145 cm lang) op dezelfde hoogte op de twee ijzeren kolommen met behulp van een schroefverbindingsstructuur die kan worden aangepast en op een vaste hoogte kan worden gehouden (zie afbeelding 4A).
- Om de rat die de jas draagt aan de ijzeren stok te bevestigen, gebruikt u de S-vormige haken (11 cm in diameter). Wikkel het ene uiteinde van de haak om de riem van de jas terwijl het andere uiteinde aan de ijzeren stok wordt gehangen. Gebruik twee S-vormige haken om de rat aan de stok vast te zetten. Zie figuur 1D en figuur 4B voor de algemene structuur.

Figuur 2: Bijbehorend diagram van de lichaamsvorm van de rat en de bijpassende maat van de rattenjas. In het diagram vertegenwoordigt de parameter a de transversale afstand aan de achterkant van het gewricht tussen de bovenste ledematen en de romp van de rat. Deze waarde wordt gebruikt als de afstandsmeting tussen de penetrerende gaten voor de bovenste ledematen van de rattenjas. Evenzo vertegenwoordigt parameter b de transversale afstand op de rug waar de bilaterale onderste ledematen van de rat aansluiten op de romp. Deze meting bepaalt de afstand tussen de penetrerende gaten voor de onderste ledematen van de rattenjas. De parameter c geeft de omtrek aan van het dikste deel van de buik van de rat, die kan worden gebruikt als breedtemaat voor de stof van de jas van de rat. De parameter d vertegenwoordigt de afstand van de oksel van de rat tot de voorkant van zijn darmbeen en bepaalt de longitudinale afstand tussen de bovenste en onderste gaten van de jas. De parameter e komt overeen met de longitudinale afstand van de neuspunt van de rat tot de basis van zijn staart en dient als lengtemaat voor de jas van de rat. De parameter f geeft de omtrek aan van de articulatie die de bovenste ledematen verbindt met de romp van de rat en dient als de omtrek van het gat waardoor de bovenste ledematen passeren. De parameter g staat voor de omtrek van het gewricht dat de onderste ledematen en de romp van de rat met elkaar verbindt, en bepaalt de omtrek van het gat waardoor de onderste ledematen passeren. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
| Lichaamsgewicht (g) | Parameters lichaamsvorm (cm) |
| een | b | c | d | e | f | g |
| 220 | 6.0 | 7.0 | 15.0 | 8.0 | 19.0 | 5.0 | 7.0 |
| 300 | 7.0 | 7.5 | 17.0 | 10.0 | 21.0 | 6.0 | 8.0 |
| 400 | 8.0 | 8.5 | 19.0 | 11.5 | 23.0 | 6.5 | 9.0 |
| 520 | 8.0 | 10.0 | 20.0 | 12.5 | 26.0 | 7.0 | 9.5 |
Tabel 1. De meetresultaten van lichaamsvormparameters van ratten met verschillende lichaamsgewichten.

Figuur 3: Diagram met het fysieke uiterlijk en het gebruik van de rattenjas . (A) Buitenaanzicht van het rattenjasje van het vliegtuig. De vorm van het jasje van de rat lijkt op een rechthoekig trapezium, met aparte openingen aan de linker- en rechterkant waar de bovenste en onderste ledematen van de rat doorheen kunnen. (B) Uitgevouwen buitenaanzicht van het rattenjasje. De sluiting van het hoofddeksel creëert een semi-gesloten holte, die dient als een cruciaal onderdeel om ratten te verleiden om binnen te komen. (C) Zijaanzicht van een rat gekleed in de jas. Zodra de ledematen van de rat door de openingen in de kleding zijn gegaan, worden de riemen over het ventrale oppervlak van de romp gekruist en aan de achterkant stevig vastgemaakt met de juiste spanning. Dit zorgt ervoor dat de rat relatief geïmmobiliseerd is. (D) Buikaanzicht van een rat gekleed in het rattenjasje. Het ventrale oppervlak van de jas legt de buikhuid van de rat bloot, waardoor acupunctuur op ventrale punten gemakkelijk toegankelijk is. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Video 1: Het rattenjasje aantrekken. Deze video toont een typisch proces van het aankleden van de rat in de jas. Klik hier om deze video te downloaden.

Afbeelding 4: Diagram met het fysieke uiterlijk en het gebruik van het verhoogde bevestigingsrek. (A) Verhoogd bevestigingsrek. Dit rek bestaat voornamelijk uit twee verticale ijzeren kolommen (60 cm lang) die aan elke bak zijn gelast, samen met een lange horizontale ijzeren stok (145 cm lang) die evenwijdig aan de grond is geplaatst. Schroeven worden gebruikt om de horizontale stok op dezelfde hoogte als de verticale kolommen te bevestigen. (B) Rattenophanging op het fixatierek. Ratten die de rattenjassen dragen, worden stevig vastgemaakt aan het fixatierek met behulp van twee S-vormige haken per rat. (C) Gelijktijdige elektro-acupunctuurbehandeling bij meerdere ratten. Om mogelijke interferentie als gevolg van staartbewegingen te voorkomen, was het noodzakelijk om de juiste afstand tussen de ratten aan te houden, gelijk aan de lengte van de staart van een rat. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
2. Elektro-acupunctuur procedure
- Routinematige voorbereiding
- Plaats het bevestigingsrek op een horizontaal bureaublad of grond.
- Verwijder voorafgaand aan de naaldprocedure de vacht rond de acupunten met behulp van een elektrisch scheerapparaat om volledige blootstelling te garanderen. Wanneer het acupunt dat moet worden doorboord zich op de buik van de rat bevindt, zoals Guanyuan (CV4, ongeveer 25 mm onder de navel), verkort dan de breedte van de rattenkleding op de juiste manier om abdominale acupunten bloot te leggen.
- Lokaliseer het acupunt uit de opening op de middellijn van de buik die niet wordt bedekt door de rattenjas (zie figuur 3D) en injecteer vervolgens de naald.
- Wanneer de acupunten die moeten worden geprikt zich op het hoofd van de rat bevinden, zoals Baihui (GV20, gelegen in het midden van het pariëtale bot), maak dan een kleine incisie op de overeenkomstige positie op het hoofd om de huid rond GV20 volledig bloot te leggen (zie figuur 1C).
- Bij het acupuncteren van acupuncturen op de ledematen van ratten, zoals Neiguan (PC6, aan de binnenkant van de voorpoot, tussen de radiale en ulnaire hechtingen op ongeveer 3 mm afstand van het polsgewricht) in de bovenste ledematen of Zusanli (ST36, aan de posterolaterale zijde van het kniegewricht, ongeveer 2 mm onder de kuitbeenkop) in de onderste ledematen, Vanwege de duidelijke blootstelling van de acupunten, gebruikt u één hand om te helpen bij het fixeren van de ledemaat, terwijl de andere de acupunctuuroperatie direct kan uitvoeren.
- Wanneer het acupunt zich op de rug of taille van een rat bevindt, zoals Shenshu (BL23, onder de 2e lendenwervels, 6 mm uit elkaar van de middellijn van de rug), snijd dan een opening van ongeveer 2 cm breed in het midden van de jas van de rat om de huid van de overeenkomstige plaats volledig bloot te leggen (zie figuur 1C).
- Kleed de rat in de jas. Na het desinfecteren van de lokale huid van acupunten met alcoholdoekjes, begint u met de acupunctuurprocedure.
- Naaldtechniek: Lokaliseer het acupunt nauwkeurig. Steek een steriele wegwerpacupunctuurnaald (0,16 mm x 7 mm) op de juiste diepte in het acupunt van de rat.
- Elektro-acupunctuur operatie
- Wikkel de elektrodedraad om de horizontale ijzeren staaf. Deze stap vermindert het risico dat de naald eruit valt als gevolg van de zwaartekracht die op de elektro-acupunctuurclip inwerkt. Bevestig vervolgens het uiteinde van de elektrodedraad stevig op het handvat van de naald.
- Schakel de stroom in en selecteer de juiste frequentie-, stroom- en tijdparameters. In dit experiment werden de parameters ingesteld op 2 Hz, 1 mA en 15 min. Zodra de parameters zijn aangepast, begint u met het elektro-acupunctuurbehandelingsproces (zie video 2 en video 3).
- Gelijktijdige elektro-acupunctuur bij ratten: Hang tijdens de behandeling de ratten in dezelfde groep samen aan de ijzeren stok met behulp van de S-vormige haken en laat ze tegelijkertijd elektro-acupunctuurinterventie ondergaan.
- OPMERKING: De ijzeren stok moet niet alleen stevig zijn, maar ook lang genoeg om een groep ratten tegelijkertijd te behandelen. In dit experiment kunnen 3-4 ratten tegelijkertijd worden behandeld, mits de juiste afstand wordt bewaard en er geen interferentie tussen de ratten optreedt (zie figuur 4C).
- Observatie van reacties van ratten tijdens elektro-acupunctuurbehandeling: Evalueer de geschiktheid van deze fixatiemethode voor elektro-acupunctuur bij ratten op basis van de volgende factoren, zoals het aantal personeelsleden dat nodig is om de operatie te voltooien, de tijd die nodig is om een rat te fixeren, de reactie van de ratten tijdens de elektro-acupunctuurbehandeling, het aantal naalden dat tijdens de procedure is gevallen en eventuele sterfgevallen door ongevallen die tijdens de operatie kunnen optreden.
- Verwijderen van de naalden
- Zodra de vooraf ingestelde tijd is voltooid, wordt het elektro-acupunctuurapparaat automatisch uitgeschakeld. Verwijder de kleine clip die is verbonden met het handvat van de naald en verwijder voorzichtig de acupunctuurnaald onder de huid van de rat, waarmee het elektro-acupunctuurbehandelingsproces wordt afgesloten.
- Maak de riemen los, til de hoofdbedekking van de jas van de rat op en plaats de rat boven de kooi. De rat is dan vrij om zich los te maken van de jas en zelfstandig de kooi in te gaan (zie video 4).
Filmpje 2. Naaldacupunten in de lumbale regio. Deze video demonstreert de uitgebreide en coherente procedure die het aankleden van de rat in de jas omvat, het inbrengen van acupunctuurnaalden in acupunten in de taille en de daaropvolgende aansluiting van een elektro-acupunctuurapparaat. Klik hier om deze video te downloaden.
Filmpje 3. Naalden acupunten in de buik en onderste ledematen. Deze video demonstreert de uitgebreide en coherente procedure die het aankleden van de rat in de jas omvat, het inbrengen van acupunctuurnaalden in acupunten in de buik en de onderste ledematen, en de daaropvolgende aansluiting van een elektro-acupunctuurapparaat. Klik hier om deze video te downloaden.
Filmpje 4. Het verwijderen van de rattenjas. Deze video toont de gebruikelijke praktijk om de jas van de rat te verwijderen. Klik hier om deze video te downloaden.