Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Verbetering van de ontwikkeling en groei van ratten met hersenverlamming bij baby's met behulp van selectieve spinale manipulaties

1.4K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/65659

⸱

2 februari 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Yunnan University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Deze studie illustreert het effect van selectieve manipulatie van de wervelkolom op de groei en ontwikkeling van jonge ratten met hersenverlamming, met de nadruk op de specifieke procedure en het gestandaardiseerde protocol. Meting van het lichaamsgewicht, Rotorod-test, voetfoutscore, andere gedragstests en detectie van groeihormoon werden uitgevoerd om het protocol te evalueren.

Samenvatting

Cerebrale parese (CP) is een refractaire pediatrische ziekte met een hoge prevalentie, een hoog invaliditeitspercentage en moeilijke behandeling. Er worden momenteel verschillende behandelingen gebruikt voor CP. De behandeling omvat medicamenteuze en niet-medicamenteuze therapie. Traditionele Chinese geneeskunde externe therapie is een zeer onderscheidende behandelmethode in niet-medicamenteuze therapie. Als een van de externe therapieën van de traditionele Chinese geneeskunde, wordt massage gebruikt bij de behandeling van hersenverlamming en heeft het een goede werkzaamheid, kleine bijwerkingen en een sterke bruikbaarheid. Als onderdeel van externe TCM-therapie kan selectieve manipulatie van de wervelkolom de groei en ontwikkeling van jonge ratten met hersenverlamming effectief bevorderen. De operatie was voornamelijk verdeeld in vier stappen: eerst werd de wrijfmethode gedurende 1 minuut op de wervelkolom en beide zijden van de wervelkolom toegepast. De pers- en kneedmethode werd gedurende 5 minuten op de wervelkolom toegepast en gedurende 5 minuten op de spieren aan beide zijden van de wervelkolom. Ten tweede werd het persen en kneden van de gevoelige lokale acupunten in de wervelkolom gedurende 2 minuten uitgevoerd. Ten derde werd het aangedane ledemaat gedurende 1 minuut behandeld door middel van een draaimethode. Ten vierde werd de wrijfmethode gedurende 1 minuut toegepast op een middellijn van het voorhoofd naar de achterkant van de hersenen. Deze studie had tot doel selectieve manipulatie van de wervelkolom te gebruiken om jonge ratten met hersenverlamming te behandelen. Het gewicht, de Rotaroid-test, de voetfoutscore en het groeihormoon van zuigelingenratten met hersenverlamming werden gedetecteerd om het effect van selectieve manipulatie van de wervelkolom op de groei en ontwikkeling van zuigelingenratten met hersenverlamming te begrijpen. De resultaten toonden aan dat het gewichtstoename kan bevorderen, het evenwichtsvermogen en de motorische functie kan verbeteren, de groei en ontwikkeling van ratten met hersenverlamming bij kinderen kan bevorderen, de secretie van groeihormoon kan bevorderen en de temperatuur van gevoelige delen van de rug kan verhogen.

Inleiding

Cerebrale parese (CP), veroorzaakt door niet-progressieve schade aan de hersenen bij de foetus of de kindertijd, is een groep aandoeningen die wordt gekenmerkt door abnormale motorische en houdingsontwikkeling1, ontwikkelingsstoornissen waaronder langzame gewichtstoename 2,3,4 en motorische disfunctie. De incidentie van hersenverlamming in China is respectievelijk 2,48% en de prevalentie is 2,46‰ (1-6 jaar oud)5. Buitenlandse studies rapporteerden een prevalentie van 2,4%-3,6%6. Hersenverlamming is een belangrijke oorzaak van lichamelijk letsel en invaliditeit bij kinderen, waarbij evenwichts- en bewegingsstoornissen een aanzienlijke invloed hebben op de dagelijkse activiteiten1. Hersenverlamming kan worden veroorzaakt door vroeggeboorte, infectie, genetica, neonatale ischemie en hypoxie, neonatale geelzucht en andere complexe en diverse pathogene factoren7. Het doel van de behandeling van hersenverlamming is het verbeteren van de fysieke functie en kwaliteit van leven 8. Momenteel omvatten de behandelingsmethoden voor hersenverlamming diepe hersenstimulatie9, robotondersteunde looptraining10, pols- en enkelacupunctuur11 en meridiaanacupunctuur in combinatie met massage12.

Traditionele Chinese geneeskunde (TCM) wordt steeds vaker gebruikt als een effectieve behandeling voor CP13,14. Massage, als onderdeel ervan, speelt ook een bepaalde rol. Selectieve manipulatie van de wervelkolom kan bijvoorbeeld de toestand van DNA-hydroxymethylering reguleren om de neurale ontwikkeling te reguleren en het leren en de geheugenfunctie te verbeteren15. Bij de behandeling van zuigelingenratten met hersenverlamming kan selectieve manipulatie van de wervelkolom de inflammatoire homeostase van de cortex en hippocampus verbeteren door het methyleringsniveau van inflammatoire cytokines TNF-α en IL-10-genpromotorgebied16 te reguleren en een positieve therapeutische rol spelen in het evenwichtsvermogen van zuigelingenrat met hersenverlamming16. Selectieve manipulatie van de wervelkolom kan de cognitieve functie van jonge ratten met hersenverlamming verbeteren17. Selectieve manipulatie van de wervelkolom werd gebruikt bij de behandeling van zuigelingenratten met hersenverlamming, en er werd waargenomen dat het ook therapeutische effecten had op hun groei en ontwikkeling18.

Het doel van deze studie is om het effect van selectieve manipulatie van de wervelkolom op de groei en ontwikkeling van jonge ratten met hersenverlamming te illustreren door het lichaamsgewicht te meten, Rotarod-test19, voetfoutscore 20,21 en andere gedragstests en de detectie van groeihormoon, en om onderzoeksideeën te bieden aan relevant personeel.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Deze studie werd goedgekeurd door de Experimental Animal Ethics Committee van de Yunnan University of Traditional Chinese Medicine. Alle experimentele operaties op dieren volgden het 3R-principe van proefdiervermindering, optimalisatie en vervanging (nr. R-06202018). Gezonde Sprague Dawley (SD) ratten (14 mannetjes en 7 vrouwtjes) van specifieke pathogeenvrije (SPF) graad met een gemiddeld lichaamsgewicht van 250-300 g werden in dit experiment gebruikt. De ratten werden grootgebracht in de SPF-dierenkamer van de Yunnan University of Traditional Chinese Medicine, certificaatnummer: SYXK(Yunnan)K2022-0004. Alle ratten werden gehuisvest onder een licht/donkercyclus van 12 uur met een natuurlijke lichtgecontroleerde omgeving bij een kamertemperatuur van 22-26 °C en een relatieve vochtigheid van 40%-50%. Na 1 week adaptieve voeding bleef de man/vrouw verhouding op 1:2. Na 1 week werden de zwangere ratten gehuisvest in een enkele kooi, normaal gevoed en vrij etend en gedronken. Na de natuurlijke bevalling werden de gezonde babyratten van de zwangere ratten geselecteerd. De babyratten werden verdeeld in de Sham-, Control- en Treatment-groepen om het effect van selectieve manipulatie van de wervelkolom op de groei en ontwikkeling van babyratten met hersenverlamming te observeren. Uit elke groep werden 6 mannelijke pups geselecteerd voor het experiment. De behandelingsgroep werd behandeld met selectieve manipulatie van de wervelkolom vanaf de5e dag na de geboorte, en de behandeling werd gedurende 6 dagen gegeven, gevolgd door rust gedurende 1 dag.

1. Vaststellen van een model voor hersenverlamming

  1. Steriliseer de microscoop, oogheelkundige schaar, tang, hechtdraad, operatieplaat, schaar, wattenstaafjes en handschoenen die nodig zijn voor de operatie en plaats ze in de operatiekamer.
  2. Scheid een pup tijdelijk van zijn moeder op de derde levensdag, plaats hem in een enkel frame en vervoer hem naar de steriele operatiekamer.
  3. Meet het lichaamsgewicht. Neem babyratten met een lichaamsgewicht van 7-9 g op in het onderzoek en sluit degenen uit die niet aan het lichaamsgewicht voldeden. Verdeel de babyratten willekeurig in schijn-, controle- en behandelingsgroepen.
  4. Induceer anesthesie met isofluraan in een concentratie van 2% en handhaaf de anesthesie op 1% met behulp van een inhalatiegasanesthesieapparaat voor kleine dieren.
    OPMERKING: Dit experiment is voornamelijk bedoeld om de effecten van selectieve manipulatie van de wervelkolom op de groei en ontwikkeling van jonge ratten met hersenverlamming te observeren. Anesthesie is uitgevoerd in overeenstemming met de algemene vereisten tijdens het modelleringsproces en aanvullende analgesie zal de observatieresultaten beïnvloeden.
    1. Sluit de gasverdoving voor kleine dieren aan op de voeding en open de klep die op de inductiebox is aangesloten.
    2. Plaats de babyrat in de inductiebox, draai aan de concentratie-instelknop en stel de concentratie isofluraan in op 2% om anesthesie op te wekken.
    3. Als de babyrat bewusteloos is, haal hem dan uit de inductiebox. Plaats deze op het operatieplaatje en sluit kanaal 1 van het anesthesieapparaat.
    4. Plaats de jonge rat in rugligging. Bevestig het anesthesie-inhalatiemasker om de anesthesie te behouden.
    5. Open het kanaal dat is aangesloten op het anesthesie-inhalatiemasker. Handhaaf de anesthesie door aan de concentratie-instelknop te draaien en de isofluraanconcentratie in te stellen op 1%.
      OPMERKING: Beoordeel na de anesthesie de diepte van de verdoving door de tenen en staart van de babyratten met geweld op te tillen en erin te knijpen. Een geen-reactie toen de tenen en staart werden opgetild en geknepen, bevestigt dat de diepte van de anesthesie is bereikt.
  5. Desinfecteer de nekhuid van de jonge rat driemaal met 75% alcohol en snijd een longitudinale incisie van 1 cm in de nekhuid om het onderhuidse weefsel bloot te leggen.
    OPMERKING: Longitudinale incisie van de nekhuid veroorzaakt geen huiddefect.
  6. Snijd de huid van de linkernek onder een ontleedmicroscoop en gebruik een oogheelkundig pincet om de sternohyoïde spier en de linker sternomastoïde spier botweg te scheiden.
    1. Zoek de linker gemeenschappelijke halsslagader en de nervus vagus en scheid de linker gemeenschappelijke halsslagader en de nervus vagus.
    2. Snijd in de Modelgroep de linker gemeenschappelijke halsslagader af met een elektrische stollingspen. Reinig en hecht de incisie in de nek.
    3. Scheid in de Sham-groep de linker gemeenschappelijke halsslagader van de nervus vagus.
  7. Plaats de babyrat na de operatie in het thermostatische waterbad in buikligging voor reanimatie gedurende 1 uur.
    OPMERKING: Na natuurlijk herstel was de huidskleur van de ledematen en het hele lichaam rossig. De babyrat kon zijn ledematen autonoom bewegen en zelfstandig kruipen.
  8. Plaats de gereanimeerde ratten van de controle- en behandelingsgroep in een gesloten couveuse bij 37 °C in buikligging. Breng een mengsel van 5% zuurstof en 95% stikstofgas om hypoxie op te wekken en verwijder de ratten na 2 uur.
  9. Haal de babyrat die het hypoxieproces heeft voltooid uit de hypoxiedoos en plaats deze in buikligging in een doos met een normaal atmosferisch zuurstofgehalte. Plaats ze gedurende 1 uur in een thermostatisch waterbad van 37 °C. Na volledig herstel brengt u de babyrat terug naar de kooi van de moeder.
    OPMERKING: Nadat ze op natuurlijke wijze waren hersteld, was de huidskleur van de ledematen en het hele lichaam rood. Babyratten kunnen hun ledematen autonoom bewegen en zelfstandig kruipen.
  10. Plaats de jonge rat van de Sham-groep in een doos met een normaal zuurstofgehalte in de atmosfeer en plaats de doos gedurende 1 uur in een thermostatisch waterbad van 37 °C. Na volledig herstel plaatst u de babyrat terug in de kooi van de moeder om te voeren.
    OPMERKING: Nadat ze op natuurlijke wijze waren hersteld, was de huidskleur van de ledematen en het hele lichaam rood. Babyratten kunnen hun ledematen autonoom bewegen en zelfstandig kruipen. Het hele operatieproces werd voltooid in de speciale operatiekamer van de SPF-dierenkamer van de Yunnan University of Traditional Chinese Medicine. Tijdens reanimatie en hypoxie observeert de operator de babyrat te allen tijde om de dood door een verkeerde houding te voorkomen. Zogende vrouwelijke ratten werden gevoed met Specific Pathogen Free (SPF) fokvoer en toen de pups in staat waren om zichzelf te voeden, werden de pups gespeend (postnatale dag 21) en gevoed met SPF-onderhoudsvoer.

2. Smeedreflex experiment

  1. Voer op de 4edag na de geboorte (de 2edag na het modelleren) het oprichtreflexexperiment uit om te controleren of het model succesvol was (Figuur 1 en Tabel 1).
    1. Til de staart van de babyrat op, laat zijn rug op een horizontaal bord rusten en gebruik de duim en wijsvinger om zijn buik en nek vast te zetten. Controleer of de rat kan terugkeren naar zijn normale positie. Het onvermogen van de rat om vanuit de abnormale positie terug te keren naar de normale positie als gevolg van het verlies van de oprichtreflex wordt geregistreerd als een succesvol model16,22.
    2. Noteer de tijd die elke groep pups nodig heeft om van rugligging naar buikligging over te gaan. Begin met het registreren van de tijd waarop de duim en wijsvinger tegelijkertijd in rugligging worden losgelaten, laat de babyrat naar de buikligging draaien en stop met opnemen wanneer de voor- en achterpoten op de grond worden geplaatst. Als de jonge rat niet langer dan 20 s naar de normale positie kon terugkeren, noteer dan de oprichttijd op 20 s.

3. Voorbereiding voor de operatie

  1. Scheid na het modelleren de babyrat met hersenverlamming van zijn moeder en breng hem gedurende 2 minuten naar een operatiekamer met een constante kamertemperatuur van 22-26 °C om zich aan te passen aan de omgeving.
  2. Draag wegwerphandschoenen om de handpalm mild en zacht te houden en de temperatuur tussen 36-37 °C te houden.
  3. Plaats de rat voorzichtig in de palm van de linkerhand. Buig de linkerduim om de ogen van de rat gedurende 2 minuten te bedekken om een donker gezichtsveld te vormen, zodat de rat zich kan aanpassen aan de omgeving van de handpalm van de operator. Gebruik de rechter wijs- en middelvinger voor manipulatie.
    OPMERKING: Het bedekken van de ogen van de jonge rat kan een donkere omgeving creëren. Dit voorkomt dat de jonge rat geagiteerd raakt vanwege de onveilige en onzekere omgeving die de experimentele resultaten beïnvloedt.

4. De ratten verdelen in de controle- en de behandelingsgroep

  1. Op de tweede dag na het modelleren (P5) verifieert u het model met de oprichtreflextest en verdeelt u de babyratten willekeurig in de controle- en behandelingsgroepen. Voer selectieve manipulatie van de wervelkolom uit op de jonge ratten van de behandelingsgroep.
  2. Plaats de babyrat in buikligging. Zorg ervoor dat de wervelkolom altijd op een rechte hoogte wordt gehouden (Figuur 2A).
  3. Masseer de wervelkolom en beide zijden van de wervelkolom gedurende 1 minuut met behulp van de wrijfmethode en gebruik de pers- en kneedmethode op de wervelkolom en de spieren aan beide zijden van de wervelkolom gedurende 5 minuten.
    1. Masseer de wervelkolom en de huid aan beide kanten met behulp van de wrijfmethode om de jonge rat te ontspannen en zijn spanning volledig te verlichten. Zorg ervoor dat de frequentie van wrijven 100-120 keer/min is gedurende 1 minuut nadat de jonge rat stil en zonder opwinding is.
      1. Gebruik de rechter wijsvinger, middelvinger en ringvinger als contactoppervlak en maak een cirkelvormige wrijvende beweging op de oppervlaktehuid van de cervicale wervelkolom, thoracale wervelkolom en lumbale wervelkolom van kop tot staart zonder het onderhuidse weefsel te verstoren.
      2. Met de rechter wijsvinger, middelvinger en ringvinger als contactvlakken voert u een cirkelvormige beweging uit op het huidoppervlak van de trapeziusspier, de oppervlakkige gluteusspier, de cervicale rhomboïde spier, de borstruitvormige spier, de latissimus dorsi-spier en de externe schuine spier in volgorde van kop tot staart volgens de dierlijke anatomische standaard23, zonder het onderhuidse weefsel te verstoren.
    2. Behandel de wervelkolom eerst door 5 minuten te drukken en te kneden, gevolgd door 5 minuten te drukken en te kneden van de spieren aan beide zijden van de wervelkolom.
      1. Breng de kneedmethode aan op de wervelkolom met een frequentie van 120 keer/min gedurende 5 minuten. Gebruik de rechter wijs- of middelvinger als contactoppervlak. Kneed van kop tot staart op de oppervlaktehuid van de hals-, borst- en lendenwervels, gecombineerd met neerwaarts drukken (1,77 ± 0,54 N). Zorg ervoor dat de kracht de halswervels, borstwervels, lendenwervels en supraspinale ligamenten bereikt.
      2. Breng de pers- en kneedmethode aan op de spieren aan beide zijden van de wervelkolom met een frequentie van 120 keer/min gedurende 5 minuten. Gebruik de rechter wijsvinger of middelvinger als contactoppervlak. Volgens de dierlijke anatomische standaard23, druk het huidoppervlak van de trapezius, oppervlakkige gluteus, ruitvormige nek, ruitvormige borstspier, latissimus dorsi en uitwendige schuine buikspieren naar beneden in een ronde kneedbeweging van kop tot staart, met een kracht van 1,77 ± 0,54 N, zodat de kracht de trapezius, oppervlakkige bilspier, ruitvormige nek, ruitvormige borstspier bereikt, latissimus dorsi, en uitwendige schuine buikspieren (Figuur 2B)23.
  4. Druk en kneed de gevoelige spinale acupuntpunten (zoals Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu en Feishu24) met een frequentie van 100-120 keer/min gedurende 2 minuten. Gebruik de rechter wijs- of middelvinger als contactoppervlak en voer ronduit kneden en neerwaarts drukken (1,77 ± 0,54 N) op de oppervlaktehuid van lokale acupunten (zoals Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu en Feishu) bij jonge ratten met hersenverlamming.
    OPMERKING: De acupunten werden geselecteerd volgens de "Animal Acupuncture Point Map" geformuleerd door de Experimental Acupuncture Research Branch van de Chinese Acupuncture Society) (Figuur 3)25.
  5. Stimuleer het aangedane ledemaat plaatselijk door de draaimethode met een frequentie van 25 keer/min gedurende 1 minuut.
    1. Knijp met de rechterduim en wijsvinger in het aangedane ledemaat van de jonge rat met hersenverlamming en oefen symmetrische kracht uit op de twee vingers. Zorg ervoor dat de kracht zacht is en de actie licht en zacht. Wrijf de rechter extensor carpi radialis, extensor digitorum common, extensor carpi ulnaris, falanx, interfalangeaal gewricht, gastrocnemius-spier, semitendinosus-spier, middenvoetsbeentje en intermetatarsale gewricht van babyratten heen en weer.
  6. Pas de wrijfmethode toe op de middellijn van het voorhoofd tot aan de achterkant van de hersenen met een frequentie van 100-120 keer/min gedurende 1 minuut. Gebruik de rechter wijsvinger als contactoppervlak en gebruik de wrijfmethode op een denkbeeldige lijn van het voorhoofd naar het midden van de achterste hersenen van de babyrat (namelijk een lijn van Baihui, Fengfu en Dazhui) (Figuur 3).
    LET OP: Massage wordt voornamelijk op de huid toegepast. Het is een cirkelvormige beweging op het huidoppervlak van het hoofd van de jonge rat met hersenverlamming. Het hoeft niet de onderhuidse spierbeweging van een jonge rat met hersenverlamming aan te drijven.
  7. Laat de jonge rat aan het einde van de procedure 30 minuten met rust voordat u hem terugbrengt naar de moederrattenkooi.
    OPMERKING: Met de leeftijd wordt het haar van de babyratten dik, dus het is noodzakelijk om het rughaar van alle groepen babyratten tijdens de massageoperatie te verwijderen om te voorkomen dat het experimentele effect wordt aangetast.

5. Detecteren van de temperatuur van de lokale acupunten

  1. Gebruik een infrarood warmtebeeldcamera om de temperatuur van het lokale acupuntgebied voor en na de operatie te detecteren.
    1. Vóór selectieve spinale massage verbindt u de Type-C-interface van de mobiele telefoon met de USB-interface van het infraroodbeeldvormingsapparaat met een datakabel en zet u de aan/uit-knop aan.
    2. Klik op Analyseren om de mobiele telefoonterminal van de software te openen, selecteer Foto om de fotomodus te openen en klik op de Afbeelding in beeldmodus in de rechter benedenhoek.
    3. Richt de camera op de acupuntgebieden van Dazhui-, Xinshu- en Shenshu-acupunten (Figuur 3) op de rug van de babyrat om temperatuuropnamen te maken. Klik op Foto om de opname van de afbeelding te voltooien en sla deze op in JPG-indeling.
    4. Sluit de computer aan met een datakabel en upload de opgeslagen afbeelding naar een computer die is geïnstalleerd met de Fotric-software voor analyse.
      1. Open de Fotric-software op de pc, open het lokale bestand en zoek de locatie van de afbeelding.
      2. Selecteer de werkruimte Thermogram, selecteer de afbeelding die moet worden geanalyseerd en open de analyse-interface.
      3. Selecteer op het scherm Analyse het beeld in het vak Warmtebeeld aan de rechterkant en open het slot.
      4. Selecteer de zoomfunctie, pas de grootte van het warmtebeeld en het linkervak Achtergrondafbeelding aan om samen te vallen en schakel het slot aan de rechterkant uit.
      5. Zoek de rechthoek Meting instellen in de werkbalk bovenaan en markeer het acupunt dat in de afbeelding moet worden gedetecteerd.
      6. Klik aan de rechterkant op Rapporteren om de temperatuurwaarde vast te leggen.

6. Detectie van de motorische evenwichtsfunctie van zuigelingenratten met hersenverlamming

  1. Gebruik de Behavioral Rotarod test19 om de motorische functie van ratten in de Sham-, Control- en Treatment-groepen op de 61edag na de geboorte te detecteren.
    1. Parameterinstellingen: Start de aan/uit-schakelaar, selecteer Experiment uitvoeren om de volgende stap in te voeren, selecteer Positief, Ratten, Timing 5 min om de volgende stap in te voeren en selecteer Acc-tijd: 10s, Snelheid: 10 tpm.
    2. Plaats vervolgens de ratten op de atletiekbaan en begin de test door op Rennen te klikken nadat ze stevig staan. Stel de hardloopstatus van elke run in op AAN. Train elke rat één keer gedurende 5 minuten en begin dan driemaal met het uitvoeren van de test.
    3. Na de training zet je de babyratten op de rotarod-loopbaan. Nadat het stabiel is, klikt u op Uitvoeren en stelt u de actieve status in op AAN. Selecteer aan het einde van 5 minuten Datum om de tijd en snelheid te registreren van elke rat die voor het eerst van de rotarod-loopbaan valt, d.w.z. de gegevens over de looptijd.
  2. Gebruik de voetfouttest20,21 om de evenwichtsmotorische functie van de rechter voorpoot van de schijn-, controle- en behandelingsgroepen op de 61edag na de geboorte te evalueren.
    1. Plaats de babyratten aan het begin van de horizontale ladder en neem een video op van hoe ze deze oversteken naar het andere uiteinde (100 cm lang en de afstand tussen elke ladder is 2 cm). Voer na één trainingssessie de formele test driemaal uit voor elke rat met een interval van 5 minuten.
    2. Observeer de rechter voorpoot wanneer het dier de ladder oversteekt met behulp van afspelen op lage snelheid om een score te maken, zoals weergegeven in de scorestandaard (Tabel 2).

7. Western blotting

  1. Voer een western blotting-analyse uit van de weefselmonsters zoals eerder beschreven26.
    OPMERKING: De hoeveelheid lysaat werd bepaald op basis van de grootte van het weefselblok. De gebruikte antilichamen waren als volgt: primair anti-groeihormoonantilichaam (0,5 μg [0,5 ng/baan]); anti-groeihormoonreceptor antilichaam (1/1000); interne referentie anti-bèta actine-antilichaam (1/2000) voor primaire antilichamen; Geit anti-RabbitIgG H&L (HRP) (1/10000) voor secundair antilichaam.

8. Detectie van de kracht van de hand

  1. Draag het apparaat dat wordt gebruikt om de manipulatiekracht op de hand te detecteren die voor massage wordt gebruikt. Plaats de vinger die is gebruikt om de babyrat te masseren met de sensorchip van het apparaat en zet de aan/uit-knop aan.
  2. Sluit de interface van de harde schijf waarin de software van de handmatige tester is opgeslagen, aan op de computer en voer het toegewezen IP-adres van de handmatige tester in het URL-invoervak in.
  3. Installeer de SpringVR-client op de computer, klik om de verzamelingsinterface te openen en selecteer het vingerpatroon in de rechterbenedenhoek om de manipulatiekracht te testen.
  4. Selecteer de optie Druk en klik op Start om te beginnen met het registreren van de handkracht van de bediener tijdens het gebruik. De software registreert automatisch de intensiteit van de manipulatie en genereert een gegevenstabel op de lokale schijf waar de gegevens in de bestandsnaam PressureSensor te vinden zijn.

9. Statistieken van de gegevens

OPMERKING: SPSS26.0-software werd gebruikt voor statistische analyse, Graphpad Prism9.0.0 voor de productie van staafdiagrammen en Image J voor grijswaardeanalyse van eiwitbanden.

  1. Analyseer en presenteer alle gegevens als gemiddelde ± standaarddeviatie (gemiddelde ± SD).
    OPMERKING: De testnorm was α = 0,05 en P ≤ 0,05 werd als statistisch significant beschouwd. De Fisher-test werd gebruikt omdat de gegevens werden geanalyseerd door analyse van variantie en normaliteit en overeenkwamen met de normale verdelingskenmerken en variantiehomogeniteit.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Selectieve manipulatie van de wervelkolom kan de toename van het lichaamsgewicht bevorderen bij zuigelingenratten met hersenverlamming.
Tijdens de behandeling werd het lichaamsgewicht gemeten op de postnatale dagen 3, 14, 28, 42 en 61 (Figuur 4, Tabel 3). Op de derde dag na de geboorte was het lichaamsgewicht van de Sham-groep 5,53 ± 0,035 g en het lichaamsgewicht van de controlegroep 3,15 ± 0,43 g. Het lichaamsgewicht va...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Omdat ischemie en hypoxie belangrijke pathogene factoren van hersenverlamming zijn, wordt de internationaal erkende methode voor het vaststellen van het cerebrale paresemodel gecombineerd met hypoxie om het cerebrale paresemodel voor te bereiden 16,28,29,30. Wanneer hersenverlamming zich ontwikkelt, veroorzaakt dit een algehele ontwikkelingsachterstand, inclusi...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben geen concurrerende financiële of andere belangenconflicten in het kader van dit werk.

Dankbetuigingen

Dit werk is ondersteund door het algemene programma van de National Natural Science Foundation of China (82374614), het grote biomedische project van de afdeling Wetenschap en Technologie van de provincie Yunnan (202102AA100016), het gezamenlijke grote project van toegepast fundamenteel onderzoek van het ministerie van Wetenschap en Technologie van de provincie Yunnan - Yunnan University of Traditional Chinese Medicine (201901AI070004), Ondersteund door het Key Laboratory of Acupuncture, Moxibustion and Massage for Prevention and Treatment of Encephalopathy in Colleges and Universities of Yunnan Province (2019YGZ04), Department of Science and Technology of Yunnan Province -- Youth Project of Basic Research Program of Yunnan Province (202101AU070002), Graduate Program of Science Research Fund of Education Department of Yunnan Province, (2023Y0433); Wetenschappelijk Onderzoek Stichting van Onderwijs Afdeling van de provincie Yunnan, (2023Y0462).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

```html
Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
96-well platesBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD11510Determinatie van eiwitconcentratie
Anti-beta Actin antibodyAbacmAb8227Verdunning: 1/2000
Anti-Growth Hormone antibodyAbacmAb1268820,5 µg (0,5 ng/lane)
Anti-Growth Hormone receptor antibodyAbacmAb202964Verdunning: 1/1000
Basic operating microscopeShanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTDSM-101De gemeenschappelijke halsslagader werd geïsoleerd onder microscoop tijdens het modelleren
BCA developerBiyuntian Biological Engineering Co., LTDP0010Determinatie van eiwitconcentratie
Chemiluminescence imaging systemShanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., LTD100240073Protein banding imaging
Direct-load Color Prestained MarkerBeijing Kangrunchengye Biotechnology Co., LTD (GenStar)M221Western Blot
DK-30Automatic snow ice makerHenan Brothers instrument equipment Co., LTDSHDX0023IJsmaken
ECL luminescent substrate kitBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTDBL520BConverteer latente beelden in belichte film naar zichtbare beelden
Electric-heated thermostatic water bathTAISITE INSTRUMENTDK-98-IIDe jonge ratten werden gereanimeerd na het modelleren
Electronic scalesKunshan YoukeWEI ELECTRONIC Technology Co. LTDCN-LQC10002Het lichaamsgewicht van de jonge ratten werd gemeten
German small white electric coagulation pen hemostatHaohangL55×W125×H37Het werd gebruikt om de linkergemeenschappelijke halsslagader te coaguleren
GloveJiangsu YANGzi LiDE Medical Device Co. LTDQ/320684 YZYL001-2017Voor massageoperatie
GlycineBeijing Soleibao Technology Co., Ltd.Cat#G8200Electroforetische oplossing, Configureer de overdrachtsvloeistof
Goat Anti-RabbitIgG H&L (HRP) AbacmAb6721Verdunning: 1/10000
Intelligent laboratory ultra-pure water machineChongqing huachuag water treatment engineering co.,LTDN/AFiltratie (15 L)
IsofluraneShandong Ante Animal Husbandry Technology Co. LTD15198Anesthesie werd onderhouden door inductie bij jonge ratten
LinkIRFOTIRCV1.3.2.134Infrarood beeldanalysesoftware
Low temperature high speed tissue grinderWuhan Servicebio technology CO.,LTDSKZ3F20200191Weefselslijpen
MethanolGuangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd20220519Configureer de overdrachtsvloeistof
Mini-PROTEAN TetraBole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd552BR 233193Elektroforese
Multiskan Spectrum Microplate SpectrophotometerTECANSparkDe absorptie en concentratie van weefseleiwit werden gedetecteerd
Pressure-sensing smart glovesJinan Super Sense Intelligent Technology Co. LTDMiigloveHet wordt gebruikt om de manipulatieve kracht van de operator te meten
PVDF membraneMerckMillipore Corporation IPVH00010 Western Blot
Refrigerated centrifugeHettich Precision Technology (Zhuhai) Co., LTDMIKRO 220RCentrifugeren
Research three-in-one thermal imagerFOTIRC226S (384 x 288)Temperatuurmeting
RIPA lysateBeijing Solaibao Technology Co., LTD (Solarbio)R0010Lytisch weefsel
SHA-CA digital display water bath thermostatic oscillatorChangzhou Aohua Instrument Co. LTDSHA-CAJonge ratten werden gebruikt in hypoxie
Six-rat fatigue rotarod apparatusShanghai Duoyi Industry Co., LTDDO01104RT703CP motorfunctie werd gedetecteerd
Skim milk powderGuangzhou Saiguo Biotechnology Co., LTD (BIOFROXX)1172GR500Beperkende vloeistof
SPF breeding feedSPF(Beijing)biotechnology co.,Ltd.A1EC30005A1S4285266Lacterende vrouwelijke ratten werden gevoerd
SPF maintenance feedSPF(Beijing)biotechnology co.,Ltd.A1EC30005A1S4285267De pups werden gevoerd na het spenen
Surgical plateShanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTD51002De modeloperatietafel werd opgezet bij jonge ratten
TS-200 Orbital shakerHaimen Qilin Bell Manufacturing Co., Ltd.TS-8SGel fixatie
Tween 80MedChemExpressHY-Y1819Configureer TBST 
ZS-MV Portable anesthesia machineZHONGSHI SCIENCE &TECHNOLOGYZS-MV-IAnesthesie werd geïnduceerd en onderhouden bij proefdieren
```

Referenties

  1. Paul, S., Nahar, A., Bhagawati, M., Kunwar, A. J. A review on recent advances of cerebral palsy. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. , 2622310(2022).
  2. Şimşek, T. T., Tuç, G. Examination of the relation between body mass index, functional level and health-related quality of life in children with cerebral palsy. Turk Pediatri Arsivi. 49 (2), 130-137 (2014).
  3. Dahlseng, M. O., et al. Feeding problems, growth and nutritional status in children with cerebral palsy. Acta Paediatrica. 101 (1), Oslo, Norway. 92-98 (2012).
  4. Fogarasi, A., et al. The purple n study: Objective and perceived nutritional status in children and adolescents with cerebral palsy. Disability and Rehabilitation. 44 (22), 6668-6675 (2022).
  5. Xiaojie, L., et al. Epidemiological characteristics of cerebral palsy in twelve province in China. Chinese Journal of Practical Pediatrics Clinical. 33 (5), 378-383 (2018).
  6. Kakooza-Mwesige, A., et al. Prevalence of cerebral palsy in Uganda: A population-based study. The Lancet. Global Health. 5 (12), e1275-1282 (2017).
  7. Korzeniewski, S. J., Slaughter, J., Lenski, M., Haak, P., Paneth, N. The complex aetiology of cerebral palsy. Nature Reviews. Neurology. 14 (9), 528-543 (2018).
  8. Vargus-Adams, J. N., Martin, L. K. Domains of importance for parents, medical professionals and youth with cerebral palsy considering treatment outcomes. Child: Care, Health and Development. 37 (2), 276-281 (2011).
  9. Koy, A., et al. Quality of life after deep brain stimulation of pediatric patients with dyskinetic cerebral palsy: A prospective, single-arm, multicenter study with a subsequent randomized double-blind crossover (stim-cp). Movement Disorders. 37 (4), 799-811 (2022).
  10. Pool, D., Valentine, J., Taylor, N. F., Bear, N., Elliott, C. Locomotor and robotic assistive gait training for children with cerebral palsy. Developmental Medicine and Child Neurology. 63 (3), 328-335 (2021).
  11. Li, J., et al. Evaluating the effects of 5-hz repetitive transcranial magnetic stimulation with and without wrist-ankle acupuncture on improving spasticity and motor function in children with cerebral palsy: A randomized controlled trial. Frontiers In Neuroscience. 15, 771064(2021).
  12. Chen, K., Shu, S., Yang, M., Zhong, S., Xu, F. Meridian acupuncture plus massage for children with spastic cerebral palsy. American Journal of Translational Research. 13 (6), 6415-6422 (2021).
  13. Gao, J., et al. Rehabilitation with a combination of scalp acupuncture and exercise therapy in spastic cerebral palsy. Complementary Therapies in Clinical Practice. 35, 296-300 (2019).
  14. Chen, Z., et al. Effects of traditional Chinese medicine combined with modern rehabilitation therapies on motor function in children with cerebral palsy: A systematic review and meta-analysis. Frontiers In Neuroscience. 17, 1097477(2023).
  15. Zhang, Y., et al. Tuina massage improves cognitive functions of hypoxic-ischemic neonatal rats by regulating genome-wide DNA hydroxymethylation levels. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: ECAM. 2019, 1282085(2019).
  16. Zhang, P., et al. Chinese tuina protects against neonatal hypoxia-ischemia through inhibiting the neuroinflammatory reaction. Neural Plasticity. 2020, 8828826(2020).
  17. Niu, F., et al. Spinal tuina improves cognitive impairment in cerebral palsy rats through inhibiting pyroptosis induced by nlrp3 and caspase-1. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: ECAM. 2021, 1028909(2021).
  18. Bowen, Z., Guangyi, X., Qian, Z., Xueping, H., Xiantao, T. Time-dose effect of spinal manipulation on growth and motor function in infant rat with cerebral palsy. Shi Zhen National Medicine and National Medicine. 28 (09), 2274-2277 (2017).
  19. Yang, L. J., Cui, H. Olig2 knockdown alleviates hypoxic-ischemic brain damage in newborn rats. Histology and Histopathology. 36 (6), 675-684 (2021).
  20. Martins, L. A., Schiavo, A., Xavier, L. L., Mestriner, R. G. The foot fault scoring system to assess skilled walking in rodents: A reliability study. Frontiers in Behavioral Neuroscience. 16, 892010(2022).
  21. Li, S., et al. Plxna2 knockdown promotes m2 microglia polarization through mtor/stat3 signaling to improve functional recovery in rats after cerebral ischemia/reperfusion injury. Experimental Neurology. 346, 113854(2021).
  22. Naomi, R., Rusli, R. N. M., Teoh, S. H., Bahari, H., Zakaria, Z. A. Remodulation effect of elateriospermum tapos yoghurt on metabolic profile of maternal obesity induced cognitive dysfunction and anxiety-like behavior in female offspring-an in vivo trial on sprague dawley rats. Foods (Basel, Switzerland). 12 (8), (2023).
  23. Naomi, R., et al. The role of elateriospermum tapos yoghurt in mitigating high-fat dietary cause of maternal obesity-an experimental study. Frontiers In Endocrinology. 14, 1131830(2023).
  24. Mukonowenzou, N. C., Dangarembizi, R., Chivandi, E., Nkomozepi, P., Erlwanger, K. H. Administration of ursolic acid to new-born pups prevents dietary fructose-induced non-alcoholic fatty liver disease in sprague dawley rats. Journal of Developmental Origins of Health and Disease. 12 (1), 101-112 (2021).
  25. Wei, W., et al. Neuroprotective effect of verbascoside on hypoxic-ischemic brain damage in neonatal rat. Neuroscience Letters. 711, 134415(2019).
  26. Taiyi, W., Ziyu, H. Anatomical Atlas of Experimental Animals in Chinese and English. , Liaoning Fine Arts Publishing House; Shenyang: Liaoning Science and Technology Press. Shenyang. (2000).
  27. Na, X. Study on the sensitization rule of dorsal acupoints in children with spastic cerebral palsy based on infrared thermal imaging technology and the effect of massage intervention. , (2021).
  28. China Association for Acupuncture and Moxibustion. Names and localization of commonly used acupoints in laboratory animals Part 2: Rats. Acupuncture Research. 46 (04), 351-352 (2021).
  29. Yinghua, S., Xiantao, T. Effect of spinal manipulation on the expression of growth hormone and its receptor protein in hypothalamus of infant rat with cerebral palsy. Sichuan Traditional Chinese Medicine. 39 (02), 55-59 (2021).
  30. Qi, H., et al. Effect of spinal manipulation on learning and memory in infant rat with cerebral palsy and its mechanism. Guide to Traditional Chinese Medicine. 24 (11), 36-39 (2018).
  31. Tai, W. -C., Burke, K. A., Dominguez, J. F., Gundamraj, L., Turman, J. E. Growth deficits in a postnatal day 3 rat model of hypoxic-ischemic brain injury. Behavioural Brain Research. 202 (1), 40-49 (2009).
  32. Huang, L., et al. Animal models of hypoxic-ischemic encephalopathy: Optimal choices for the best outcomes. Reviews In the Neurosciences. 28 (1), 31-43 (2017).
  33. Lyu, H., et al. A new hypoxic-ischemic encephalopathy model in neonatal rats. Heliyon. 7 (12), e08646(2021).
  34. Hegazi, M. A., et al. Growth hormone/insulin-like growth factor-1 axis: A possible non-nutritional factor for growth retardation in children with cerebral palsy. Jornal de Pediatria. 88 (3), 267-274 (2012).
  35. Boboc, I. K. S., et al. A preclinical systematic review and meta-analysis of behavior testing in rat models of ischemic stroke. Life. 13 (2), Basel, Switzerland. 567(2023).
  36. Lubrich, C., Giesler, P., Kipp, M. Motor behavioral deficits in the cuprizone model: Validity of the rotarod test paradigm. International Journal of Molecular Sciences. 23 (19), 11342(2022).
  37. Tan, Y., et al. Vof-16 knockout improves the recovery from hypoxic-ischemic brain damage of neonatal rats. Brain Research. 1748, 147070(2020).
  38. Xiantao, T., Pengyue, Z., Xinghe, Z. Construction and application of selective spinal manipulation in the treatment of children with cerebral palsy. China's Scientific and Technological Achievements. 23 (9), 1-2 (2022).
  39. Matos, L. C., Machado, J., Greten, H. J., Monteiro, F. J. Changes of skin electrical potential in acupoints from ren mai and du mai conduits during qigong practice: Documentation of a clinical phenomenon. Journal of Bodywork and Movement Therapies. 23 (4), 713-720 (2019).
  40. Levkovets, I. L., Kiryanova, V. V. Systemic and pathogenetic approach: A new look at traditional Chinese medicine. Voprosy Kurortologii, Fizioterapii, I Lechebnoi Fizicheskoi Kultury. 99 (1), 80-88 (2022).
  41. Efferth, T., Xu, A. -L., Lee, D. Y. W. Combining the wisdoms of traditional medicine with cutting-edge science and technology at the forefront of medical sciences. Phytomedicine: International Journal of Phytotherapy and Phytopharmacology. 64, 153078(2019).
  42. Zhang, Z., et al. Correlated sensory and sympathetic innervation between the acupoint bl23 and kidney in the rat. Frontiers In Integrative Neuroscience. 14, 616778(2020).
  43. Zhu, X., et al. Effects of electroacupuncture at st25 and bl25 in a sennae-induced rat model of diarrhoea-predominant irritable bowel syndrome. Acupuncture In Medicine: Journal of the British Medical Acupuncture Society. 35 (3), 216-223 (2017).
  44. Gimarc, K., Yandow, S., Browd, S., Leibow, C., Pham, K. Combined selective dorsal rhizotomy and single-event multilevel surgery in a child with spastic diplegic cerebral palsy: A case report. Pediatric Neurosurgery. 56 (6), 578-583 (2021).
  45. Zhang, W. -B., Wang, Y. -P., Li, H. -Y. Analysis on correlation between meridians and viscera in book the yellow emperor's internal classic. Acupuncture Research. 43 (7), 424-429 (2018).
  46. Wang, Y. -P., Hou, X. -S. Discussion on the classification of acupoints. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 39 (10), 1069-1072 (2019).
  47. Chen, R. -X., Kang, M. -F. Clinical application of acupoint heat-sensitization. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 27 (3), 199-202 (2007).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Meer artikelen verkennen

Selectieve spinale manipulatiemodel van jonge rattenTraditionele Chinese Geneeskundeexterne therapieverbetering van de motorische functiesecretie van groeihormoonanalyse van diergedragstimulatie van spinale acupuntenpediatrische neurologische aandoening
Verbetering van de ontwikkeling en groei van ratten met hersenverlamming bij baby's met behulp van selectieve spinale manipulaties
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.