Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Een hulpmiddel om automatisch stabiele en reproduceerbare celvrije openingen te creëren voor het verbeteren van de betrouwbaarheid van de celwondgenezingstest

1.4K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/65794

⸱

4 oktober 2024

 ,  ,  , 
1Faculty of Art and Communication, Kunming University of Science and Technology, 2The School of Integrated Chinese and Western Clinical Medicine, Anhui University of Chinese Medicine, 3School of Industrial Design, Hubei University of Technology

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Door de integratie van interactie-ervaringsontwerp en analyse van gebruikersvereisten, introduceren we een innovatieve celschraper die cellulaire wondgenezingstesten verbetert in termen van reproduceerbaarheid, betrouwbaarheid, bruikbaarheid, cellulaire integriteit en gebruikerservaring.

Samenvatting

De betrouwbaarheid van cellulaire migratiemeting in wondgenezingstesten wordt vaak ondermijnd door de heersende methodologische instabiliteit, d.w.z. een op tips gebaseerde methode. We introduceren een innovatief instrument dat is ontworpen om deze beperkingen aan te pakken. Onze nieuwe celschraper overtreft de huidige aanpak en genereert een consistentere en stabielere celvrije kloof. Herhaalde biologische experimenten tonen aan dat de celvrije opening die door de celschraper wordt geproduceerd, rechtere randen en een uniforme grootte en vorm vertoont in vergelijking met de op punt gebaseerde techniek (p < 0,05). Wat het productontwerp betreft, heeft de celschraper een verfijnd kleurenschema dat geschikt is voor laboratoriumomgevingen, waardoor de monitoring van experimentele resultaten wordt verbeterd en sterilisatie door middel van autoclaveren voor hergebruik mogelijk is. Met name na de behandeling vertoont de celschraper een verwaarloosbaar effect op de levensvatbaarheid en proliferatie van de cellen (respectievelijk 97,31% en 24,41%). Omgekeerd levert de op tips gebaseerde methode een lagere cellevensvatbaarheid (91,37%) en proliferatie (18,79%) op. Dit onderzoek presenteert de celschraper als een nieuw, herbruikbaar apparaat dat in staat is om reproduceerbare celvrije openingen te genereren met behoud van cellulaire levensvatbaarheid, waardoor de betrouwbaarheid van wondgenezingstesten wordt vergroot in vergelijking met bestaande technieken.

Inleiding

Tumoren worden gekenmerkt door verschillende kenmerken zoals selectieve groeivoordelen, metabole herbedrading en immuunmodulatie, die allemaal intrigerend bijdragen aan verbeterde celmigratie, een kritisch kwaadaardig gedrag van tumorcellen. Deze functie heeft een directe invloed op de metastase op afstand van de primaire tumor, waardoor de overleving van patiënten op lange termijn in gevaar komt 1,2,3. Selectieve groeivoordelen stellen kankercellen in staat om normale cellen te overtreffen, terwijl metabole herbedrading deze snelle proliferatie ondersteunt door energieroutes te veranderen. Tegelijkertijd zorgt immuunmodulatie ervoor dat tumoren de afweer van het lichaam kunnen ontwijken. Studies onderstrepen de ernst van dit probleem en tonen aan dat longmetastase, vaak een gevolg van verbeterde celmigratie, een terminale gebeurtenis is die leidt tot de dood van patiënten met verschillende vormen vankanker. Borstkanker5, baarmoederhalscarcinoom4 en osteosarcoom6 zijn bijvoorbeeld goed voor respectievelijk 20%, 9% en 30% van dergelijke gevallen. Daarom is het beoordelen van de migratie van tumorcellen een integraal onderdeel geworden van het huidige oncologisch onderzoek, wat de veelzijdige aard van tumorprogressie verder benadrukt.

Celwondgenezingstest is een gebruiksvriendelijke methode voor het meten van in vitro cellulaire migratie, die vaak wordt gebruikt in oncologische onderzoeken7. De meeste onderzoekers gebruiken pipetpunten om handmatig celwonden te maken8. Hoewel een dergelijke methode snel en gemakkelijk celwonden kan vormen, heeft deze nog steeds veel beperkingen die de reproduceerbaarheid en nauwkeurigheid voor het evalueren van celmigratie beïnvloeden. Ten eerste wordt het gebruik van pipetpunten om handmatig krassen te maken sterk beïnvloed door de werkhoek, kracht en snelheid van de gebruiker, wat van invloed is op de herhaalbaarheid van de methode8. Ten tweede hebben celdefecten die door de punt worden gegenereerd meestal gekartelde randen in plaats van rechte randen, omdat pipetpunten plastic producten zijn met een bepaalde elasticiteit9. Sommige onderzoeken genereren wonden door geprefabriceerde kweekinzetstukken rechtstreeks in de celkweekplaat te plaatsen om het bereik van celproliferatie te beperken10. Deze aanpak omzeilt de beperkingen van de op tips gebaseerde methode, zoals gekartelde randen en reproduceerbaarheid. Maar zelfs met biocompatibele materialen heeft de langdurige coëxistentie van de inbedding met de cellen nog steeds invloed op de celgroei11. Bovendien kan de inbedding ook cellulaire epigenetische veranderingen in de marginale zone veroorzaken als gevolg van contactbeperking12. Ook zijn contactinzetstukken gemaakt van biocompatibele materialen duur en moeilijk te hergebruiken, waardoor de haalbaarheid ervan wordt beperkt13. Daarom is een nieuw, reproduceerbaar en praktisch hulpmiddel nodig om in vitro cellulaire migratie gemakkelijk te kwantificeren.

Het primaire doel van deze methode is het introduceren van een innovatief hulpmiddel voor het kwantificeren van in vitro cellulaire migratie in oncologische studies, het aanpakken van de beperkingen van bestaande technieken en het verbeteren van de reproduceerbaarheid en nauwkeurigheid bij het beoordelen van cellulaire migratie.

De grondgedachte achter de ontwikkeling van deze techniek ligt in het cruciale belang van het evalueren van tumorcelmigratie in de oncologie. Tumoren vertonen onderscheidende kenmerken, waaronder selectieve groeivoordelen, metabole herbedrading en immuunmodulatie, die allemaal bijdragen aan verbeterde celmigratie, een fundamenteel aspect van kankermaligniteit. Deze methode is bedoeld om een betrouwbaardere manier te bieden om cellulaire migratie te bestuderen, wat bijdraagt aan een beter begrip van tumorgedrag.

Deze methode biedt substantiële voordelen ten opzichte van bestaande technieken. Handmatige krastesten kunnen last hebben van operatorafhankelijke interferentie, terwijl kweekinserts de celgroei en genexpressie kunnen beïnvloeden. Deze methode daarentegen biedt verbeterde herhaalbaarheid, nauwkeurigheid en bruikbaarheid, en biedt een kosteneffectieve oplossing voor het meten van in vitro cellulaire migratie in oncologisch onderzoek. Het voorziet in een cruciale behoefte aan een betrouwbaar en toegankelijk hulpmiddel om celmigratie bij verschillende soorten kanker te bestuderen, waardoor het een waardevolle aanvulling is op het veld.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle deelnemers hebben volledige schriftelijke geïnformeerde toestemming gegeven. Ethische goedkeuring was niet van toepassing, aangezien er geen dierlijke of menselijke weefselmonsters in de huidige studie waren opgenomen.

1. Onderzoek naar de eisen van de gebruikersgemeenschap

  1. Lever vragenlijsten aan de biologen/experimentatoren die werken aan celwondgenezingstests. Verzamel de ingevulde vragenlijsten en gebruik ze voor het onderzoek. Voor dit onderzoek zijn van 12 okt 2021 tot en met 3 feb 2022 100 vragenlijsten afgeleverd bij 100 biologen. Het responspercentage was 97%.
  2. Vraag respondenten om vragen te beantwoorden als: welke van de experimenten met celkrabben stoorde u het meest? En welk hulpmiddel is gebruikt om het celkrassen uit te voeren? Volg deze vragen met subvragen om de oorzaken op te sporen.
  3. Onderzoek de perceptie van de experimentalisten van hulpmiddelen zoals pipetpunten en celkweekinzetstukken in experimenten met celwondgenezing. Begrijp en verzamel hun redenen om het ene hulpmiddel boven het andere te kiezen, met behulp van de Means-end-chain-theorie op basis van ladderingtechnieken in de vragenlijsten sectie14,15.
    OPMERKING: De laddermethode is onderverdeeld in twee soorten: de zachte laddermethode met diepte-interviews en de harde laddermethode met vragenlijsten of papier-en-potloodquizzen16. De harde laddermethode was de primaire techniek die in dit onderzoek werd gebruikt. De Means-end-chain-theorie suggereert dat de expliciete kennis van de doelgebruikers oppervlakkig en concreet is, terwijl de stilzwijgende kennis diep en abstract is 17,18,19.

2. Ontwerp en driedimensionale modellering

  1. Maak een schets van de inzichten die zijn verzameld uit de vorige vragenlijstenquête en start het ontwerpproces. Gebruik deze voorlopige schets als de fundamentele blauwdruk.
    1. Werk de afmetingen en lay-out van elk onderdeel uit door de functies Dim, DimRadius en DimDiameter toe te passen in de modelleringssoftware.
    2. Voer metingen uit met de schuifmaat met een precisie van 0,02 mm op echte 6-putjes platen om de uiteindelijke afmetingen van de celschraper vast te stellen. Controleer of deze 42,1 mm lang, 42,1 mm breed en 18,5 mm hoog zijn. Besteed aandacht aan de details in de ontwerpfase, met name de producthoogte en de geschiktheid in de put, om een vlottere montage te vergemakkelijken.
  2. Bouw een driedimensionaal model en render het.
    1. Begin met 3D-ontwerpen in software door een basismodel te maken. Klik op knoppen zoals ExtrudeCrv voor het uitrekken en Loft voor het vormgeven van het ontwerp. Verfijn het model en klik vervolgens op Fitaalrand voor gladde randen.
      OPMERKING: Andere gebruikte functieknoppen zijn onder meer: Lijnen - Om rechte lijnsegmenten te tekenen, Polylijnen - Om ononderbroken lijnen te maken die zijn samengesteld uit meerdere segmenten, Rechthoeken - Om rechthoekige vormen te tekenen, Cirkels - Om cirkelvormige vormen te tekenen, Arcs - Om boog- of elliptische vormen te tekenen, Punten - Om enkelpuntsmarkeringen te plaatsen, Tekst - Om tekstlabels toe te voegen, Afmetingen - Om gemeten afmetingen aan modellen toe te voegen, Array - Om gekopieerde patronen van objecten te maken, Roteren - Om objecten in de gewenste hoeken te roteren, Verplaatsen - Om objecten naar nieuwe locaties te verplaatsen, Schaal - Om objecten groter of kleiner te maken, Bijsnijden/Verlengen - Om objecten bij te snijden of uit te breiden om aan andere geometrie te voldoen, Booleaanse Unie/Verschil/Snijpunt - Om objecten te combineren, af te trekken of het snijpunt van objecten te vinden, Lagen - Om objecten op verschillende lagen te ordenen, Render - Om gerenderde weergaven met materialen en belichting te genereren en Exporteren - Om modelgeometrie te exporteren naar andere bestandsindelingen.
    2. Importeer het model in een 3D-renderingsoftware. Breng materialen aan zoals plastic, spons en staal en pas vervolgens de belichting aan voor een realistische weergave.
      OPMERKING: Een algemene lijst met functieknoppen omvat: Drag & Drop - Om materialen rechtstreeks op onderdelen of modellen toe te passen door een materiaal uit de bibliotheek te slepen en neer te zetten op het gewenste onderdeel in de real-time weergave, Klik met de rechtermuisknop - Wanneer u met de rechtermuisknop op een materiaal in de bibliotheek klikt, ziet u meestal opties om: Toepassen op selectie - Pas het materiaal toe op een geselecteerd onderdeel in de real-time weergave. Materiaal bewerken - Pas de materiaaleigenschappen aan. Materiaaleigenschappen (na het selecteren van een materiaal) - Om toegang te krijgen tot specifieke eigenschappen van het materiaal en deze te wijzigen, zoals kleur, ruwheid, brekingsindex en andere kenmerken. Zoekbalk - Om snel een materiaal in de bibliotheek te vinden door de naam of bijbehorende trefwoorden te typen. Categorieën/mappen - Om te navigeren door verschillende categorieën of mappen met materialen zoals metalen, kunststoffen, glas, enz. Toevoegen aan favorieten - Om bepaalde materialen als favorieten te markeren voor gemakkelijke toegang tijdens toekomstige sessies. Sneltoetsen - Sommige bewerkingen zijn toegankelijk via sneltoetsen. M is bijvoorbeeld meestal de sneltoets om snel de materiaaleigenschappen van een geselecteerd onderdeel op te roepen.
    3. Verbeter ten slotte het contrast (+56) en de verzadiging (levendigheid +19, verzadiging +7) van de afbeelding in foto- en ontwerpsoftware en voeg achtergrondelementen toe (tekstinformatie en kleur van witte naar lichtgrijze gradiëntachtergrond) voor context om een hoogwaardige, realistische productweergave te garanderen.
      1. Gebruik Afbeelding > Aanpassingen, Helderheid/Contrast om het contrast van een afbeelding aan te passen. Gebruik Afbeelding > Tint/Verzadiging om het verzadigingsniveau van de afbeelding te wijzigen. Gebruik het tekstgereedschap (T-pictogram) om tekstinformatie aan de afbeelding toe te voegen.
        OPMERKING: Een algemene lijst met functieknoppen omvat Ellipse Tool (U) - Om stippen/cirkels te tekenen. Stel het gereedschap in om een vorm te tekenen, kies de gewenste vulkleur en klik en sleep vervolgens (houd de Shift-toets ingedrukt om een perfecte cirkel te behouden) om een stip te maken. Lijngereedschap (U) - Om rechte lijnen op de afbeelding te tekenen. Selecteer het gereedschap, stel de gewenste lijndikte in en klik en sleep vervolgens om een lijn te tekenen. Penseel (B) - Een alternatieve manier om stippen en lijnen te tekenen. Selecteer de grootte en vorm van het penseel en klik (voor stippen) of klik en sleep (voor lijnen).
  3. Na het voltooien van het driedimensionale model, gaat u verder met het produceren van de celschraper via de maal- en montagemethode 20,21,22.

3. Productie

  1. Gebruik de kleur, materialen, afwerking (CMF) theorie in de huidige studie om de prototypes van de celschraper te ontwerpen. De CMF-theorie dient als ontwerpmethodologie in wetenschappelijk onderzoek. Het verbetert de bruikbaarheid van het product, geeft vorm aan de perceptie van de gebruiker en stuurt de selectie van materialen 23,24,25.
    1. Selecteer de kleuren die in de celschraper moeten worden gebruikt uit het standaard kleurensysteem, waaronder Zwart 6 C, Cool Gray 6 C en 11-0601TPG26,27.
    2. Om de celschraper te bouwen die voldoet aan de laboratoriumnormen, kiest u geschikte materialen, waaronder polypropyleen (PP), spons en koolstofstaal. Voor de fabricage van fysieke prototypes begint u met het gebruik van een 3D-printer om het structurele raamwerk te produceren. Gebruik vervolgens connectoren of kleefmiddelen om de montage van de schraper te voltooien.
      NOTITIE: Om het fysieke product van de celschraper voor te bereiden, maalt en monteert u de benodigde materialen. Veiligheidsprotocollen moeten gedurende het hele proces worden gevolgd om een veilig en effectief eindproduct te garanderen.
    3. Ga verder met het afwerkingsproces, dat kan bestaan uit snijden, slijpen, polijsten, stempelen of andere technieken. Begin met het schuren van het model met schuurpapier met een gemiddelde korrel en korrel 120 om eventuele ruwe randen te verwijderen.
    4. Volg dit met een schuurpapier met korrel 220 om een glad oppervlak te krijgen.
    5. Naschuren om de oppervlakken glad te strijken en ervoor te zorgen dat de plug-in of ingebouwde connectoren correct op elkaar zijn afgestemd.
    6. Verbind dia I en II stevig met behulp van de connectoren (vaste staven) om een robuuste en duurzame montage van de celschraper te garanderen. Bereik de uiteindelijke vaste vorm van de celschraper door een combinatie van mechanische bevestiging en lijmverbinding. Gebruik bevestigingsmiddelen, met name een pen-en-gatstructuur, om onderdelen met mechanische kracht aan elkaar te bevestigen. Om de sterkte van de assemblage te verbeteren, brengt u bovendien lijm (lijm) aan om de componenten verder te hechten.
    7. Autoclaaf de schraper bij 121,3 °C gedurende 30 minuten om ervoor te zorgen dat hij zijn oorspronkelijke vorm en fysische eigenschappen behoudt.

4. Celcultuur

  1. Kweek HOS-cellen in minimaal essentieel medium aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS) en 1% penicilline-streptomycine. Kweek ze bij 37 °C met 5% CO2 .
  2. Verander het kweekmedium elke 2 dagen.
  3. Wanneer de celgroei de confluentie van 80% overschrijdt, voeg dan 1 ml trypsine met 0,25% EDTA toe en verteer gedurende 60 seconden. Centrifugeer de cellen daarna 5 minuten bij 300 x g voor de subcultuur. Verwijder het supernatans en voeg kweekmedium toe om een uiteindelijke concentratie van 5 x 104 cellen per putje te krijgen. Gebruik een geautomatiseerde cellenteller voor het tellen van cellen.

5. Beoordeling van het potentieel voor celbeschadiging van de celschraper en op tips gebaseerde methode

  1. Bereid alle materialen voor op verwonding en steriliseer ze met ultraviolette straling door ze 30 minuten bloot te stellen.
  2. Wikkel na sterilisatie 100% confluente HOS-cellen in platen met 6 putjes in een concentratie van 5 x 104 cellen per putje met behulp van de celschrapermethode of de op tips gebaseerde methode.
    1. Gebruik voor de op punt gebaseerde methode een punt van 100 μL en sleep deze met 1 streek in horizontale richting en de andere in verticale richting over de cel met medium.
    2. Voor de celschrapermethode plaatst u het prototype van de schraper in een van de putjes en drukt u met behulp van het pincet één keer voorzichtig aan. De cellen zijn gewond. Voer elk verwondingsexperiment in drievoud uit.
  3. Analyseer alle celwonden met behulp van een digitaal microscoopsysteem en beeldvormingssoftware.

6. Meten van de levensvatbaarheid en celproliferatie van cellen

  1. Voer alle cellevensvatbaarheidstests uit volgens het protocol in de CCK-8-kit.
  2. Incubeer de cellen met CCK-8-oplossing gedurende 2 uur bij 37 °C en meet vervolgens hun absorptie bij 450 nm met behulp van een microplaatlezer om de levensvatbaarheid van de cellen te kwantificeren.
  3. Ontwerp de 5-ethynyl-20-deoxyuridine (EdU) incorporatietest om DNA-duplicatie nauwkeurig te kwantificeren en de celproliferatieverhouding direct te kwantificeren. Bepaal de invloed van verschillende methoden om celwonden te genereren op celproliferatie met behulp van de EdU-test, volgens het protocol beschreven in eerdere publicatie28.
  4. Kleur de cellen en breng ze in beeld met een digitaal microscoopsysteem. Zorg ervoor dat elk experiment in drievoud wordt uitgevoerd.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Het ontleden van de vraag van gebruikers naar gereedschappen om celwonden te genereren
De huidige experimentele methode om celwonden te genereren vereist verdere verbetering om veel problemen aan te pakken die de biologische reproduceerbaarheid, robuustheid, economische consumptie en gebruikerservaring van celwondgenezingstest in gevaar brengen. We gebruikten de harde laddering-methode om de behoeften van gebruikers die betrokken zijn bij biologische experimenten te a...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

De huidige studie was gericht op het ontwikkelen van een automatisch gemechaniseerd hulpmiddel voor het genezen van celwonden. Voor zover wij weten, is het de eerste poging om een gemechaniseerde aangedreven structuur toe te passen om automatisch celwonden te maken op een manier met één klik. Hiermee willen we de tekortkomingen van de traditionele, op tips gebaseerde methode aanpakken, zoals een lage reproduceerbaarheid en een onstabiele krastoestand. Profiterend van de positieve resulta...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs verklaren dat ze geen belangenconflict hebben.

Dankbetuigingen

Deze studie wordt ondersteund door de subsidie van de National Social Science Foundation (22FYSB023), de Hubei Industrial Design Center Research Foundation (08hqt201412046) en de Humanities and Social Science Foundation van de provinciale onderwijsafdeling van Hubei (15Y054).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
CCK-8 KitBeyotime Company, ChinaC0037
digitaal microscoopsysteemOlympusIX81
foetaal bovien serumGibco, USA16000044
HOS Procell Life Science & Technology Co., LtdCL-0360
Image-Pro PlusMedia Cyberneticsversie 6.0
KeyShotLuxionversie 11.03D rendersoftware
microplatelezerBioTek, DuitslandELX808
Minimum Essential MediumGibco, USA11095080
Pantone-matchsysteemPantonecommercieel kleurmatchsysteem
penicilline-streptomycineBeyotime Company, ChinaST488
PhotoshopAdobefoto- en ontwerpsoftware
Rhinoceros 3DRobert McNeel & Associatesversie 7.03D ontwerpsoftware
TC20 geautomatiseerde celtellerBio-RadTC20
TrypsineCytiva HyClone, Verenigde StatenSH30042.01

Referenties

  1. Trepat, X., Chen, Z., Jacobson, K. Cell migration. Compr Physiol. 2 (4), 2369-2392 (2012).
  2. Moncharmont, C., et al. Radiation-enhanced cell migration/invasion process: a review. Crit Rev Oncol Hematol. 92 (2), 133-142 (2014).
  3. Verbeek, B. S., Adriaansen-Slot, S. S., Vroom, T. M., Beckers, T., Rijksen, G. J. F. I. Overexpression of EGFR and c-erbB2 causes enhanced cell migration in human breast cancer cells and NIH3T3 fibroblasts. FEBS Lett. 425 (1), 145-150 (1998).
  4. Vaideeswar, P., Aswani, Y., Damani, S., Singaravel, S. Pulmonary microvascular metastases in cervical carcinoma: A case series. J Postgrad Med. 66 (3), 155-158 (2020).
  5. Liang, Y., Zhang, H., Song, X., Yang, Q. Metastatic heterogeneity of breast cancer: Molecular mechanism and potential therapeutic targets. Semin Cancer Biol. 60, 14-27 (2020).
  6. Sasaki, R., Osaki, M., Okada, F. MicroRNA-based diagnosis and treatment of metastatic human osteosarcoma. Cancers (Basel). 11 (4), 553(2019).
  7. Spaeth, E., Klopp, A., Dembinski, J., Andreeff, M., Marini, F. Inflammation and tumor microenvironments: defining the migratory itinerary of mesenchymal stem cells. Gene Ther. 15 (10), 730-738 (2008).
  8. Zhang, M., Li, H., Ma, H., Qin, J. A simple microfluidic strategy for cell migration assay in an in vitro wound-healing model. Wound Repair Regen. 21 (6), 897-903 (2013).
  9. Yue, P. Y., Leung, E. P., Mak, N., Wong, R. N. A simplified method for quantifying cell migration/wound healing in 96-well plates. J Biomol Screen. 15 (4), 427-433 (2010).
  10. Roch, T., et al. Immunological evaluation of polystyrene and poly (ether imide) cell culture inserts with different roughness. Clin Hemorheol Microcirc. 52 (2-4), 375-389 (2012).
  11. Jonkman, J. E., et al. An introduction to the wound healing assay using live-cell microscopy. Cell Adh Migr. 8 (5), 440-451 (2014).
  12. Freshney, R. I. Culture of animal cells: a manual of basic technique and specialized applications. , John Wiley & Sons, Inc. (2015).
  13. Kato, T., et al. Reuse of cell culture inserts for in vitro human primary airway epithelial cell studies. Am J Respir Cell. 64 (6), 760-764 (2021).
  14. Veludo-de-Oliveira, T. M., Ikeda, A. A., Campomar, M. C. Discussing laddering application by the means-end chain theory. Qualit Rep. 11 (4), 626-642 (2006).
  15. Yang, T., Yang, F., Men, J. Recommendation content matters! Exploring the impact of the recommendation content on consumer decisions from the means-end chain perspective. Int J Info Manage. 68, 102589(2023).
  16. Sadeghlou, S., Emami, A. Residential preferences and satisfaction: a qualitative study using means-end chain theory. J Housing Built Env. 38, 1711-1734 (2023).
  17. Pieters, R., Baumgartner, H., Allen, D. A means-end chain approach to consumer goal structures. Int J Res Market. 12 (3), 227-244 (1995).
  18. Valette-Florence, P., Rapacchi, B. J. J. Improvements in means-end chain analysis: using graph theory and correspondence analysis. J Advert Res. 31, 30-45 (1991).
  19. Nunkoo, R., Ramkissoon, H. Applying the means-end chain theory and the laddering technique to the study of host attitudes to tourism. J Sustain Tourism. 17 (3), 337-355 (2009).
  20. Development of an automatic mold polishing system. Tsai, M. J., Chang, J. L., Haung, J. F. IEEE Int Conf Robot Auto, 3, 3517-3522 (2005).
  21. Altan, T., et al. Advanced techniques for die and mold manufacturing. CIRP Annals. 42 (2), 707-716 (1993).
  22. Kalt, E., Monfared, R., Jackson, M. Towards an automated polishing system: Capturing manual polishing operations. Int J Res Eng Tech. 5 (7), 182-192 (2016).
  23. Becerra, L. CMF design: the fundamental principles of colour, material and finish design. , Frame Publishers, UK. (2016).
  24. Pan, C., et al. Next-generation immuno-oncology agents: current momentum shifts in cancer immunotherapy. J Hematol Oncol. 13 (1), 29(2020).
  25. Kim, S., Nah, K. The development direction of emotional materials by increasing sensorial experiences-Focusing on the case study of CMF design. Arch Des Res. 27 (2), 121-135 (2014).
  26. Eiseman, L. The complete color harmony, pantone edition: expert color information for professional results. , Rockport Publishers. (2017).
  27. Eiseman, L., Recker, K. Pantone: The twentieth century in color:(coffee table books, design books, best books about color). , Chronicle Books. (2011).
  28. Deng, P., Jin, W., Liu, Z., Gao, M., Zhou, J. Novel multifunctional adenine-modified chitosan dressings for promoting wound healing. Carbohydr Polym. 260, 117767(2021).
  29. Ares, G., Giménez, A., Gámbaro, A. Understanding consumers' perception of conventional and functional yogurts using word association and hard laddering. Food Quality Prefer. 19 (7), 636-643 (2008).
  30. Lee, W. J. A study on word cloud techniques for analysis of unstructured text data. J Converg Culture Tech. 6 (4), 715-720 (2020).
  31. Word Cloud Explorer: Text Analytics Based on Word Clouds. Heimerl, F., Lohmann, S., Lange, S., Ertl, T. 47th Hawaii international conference on system sciences, , IEEE. (2014).
  32. Kulevicz, R. A., et al. Influence of sustainability reports on social and environmental issues: bibliometric analysis and the word cloud approach. Env Rev. 28 (4), 380-386 (2020).
  33. Rubbo, S. D., Gardner, J. F. A review of sterilization and disinfection. Lloyd-Luke. , (1965).
  34. Kelsey, J. C. Sterilization by ethylene oxide. J Clin Pathol. 14 (1), 59-61 (1961).
  35. Shintani, H. Ethylene oxide gas sterilization of medical devices. Biocontrol Sci. 22 (1), 1-16 (2017).
  36. Rutala, W. A., Gergen, M. F., Weber, D. J. Comparative evaluation of the sporicidal activity of new low-temperature sterilization technologies: ethylene oxide, 2 plasma sterilization systems, and liquid peracetic acid. Am J Infect Control. 26 (4), 393-398 (1998).
  37. Dion, M., Parker, W. Steam sterilization principles. Pharm Eng. 33 (6), 1-8 (2013).
  38. Környei, Z., et al. Cell sorting in a Petri dish controlled by computer vision. Sci Rep. 3, 1088(2013).
  39. Hsu, J. T., et al. Chronic wound assessment and infection detection method. BMC Med Inform Decis Mak. 19 (1), 99(2019).
  40. Katoh, M. Test-retest reliability of isometric ankle plantar flexion strength measurement performed by a hand-held dynamometer considering fixation: examination of healthy young participants. J Phys Ther Sci. 34 (6), 463-466 (2022).
  41. Li, X., Zhao, J., Ma, G., Huang, S. Experimental study on the traditional timber mortise-tenon joints. Adv Str Eng. 18 (12), 2089-2102 (2016).
  42. Cottle, R. W. The principal pivoting method revisited. Mathematical Prog. 48, 369-385 (1990).
  43. Cross, N. Engineering design methods: strategies for product design. , John Wiley & Sons. (2021).
  44. Otto, K., Wood, K. Product design: techniques in reverse engineering and new product development. , Pearson. (2001).
  45. Tariq, M., et al. Gefitinib inhibits M2-like polarization of tumor-associated macrophages in Lewis lung cancer by targeting the STAT6 signaling pathway. Acta Pharmacol Sin. 38 (11), 1501-1511 (2017).
  46. Rahimi, S., et al. CRISPR/Cas9-mediated knockout of Lcn2 effectively enhanced CDDP-induced apoptosis and reduced cell migration capacity of PC3 cells. Life Sci. 231, 116586(2019).
  47. Cormier, N., Yeo, A., Fiorentino, E., Paxson, J. Optimization of the wound scratch assay to detect changes in murine mesenchymal stromal cell migration after damage by soluble cigarette smoke extract. J Vis Exp. (106), e53414(2015).
  48. Pinto, B. I., Cruz, N. D., Lujan, O. R., Propper, C. R., Kellar, R. S. In vitro scratch assay to demonstrate effects of arsenic on skin cell migration. J Vis Exp. (144), e58838(2019).
  49. Rodriguez, L. G., Wu, X., Guan, J. L. Wound healing assay. Methods Mol Biol. 294, 23-29 (2005).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Meer artikelen verkennen

Celscrapercelvrije openingcelmigratiecelviabiliteitcelproliferatiereproduceerbare assaytipgebaseerde methodeEdU-assay
Een hulpmiddel om automatisch stabiele en reproduceerbare celvrije openingen te creëren voor het verbeteren van de betrouwbaarheid van de celwondgenezingstest
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.