Onderzoek naar keuzes in de levensgeschiedenis: temperatuur en substraattype gebruiken als op elkaar inwerkende factoren voor voorkeuren van bromvlieglarven en vrouwtjes

Summary

Hierin worden twee protocollen beschreven voor het beoordelen van voedselbron- en ovipositievoorkeuren bij larven en vrouwtjes van bromvliegen. Deze bestaan uit vier keuzes met twee factoren die op elkaar inwerken: het type substraat en de temperatuur. De testen maken het mogelijk om de voedselbronvoorkeur van de larven en de voorkeur voor de ovipositieplaats van de vrouwtjes te bepalen.

Abstract

Bromvliegen (Diptera: Calliphoridae) vertonen een breed scala aan larvale levensstijlen, meestal geclassificeerd als obligaat parasitisme, facultatief parasitisme en volledige sapro-necrofagie. Verschillende parasitaire soorten, zowel obligate als facultatieve, worden beschouwd als van sanitair en economisch belang, omdat hun larven myiasis (madenbesmetting in levend weefsel) kunnen veroorzaken. Het is echter opmerkelijk dat het volwassen vrouwtje een beslissende rol speelt bij het kiezen van de ovipositieplaats en daarom grotendeels de voedingsgewoonte en ontwikkelingsomstandigheden van de larven bepaalt. In deze studie worden twee protocollen voorgesteld om de voedingsvoorkeur van larven en de voorkeur voor de vrouwelijke ovipositieplaats te testen, rekening houdend met twee op elkaar inwerkende factoren: het type vleessubstraat en de temperatuur. De hier gepresenteerde opstellingen maakten het mogelijk om Lucilia cuprina-larven en drachtige vrouwtjes te testen in een vierkeuzetest met twee temperaturen (33 ± 2 °C en 25 ± 2 °C) en twee soorten vleessubstraten (vers vlees aangevuld met bloed en 5 dagen oud bedorven vlees). Larven of drachtige vrouwtjes kunnen ervoor kiezen om respectievelijk hun eieren in te graven of te leggen in een van de volgende situaties: bedorven vlees bij 25 °C (simulatie van een acrofaag soort), vers vlees aangevuld met bloed bij 33 °C (simulatie van een parasitaire soortconditie) en twee controles, bedorven vlees bij 33 °C of vers vlees aangevuld met bloed bij 25 °C. De voorkeur wordt beoordeeld door het aantal larven of eieren te tellen dat in elke optie voor elke replica is gelegd. Door de waargenomen resultaten te vergelijken met een willekeurige verdeling, kon de statistische significantie van de voorkeur worden ingeschat. De resultaten gaven aan dat larven van L. cuprina een sterke voorkeur hebben voor het rotte substraat bij 25 °C. Omgekeerd was de voorkeur van vrouwtjes voor de ovipositieplaats meer gevarieerd voor het vleestype. Deze methodologie kan worden aangepast om de voorkeur van andere insectensoorten van vergelijkbare grootte te testen. Andere vragen kunnen ook worden onderzocht door gebruik te maken van alternatieve voorwaarden.

Introduction

Vliegen, met name kelkvormige muskoïden (waaronder bromvliegen, huisvliegen, botvliegen en vleesvliegen), vertonen een breed scala aan levensstijlen, waaronder parasitair en necro-saprofage gedrag. Parasitaire soorten veroorzaken meestal myiasis, een aantasting van levende weefsels door maden (larven)². In de familie Calliphoridae zijn zowel obligate als facultatieve parasitaire soorten belangrijke veeplagen die verantwoordelijk zijn voor economische verliezen en slecht dierenwelzijn als gevolg van madenplagen 2,3,4,5,6,7.^<....

Protocol

Vliegenmonsters werden verkregen met behulp van vallen en niet op besmette dieren. Er werd een SISBIO-vergunning (67867-1) afgegeven om vliegen van de familie Calliphoridae in gevangenschap te verzamelen en te houden in laboratoriumomstandigheden. Insectenmonsters zijn vrijgesteld van ethische evaluatie in onderzoek in Brazilië. Rundvlees en -bloed werden commercieel verkregen en er was geen ethische goedkeuring vereist.

1. Voedingsvoorkeur voor larven

1. Bereiding van de petrischaaltjes met 2% agar
   1. Bereid vier petrischaaltjes met 2% agar. Voeg hiervoor 6 g bacteriologische agar toe aan 300 ml water en smelt d....

Results

Om de effectiviteit van de gepresenteerde methoden aan te tonen, werden de experimenten uitgevoerd met behulp van een laboratoriumpopulatie van Lucilia cuprina (familie: Calliphoridae), een facultatieve parasitaire bromvlieg². De volledige ruwe dataset die voor deze soort is verkregen, is te vinden in aanvullend bestand S3 met de resultaten voor de larvale en vrouwelijke substraatvoorkeurstests. Om te beoordelen of de larven en vrouwtjes een voorkeur hebben voor een subst.......

Discussion

Om de evolutie van voedingsgewoonten te begrijpen, met name in de context van parasitisme bij bromvliegen, is het nodig om de voorkeuren van het substraat te onderzoeken in de verschillende levensfasen voor voeding of ovipositie. Daarom werden in deze studie robuuste en eenvoudige methoden voorgesteld voor het onderzoeken van substraatvoorkeuren bij larven en vrouwtjes van bromvliegen. Deze methoden werden getest in Lucilia cuprina, een facultatieve parasitaire bromvlieg². Interessant is .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Agar	Sigma-Aldrich	05038-500G	For microbiology
Black cardboards	-	-	70x50 cm
Bovine blood with anticoagulat	-	-	50% pure bovine blood with anticoagulant (3.8% sodium citrate) + 50% of filtered water
Bovine ground Meat	-	-	Around 7-8% of fat
Brush	-	-	Made with plastic
Conical tube	Falcon or Generic	-	50 mL
Cross-shaped glass containers	Handmade	NA	48x48 cm, 8 cm of height and 8 cm of width
Erlenmeyer	Vidrolabor	NA	500 mL
70% Ethanol	Synth	A1084.01.BL	70% ethyl ethanol absolute + 30% filtered water
Graduated cylinder	Nalgon or Generic	-	500 mL and 50 mL
Heating pad	Thermolux	-	30x40 cm dimensions, 40 W, 127 V
Infrared thermometer	HeTaiDa	HTD8808	Non-contact body thermometer (Sample Rate: 0.5 S, Accuracy: ±0.2 °C, Measuring: 5-15 cm)
Petri dish (Glass)	Precision	NA	150x20 mm dimensions
			(Note: the petri dishes can be plastic if used only once)
Petri dish PS	Cralplast	18130	60x15 mm dimensions
Plastic Pasteur pipette	-	-	3 mL (total volume)
Sodium citrate	Synth	C11033.01.AG	3.8% Sodium citrate (38 g diluted in 1L of filtered water)
Spoons	-	-	More than one spoon is necessary. Use one for each type of meat substrate. Preferably stainless steel.
Stainless steel spatula	Generic	-	Flat end and spoon end
Stereomicroscope	Bioptika	-	WF10X/22 lenses
Tweezer	-	-	Metal made and fine point
White led light strips	NA	NA	4.8 W, 2x0.05 mm², 320 lumens, Color temperature:6500 K (white)