Onderzoek naar keuzes in de levensgeschiedenis: temperatuur en substraattype gebruiken als op elkaar inwerkende factoren voor voorkeuren van bromvlieglarven en vrouwtjes

Samenvatting

Hierin worden twee protocollen beschreven voor het beoordelen van voedselbron- en ovipositievoorkeuren bij larven en vrouwtjes van bromvliegen. Deze bestaan uit vier keuzes met twee factoren die op elkaar inwerken: het type substraat en de temperatuur. De testen maken het mogelijk om de voedselbronvoorkeur van de larven en de voorkeur voor de ovipositieplaats van de vrouwtjes te bepalen.

Samenvatting

Bromvliegen (Diptera: Calliphoridae) vertonen een breed scala aan larvale levensstijlen, meestal geclassificeerd als obligaat parasitisme, facultatief parasitisme en volledige sapro-necrofagie. Verschillende parasitaire soorten, zowel obligate als facultatieve, worden beschouwd als van sanitair en economisch belang, omdat hun larven myiasis (madenbesmetting in levend weefsel) kunnen veroorzaken. Het is echter opmerkelijk dat het volwassen vrouwtje een beslissende rol speelt bij het kiezen van de ovipositieplaats en daarom grotendeels de voedingsgewoonte en ontwikkelingsomstandigheden van de larven bepaalt. In deze studie worden twee protocollen voorgesteld om de voedingsvoorkeur van larven en de voorkeur voor de vrouwelijke ovipositieplaats te testen, rekening houdend met twee op elkaar inwerkende factoren: het type vleessubstraat en de temperatuur. De hier gepresenteerde opstellingen maakten het mogelijk om Lucilia cuprina-larven en drachtige vrouwtjes te testen in een vierkeuzetest met twee temperaturen (33 ± 2 °C en 25 ± 2 °C) en twee soorten vleessubstraten (vers vlees aangevuld met bloed en 5 dagen oud bedorven vlees). Larven of drachtige vrouwtjes kunnen ervoor kiezen om respectievelijk hun eieren in te graven of te leggen in een van de volgende situaties: bedorven vlees bij 25 °C (simulatie van een acrofaag soort), vers vlees aangevuld met bloed bij 33 °C (simulatie van een parasitaire soortconditie) en twee controles, bedorven vlees bij 33 °C of vers vlees aangevuld met bloed bij 25 °C. De voorkeur wordt beoordeeld door het aantal larven of eieren te tellen dat in elke optie voor elke replica is gelegd. Door de waargenomen resultaten te vergelijken met een willekeurige verdeling, kon de statistische significantie van de voorkeur worden ingeschat. De resultaten gaven aan dat larven van L. cuprina een sterke voorkeur hebben voor het rotte substraat bij 25 °C. Omgekeerd was de voorkeur van vrouwtjes voor de ovipositieplaats meer gevarieerd voor het vleestype. Deze methodologie kan worden aangepast om de voorkeur van andere insectensoorten van vergelijkbare grootte te testen. Andere vragen kunnen ook worden onderzocht door gebruik te maken van alternatieve voorwaarden.

Inleiding

Vliegen, met name kelkvormige muskoïden (waaronder bromvliegen, huisvliegen, botvliegen en vleesvliegen), vertonen een breed scala aan levensstijlen, waaronder parasitair en necro-saprofage gedrag. Parasitaire soorten veroorzaken meestal myiasis, een aantasting van levende weefsels door maden (larven)². In de familie Calliphoridae zijn zowel obligate als facultatieve parasitaire soorten belangrijke veeplagen die verantwoordelijk zijn voor economische verliezen en slecht dierenwelzijn als gevolg van madenplagen 2,3,4,5,6,7. Obligate parasieten, zoals de schroefwormen van de Nieuwe Wereld en de Oude Wereld (respectievelijk Cochliomyia hominivorax en Chrysomyia bezziana), zijn bijzonder problematisch 4,7,8,9,10 samen met facultatieve parasieten, zoals de schapenbromvliegen (Lucilia cuprina en Lucilia sericata)^{2,5,6, 7}. okt. Niet-parasitaire soorten, waaronder sapro-necrofaag, ontwikkelen zich in rottend en necrotisch organisch materiaal en worden vaak aangetroffen in onhygiënische omgevingen. Hun strikt niet-parasitaire levensstijl kan met succes worden gebruikt voor madentherapie, waarbij vliegenlarven worden gebruikt om wonden van necrotische weefsels schoon te maken^11,12,13. Bromvliegen worden ook gebruikt in de forensische wetenschap, omdat ze tot de eerste organismen behoren die recent overleden lichamen lokaliseren en koloniseren, waarbij de zich ontwikkelende larven dienen als een middel om het tijdstip van overlijden te schatten¹⁴.

De levensstijl van bromvliegen is het onderwerp geweest van verschillende onderzoeken (bijv. 15,16,17,18,19,20,21) vanwege hun betekenis in relatie tot menselijke belangen. Inzicht in de biologische mechanismen die de levensstijl van een soort bepalen, kan waardevolle inzichten opleveren in het verbeteren van methoden die gericht zijn op het bestrijden van plaagsoorten. Bovendien bieden de diversiteit en evolutie van de levensstijl van bromvliegen een ideale context om de oorsprong en mechanismen van complexe eigenschappen (bijv. parasitisme) te bestuderen. Parasitisme als gevolg van maden die zich voeden met levend weefsel is verschillende keren onafhankelijk geëvolueerd binnen de familie Calliphoridae^22,23. De evolutionaire geschiedenis van de voedingsgewoonten van bromvliegen is echter nog grotendeels onbekend, met studies die beperkt zijn tot het in kaart brengen van de gewoonten langs fylogenieën (bijv. ^16,19,22) zonder de hulp van functionele assays. Het is bijvoorbeeld onzeker of obligate parasieten zijn geëvolueerd uit generalisten (d.w.z. facultatieve parasieten) of rechtstreeks uit necrofaag soorten. De moleculaire, fysiologische en gedragsprocessen die gepaard gaan met de evolutionaire verschuivingen in levensstijl zijn ook grotendeels onbekend.

In deze context bieden facultatieve parasieten, zoals de schaapskogelvlieg Lucilia cuprina, die zich kunnen ontwikkelen als parasieten op een gastheer of als necrofagen op kadavers, de mogelijkheid om de factoren en mechanismen te onderzoeken die levensstijlkeuzes bepalen. Lucilia cuprina is een kosmopolitische soort die bekend staat om het veroorzaken van schapenvliegen, vooral in Australië, waar het als een plaag wordt beschouwd ^3,16. Myiasis als gevolg van L. cuprina kan ook voorkomen bij andere veedieren, huisdieren en mensen 3,24,25,26,27,28,29,30. De larven kunnen zich echter ook ontwikkelen in necrotische weefsels en rottend materiaal en deze soort is met succes gebruikt in de forensische entomologie omdat het zeer snel is om lijken te lokaliseren en te koloniseren^31,32,33,34. Hoewel de parasitaire versus niet-parasitaire levensstijl van bromvliegen wordt bepaald door het larvale stadium, is het het volwassen vrouwtje dat de ovipositieplaats selecteert. Bijgevolg heeft het volwassen vrouwtje een grote invloed op de levensstijl van de larven, omdat deze laatste een beperkte mobiliteit hebben. De keuze van het vrouwtje betekent echter niet noodzakelijkerwijs dat de larven de voorkeur geven aan hetzelfde substraat wanneer ze een keuze krijgen³⁵. Een hypothese is dat gedragsveranderingen die ertoe leiden dat vrouwtjes hun eieren op levend weefsel leggen, deel kunnen hebben uitgemaakt van een vroege omschakeling naar een parasitaire levensstijl. Pre-adaptaties of fysiologische vermogens van de resulterende larven zouden essentieel zijn geweest voor hun succesvolle ontwikkeling op het levende weefsel, wat leidde tot het ontstaan van de parasitaire levensstijl. Als zodanig hoeven de beïnvloede en geselecteerde processen niet noodzakelijkerwijs op één lijn te liggen tussen beide levensfasen.

In deze context werden twee methoden ontwikkeld om gedragsvoorkeur bij bromvliegen te testen, in het bijzonder voor L. cuprina, met betrekking tot het voedingssubstraat van de larven (larvale voorkeurstest) en de ovipositieplaats (vrouwelijke voorkeurstest). Deze methoden houden rekening met twee op elkaar inwerkende factoren: temperatuur en versheid van het vlees. Temperatuur werd gekozen als een cruciale factor, aangezien de meeste gevallen van myiasis voorkomen bij homeotherme dieren². Daarom werd een temperatuur van 33 °C gekozen als proxy voor de "parasitaire levensstijlfactor", terwijl een temperatuur van 25 °C (kamertemperatuur) de "niet-parasitaire factor" vertegenwoordigt. Er is gekozen voor een temperatuur van 25 °C omdat deze representatief is voor de gemiddelde jaartemperatuur die in Brazilië is geregistreerd (Nationaal Instituut voor Meteorologie, INMET). Daarnaast werden twee soorten vleessubstraten overwogen, beide afkomstig van runderen: (i) vers vlees aangevuld met bloed, dat het substraat nabootst voor de parasitaire levensstijl, dat wordt gebruikt om de parasitaire bromvlieg Co. hominivorax in laboratoriumomstandigheden te kweken³⁶, en (ii) 5 dagen oud rot vlees, dat het substraat nabootst voor de necrofaag levensstijl. Het rundersubstraat wordt vaak gebruikt om L. cuprina te kweken in laboratoriumomstandigheden 27,37,38,39 omdat het verschillende voordelen biedt op het gebied van beschikbaarheid, kosteneffectiviteit en bruikbaarheid^, terwijl het een ecologisch verantwoord substraat is. Andere studies^40,41 waarin het effect van rotte versus verse substraten bij bromvliegen werd vergeleken, hebben 7 dagen oud rot substraat gebruikt (in anaërobe omstandigheden) en toonden een nadelig effect van het rotte substraat op ontwikkelingssnelheden, overleving en groei. Omdat bekend is dat L. cuprina verse kadavers koloniseert die meestal aan lucht worden blootgesteld, hebben we besloten om 5 dagen oud rot vlees (rundergehakt) te gebruiken in niet-hermetische potten (aërobe en anaërobe afbraak) om een necrofaag substraat na te bootsen.

De hier gepresenteerde experimentele ontwerpen bieden het voordeel van het onderscheiden van voorkeuren voor individuele factoren en hun gecombineerde effecten. Bovendien zijn de gescoorde fenotypen, namelijk de keuze van het voedingssubstraat voor de larven en het aantal gelegde eieren, direct relevant voor de biologische en ecologische aspecten van bromvliegsoorten. De geschiktheid van deze protocollen wordt benadrukt door hun effectiviteit in L. cuprina aan te tonen. Daarnaast wordt een script voor statistische analyse verstrekt, dat kan worden gebruikt om de waargenomen resultaten verkregen in L. cuprina te vergelijken met gesimuleerde willekeurige gegevens, waardoor robuuste statistische analyse en interpretaties worden gegarandeerd.

Protocol

Vliegenmonsters werden verkregen met behulp van vallen en niet op besmette dieren. Er werd een SISBIO-vergunning (67867-1) afgegeven om vliegen van de familie Calliphoridae in gevangenschap te verzamelen en te houden in laboratoriumomstandigheden. Insectenmonsters zijn vrijgesteld van ethische evaluatie in onderzoek in Brazilië. Rundvlees en -bloed werden commercieel verkregen en er was geen ethische goedkeuring vereist.

1. Voedingsvoorkeur voor larven

1. Bereiding van de petrischaaltjes met 2% agar
   1. Bereid vier petrischaaltjes met 2% agar. Voeg hiervoor 6 g bacteriologische agar toe aan 300 ml water en smelt dit mengsel in een magnetron. Verdeel het volume vervolgens gelijkmatig over vier glazen petrischaaltjes (150 x 20 mm), waarbij je in elk schaaltje ongeveer 70 ml gebruikt.
      OPMERKING: Bereid petrischalen die gelijk zijn aan het gewenste aantal experimentele replicaten. In deze studie werden 36 replicaten gebruikt.
   2. Zodra de agar is gestold, gebruikt u een conische buis van 50 ml (diameter van 3 cm) om vier gaatjes in de agar te ponsen, twee aan elke kant van de petrischaal, volgens het meegeleverde snijpatroon (figuur 1).
      LET OP: Deze opzet is vergelijkbaar met eerder beschreven protocollen door Fouche et al. (2021)⁴⁰ en Boulay et al. (2016)⁴².
2. Voorbereiding van substraten
   1. Om het verse vlees met bloed te bereiden, voegt u 12 ml verdund runderbloed toe aan 200 g vers rundergehakt. Meng. Zorg ervoor dat u voor elk type vlees verschillende maatcilinders en lepels gebruikt om kruisbesmetting tussen substraten te voorkomen.
      OPMERKING: Het verdunde bloed bestaat voor 50% uit zuiver bloed gemengd met een antistollingsmiddel (3,8% natriumcitraat) en voor 50% gefilterd water.
   2. Om het rotte substraat te bereiden, voegt u 12 ml gefilterd water toe aan 200 g 5 dagen oud rot rundergehakt en mengt u dit goed.
      OPMERKING: Bedorven vlees werd verkregen door versgemalen vlees gedurende vijf dagen bij 25 °C te incuberen in niet-hermetische plastic potten (mix van aërobe en niet-aërobe ontleding). Elke pot bevatte 200 g vers gemalen vlees. Het werd vervolgens ingevroren tot gebruik.
   3. Vul in elk petrischaaltje twee gaatjes met het mengsel van vers vlees en bloed en de overige twee gaatjes met het mengsel van rot vlees en water.
      OPMERKING: Om positiefouten te voorkomen, varieert u de plaatsing van de verschillende vleessoorten in de petrischalen. Sommige petrischalen moeten bijvoorbeeld hetzelfde soort vlees tegenover elkaar hebben, terwijl in andere schalen het vleestype moet worden gekruist, zoals weergegeven in figuur 2.
3. Experimentele opstelling
   1. Plaats het verwarmingskussen bij een kamertemperatuur (RT) van 25 °C direct onder een lichtbron om het experimentele gebied gelijkmatig te verlichten en elke gedragsbias naar of tegen het licht te voorkomen. Plaats kartonnen pads rond het verwarmingskussen om ervoor te zorgen dat de experimentele opstelling waterpas blijft.
      NOTITIE: De gebruikte lichtbron was wit licht met lage verwarming, zoals een neonbuis. Het verwarmingskussen werd op een tafel direct onder de plafondlampen geplaatst (Figuur 3).
   2. Bedek het verwarmingskussen en de nivelleringspads met zwart karton en schakel het verwarmingskussen in.
      OPMERKING: De zwarte kartonnen omslag moet worden gebruikt om visuele aanwijzingen te vermijden die de gedragstest kunnen beïnvloeden.
   3. Plaats zes petrischaaltjes met agar en vleessubstraat op het zwarte karton met twee substraten, één van elk type, op het verwarmingskussen en de andere twee van het oppervlak van het verwarmingskussen (Figuur 2). Laat de substraten ongeveer 10 minuten opwarmen.
      OPMERKING: Er kan condens ontstaan op het deksel van de petrischalen.
4. Larvale test
   1. Controleer de temperatuur van de ondergronden (koude kant: 25 ± 2 °C; warme kant: 33 ± 2 °C) met een infraroodthermometer.
      NOTITIE: Het verwarmingskussen blijft gedurende de hele duur van het experiment branden. Aan het begin en aan het einde van het experiment werden temperatuurmetingen gedaan. Hoewel de temperatuur met ± 2 °C fluctueerde, was er nog steeds een temperatuurverschil van minimaal 8 °C tussen de warme en koude omstandigheden.
   2. Plaats na het bereiken van de gewenste temperatuur vijf larven van de derde instar in het midden van elke petrischaal met een pincet (Figuur 2) en bedek de petrischalen met de deksels. Laat het keuze-experiment 10 minuten lopen.
      OPMERKING: Sommige larven kunnen langs de randen en op het deksel van de petrischalen kruipen. Als er een larve ontsnapt, gebruik dan een pincet om deze terug te plaatsen in het midden van de petrischaal.
   3. Haal na 10 minuten alle petrischaaltjes van het verwarmingskussen en plaats ze op een ander oppervlak om te voorkomen dat de substraten blijven verwarmen. Tel vervolgens het aantal larven in elk substraat, evenals degenen die geen substraat hebben gekozen.
      OPMERKING: Lucilia cuprina-larven blijven in het door hen gekozen substraat, zoals waargenomen in dit experiment.

2. Voorkeur voor vrouwelijke ovipositieplaats

1. Experimentele opstelling
   1. Gebruik een gewone plank die eerder is bedekt met zwart karton en gelijkmatig is verlicht met witte LED-lichtstrips.
      OPMERKING: De zwarte kartonnen omslagen moeten worden gebruikt om visuele aanwijzingen te vermijden die de gedragstest kunnen beïnvloeden. De witte LED-strips worden in de lengte vastgezet in het midden van de plank recht boven het experiment. De planken die in de opstelling werden gebruikt, werden 45 cm uit elkaar geplaatst.
   2. Plaats bij RT (25 °C) een verwarmingskussen in het midden van de plank. Gebruik kartonnen pads rond het verwarmingskussen als ondersteuning om ervoor te zorgen dat de experimentele opstelling waterpas staat.
   3. Bedek het verwarmingskussen en de nivelleringskussens met zwart karton om hetzelfde visuele patroon onder alle substraten te behouden.
   4. Plaats twee kruisvormige glazen containers op één plank, elk moet twee armen over het zwarte karton en het verwarmingskussen hebben. Schakel de witte LED-lichtstrips en de verwarmingskussens in voordat het experiment begint.
   5. Gebruik 70% ethanol om de kruisen schoon te maken (in het kruis en het deksel) om geurverontreiniging te voorkomen.
2. Voorbereiding van substraten
   1. Bereid vier petrischaaltjes (60 mm x 15 mm) per kruis met 5 g bedorven of vers vlees van 5 dagen oud (twee van elk type substraat).
      OPMERKING: Bereid petrischalen die gelijk zijn aan het aantal experimentele replicaten dat vier keer gewenst is. In dit onderzoek werden 30 replicaten gebruikt, in totaal 120 bereide petrischalen.
   2. Voeg 1 ml verdund runderbloed (50% zuiver bloed met antistollingsmiddel en 50% gefilterd water) toe aan het verse vlees en 1 ml gefilterd water aan het bedorven vlees. Meng het vlees (vers of bedorven) grondig met de vloeistof (bloed of water) met een andere lepel voor elke vleessoort.
      OPMERKING: De bereiding van het vlees voor de vrouwelijke test lijkt sterk op de larvale test, hoewel de hoeveelheden anders zijn omdat de vrouwelijke test langer zal lopen dan de larvale test. Vergeet niet om voor elk type vlees verschillende pipetpunten en lepels te gebruiken om geurkruisbesmetting tussen substraten te voorkomen.
   3. Controleer of de alcohol volledig uit de kruisen is verdampt. Plaats vervolgens vier petrischaaltjes (één van elke vleessoort op het verwarmingskussen en de andere twee van het oppervlak van het verwarmingskussen) aan het uiteinde van elke arm van het kruis (Figuur 4). Sluit de kruisen met hun deksels en laat de substraten ongeveer 10 minuten opwarmen.
      OPMERKING: Om positiefouten te voorkomen, moet u bovendien de plaatsing van de verschillende vleessoorten in de kruisen variëren. Sommige kruisen moeten bijvoorbeeld hetzelfde soort vlees op aangrenzende armen hebben, terwijl in andere kruisen hetzelfde vleestype tegenover elkaar moet staan, zoals weergegeven in figuur 4.
3. Vrouwelijke test
   1. Verzamel zwangere vrouwtjes in de vliegenkooi en isoleer ze in individuele buizen.
      OPMERKING: Zwangere vrouwtjes worden gekenmerkt door een vergroot en witachtig geel achterlijf in tegenstelling tot niet-drachtige vrouwtjes (Figuur 5). Zwangere vrouwtjes werden tussen 10 en 16 dagen na opkomst verzameld voor de experimenten.
   2. Controleer de temperatuur van de ondergronden in de kruisen (koude kant: 25 ± 2 °C; warme kant: 33 ± 2 °C) met behulp van een infraroodthermometer.
      OPMERKING: Net als bij de larvale test blijft het verwarmingskussen gedurende de hele duur van het experiment branden. Aan het begin en einde van het experiment werden temperatuurmetingen gedaan. Hoewel de temperatuur met ± 2 °C fluctueerde, was er nog steeds een temperatuurverschil van minimaal 8 °C tussen de warme en koude omstandigheden.
   3. Plaats de buis ondersteboven met daarin een zwangere vrouw in de opening in het midden van elk kruis. Nadat het vrouwtje het kruis is binnengegaan, verwijdert u de buis en sluit u de opening met het kleine deksel. Nadat je alle kruizen hebt gesloten, plaats je een zwart karton vooraan in de plank om de experimentele opstelling in te sluiten. Laat het experiment 4 uur duren.
   4. Verwijder daarna het vrouwtje door het voorzichtig op te vangen met een buis en controleer of er eieren op de substraten zaten.
   5. Identificeer het deksel van elke petrischaal met het substraattype van elk kruis. Gebruik 70% ethanol om de kruisen (in het kruis en het deksel) te reinigen van eventuele geuren van de test.
      OPMERKING: Als de eieren niet direct na het experiment kunnen worden geteld, kunnen de petrischaaltjes met substraten bij -20 °C worden bewaard.
4. Aantal eieren
   OPMERKING: Als de substraten in de petrischalen bevroren waren, ontdooi ze dan voordat u gaat tellen.
   1. Gebruik een stereomicroscoop om het aantal eieren te tellen dat in elk substraat is gelegd. Gebruik een borstel en water om de eieren te scheiden om ze te tellen.

3. Data-analyse en statistiek

1. Berekening van voorkeursindexen
   1. Bereken voor elk duplo van larvale (n = 36) en vrouwelijke (n = 30) tests de voorkeursindex voor vlees (aangeduid als_PI-vlees) door de verhouding te bepalen tussen larven of eieren die aanwezig zijn op verse substraten (vers warm en vers koud) en het totale aantal larven of eieren op alle substraten (vers warm + vers koud + rot heet + rot koud).
      PI_vlees = (# larven of eitjes op verse substraten) / # Totaal larven of eitjes
      OPMERKING: De termen "Warm" en "Koud" zijn indicatief voor temperatuuromstandigheden van respectievelijk 33 ± 2 °C en 25 ± 2 °C.
   2. Bereken op dezelfde manier de voorkeursindex voor temperatuur (_PI-temp) voor elke replicatie van larvale en vrouwelijke tests als het aantal larven of eieren dat aanwezig is op hete substraten (vers heet en rot heet) gedeeld door het totale aantal larven of eieren op alle substraten (vers warm + vers koud + rot heet + rot koud ).
      PI_temp = (# larven of eitjes op hete substraten) / # Totaal aantal larven of eitjes
      OPMERKING: Waarden dicht bij 1 geven een voorkeur aan voor verse of warme substraten en waarden dicht bij nul duiden op een voorkeur voor rotte of koude substraten. De PI's kunnen handmatig worden berekend of met behulp van de verstrekte code (Supplemental Files S1 en Supplemental Files S2).
2. Vergelijking van de waargenomen voorkeur voor gesimuleerde willekeurige gegevens
   1. Voer de meegeleverde code (aanvullend bestand S1 en aanvullend bestand S1) uit om de gesimuleerde gegevens te genereren en te vergelijken met de waargenomen gegevens.
      OPMERKING: Deze code genereert 1000 gesimuleerde willekeurige datasets voor larven en vrouwtjes en berekent de voorkeursindexen (PI's) voor elke replicatie van de gesimuleerde en de waargenomen gegevens van L. cuprina. De simulaties gaan ervan uit dat zowel larven als vrouwtjes geen substraatvoorkeur vertonen en willekeurige keuzes maken. De simulaties omvatten de belangrijkste gedragsaspecten van de dieren, waaronder verschillende scenario's, zoals: de kans dat larven geen substraat kiezen, en volwassen vrouwtjes die hun eileg concentreren op een enkel substraat of hun eieren al dan niet uniform verdelen over verschillende substraten. Gegeneraliseerde lineaire modellen (GLM, familie: quasibinomiaal; link: logit) werden gebruikt om de waargenomen gegevens van de gedragstesten te vergelijken met de gesimuleerde willekeurige gegevens. De gebruikte GLM was zeer geschikt voor deze analyse vanwege het begrensde karakter van de Preference Index (PI), variërend tussen 0 en 1. GLM's zijn bedreven in het omgaan met niet-normaal verdeelde responsvariabelen en maken robuuste statistische vergelijkingen mogelijk. Deze keuze maakte zinvolle inzichten mogelijk door het mogelijk te maken om waargenomen gegevens van gedragstesten effectief te vergelijken met complexe patronen die werden gegenereerd door gesimuleerde willekeurige gegevens. Kleine aanpassingen aan de code kunnen nodig zijn voor andere gestructureerde datasets.

Resultaten

Om de effectiviteit van de gepresenteerde methoden aan te tonen, werden de experimenten uitgevoerd met behulp van een laboratoriumpopulatie van Lucilia cuprina (familie: Calliphoridae), een facultatieve parasitaire bromvlieg². De volledige ruwe dataset die voor deze soort is verkregen, is te vinden in aanvullend bestand S3 met de resultaten voor de larvale en vrouwelijke substraatvoorkeurstests. Om te beoordelen of de larven en vrouwtjes een voorkeur hebben voor een subst...

Discussie

Om de evolutie van voedingsgewoonten te begrijpen, met name in de context van parasitisme bij bromvliegen, is het nodig om de voorkeuren van het substraat te onderzoeken in de verschillende levensfasen voor voeding of ovipositie. Daarom werden in deze studie robuuste en eenvoudige methoden voorgesteld voor het onderzoeken van substraatvoorkeuren bij larven en vrouwtjes van bromvliegen. Deze methoden werden getest in Lucilia cuprina, een facultatieve parasitaire bromvlieg². Interessant is ...

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Agar	Sigma-Aldrich	05038-500G	Voor microbiologie
Zwarte kartonnen platen	-	-	70x50 cm
Rund bloed met anticoagulant	-	-	50% puur rund bloed met anticoagulant (3,8% natriumcitraat) + 50% gefilterd water
Rund gemalen vlees	-	-	Ongeveer 7-8% vet
Borstel	-	-	Gemaakt van plastic
Conische buis	Falcon of Generic	-	50 mL
Kruisvormige glazen containers	Handgemaakt	NA	48x48 cm, 8 cm hoogte en 8 cm breedte
Erlenmeyer	Vidrolabor	NA	500 mL
70% Ethanol	Synth	A1084.01.BL	70% ethyl ethanol absoluut + 30% gefilterd water
Gradueerde cilinder	Nalgon of Generic	-	500 mL en 50 mL
Verwarmingspad	Thermolux	-	30x40 cm afmetingen, 40 W, 127 V
Infrarood thermometer	HeTaiDa	HTD8808	Non-contact lichaamsthermometer (Sample Rate: 0,5 S, Nauwkeurigheid: ±0,2 °C, Meetbereik: 5-15 cm)
Petrischaal (Glas)	Precision	NA	150x20 mm afmetingen
			(Opmerking: de petrischalen kunnen van plastic zijn indien ze maar eenmalig worden gebruikt)
Petrischaal PS	Cralplast	18130	60x15 mm afmetingen
Plastiek Pasteur pipet	-	-	3 mL (totaal volume)
Natriumcitraat	Synth	C11033.01.AG	3,8% Natriumcitraat (38 g verdund in 1L gefilterd water)
Lepels	-	-	Meer dan één lepel is noodzakelijk. Gebruik er een voor elk type vlees substraat. Bij voorkeur roestvrij staal.
Roestvrij stalen spatel	Generic	-	Vlakke punt en lepel punt
Stereomicroscoop	Bioptika	-	WF10X/22 lenzen
Pincet	-	-	Metaal gemaakt en fijn punt
Witte led licht strips	NA	NA	4,8 W, 2x0,05 mm², 320 lumens, Kleurtemperatuur: 6500 K (wit)