Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Verstoring van de bloed-hersenbarrière van muizen door kleine extracellulaire blaasjes van hypoxische menselijke placenta's

1.8K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/65867

⸱

26 januari 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Vascular Physiology Laboratory, Department of Basic Sciences, Universidad del Bío-Bío, Chillan, 2Nursery School, Health Faculty, Universidad Santo Tomás, Los Angeles, 3Obstetrics and Gynecology Department, Herminda Martin Clinical Hospital, Chillan, 4Faculty of Medicine, Universidad Católica de la Santísima Concepción, Concepcion, 5Laboratory of Animal Biotechnology, Department of Animal Science, Faculty of Veterinary Sciences, Universidad de Concepción, Chillan, 6Group of Research and Innovation in Vascular Health (GRIVAS Health), Chillan

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Er wordt een protocol gepresenteerd om te evalueren of kleine EV's (sEV's) geïsoleerd uit placenta-explantaten gekweekt onder hypoxische omstandigheden (modellering van één aspect van pre-eclampsie) de bloed-hersenbarrière verstoren bij niet-zwangere volwassen vrouwelijke muizen.

Samenvatting

Cerebrovasculaire complicaties, waaronder hersenoedeem en ischemische en hemorragische beroerte, vormen de belangrijkste oorzaak van moedersterfte geassocieerd met pre-eclampsie. De onderliggende mechanismen van deze cerebrovasculaire complicaties blijven onduidelijk. Ze zijn echter gekoppeld aan placentadisfunctie en verstoring van de bloed-hersenbarrière (BBB). Niettemin wordt het verband tussen deze twee verre organen nog steeds vastgesteld. Toenemend bewijs suggereert dat de placenta signaalmoleculen, waaronder extracellulaire blaasjes, afgeeft aan de maternale circulatie. Extracellulaire blaasjes worden gecategoriseerd op basis van hun grootte, waarbij kleine extracellulaire blaasjes (sEV's kleiner dan 200 nm in diameter) worden beschouwd als kritische signaaldeeltjes in zowel fysiologische als pathologische omstandigheden. Bij pre-eclampsie is er een verhoogd aantal circulerende sEV's in de maternale circulatie, waarvan de signaalfunctie niet goed wordt begrepen. Placenta-sEV's die vrijkomen bij pre-eclampsie of van normale zwangerschapsplacenta's die worden blootgesteld aan hypoxie, veroorzaken endotheeldisfunctie in de hersenen en verstoring van de BBB. In dit protocol beoordelen we of sEV's geïsoleerd uit placenta-explantaten gekweekt onder hypoxische omstandigheden (modellering van een aspect van pre-eclampsie) de BBB in vivo verstoren.

Inleiding

Ongeveer 70% van de maternale sterfte als gevolg van pre-eclampsie, een hypertensief zwangerschapssyndroom dat wordt gekenmerkt door verminderde placentatieprocessen, maternale systemische endotheeldisfunctie en, in ernstige gevallen, multi-orgaanfalen 1,2, wordt geassocieerd met acute cerebrovasculaire complicaties 3,4. De meeste moedersterfte komt voor in lage- en middeninkomenslanden5. De onderliggende mechanismen zijn echter nog steeds onduidelijk, ondanks de klinische en epidemiologische relevantie van cerebrovasculaire complicaties geassocieerd met pre-eclampsie.

Aan de andere kant zijn extracellulaire vesikels (EV's) (diameter ~30-400 nm) essentiële mediatoren van intercellulaire communicatie tussen weefsels en organen,inclusief maternale en placenta-interactie6. Naast eiwitten en lipiden op het uitwendige oppervlak, vervoeren EV's lading naar binnen (eiwitten, RNA en lipiden). EV's kunnen worden onderverdeeld in (1) exosomen (diameter ~50-150 nm, ook wel kleine EV's (sEV's) genoemd), (2) middelgrote/grote EV's en (3) apoptotische lichamen, die verschillen in grootte, biogenese, inhoud en potentiële signaalfunctie. De samenstelling van EV's wordt bepaald door de cellen waaruit ze afkomstig zijn en het ziektetype7. Syncytiotrofoblast-afgeleide EV's brengen placenta alkalische fosfatase (PLAP)8,9 tot expressie, die van placentae afgeleide circulerende kleine EV's (PDsEV's) tijdens de zwangerschap detecteert. PLAP helpt ook bij het onderscheiden van veranderingen in de lading van de PD'sEV's en hun effecten bij pre-eclampsie versus normotensieve zwangerschappen 10,11,12,13,14,15.

De placenta is erkend als de noodzakelijke component in de pathofysiologie van pre-eclampsie16 of cerebrale complicaties geassocieerd met deze ziekte 17,18,19. Het is echter onbekend hoe dit verre orgaan veranderingen in de hersencirculatie kan veroorzaken. Aangezien sEV's een cruciale rol spelen in cel-tot-celcommunicatie vanwege hun vermogen om bioactieve componenten over te dragen van donor- naar ontvangercellen 6,20,21, heeft een groeiend aantal onderzoeken placenta-sEV's in verband gebracht met het ontstaan van maternale endotheeldisfunctie 21,22,23,24, inclusief endotheelcellen in de hersenen 25,26bij vrouwen met pre-eclampsie. Het compromitteren van de endotheelfunctie van de hersenen kan dus leiden tot verstoring van de bloed-hersenbarrière (BBB), een cruciaal onderdeel bij cerebrovasculaire complicaties geassocieerd met pre-eclampsie3,27.

Niettemin meldden preklinische bevindingen met behulp van cerebrale vaten van ratten die waren blootgesteld aan serum van vrouwen met pre-eclampsie28 of menselijke endotheelcellen van de hersenen die waren blootgesteld aan plasma van vrouwen met pre-eclampsie29 dat circulerende factor(en) verstoring van de BBB veroorzaken. Ondanks verschillende kandidaten met het potentieel om de BBB te schaden die aanwezig is in de maternale circulatie tijdens pre-eclampsie, zoals verhoogde niveaus van pro-inflammatoire cytokines (d.w.z. tumornecrosefactor)18,28 of vasculaire regulatoren (d.w.z. vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF))29,30,31, of oxidatieve moleculen zoals geoxideerde lipoproteïnen (oxo-LDL)32,33, onder andere 34, geen van hen brengt een directe verbinding tot stand tussen de placenta en de BBB. Onlangs hebben sEV's geïsoleerd uit hypoxische placenta's aangetoond dat ze de BBB kunnen verstoren bij niet-zwangere vrouwelijke muizen25. Aangezien placenta-sEV's de meeste van de genoemde circulerende factoren kunnen dragen met het vermogen om de BBB te verstoren, worden sEV's beschouwd als geschikte kandidaten om de gewonde placenta te verbinden, de drager te zijn van schadelijke circulerende factoren en de BBB te verstoren bij pre-eclampsie.

Dit protocol stelt ons in staat om te onderzoeken of sEV's geïsoleerd uit placenta-explantaten gekweekt onder hypoxische omstandigheden de BBB kunnen verstoren bij niet-zwangere vrouwelijke muizen als een proxy voor het begrijpen van de pathofysiologie van cerebrale complicaties tijdens pre-eclampsie.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Het onderzoek werd uitgevoerd volgens de principes die zijn verwoord in de Verklaring van Helsinki en met toestemming van de respectieve ethische beoordelingscommissies. Alle menselijke deelnemers gaven hun geïnformeerde toestemming vóór het verzamelen van monsters, zoals eerder gerapporteerd25. Bovendien keurde de Commissie Bio-ethiek en Bioveiligheid van de Universiteit van Bío-Bío dit project goed (Fondecyt-subsidie 1200250). Het dierwerk werd uitgevoerd in overeenstemming met de kardinale principes van de drie R's in het gebruik van dieren in experimenten35, en volgens de aanbevelingen van de richtlijnen voor de verzorging en het gebruik van proefdieren gepubliceerd door het Amerikaanse National Institute of Health. De dieren werden in geschikte omgevingen gehouden in het Vivarium van de Universiteit van Bío-Bío. Verse placenta's (n = 4) werden binnen 1 uur na een electieve keizersnede verkregen van moeders (leeftijd 28-31 jaar) met een normale zwangerschap op termijn (38 tot 41 weken zwangerschap). Keizersneden werden uitgevoerd in het Herminda Martin Clinical Hospital, Chillan, Chili, zoals eerder gemeld25. Om het in vivo model toe te passen, werden 4-6 maanden oude vrouwelijke niet-zwangere muizen (stam C57BLACK/6) gebruikt. Ze werden verdeeld in drie experimentele groepen: (1) controle (zonder behandeling), (2) behandeld met sEV's van normoxie (sEVs-Nor), en (3) behandeld met sEV's van hypoxische gekweekte placenta's (sEVs-Hyp), die werden gebruikt om de verstoring van de BBB in vivote evalueren 25. Alle geïnjecteerde oplossingen waren steriel. Ook werd de bereiding van sEV's uitgevoerd in aseptische omstandigheden en onder een klasse II bioveiligheidskap om besmetting te voorkomen.

1. Placentacultuur explanteert

  1. Om explantaten van normale zwangerschapsplacenta's te extraheren, raadpleegt u de methode gepubliceerd door Miller et al. 200536.
  2. Verwijder voorzichtig de stolsels van de basale plaat van de menselijke placenta met behulp van een gesteriliseerde pincet. Extraheer kleine explantaten om een uiteindelijke weefselextractie van 10 g te verkrijgen.
  3. Zorg ervoor dat placenta-explantaten worden verwijderd uit de vier kwadranten van het maternale deel van de placenta. Zorg ervoor dat gedevitaliseerd weefsel en verkalkte gebieden worden uitgesloten.
  4. Om placentaweefsel te manipuleren, doet u dit op ijs, onder steriele omstandigheden en in een bioveiligheidskast.
  5. Was de explantaten (minstens drie keer) met ruime hoeveelheden (vijf delen van de explantaten) koude (4 °C) fosfaatbufferoplossing (PBS 1x, pH 7,4) om zoveel mogelijk bloed te verwijderen. Centrifugeer (252 x g gedurende 10 min) op kamertemperatuur tussen wasbeurten.
  6. Resuspendeer 10 g gewassen explantaten in 20 ml kweekmedium aangevuld met 2% foetaal runderserum, 100 IE/ml penicilline en 100 μg/ml streptomycine (zie materiaaltabel).
  7. Doe de suspensie in een kweekschaal van 100 mm. Laat de explantaten 2 uur in een incubator bij 37 °C met 21% zuurstof en 5% CO2 staan.
  8. Was daarna de explantaten opnieuw met 1x PBS op 37 °C (drie keer). Centrifugeer (252 x g gedurende 10 min) op kamertemperatuur tussen wasbeurten.
  9. Resuspendeer het weefsel verder in 20 ml kweekmedium dat eerder is ontdaan van nanodeeltjes.
    OPMERKING: Voer voor uitputting van nanodeeltjes ultracentrifugatie (120.000 x g gedurende 18 uur bij kamertemperatuur) en microfiltratie (0,22 μm filter) uit.
  10. Verdeel de geresuspendeerde explantaten in twee kweekschalen (100 mm). Elk kweekschaaltje moet 10 ml geresuspendeerde explantaten bevatten.
  11. Plaats daarna een van de schalen met placenta-explantaten in standaardkweekomstandigheden (37 °C met 8% zuurstof en 5% CO2), terwijl u de andere in een hypoxische kamer met 1% O2 plaatst.
    OPMERKING: (OPTIONEEL) Analyse van de levensvatbaarheid van weefsels kan worden uitgevoerd met behulp van dezelfde weefselextracties en 3-(4,5-dimethylthiazool-2-yl)-2,5-difenyltetrazoliumbromidetest (MTT-test) als elders beschreven37,38. Gebruik de totale eiwitconcentratie gemeten in de explantatiehomogenaten om de MTT-waarden te normaliseren.
  12. Oogst na 18 uur in cultuur de geconditioneerde media van de explantaten in een nieuwe buis van 15 ml.
    OPMERKING: Bij deze stap kunnen geconditioneerde media voor een langere periode (weken) worden ingevroren (-80 °C).

2. Isolatie van sEV's op basis van placenta

  1. Isoleer sEV's uit het geconditioneerde medium met behulp van het differentiële centrifugatie- en microfiltratieprotocol volgens eerder gepubliceerde rapporten25,39.
  2. Voer sequentiële centrifugatie uit voor het geoogste geconditioneerde medium. De opeenvolgende stappen van centrifugaties zijn (1) 300 x g gedurende 10 min, (2) 2000 x g gedurende 10 min, (3) 10.000 x g gedurende 30 min en (4) 120.000 x g gedurende 2 uur. Voer de centrifugaties op kamertemperatuur uit.
  3. Verzamel bij al deze centrifugaties met een pipet van 20-100 μl voorzichtig het supernatans en gooi de pellet weg.
  4. Als u klaar bent, haalt u het laatst opgevangen supernatans door een filter van 0,22 μm (zie Materiaaltabel). Voer vervolgens een extra centrifugatie uit bij 120.000 x g gedurende 18 uur bij kamertemperatuur.
  5. Gooi daarna het supernatans weg terwijl u de pellet (die placenta-sEV's bevat) resuspendeert in 500 μL PBS (pH 7,4) en opnieuw door een filter van 0,22 μm gaat. Voer ten slotte nog een laatste centrifugatie uit bij 120.000 x g gedurende 3 uur bij kamertemperatuur.
  6. Resuspendeer vervolgens de pellet (die placenta-sEV's bevat) in 500 μL PBS (pH 7,4, eerder verarmd door sEV's) en passeer deze door een filter van 0,22 μm.
  7. Label de monsters als voorraad sEV's-Normoxia (sEVs-Nor) of sEVs-Hypoxie (sEVs-Hyp).
    OPMERKING: Bereid aliquots van 50-100 μL van de geïsoleerde sEV's voor op verdere experimenten. Kleine EV's kunnen voor een langere periode (maanden) bij -80 °C worden opgeslagen.
  8. Karakteriseer de placenta-sEV's op grootte, aantal en sEVs-eiwitmarker, zoals eerder gerapporteerd25. De ideale gemiddelde deeltjesdiameter van sEV's is 50-150 nm.
    OPMERKING: de karakterisering van sEV's omvat positieve detectie van CD63, Tsg101, Alix en HSP70 (d.w.z. om de sEV-populatie verrijkt met exosomen te karakteriseren). Gebruik PLAP ook als een marker van placenta-oorsprong25.
  9. Meet de totale hoeveelheid eiwit in de sEVs-oplossing met behulp van de BCA-eiwittestkit volgens de instructies van de fabrikant (zie Materiaaltabel).
    OPMERKING: Figuur 1 toont een overzicht van de placenta-explantatiecultuur en extracellulaire vesikelisolatie.

3. Muizen injectie

  1. Verdoof het dier in een anesthesie-inductiekamer met een isofluraanverdeling van 5% (zie Materiaaltabel). Controleer het niveau van anesthesie door in de teen te knijpen.
  2. Plaats de muis na ~40 s in het anesthesiesysteem met behulp van een gezichtsmasker en handhaaf een anesthesieniveau van 2% isofluraan.
  3. Plaats het dier vervolgens op een verwarmingsplatform (zie Materiaaltabel) bij een kamertemperatuur van 28 °C. Houd de ogen gesmeerd met kunsttranen.
  4. Verdun vóór de injectie placenta-sEV's (200 μg totaal eiwit) met fosfaatbuffer (pH, 7,4) tot een eindvolume van 70 μl.
  5. Desinfecteer het injectiegebied met 70% ethanol en wattenstaafjes. Zorg ervoor dat u een insulinespuit met een naald van 30 G gebruikt om de sEVs-oplossing te injecteren.
    NOTITIE: De spuit kan gedurende 5 minuten op het verwarmingsplatform worden geplaatst om een fysiologische temperatuur te verkrijgen.
  6. Injecteer vervolgens de oplossing in de uitwendige halsader. Deze stap vereist een speciale training.
    OPMERKING: De procedure moet voorzichtig worden uitgevoerd, waarbij de naald langzaam wordt teruggetrokken en voorzichtig wordt opgezogen tot tekenen van bloedreflux.
  7. Oefen na injectie lichte druk uit op het geïnjecteerde gebied gedurende ~15 s met een droog wattenstaafje. Breng daarna de dieren terug naar hun respectievelijke kooien.
  8. Zorg ervoor dat u het bewustzijn en het gedrag gedurende 15 minuten evalueert. Een indicator voor het bereiken van het bewustzijn is het herstel van de totale motorische activiteit bij dieren.
    NOTITIE: Zorg voor een warme temperatuur in de kooien van het dier.

4. Snelle muizencoma- en gedragsschaal (RMCBS)

  1. Gebruik het KMCBS om de neurologische en welzijnsparameters van de dieren te evalueren40.
    OPMERKING: RMCBS maakt een snelle evaluatie mogelijk (~ 3 min) met minimale stress bij de dieren als gevolg van tussenkomst van de operator. RMCBS heeft tien parameters (elke score is 0-2).
  2. Evalueer het welzijn van muizen met de RMCBS-schaal na 0 uur (vóór het injecteren van sEV's) en 3 uur, 6 uur, 12 uur en 24 uur na injectie.
    OPMERKING: Voer een analyse uit van claudine-5 (6 uur na injectie van sEV's) en Evan's blauwe extravasatie (24 uur na injectie van sEV's) om de verstoring van de BBB te evalueren (Figuur 2).

5. Analyse van Evan's blauwe extravasatie

  1. Na injectie van placenta-sEV's (24 uur) de muizen verdoven zoals beschreven in stap 3.1.
  2. Bereid Evan's Blue-oplossing (2%, verdund in fosfaatbufferoplossing, 1x) (zie materiaaltabel).
  3. Injecteer Evan's Blue-oplossing met behulp van retro-orbitale toegang25 in een dosis van 2 ml/kg.
  4. Laat Evan's blauwe oplossing 20 minuten circuleren onder narcose.
  5. Voer vervolgens intracardiale perfusie uit volgens eerder beschreven protocol41 met zoutoplossing (~3 ml, 0,9%, w/v) om Evan's blauwe kleurstof uit de bloedsomloop te verwijderen. Deze stap is verplicht.
    OPMERKING: Verhoog voor deze procedure de anesthesie tot 5% en controleer een diep anesthesievlak (d.w.z. een drastische verlaging van de ademhalingsfrequentie).
  6. Stel het hart bloot via mediale thoracotomie41 (Figuur 3).
  7. Fixeer daarna het hele dier met een intracardiale infusie van paraformaldehyde-oplossing (4% in PBS, v/v).
    NOTITIE: Controleer de stijfheid van de staart om de juiste fixatie te controleren.
  8. Verder, zodra de fixatie is voltooid, haalt u voorzichtig de hersenen eruit, weegt u ze en fotografeert u ze41. Maak foto's met het hele brein in de buurt van een liniaal42.
  9. Plaats vervolgens de hersenen in een hersenmuissnijder (zie Tabel met materialen).
  10. Ontleed de hersenen in negen secties, kraanvogel-caudaal, inclusief het cerebellum (100 μm per sectie).
  11. Visualiseer en leg na dissectie beelden van de hersenplakjes vast in een stereozoommicroscoop (zie Tabel met materialen).
  12. Gebruik de vastgelegde beelden om Evans blauwe extravasatie te kwantificeren met behulp van ImageJ-software (zie Tabel met materialen).
    OPMERKING: Om de aanwezigheid van Evan's blauwe kleurstof te analyseren, stelt u Evan's blauwe waarden in met behulp van een positieve controle van het hersengedeelte (van een diercontroledier geïnjecteerd met kleurstof maar zonder intracardiale perfusie). De blauwe waarden van Evan die worden bereikt met positieve controle liggen over het algemeen tussen 75 en 110 in het intensiteitshistogram van het blauwe kanaal (Figuur 4).
  13. Zorg ervoor dat hersenbeelden blindelings worden geanalyseerd door de betreffende experimentele groep om vooringenomenheid van de waarnemer te voorkomen. U kunt ook de blauwe extravasatie van Evan kwantificeren door middel van hersenhomogenisatie gevolgd door spectroscopie43.
    OPMERKING: In afzonderlijke experimenten, met behulp van vers geïsoleerde hersenen van met sEV's geïnjecteerde muizen (6 uur), analyseer je de eiwitniveaus van claudine 5 (CLND-5) (zie Tabel met materialen), een kritische tight junction die betrokken is bij de dichtheid van de BBB44 (Figuur 5).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Dit protocol evalueert het vermogen van sEV's afkomstig van placenta's die zijn gekweekt in hypoxie om de BBB bij niet-zwangere muizen te verstoren. Deze methode stelt het mogelijk om de mogelijke verbinding tussen de placenta en de hersenen in normale en pathologische omstandigheden beter te begrijpen. In het bijzonder kan deze methode een proxy zijn voor het analyseren van de deelname van placenta-sEV's aan het ontstaan van cerebrale complicaties bij pre-eclampsie.

In tegenstelling tot muize...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Deze studie onthult nieuwe inzichten in mogelijke schade als gevolg van sEV's geïsoleerd uit placenta-explantaten gekweekt in hypoxische omstandigheden op de verstoring van de bloed-hersenbarrière van knaagdieren. Het pathologische mechanisme omvat een vermindering van CLND-5 in het achterste hersengebied25.

Eerder onderzoek heeft aangetoond dat plasma-sEV's van personen met pre-eclampsie endotheeldisfunctie induceren in verschillende organen met behulp van in vitro...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben geen belangenconflict te melden.

Dankbetuigingen

De auteurs willen de onderzoekers van GRIVAS Health bedanken voor hun waardevolle input. Ook verloskundigen en klinisch personeel van de dienst Verloskunde en Gynaecologie behoren tot het Hospital de Chillan, Chili. Opgericht door Fondecyt Regular 1200250.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Adult mice brain slecer matrice 3D printedOpen access fileAdult miceAdult mice brain slicer. Printed in PLA filament.
Anti β-Actin primary antibodySigma-AldrichClon AC-74Antilichaam voor ladingscontrole (Western blot)
Anti-Claudin5 primary antibodySanta cruz Biotechnologysc-374221Primair antilichaam voor tight junction eiwit CLDN5 van muizen BBB (Western blot)
BCA protein kitThermo Scientific23225Kit voor het meten van eiwitconcentratie
Culture media #200 500 mLThermo Fisher Scientificm200500Kweekmedium voor placentale explantaten
D180 CO2 incubatorRWD Life scienceD180Standaard incubator om explantaten te stabiliseren en sEVs-Nor te kweken
Evans blue dye  > 75% 10 gSigma-AldrichE2129.10GKleurstof om verstoring van de bloed-hersenbarrière IN VIVO te analyseren
Fetal bovine serum 500 mLThermo Fisher Scientific16000044Additief groeifactor voor kweekmedium 200
Himac Ultracentrifuge CP100NXHimac eppendorf group5720410101Ultracentrifuge voor geconditioneerd medium > 1,20,000 x g
ImageJ softwareNIHhttps://imagej.nih.gov/ij/download.html
Isoflurane x 100 mLUSP Baxter212-094Vluchtige inhalatieanesthesie voor muizen
Kit CellTiter 96 Non-radioactive Promega0000105232In vitro test voor de levensvatbaarheid van placentale explantaten
Mouse IgG Secondary antibodyThermo Fisher ScientificMO 63103Secundair antilichaam voor CLDN5 (western blot)
NanoSight NS300Malvern Panalytical90278090Nanotracking-analyse van deeltjes uit geconditioneerd medium van placentale explantaten
Paraformaldehide E 97% oplossing 500 mLThermo Fisher ScientificA11313.22Fixeeroplossing voor hersenweefselsneden en intracardiale perfusie (eenmaal verdund)
PBS 1 X pH 7.4 500 mLThermo Fisher Scientific10010023Wasoplossing voor placenta explantaten
Peniciline-streptomicine 100x 20 mLThermo Fisher Scientific10378016Antibiotica voor het kweekmedium van placentale explantaten
ProOX C21 Cytocentric O2 en CO2 Subchamber ControllerBioSpherixSCR_021131CO2 regulator om Hypoxie te induceren in een afgesloten kamer voor sEVs-Hyp
Sodium Thiopental 1 gChemie7061humanitaire euthanasiemiddel
Somnosuite low flow anesthesiesysteemKent ScientificsSS-01Isoflurane-verdamper voor kleine knaagdieren
Surgical Warming platformKent ScientificsA41166Verwarmingsplatform voor het onderhoud van anesthesie bij muizen
Syringe Filters, Polytetrafluoroethylene (PTFE), Hydrophobic, 0.22 µm, Sterile, 25 mmSouthern labware10026Filtratie van geconditioneerd medium dat is geoogst van placentale explantaten 
Tabletop High-Speed Micro Centrifuges HITACHI himac CT15E/CT15REHitachi medical systems6020Serie centrifugaties van geconditioneerd medium < 1,20, 000 x g
Trinocular stereomicroscope transmided and reflective light 10x-160x Center Medical2597Stereomicroscoop om hersensneden te registreren

Referenties

  1. Lisonkova, S., Joseph, K. S. Incidence of preeclampsia: risk factors and outcomes associated with early- versus late-onset disease. Am J Obstet Gynecol. 209 (544), 544.e1-544.e12 (2013).
  2. Sibai, B., Dekker, G., Kupferminc, M. Preeclampsia. Lancet. 365 (9461), 785-799 (2005).
  3. Hammer, E. S., Cipolla, M. J. Cerebrovascular dysfunction in preeclamptic pregnancies. Curr Hypertens Rep. 17 (8), 64(2015).
  4. Okanloma, K. A., Moodley, J. Neurological complications associated with the preeclampsia/eclampsia syndrome. Int J Gynaecol Obstet. 71, 223-225 (2000).
  5. Frias, A. E., Belfort, M. A. Post magpie: how should we be managing severe preeclampsia. Curr Opin Gynecol Obstet. 15 (6), 489-495 (2003).
  6. Familari, M., Cronqvist, T., Masoumi, Z., Hansson, S. R. Placenta-derived extracellular vesicles: Their cargo and possible functions. Reprod Fertil Dev. 29 (3), 433-447 (2017).
  7. Montoro-Garcia, S., Shantsila, E., Marin, F., Blann, A., Lip, G. Y. Circulating microparticles: new insights into the biochemical basis of microparticle release and activity. Basic Res Cardiol. 106, 911-923 (2011).
  8. Germain, S. J., Sacks, G. P., Sooranna, S. R., Sargent, I. L., Redman, C. W. Systemic inflammatory priming in normal pregnancy and preeclampsia: the role of circulating syncytiotrophoblast microparticles. J Immunol. 178 (9), 5949-5956 (2007).
  9. Tannetta, D., Masliukaite, I., Vatish, M., Redman, C., Sargent, I. Update of syncytiotrophoblast derived extracellular vesicles in normal pregnancy and preeclampsia. J Reprod Immunol. 119, 98-106 (2017).
  10. Collett, G. P., Redman, C. W., Sargent, I. L., Vatish, M. Endoplasmic reticulum stress stimulates the release of extracellular vesicles carrying danger-associated molecular pattern (DAMP) molecules. Oncotarget. 9 (6), 6707-6717 (2018).
  11. Cooke, W. R., et al. Maternal circulating syncytiotrophoblast-derived extracellular vesicles contain biologically active 5'-tRNA halves. Biochem Biophys Res Commun. 518 (1), 107-113 (2019).
  12. Gill, M., et al. Placental syncytiotrophoblast-derived extracellular vesicles carry active nep (neprilysin) and are increased in preeclampsia. Hypertension. 73 (5), 1112-1119 (2019).
  13. Kandzija, N., et al. Placental extracellular vesicles express active dipeptidyl peptidase IV; levels are increased in gestational diabetes mellitus. J Extracell Vesicles. 8 (1), 1617000(2019).
  14. Motta-Mejia, C., et al. Placental vesicles carry active endothelial nitric oxide synthase and their activity is reduced in preeclampsia. Hypertension. 70 (2), 372-381 (2017).
  15. Sammar, M., et al. Reduced placental protein 13 (PP13) in placental derived syncytiotrophoblast extracellular vesicles in preeclampsia - A novel tool to study the impaired cargo transmission of the placenta to the maternal organs. Placenta. 66, 17-25 (2018).
  16. Burton, G. J., Woods, A. W., Jauniaux, E., Kingdom, J. C. Rheological and physiological consequences of conversion of the maternal spiral arteries for uteroplacental blood flow during human pregnancy. Placenta. 30 (6), 473-482 (2009).
  17. Warrington, J. P., et al. Placental ischemia in pregnant rats impairs cerebral blood flow autoregulation and increases blood-brain barrier permeability. Physiological Reports. 2 (8), e12134-e12134 (2014).
  18. Warrington, J. P., Drummond, H. A., Granger, J. P., Ryan, M. J. Placental Ischemia-induced increases in brain water content and cerebrovascular permeability: Role of TNFα. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 309 (11), R1425-R1431 (2015).
  19. Johnson, A. C., et al. Magnesium sulfate treatment reverses seizure susceptibility and decreases neuroinflammation in a rat model of severe preeclampsia. PLoS ONE. 9 (11), e113670(2014).
  20. Escudero, C. A., et al. Role of extracellular vesicles and microRNAs on dysfunctional angiogenesis during preeclamptic pregnancies. Front Physiol. 7, 1-17 (2016).
  21. Salomon, C., et al. Placental exosomes as early biomarker of preeclampsia: Potential role of exosomalmicrornas across gestation. J Clin Endocrinol Metab. 102 (9), 3182-3194 (2017).
  22. Knight, M., Redman, C. W., Linton, E. A., Sargent, I. L. Shedding of syncytiotrophoblast microvilli into the maternal circulation in pre-eclamptic pregnancies. Br J Obstet Gynaecol. 105 (6), 632-640 (1998).
  23. Gilani, S. I., Weissgerber, T. L., Garovic, V. D., Jayachandran, M. Preeclampsia and extracellular vesicles. Curr Hypertens Rep. 18 (9), 68(2016).
  24. Dutta, S., et al. Hypoxia-induced small extracellular vesicle proteins regulate proinflammatory cytokines and systemic blood pressure in pregnant rats. Clin Sci (Lond). 134 (6), 593-607 (2020).
  25. Leon, J., et al. Disruption of the blood-brain barrier by extracellular vesicles from preeclampsia plasma and hypoxic placentae: attenuation by magnesium sulfate. Hypertension. 78 (5), 1423-1433 (2021).
  26. Han, C., et al. Placenta-derived extracellular vesicles induce preeclampsia in mouse models. Haematologica. 105 (6), 1686-1694 (2020).
  27. Amburgey, O. A., Chapman, A. C., May, V., Bernstein, I. M., Cipolla, M. J. Plasma from preeclamptic women increases blood-brain barrier permeability: role of vascular endothelial growth factor signaling. Hypertension. 56 (5), 1003-1008 (2010).
  28. Cipolla, M. J., et al. Pregnant serum induces neuroinflammation and seizure activity via TNFalpha. Exp Neurol. 234 (2), 398-404 (2012).
  29. Bergman, L., et al. Preeclampsia and increased permeability over the blood brain barrier - a role of vascular endothelial growth receptor 2. Am J Hypertens. 34 (1), 73-81 (2021).
  30. Torres-Vergara, P., et al. Dysregulation of vascular endothelial growth factor receptor 2 phosphorylation is associated with disruption of the blood-brain barrier and brain endothelial cell apoptosis induced by plasma from women with preeclampsia. Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis. 1868 (9), 166451(2022).
  31. Schreurs, M. P., Houston, E. M., May, V., Cipolla, M. J. The adaptation of the blood-brain barrier to vascular endothelial growth factor and placental growth factor during pregnancy. FASEB J. 26 (1), 355-362 (2012).
  32. Schreurs, M. P., Cipolla, M. J. Cerebrovascular dysfunction and blood-brain barrier permeability induced by oxidized LDL are prevented by apocynin and magnesium sulfate in female rats. J Cardiovasc Pharmacol. 63 (1), 33-39 (2014).
  33. Schreurs, M. P. H., et al. Increased oxidized low-density lipoprotein causes blood-brain barrier disruption in early-onset preeclampsia through LOX-1. FASEB J. 27 (3), 1254-1263 (2013).
  34. Escudero, C., et al. Brain vascular dysfunction in mothers and their children exposed to preeclampsia. Hypertension. 80 (2), 242-256 (2023).
  35. Russell, W. M. S., Burch, R. L. The principles of humane experimental technique. Universities Federation of Animal Welfare. , https://awionline.org/lab-animal-search/russell-w-m-s-burch-r-l-1959-principles-humane-experimental-technique-methuen-co (1959).
  36. Miller, R. K., et al. Human placental explants in culture: approaches and assessments. Placenta. 26 (6), 439-448 (2005).
  37. Troncoso, F. A. J., Herlitz, K., Ruiz, F., Bertoglia, P., Escudero, C. Elevated pro-angiogenic phenotype in feto-placental tissue from gestational diabetes mellitus. Placenta. 36 (4), 2(2015).
  38. Zhang, H. C., et al. Microvesicles derived from human umbilical cord mesenchymal stem cells stimulated by hypoxia promote angiogenesis both in vitro and in vivo. Stem Cells Dev. 21 (18), 3289-3297 (2012).
  39. Thery, C., Amigorena, S., Raposo, G., Clayton, A. Isolation and characterization of exosomes from cell culture supernatants and biological fluids. Curr Protoc Cell Biol. Chapter 3 (Unit 3), 22(2006).
  40. Carroll, R. W., et al. A rapid murine coma and behavior scale for quantitative assessment of murine cerebral malaria. PLoS One. 5 (10), e13124(2010).
  41. Wu, J., et al. Transcardiac perfusion of the mouse for brain tissue dissection and fixation. Bio Protoc. 11 (5), e3988(2021).
  42. Walchli, T., et al. Quantitative assessment of angiogenesis, perfused blood vessels and endothelial tip cells in the postnatal mouse brain. Nat Protoc. 10 (1), 53-74 (2015).
  43. Wang, H. L., Lai, T. W. Optimization of Evans blue quantitation in limited rat tissue samples. Sci Rep. 4, 6588(2014).
  44. Morita, K., Sasaki, H., Furuse, M., Tsukita, S. Endothelial claudin: claudin-5/TMVCF constitutes tight junction strands in endothelial cells. J Cell Biol. 147 (1), 185-194 (1999).
  45. Lara, E., et al. Abnormal cerebral microvascular perfusion and reactivity in female offspring of reduced uterine perfusion pressure (RUPP) mice model. J Cereb Blood Flow Metab. 42 (12), 2318-2332 (2022).
  46. Chang, X., et al. Exosomes from women with preeclampsia induced vascular dysfunction by delivering sflt (soluble fms-like tyrosine kinase)-1 and seng (soluble endoglin) to endothelial cells. Hypertension. 72, 1381-1390 (2018).
  47. Smarason, A. K., Sargent, I. L., Starkey, P. M., Redman, C. W. The effect of placental syncytiotrophoblast microvillous membranes from normal and pre-eclamptic women on the growth of endothelial cells in vitro. BJOG. 100 (10), 943-949 (1993).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Meer artikelen verkennen

Placentale hypoxiemuismodel voor pre-eclampsieendotheeldisfunctie van de hersenenextravasatie van Evans Blueplacentale explantaatkweeksequentiële centrifugatieinjectie in de vena jugularisbeoordeling van de neurologische score
Verstoring van de bloed-hersenbarrière van muizen door kleine extracellulaire blaasjes van hypoxische menselijke placenta's
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.