Hier beschrijven we een geavanceerd hulpmiddel dat is ontworpen voor het monitoren van de biosynthese van chlorofyl tijdens de vroege stadia van de de-etiolatie van Arabidopsis-zaailingen . De nieuwe methodologie biedt niet-invasieve real-time chlorofylfluorescentiebeeldvorming met een hoge ruimtelijke en temporele resolutie.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Niet-invasieve test voor bepaling van de kinetiek van chlorofylbiosynthese tijdens vroege stadia van de-etiolatie van Arabidopsis
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Biosynthese van chlorofyl is een kenmerk van de-etiolatie, een van de meest dramatische stadia in de levenscyclus van planten. Het strak gecontroleerde en zeer dynamische proces van chlorofylbiosynthese wordt geactiveerd tijdens de verschuiving van donker naar licht in bloeiende planten. Op het moment dat geëtioleerde zaailingen worden blootgesteld aan de eerste sporen van zonlicht, wordt een snelle (in volgorde van seconden) omzetting van protochlorophyllide in chlorofyllide gemedieerd door unieke lichtaccepterende eiwitcomplexen, wat via daaropvolgende metabole stappen leidt tot de productie van volledig functioneel chlorofyl. Standaardtechnieken voor de analyse van het chlorofylgehalte omvatten pigmentextractie uit losgemaakte plantenweefsels, wat niet van toepassing is op het bestuderen van dergelijke snelle processen. Om chlorofylkinetiek in vivo te onderzoeken met hoge nauwkeurigheid en spatiotemporele resolutie in de eerste uren na door licht geïnduceerde de-etiolatie, werden een instrument en protocol ontwikkeld. Hier presenteren we een gedetailleerde procedure die is ontworpen voor statistisch robuuste kwantificering van chlorofyl in de vroege stadia van Arabidopsis-de-etiolatie .
Inleiding
De-etiolatie vertegenwoordigt de meest dramatische fase in de levenscyclus van planten, gekenmerkt door een aantal morfologische veranderingen en een volledige herschikking van het plantenmetabolisme (van hetero- naar autotropisch)1. Biosynthese van chlorofyl is een kenmerk van door licht geïnduceerde de-etiolatie in planten en een zeer dynamisch proces. De vorming van chlorofyl uit in het donker geproduceerde precursor protochlorophyllide moet nauw worden gecoördineerd om schade door reactieve bijproducten te voorkomen. De protochlorofyllidreductie tot chlorofyllide wordt gekatalyseerd door lichtafhankelijke protochlorofyllidoxidoreductasen (POR's), unieke enzymen die direct door licht worden geactiveerd. De reactie is zeer snel en vindt plaats in de orde van ms tot s3, wat leidt tot herkenbare chlorofylaccumulatie binnen enkele minuten na doorstraling van geëtioleerde zaailingen 4,5,6. Er is meer tijd (van uren tot dagen) nodig voor de biogenese van chloroplasten om een volledig functioneel fotosynthetisch apparaat tot stand te brengen3.
Er bestaan verschillende methoden om het chlorofylgehalte te analyseren, waaronder high-performance vloeistofchromatografie (HPLC) of spectrofotometrie. Gewoonlijk vereisen deze technieken de vernietiging van plantenweefsel 4,5,6, waardoor de bepaling van veranderingen in chlorofylniveaus in de loop van de tijd wordt beperkt. Methoden die niet-invasieve chlorofylkinetiek mogelijk maken, kunnen een geheel nieuw perspectief openen om planten te bestuderen in diverse aspecten, variërend van fundamentele onderzoeksvragen, zoals het analyseren van het proces van chlorofylsynthese in tijd en ruimte, tot meer praktische toepassingen, zoals beoordeling van stresstolerantie of effect van biostimulanten op de chlorofylkinetiek. Daarom hebben we een systeem geïntroduceerd voor het monitoren van chlorofylvorming, iReenCAM7. Het bevat een CCD-camera, emissiefilters, lichtbronnen en een pijplijn voor geautomatiseerde fluorescentieanalyse (Figuur 1). Het belangrijkste kenmerk van het ontwikkelde apparaat is een hoge ruimtelijke en temporele resolutie, die beter presteert dan de parameters die in de huidige benaderingen worden gebruikt, en voldoende gevoeligheid en specificiteit in vergelijking met standaard analytische methoden7.
De niet-invasieve procedure die hier wordt beschreven, vereist een minimum aan reagentia en bestaat uit eenvoudige stappen, waardoor een chlorofylkinetisch profiel kan worden verkregen in levende Arabidopsis-zaailingen tijdens zeer vroege stadia van de-etiolatie. Het protocol kan nuttig zijn voor de studie van een zeer dynamisch proces van chlorofylsynthese dat wordt beïnvloed door een aantal factoren, zowel exogeen (zout, droogte, biostimulanten, zware metalen, enz.) als endogeen (meestal geassocieerd met veranderingen in de genactiviteit) van oorsprong zonder dat plantenweefsel hoeft te worden losgemaakt, waardoor extra stress wordt vermeden.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
1. Medium voorbereiding
- Bereid het kweekmedium voor door 0,75 g geleermiddel te mengen met 50 ml steriel gedeïoniseerd water in een glazen fles om een concentratie van 1,5% (m/v) te bereiken voor één petriplaat (120 x 120 x 17 mm). Schud het mengsel voorzichtig en verwarm het vervolgens in een magnetron tot het kookt om het geleermiddel op te lossen (de oplossing wordt helder).
- Laat het medium afkoelen tot 58-60 °C voordat u doorgaat met de volgende stappen. Alle volgende stappen moeten worden uitgevoerd onder steriele omstandigheden binnen een laminaire stroomkap om besmetting te voorkomen.
- Gebruik petriplaten met lichtdichte randen om overmatige actinische lichtreflectie en hoge autofluorescentie op de achtergrond tijdens de metingen te voorkomen. Breng hiervoor zwart plakband (of andere beschikbare middelen) aan om alle zijden van de lege petriplaat te bedekken (Figuur 2).
- Voer sterilisatie van de plaat(en) uit na het aanbrengen van tape door bestraling met kiemdodende UV-lamp gedurende 20-30 minuten.
- Als het experiment een chemische behandeling omvat (d.w.z. abiotische/biotische stressoren, plantenhormonen en/of groeiregulatoren, enz.), voeg dan de juiste hoeveelheid overeenkomstige chemische stof rechtstreeks aan het medium toe. Houd er rekening mee dat er een gekozen chemische stabiliteit aan het medium wordt toegevoegd (als de chemische stof bijvoorbeeld niet thermostabiel is, voeg dan toe aan het medium wanneer het is afgekoeld vlak voordat u het in de plaat giet). Meng het medium grondig door te schudden om een gelijkmatige verdeling van de chemische stof te garanderen.
- Vermijd het verlichten van platen met UV-licht nadat het medium is gegoten (dit zou leiden tot de productie van zuurstofradicalen die het experiment zouden kunnen verstoren).
- Giet het voorbereide medium in de vierkante petrischaal(en) en laat het medium op kamertemperatuur stollen.
2. Sterilisatie van het zaadoppervlak en groeiomstandigheden van planten
- Haal de benodigde hoeveelheid Arabidopsis thaliana Col-0 zaden uit de stam (10-20 mg) en voeg deze toe aan een microcentrifugebuisje van 2 ml.
OPMERKING: Er zijn geen specifieke aanpassingen nodig bij het werken met verschillende Arabidopsis-lijnen (ecotype/mutantlijnen). Voor andere plantensoorten moeten het zaagrooster en de meetstappen worden herzien, rekening houdend met het verschil in zaadgrootte, kiemkracht en zaailinggrootte. - Steriliseer Arabidopsis-zaden aan de oppervlakte door 70% ethanol gedurende 2 minuten aan de buis toe te voegen. Schud de buisjes voorzichtig tijdens de sterilisatie.
- Verwijder ethanol door voorzichtig te pipetteren en zorg ervoor dat er geen zaden verloren gaan. Was de zaden door gedurende 5 minuten steriel water aan de buis toe te voegen om eventuele resterende ethanol te verwijderen (schud de buizen voorzichtig tijdens de wasperiode).
- Laat de zaden door de zwaartekracht naar de bodem van de buis bezinken, verwijder het resterende water.
- Spoel de zaden nogmaals 2x af met steriel water zoals beschreven in stap 2.3 om er zeker van te zijn dat ze vrij zijn van ethanoleigenschappen. Laat de zaden door de zwaartekracht naar de bodem van de buis bezinken, verwijder het resterende water.
- Voeg een gelijke hoeveelheid steriel water toe aan de buis met de zaden om een zaadwatersuspensie te creëren.
- Gebruik een zaairooster om de zaadwatersuspensie van het gegeven genotype gelijkmatig te verdelen over de geselecteerde delen van de middelgrote plaat (Figuur 2 en Aanvullende Figuur 1). Verdeel de zaden (ongeveer 30-40) op een rij in elk gebied met behulp van een brede pipetpunt.
- Laat het water ongeveer 30 minuten drogen in de zaadgebieden, waarbij u de plaat(en) open houdt in een laminaire doorstroomkap om besmetting te voorkomen. Sluit de plaat af met microporiëntape en wikkel deze in aluminiumfolie.
- Stratificeer de zaden gedurende 3 dagen bij 4 °C in het donker om (afhankelijk van het gebruikte ecotype) de kiemrust van het zaad te overwinnen en/of een uniforme kieming te bevorderen.
- Breng de plaat met gestratificeerde zaden gedurende 1 uur over in wit licht (150 μmol/m2/s) om ontkieming op te wekken (wikkel de folie alleen uit voor de lichtbehandeling).
- Wikkel de plaat na de lichtbehandeling in aluminiumfolie om de zaden tegen licht te beschermen en plaats deze in verticale positie in een groeikamer en kweek gedurende 4 dagen in het donker bij 21 °C.
3. Meting en analyse van chlorofylfluorescentie
- Schakel het iReenCAM-systeem in en zorg ervoor dat het systeem gereed is en correct is geconfigureerd in de automatisch gestarte PS-serversoftware (bijv. als er voldoende opslagruimte is voor de experimentgegevens, als de fluorescentiecamera is aangesloten op de pc, enz.).
- Activeer de Scheduler-software om het experimentele plan voor de meting te maken door op Experimenten > Nieuw experiment te klikken. Geef een beschrijvende naam op voor het experiment en vul de details in (beschrijving).
- Stel de vereiste acties voor het experiment in door op Actie toevoegen te klikken, wat leidt tot het schema met experimentele acties.
OPMERKING: Het woord actie betekent hier het uitvoeren van een volledig experiment (d.w.z. inclusief alle stappen die nodig zijn om één plaatmeting uit te voeren). - Specificeer de voorwaarden voor een enkele ronde meting (d.w.z. de lengte van de licht-/donkerperiode).
- Door op Lijst genereren te klikken, definieert u de tijdsintervallen tussen de meetrondes. Kies het tijdstip waarop de ronde begint en eindigt (4 uur in totaal) en de intervallen tussen de rondes (in de huidige opstelling één ronde om de 2 minuten).
- Klik op Genereren en zorg ervoor dat het tijdsbestek en de intervallen tussen lichtimpulsen correct zijn door de gegenereerde lijst aan de linkerkant van het scherm te controleren.
- Kies het meetprotocol (aanvullende afbeelding 2). Sla alle wijzigingen in de database op voor toekomstig gebruik.
- Gebruik vlak voor het begin van de meting groen licht van lage intensiteit (zie Materiaaltabel) in de donkere kamer en pas het niveau van de plank in de meetkamer aan of voer andere voorbereidende stappen uit voordat u de folie van de petriplaat verwijdert. Schakel vervolgens het licht uit en breng de platen in de volledige duisternis over naar de meetkamer.
- Verwijder voorzichtig de aluminiumfolie die de petriplaat met de 4 dagen oude zaailingen bedekt. Plaats de petriplaat horizontaal in de meetkamer van het apparaat. Induceer actinische lichtpulsen in de kamer en voer beeldvorming uit volgens het experimentplan (acties) dat is ingesteld in de stappen 3.1-3.7.
NOTITIE: Het is van cruciaal belang om te voorkomen dat de platen met geëtioleerde zaailingen worden verlicht voordat u ze in de meetkamer plaatst. De manipulatie met de plaat met geëtioleerde zaailingen moet worden uitgevoerd in de donkere kamer/kamer (voor een mogelijke experimentele opstelling zie aanvullende figuur 3).
4. Data-extractie en -analyse
- Open na het voltooien van de meting het bijbehorende experiment in de analysesoftware.
- Om de fluorescentie van de zaailingen te analyseren, genereert u twee soorten maskers: een ruw (tray) masker dat het gebied bedekt waar de zaailingen zich bevinden, en een nauwkeurig (plant)masker dat alleen het weefsel van belang bedekt (meestal zaadlobben).
- Genereer een lademasker door op de optie Nieuw ladetype maken te klikken. Wijs de juiste genotypenamen toe aan de respectievelijke gebieden op het plaatbeeld.
- Voor het toewijzen van genotype kiest u een afbeeldingsnummer bij Rond en klikt u vervolgens op Afbeelding laden in het bovenste deel van het scherm. De afbeelding van de plaat wordt op het scherm weergegeven. Door te klikken op een van de knoppen die verschillende tekengereedschappen voor vormen vertegenwoordigen (aanvullende afbeelding 4), gaat u naar de nieuwe vormmodus waarmee u het interessegebied op de plaatafbeelding kunt tekenen. Kies de benodigde gebieden (bijv. verschillende genotypen op de plaat) en geef de juiste naamgeving.
- Klik op Esc om de vormmodus te verlaten. Sla het gegenereerde lademasker op (nadat u er een naam voor hebt opgegeven) door op Type winkelvak te klikken.
- Ga een stap terug en pas het masker toe dat in de vorige stappen is gegenereerd door de naam ervan te selecteren in de optie Wijzigen per ladetype .
- Om een plantenmasker met hoge nauwkeurigheid te genereren, gebruikt u het beeld dat is verkregen na 180 minuten meting (ronde 91) om de minimale drempelwaarde voor de intensiteit van het fluorescentiesignaal in te stellen, waardoor achtergrondruis kan worden afgetrokken. Verwijder hiervoor het vinkje van Automatische drempel en stel een handmatige drempel in op 0 (aanvullende afbeelding 4).
- Klik op Voorbeeld om ervoor te zorgen dat het lademasker alle noodzakelijke gebieden (genotypen) op de plaatafbeelding bedekt. Kies hiervoor ronde 91 en klik op Refresh Preview.
- Ga naar het menu Uitvoeren door op Uitvoeren te klikken. Voer de analyse exclusief uit voor ronde 91 door alleen een vinkje te zetten op ronde 91. Kies vervolgens het uitvoerpad en klik op Analyse starten.
- Nadat de analyse is voltooid, wordt het menu Voltooien automatisch geopend. Kies de uitgevoerde ronde (dit is de enige) uit experimenten en klik op Analyzer overschakelen naar geanalyseerde gegevens om de gegevens voor dit specifieke tijdstip (ronde 91) te exporteren.
- Pak het .xsel-bestand uit het geëxporteerde archief uit, aangezien dit bestand de essentiële informatie over het plantenmasker bevat door op het pictogram Exportonderdeel openen te klikken.
- Open het experiment opnieuw door te klikken op het pictogram Lokaal analyseonderdeel openen . Ga opnieuw naar het menu Mask Builder , klik op Afbeelding laden, kies ronde 1 en vervolgens Laden uit bestand in de rechterbovenhoek van het scherm en laad het eerder uitgepakte .xsel-bestand. De afbeelding van de plaat wordt weergegeven met het dienbladmasker toegepast.
- Sla het masker op door te klikken op Type lade opslaan en pas het toe door de naam te selecteren in de optie Wijzigen door ladetype .
- Genereer het plantenmasker door de intensiteitsdrempel voor het fluorescentiesignaal aan te passen. Verhoog de waarde van Handmatige drempel totdat het masker dat wordt gegenereerd in het voorbeeldmenu perfect past bij de ROI (bijv. zaadlobben) in elk van de genotypen (aanvullende afbeelding 4). Controleer of het masker past bij alle rondes van de metingen door door de rondes te scrollen (het controleren van de juiste positionering van het masker in ronde 1, 61 en 121 zou voldoende moeten zijn) in het menu Voorbeeld .
- Voer de analyse uit voor alle meetrondes en exporteer gegevens.
OPMERKING: Het uitvoerbestand bevat chlorofylfluorescentiewaarden van een bepaald genotype voor elk tijdstip, waardoor de constructie van grafieken naar keuze mogelijk is en verdere statistische evaluatie wordt vergemakkelijkt.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
De typische output die wordt verkregen met behulp van de nieuw ontwikkelde procedure in de 4 dagen oude gedeëtioleerde Arabidopsis-zaailingen van wildtype (WT), ecotype Columbia-0 (Col-0) wordt weergegeven in figuur 3. Onder controleomstandigheden (DMSO-gesupplementeerde MS-media) begint de chlorofylbiosynthetische curve met een eerste uitbarsting van de chlorofylsynthese, waarbij de protochloorfyllidpool, gesynthetiseerd tijdens de scotomorfogene fase van de groei, snel wordt omgez...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Kritieke stappen van het protocol en probleemoplossing - geen licht en zorg voor het masker
Zoals direct wordt benadrukt in de bovenstaande protocolbeschrijving, is het van cruciaal belang om zelfs de sporen van licht te vermijden, zowel tijdens de teelt van geëtioleerde plantenzaailingen als vlak voor het starten van hetprotocol11. In onze opstelling gebruiken we een speciale donkere kamer die zich in de inloopfytotron bevindt en gescheiden is van de rest van de fytotron met e...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
Z.B. en K.P. zijn werknemers van de PSI en Martin Trtilek is CEO en eigenaar van het PSI-bedrijf dat de iReenCAM produceert. Al deze auteurs waren betrokken bij de ontwikkeling van het instrument zoals eerder beschreven7.
Dankbetuigingen
Dit werk werd ondersteund door het Europees Fonds voor Regionale Ontwikkeling - Project SINGING PLANT (nr. CZ.02.1.01/0.0/0.0/16_026/0008446). Dit project is gefinancierd via het MSCA4Ukraine-project (ID 1233580), dat wordt gefinancierd door de Europese Unie. We zijn Lenka Sochurkova dankbaar voor de grafische vormgeving van Figuur 1.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 6-benzylaminopurine | Duchefa Biochemie | B0904.0001 | |
| Aluminiumfolie | Merck | Z691577 | |
| Arabidopsis thaliana Col-0 zaden | NASC collectie | N1092 | |
| Kweekkamer | PSI | op maat gemaakt | |
| Dimethylsulfoxide | Thermo Fisher Scientific | 042780.AK | |
| Eppendorf enkelkanaals, variabel (100-1000 μL) | Merck | EP3123000063 | |
| Gelrite | Duchefa Biochemie | G1101 | |
| iReenCAM-apparaat | PSI | op maat gemaakt/prototype | |
| Laboratoriumflessen, met doppen (Duran), 100mL | Merck | Z305170-10EA | |
| Laminaire stroomkast | UniGreenScheme | ITEM-31156 | |
| Rubberen voegtape, 19 mm breed, zwart, Scotch | 3M Science. Toegepast op het leven | 7000006085 | |
| Microcentrifugebuis, 2 mL met deksel, PPT, BRAND | Merck | BR780546-500EA | |
| Micropore tape | 3M Science. Toegepast op het leven | 7100225115 | |
| Osram lumilux groen l18w/66 | Ovalamp | 200008833 | |
| Petrischalen - Greiner schalen, vierkant, 120 x 120 x17mm, geventileerd | Merck | Z617679-240EA | |
| Pipettips, 1000 μL, Axygen | Merck | AXYT1000B | |
| De Plant Screen Data Analyzer software | PSI | geleverd als onderdeel van de iReenCAM |
Referenties
- Arsovski, A. A., Galstyan, A., Guseman, J. M., Nemhauser, J. L. Photomorphogenesis. Arabidopsis Book. 10, e0147(2012).
- Reinbothe, S., Reinbothe, C., Apel, K., Lebedev, N. Evolution of chlorophyll biosynthesis--the challenge to survive photooxidation. Cell. 86 (5), 703-705 (1996).
- Heyes, D. J., et al. Photocatalysis as the 'master switch' of photomorphogenesis in early plant development. Nat Plants. 7 (3), 268-276 (2021).
- Hu, X. Y., Tanaka, A., Tanaka, R. Simple extraction methods that prevent the artifactual conversion of chlorophyll to chlorophyllide during pigment isolation from leaf samples. Plant Methods. 9 (1), 19(2013).
- Chazaux, M., Schiphorst, C., Lazzari, G., Caffarri, S. Precise estimation of chlorophyll a, b and carotenoid content by deconvolution of the absorption spectrum and new simultaneous equations for chl determination. Plant J. 109 (6), 1630-1648 (2022).
- Marr, I. L., Suryana, N., Lukulay, P., Marr, M. I. Determination of chlorophyll-a and chlorophyll-b by simultaneous multicomponent spectrophotometry. Fresenius J Anal Chem. 352 (5), 456-460 (1995).
- Balakhonova, V., et al. Ireencam: Automated imaging system for kinetic analysis of photosynthetic pigment biosynthesis at high spatiotemporal resolution during early deetiolation. Front Plant Sci. 14, 1093292(2023).
- Virgin, H. I., Kahn, A., Vonwettstein, D. The physiology of chlorophyll formation in relation to structural changes in chloroplasts. Photochem Photobiol. 2 (2), 83-91 (1963).
- Reinbothe, C., et al. Chlorophyll biosynthesis: Spotlight on protochlorophyllide reduction. Trends Plant Sci. 15 (11), 614-624 (2010).
- Kobayashi, K., Masuda, T. Transcriptional regulation of tetrapyrrole biosynthesis in arabidopsis thaliana. Front Plant Sci. 7, 1811(2016).
- Wang, Y., Folta, K. M. Contributions of green light to plant growth and development. Am J Bot. 100 (1), 70-78 (2013).
- Brzezowski, P., Richter, A. S., Grimm, B. Regulation and function of tetrapyrrole biosynthesis in plants and algae. Biochim Biophys Acta. 1847 (9), 968-985 (2015).
- Pipitone, R., et al. A multifaceted analysis reveals two distinct phases of chloroplast biogenesis during de-etiolation in arabidopsis. eLife. 10, e62709(2021).
- Stirbet, A. G. On the relation between the kautsky effect (chlorophyll a fluorescence induction) and photosystem ii: Basics and applications of the ojip fluorescence transient. J Photochem Photobiol B-Biol. 104 (1-2), 236-257 (2011).
- Kupper, H., et al. Analysis of ojip chlorophyll fluorescence kinetics and q(a) reoxidation kinetics by direct fast imaging. Plant Physiol. 179 (2), 369-381 (2019).
- Avin-Wittenberg, T., et al. Global analysis of the role of autophagy in cellular metabolism and energy homeostasis in arabidopsis seedlings under carbon starvation. Plant Cell. 27 (2), 306-322 (2015).
- Kósa, A., Preininger, É, Böddi, B. Nitrogen deficiency hinders etioplast development in stems of dark-grown pea (pisum sativum) shoot cultures. Physiol Plant. 155 (3), 330-337 (2015).
- Liang, Y., et al. A nondestructive method to estimate the chlorophyll content of arabidopsis seedlings. Plant Met. 13 (1), 26(2017).
- Pérez-Patricio, M., et al. Optical method for estimating the chlorophyll contents in plant leaves. Sensors. 18 (2), 650(2018).
- Spyroglou, I., et al. Mixed models as a tool for comparing groups of time series in plant sciences. Plants (Basel). 10 (2), (2021).
- Tanaka, R., Kobayashi, K., Masuda, T. Tetrapyrrole metabolism in arabidopsis thaliana. The Arabidopsis book / Am Soc Plant Biol. 9. 9, e0145(2011).
- De Wit, M., Galvao, V. C., Fankhauser, C. Light-mediated hormonal regulation of plant growth and development. Annu Rev Plant Biol. 67, 513-537 (2016).
- Liu, X., Li, Y., Zhong, S. Interplay between light and plant hormones in the control of arabidopsis seedling chlorophyll biosynthesis. Front Plant Sci. 8, 1433(2017).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
