Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Onthulling van therapeutische mogelijkheden met van melanoom patiënt afgeleide organoïde modellen

2.6K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/66509

⸱

6 september 2024

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pathology and Laboratory Medicine, Perelman School of Medicine, University of Pennsylvania

In dit artikel

Samenvatting

Hier presenteren we een protocol om van melanoompatiënten afgeleide organoïden te genereren door het kweken van gedissocieerde celsuspensies uit vers melanoomweefsel. Deze organoïden recapituleren getrouw patiëntspecifieke tumoren in vitro en bieden een innovatieve benadering voor het onderzoeken van immunosuppressieve mechanismen van tumoren, screening van geneesmiddelen, mechanismen voor resistentie tegen geneesmiddelen en benaderingen voor kankerbewaking.

Samenvatting

Met de ontwikkeling van immunotherapie is er een voortdurende behoefte om modellen te ontwikkelen die de tumormicro-omgeving van inheemse tumoren kunnen samenvatten. Hoewel traditionele twee- en driedimensionale modellen inzicht kunnen bieden in de ontwikkeling en progressie van kanker, missen deze cruciale aspecten die een getrouwe nabootsing van inheemse tumoren in de weg staan. Een alternatief model dat veel aandacht heeft gekregen, is de van de patiënt afgeleide organoïde. De ontwikkeling van deze organoïden recapituleert de complexe intercellulaire communicatie, tumormicro-omgeving en histoarchitectuur van tumoren. Dit artikel beschrijft het protocol voor het opstellen van melanoompatiënt-afgeleide organoïde (MPDO) modellen. Om deze modellen te valideren, beoordeelden we de samenstelling van immuuncellen, inclusief de expressieniveaus van T-celactiveringsmarkers, om de cellulaire heterogeniteit van de organoïden te bevestigen. Om het potentiële nut van MPDO's in cellulaire therapieën te beschrijven, evalueerden we bovendien de cytotoxische mogelijkheden van de behandeling van de organoïden met γδ T-cellen. Concluderend bieden de MPDO-modellen veelbelovende mogelijkheden voor het begrijpen van de complexiteit van tumoren, het valideren van therapeutische strategieën en het mogelijk bevorderen van gepersonaliseerde behandeling.

Inleiding

Conventionele 2D-celkweekmodellen zijn essentiële hulpmiddelen in kankeronderzoek voor het bestuderen van kankerprogressie en -therapie1. Deze modellen maken niet alleen gecontroleerde experimentele omstandigheden mogelijk om de moleculaire en cellulaire mechanismen te onderzoeken die ten grondslag liggen aan de ontwikkeling en progressie van kanker, maar bieden ook kosteneffectieve en relatief snelle experimentele resultaten. Het gebruik ervan is echter beperkt vanwege de beperkte cellulaire diversiteit in de tumormicro-omgeving (TME), die niet kan worden gerecapituleerd in een coplanaire aard van monocultuurmodellen2. Bovendien bieden celkweekmodellen een te vereenvoudigde omgeving in vergelijking met het menselijk lichaam3. Om de progressie van kanker beter te begrijpen en effectieve behandelingen te ontwikkelen, hebben onderzoekers zich daarom gewend tot innovatieve modellen die tot doel hebben de TME in de natuur nauwkeurig na te bootsen. Daarom is het handhaven van trouw aan inheemse tumoren van het grootste belang in deze modellen. Gezien de ingewikkelde aard van kanker, kan elke significante afwijking van de oorspronkelijke tumor onvoorziene variabelen introduceren die zinvolle conclusies over tumorgedrag kunnen verwarren.

Hoewel van de patiënt afgeleide xenotransplantaten (PDX) naar voren zijn gekomen als een modelsysteem dat het mogelijk maakt om de tumorprogressie in vivo te volgen, zijn er beperkingen die zich afvragen hoe goed de ontwikkelde tumor de menselijke kankerbiologie recapituleert4. Melanoom TME bevat bijvoorbeeld tumor-infiltrerende immuuncellen en stromale cellen. Wanneer ze als xenotransplantaat worden gepasseerd, zullen de niet-kankercellen van de patiënt geleidelijk verloren gaan, wat aanpassingen kan selecteren die verschillen van die in tumoren van de patiënt. Hoewel deze beperkingen kunnen worden verzacht door in vivo beperkte passages van de PDX uit te voeren, kunnen de verschillen tussen de soorten nog steeds een risico vormen op genetische veranderingen in de PDX die afwijken van die van de oorspronkelijke tumor5. Bovendien worden PDX-modellen meestal opgesteld bij immuungecompromitteerde muizen om afstoting van menselijk weefsel te voorkomen. Dit beperkt het vermogen om de rol van het immuunsysteem van de gastheer bij kanker te bestuderen, vooral in immunotherapeutische studies6. Wij en anderen hebben PDX's geënt in "gehumaniseerde" muizen 7,8. Het opzetten van PDX-modellen in gehumaniseerde muizen is echter tijdrovend en duur. Het kan enkele maanden tot jaren duren om een enkel PDX-model te ontwikkelen op basis van het tumormonster van een patiënt, waardoor de snelheid en schaal van het onderzoek worden beperkt. Ondanks deze beperkingen is aangetoond dat PDX-modellen de biologie van de TME nauwkeurig weergeven en dus op grote schaal zijn gebruikt voor de ontwikkeling vanonder meer kankertherapieën, gepersonaliseerde geneeskunde en immunotherapie.

Een alternatieve 3D-kweektechniek die is ontstaan, is de van de patiënt afgeleide organoïde (PDO), waarbij een pas verwijderde tumor van de patiënt wordt gekweekt om modellen te creëren die fenotypische heterogeniteit, histoarchitectuur en intercellulaire communicatie behouden10. Het vermogen om sterk op inheemse tumoren te lijken is eerder aangetoond waar gekweekte organoïden van niet-spierinvasieve (NMIBC) en spierinvasieve blaaskanker (MIBC) met succes belangrijke aspecten van de ouderlijke tumoren recapituleerden. Vanwege hun potentieel en voordelen ten opzichte van andere modellen bieden BOB's een breed scala aan op maat gemaakte toepassingen die andere modellen missen, inclusief maar niet beperkt tot de studie en ontwikkeling van immuuncheckpointremmers samen met cellulaire en gerichte therapieën. We hebben bijvoorbeeld eerder melanoompatiënt-afgeleide organoïden (MPDO's) gebruikt om het vermogen van tumor-infiltrerende lymfocyten (TIL's) te bestuderen om te worden uitgebreid door IL-2- en anti-PD1-antilichamen (αPD-1). De resultaten toonden aan dat de TIL's die door IL-2 en αPD-1 werden geëxpandeerd, niet alleen een hoger aantal hadden, maar ook met succes MPDO's konden infiltreren en melanoomcellen konden doden met een hogere efficiëntie dan TIL's die met andere methoden waren geëxpandeerd. Andere groepen hebben vergelijkbare resultaten laten zien waarbij het gebruik van anti-PD-1 en/of anti-PD-L1 ertoe leidt dat TIL's functioneel blijven in BOB's, wat vervolgens leidttot het doden van tumoren. Daarnaast heeft onze groep ook MPDO's gebruikt om γδ T-celinfiltratie en het dodingsvermogen te beoordelen14. De toepasbaarheid van BOB's bestrijkt een breed scala aan gebieden, waaronder TIL-expansie, cytotoxiciteitsstudies en screening van kleine moleculen. Al deze toepassingen benadrukken het potentieel en de bruikbaarheid die dit model biedt. Zo beschrijven we het uitgewerkte protocol voor de kweek van MPDO's.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Menselijk melanoomweefsel werd verkregen van patiënten die werden behandeld aan de Universiteit van Pennsylvania met behulp van het weefselverzamelingsprotocol (UPCC08607) dat is goedgekeurd door de Institutional Review Board van de Universiteit van Pennsylvania. Alle patiënten hebben geïnformeerde toestemming ondertekend. Na resectie van het menselijk melanoomweefsel wordt het tumorweefsel in Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) geplaatst en op 4 °C gehouden tot verwerking (binnen 6 uur). Melanoompatiënt-afgeleide organoïden (MPDO's) zijn afgeleid van een verse tumor, zoals geïllustreerd in figuur 1.

1. Isolatie van cellen uit menselijk melanoomweefsel

  1. Voorbereidingen voor de start van de procedure
    OPMERKING: Twee kweekmethoden (Matrigel en collageengel) kunnen worden gebruikt om gedissocieerd melanoomweefsel te kweken:
    1. Voor de Matrigel-methode: Bereid een coatingoplossing van Growth Factor Reduced (GFR) Basement Membrane Matrix voor door GFR Basement Membrane Matrix te verdunnen met organoïde kweekmedium (zie tabel 1) in een verhouding van 1:2. Voeg ongeveer 115 μl van de ontdooide oplossing toe aan elk van de verschillende putjes van een plaat met 48 putjes en laat het 30 minuten stollen bij 37 °C in een bevochtigde incubator.
    2. Voor de collageengelmethode: Voeg 1 ml collageengel (zie tabel 1) toe aan een binnenmembraaninzetstuk van 30 mm. Laat de gel 30 minuten stollen bij 37 °C in een bevochtigde couveuse.
  2. Bereid de L-WRN geconditioneerd medium15 voor. L-WRN geconditioneerd medium wordt geproduceerd uit een L-WRN-cellijn die is ontworpen om Wnt3a, R-spondin 3 en Noggin af te scheiden in een enkel geconditioneerd medium dat veel wordt gebruikt voor celcultuur.
    1. Ontdooi een cryobuis met L-WRN-cellen in het waterbad van 37 °C. Voeg 5 ml L-celmedium (zie tabel 1) en de L-WRN-celsuspensie toe aan een conische buis van 15 ml en centrifugeer bij 120 × g gedurende 5 minuten bij 4 °C. Aspireer het supernatant op en zorg ervoor dat er ~500 μL op de bodem overblijft om de celkorrel te resuspenderen.
    2. Breng de celkorrel in het supernatans over in 30 ml L-celmedium op ijs en voeg 150 μl hygromycine (500 μg/ml) en 300 μl G418 (500 μg/ml) toe. Zaai de cellen met een dichtheid van 3 × 106 op een T-150 kolf en incubeer bij 37 °C in een bevochtigde incubator met 5% CO2 tot ~90% confluent.
    3. Zodra de cellen ~90% samenvloeien, splitst u de cellen in vijf T-150-kolven door te wassen met 20 ml fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS), op te zuigen en te verteren met 3 ml trypsinevervanger. Neutraliseer na 5 minuten met 9 ml L-celmedium, gevolgd door centrifugeren gedurende 5 minuten bij 120 × g bij 4 °C . Wanneer ~100% samenvloeiend, splitst u de vijf T-150 kolven in 10 T-175 3-laagse kolven.
    4. Eenmaal samenvloeiend, wast u de cellen met 2 x 50 ml PBS en vervolgens met 25 ml wasmedium (zie tabel 1).
    5. Voeg 75 ml primair kweekmedium toe aan elke T-175 3-laagse kolf en incubeer gedurende 3 dagen bij 37 °C in een bevochtigde incubator met 5% CO2 (zie tabel 1).
    6. Oogst na 3 dagen het geconditioneerde medium in een conische conische vorm van 50 ml en draai gedurende 5 minuten bij 4 °C op 1.100 × g . Verzamel het supernatans (geconditioneerd medium) en zorg ervoor dat er 5 ml achterblijft.
    7. Voeg vers 75 ml primair celkweekmedium toe aan elke T-175 3-laagse kolf en incubeer nog 3 dagen om extra geconditioneerd medium te verzamelen.
    8. Voeg aan het verzamelde geconditioneerde medium een gelijk volume primair celkweekmedium (50% volume) toe en filtreer de inhoud vacuüm met behulp van een filter van 0,22 μm. Bewaar aliquots in tubes van 50 ml en bewaar ze bij -20 °C voor langdurig gebruik of 4 °C gedurende maximaal 2-3 weken. Gebruik dit medium om de organoïde kweekmedia aan te vullen (zie tabel 1).
      OPMERKING: Ontdooi aliquots bij 4 °C 's nachts voor gebruik.
  3. Het celmengsel oogsten uit vers melanoomweefsel
    1. Was het vers verwijderde melanoomweefsel in een petrischaaltje van 10 ml met wasmedium. Gebruik na de eerste spoeling een steriel pincet om de tumor over te brengen in een tweede petrischaal om verder te wassen en herhaal dit proces 3x op ijs om de integriteit en levensvatbaarheid van de tumor te behouden. Gebruik tijdens deze spoelcycli een steriele schaar en een mes om overtollig bindweefsel, vet en achtergebleven bloed te verwijderen. Plaats de tumor na de drie wasbeurten in een lege petrischaal en gebruik steriele mesjes om hem fijn te hakken.
      OPMERKING: Na het hakken moet de tumor een gelachtige consistentie vertonen. Hoe fijner de tumor in stukken gehakt wordt, hoe hoger de celopbrengst zal zijn. Dit komt omdat grotere klonten van de tumor moeilijker te verteren zijn en in de volgende stap mogelijk niet door de 70 μm nyloncelzeef gaan.
    2. Nadat het tumorweefsel grondig is gewassen en fijngehakt, brengt u het over in een kegelvormige buis van 50 ml met 10 ml van het bereide digestiemedium (zie tabel 1). Plaats de conische in een waterbad bij 37 °C en zorg ervoor dat de inhoud elke 5 minuten wordt gewerveld.
    3. Voeg na 25 minuten 30 ml van het ADMEM/F12-medium met 10% FBS toe om de spijsvertering te stoppen.
      OPMERKING: Deze gespecificeerde hoeveelheden zijn bedoeld voor tumoren die niet meer dan 0,2 g wegen.
    4. Filtreer de verteerde celsuspensie door een 70 μm nyloncelzeef en spoel de zeef vervolgens af met ADMEM/F12 (1x) Reduced Serum Medium (1:1) dat 10% FBS bevat. Gebruik na de wasstap een pipet om eventuele resterende media op de bodem van het filter op te halen om ervoor te zorgen dat het hoogst mogelijke aantal cellen wordt opgehaald. Centrifugeer vervolgens bij 300 × g gedurende 7 minuten bij 4 °C. Gooi het supernatans weg en suspendeer de pellet in een organoïde kweekmedium (zie tabel 1).
    5. Kweek de melanoom eencellige suspensie in Matrigel- of collageenkweeksystemen:
      1. Matrigel: Tel de eencellige suspensie om ervoor te zorgen dat ongeveer 2 × 105 cellen worden gezaaid in de voorverwarmde Matrigel-gecoate putjes aangevuld met 200 μL organoïde kweekmedium.
        OPMERKING: Op matrigel gebaseerde organoïden worden gebruikt om de pathofysiologie te bestuderen, de werkzaamheid van geneesmiddelen te screenen en de toxiciteit van het geneesmiddel tetesten16.
      2. Collageengel: Tel de eencellige suspensie om ervoor te zorgen dat ongeveer 106 cellen worden gemengd met 1 ml collageengel. Voeg het mengsel toe aan de voorgestolde collageengelmembraaninzetstukken en leg deze op een plaat met 6 putjes. Voeg voldoende organoïde kweekmedium toe om de inzetstukken met de cellen en collageengel onder te dompelen.
        OPMERKING: Collageengelorganoïden worden gebruikt om de migratie van T-cellen te meten en weefselontwikkeling te bestuderen16.
    6. Laat de organoïden groeien en zorg ervoor dat er elke 3 dagen vers medium wordt toegevoegd.
    7. Passage de organoïden zodra ze 150-200 μm groot zijn of cryopreservatie tot verder gebruik.
      1. Voor het passeren van organoïden, breng de organoïden over in een conische 15 ml en was met 1x DPSB. Centrifugeer het mengsel bij 300 × g gedurende 7 minuten bij 4 °C. Verwijder het supernatans en voeg trypsinevervanger (50-100 μl per organoïde) toe gedurende 10 minuten in een waterbad van 37 °C, zorg ervoor dat de inhoud elke 3 minuten wordt gewerveld.
      2. Stop de vertering met ADMEM/F12 (1x) Reduced Serum Medium (1:1) medium met 10% FBS. Centrifugeer het mengsel bij 300 × g gedurende 7 minuten en resuspendeer in organoïde kweekmedium.
      3. Zaai de eencellige suspensie in een nieuw Matrigel/collageen-gecoat putje met dezelfde initiële zaaidichtheid (2 × 10,5 cellen in 200 μL organoïde kweekmedia voor Matrigel-gecoate putjes in een plaat van 48 putjes of 10,6 cellen in 1 ml organoïde kweekmedia voor collageen gecoat 30 mm binnenmembraaninzetstuk).
      4. Voor cryopreservatie verteert MPDO's met behulp van de trypsinevervanger tot eencellige suspensies, gevolgd door resuspensie van 106 cellen tot 1 ml vriesmedium (zie tabel 1).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

De vorm en grootte van de MPDO's werden in de loop van de tijd gevolgd om hun groeidynamiek te bestuderen. Zoals te zien is in figuur 2, nam de organoïde tijdens de eerste groeiperiode aanzienlijk toe gedurende de 7 afgebeelde dagen. Na de observatie van de MPDO-groeidynamiek werd de aandacht gericht op het evalueren van de samenstelling van immuuncellen om de getrouwe recapitulatie van organoïden naar de oorspronkelijke tumoren te verifiëren. Deze beoordeli...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

De opkomst van BOB's heeft meerdere beperkingen van andere eerder gevestigde kankeronderzoeksmethoden aangepakt en tegelijkertijd transformatieve potentiële toepassingen in het veld geïntroduceerd. Deze organoïdetechnologie werd voor het eerst voorgesteld in 2009 door Hans Clevers en collega's, die in staat waren om met succes een intestinaal organoïdekweeksysteem op te zetten door Lgr5+ -stamcellen afkomstig van de darm van muizen te kweken in een 3D-matrixgel die R-sponsin, ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben geen belangenconflicten te melden.

Dankbetuigingen

Deze studie werd gedeeltelijk gefinancierd door subsidies van de R01(CA258113), SPORE (CA261608) en P01 (CA114046). Figuur 1 is opgesteld in BioRender.com.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
2 mL Red Cap Internal Threaded Polypropylene Cryogenic VialCorning431420
50 mL Polypropylene Conical TubeCorning352070
100 mm TC-treated Cell Culture DishCorning353003
105 mm Polystyrene Forceps SterileCaplugs Evergreen 222-1121-B1I
150 cm2 Cell Culture FlaskCorningCLS430825
A83-01Tocris2939
Advanced DMEM/F12 (1x) Reduced Serum Medium (1:1)Gibco12634-010
B-27 Supplement (50x)Gibco17504-044
Brilliant Violet 510 anti-human Perforin AntibodyBioLegend308120
Brilliant Violet 605 anti-human Ki-67 AntibodyBioLegend350522
Brilliant Violet 650 anti-human CD366 (Tim-3) AntibodyBioLegend345028
Brilliant Violet 711 anti-human CD45 AntibodyBioLegend304050
Cell Culture Inserts 0.4 µm, 30 mm DiameterMillipore SigmaPIHP03050
Cell Staining BufferBioLegend420201
Cell Strainer 40 µm NylonCorning 352340
Cell Strainer 70 µm NylonCorning 352350
Collagenase, Type IV, powderGibco17104019
Cultrex Rat Collagen ITrevigen3440-100-01
Culture Plate, PS, 48 wells, TC treated with lid, sterileMax Scientific 07-6048
Dimethyl Sulfoxide (DMSO) Hybri-MaxSigma-AldrichD2650
DMEM - high glucose 4.5 mg/mLCorningMT10-0130CV
Dnase I - Grade IIMillipore Sigma10104159001
DPBS, 1% Corning21-031-CV
Fetal Bovine Serum, FBSCorningMT35-010-CV
FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit IBD Biosciences 556547
ForskolinTocris1099
Geneticin Selective Antibiotic (G418 Sulfate) (50 mg/mL)ThermoFisher10131035
GlutaMAX SupplementThermoFisher35050061
Ham's F12 Nutrient MixThermoFisher11765054
HEPES (1 M)Gibco15630-080
Hygromycin B (50 mg/mL)ThermoFisher10687010
L-Glutamine 200 mM (100x)Gibco25030-081
L-WRN cellATCCCRL-3276
Matrigel Phenol Free & Growth Fact. ReducedCorning356231
Millex PVDF syringe filter, 0.22 μMMillipore SigmaSLGVR33RB
N-AcetylcysteineSigma-AldrichA9165-5G
NicotinamideSigma-AldrichN0636-100G
Nunc TripleFlask Treated Cell Culture FlaskThermoFisher132867
PE/Cyanine5 anti-human CD8a AntibodyBioLegend301010
PE-Cy 7 Mouse anti-Human CD279 (PD-1)BD Biosciences 561272
Pen StrepGibco15140-122
Recombinant Human EGFPeprotechAF-100-15-1MG
Recombinant Human FGF-acidicPeprotech100-17A
Sodium Bicarbonate Solution (NaHCO3) (7.5%)Quality Biological 118-085-721
Stainless Steel Surgical Blades no. 22Integra4-322
TrypLE Express Gibco12604-021

Referenties

  1. Mirabelli, P., Coppola, L., Salvatore, M. Cancer Cell Lines Are Useful Model Systems for Medical Research. Cancers (Basel). 11 (8), 1098(2019).
  2. Shannon, A. E., Boos, C. E., Hummon, A. B. Co-culturing multicellular tumor models: Modeling the tumor microenvironment and analysis techniques. Proteomics. 21 (9), e2000103(2021).
  3. Jubelin, C., Muñoz-Garcia, J., Griscom, L. Three-dimensional in vitro culture models in oncology research. Cell Biosci. 12, 155(2022).
  4. Jin, J., Yoshimura, K., Sewastjanow-Silva, M., Song, S., Ajani, J. A. Challenges and prospects of patient-derived xenografts for cancer research. Cancers (Basel). 15 (17), 4352(2023).
  5. Nabel, C. S., Heiden, M. G. V. Patient-derived xenografts to study cancer metabolism: when does X mark the spot). Cancer Res. 81 (17), 4399(2021).
  6. Choi, Y., et al. Studying cancer immunotherapy using patient-derived xenografts (PDXs) in humanized mice. Exp Mol Med. 50 (8), 99(2018).
  7. Woo, X. Y., et al. Conservation of copy number profiles during engraftment and passaging of patient-derived cancer xenografts. Nat Genet. 53 (1), 86(2021).
  8. Somasundaram, R. Tumor-infiltrating mast cells are associated with resistance to anti-PD-1 therapy. Nat Commun. 12 (1), 346(2021).
  9. Abdolahi, S. Patient-derived xenograft (PDX) models, applications and challenges in cancer research. J Transl Med. 20 (1), 206(2022).
  10. Yang, S., et al. Organoids: The current status and biomedical applications. Med Comm. 4 (3), e274(2023).
  11. Minoli, M. Bladder cancer organoids as a functional system to model different disease stages and therapy response. Nat Commun. 14, 2214(2023).
  12. Ou, L., et al. Patient-derived melanoma organoid models facilitate the assessment of immunotherapies. eBioMedicine. 92, 104614(2023).
  13. Grönholm, M., et al. Patient-derived organoids for precision cancer immunotherapy. Cancer Res. 81 (12), 3149-3155 (2021).
  14. Ou, L., et al. Preclinical platforms to study therapeutic efficacy of human γδ T cells. Clin Transl Med. 12 (6), e814(2022).
  15. Murine L-Wrn conditioned medium protocol. The University of Texas MD Anderson Cancer Center. , Available from: https://www.mdanderson.org/documents/Labs/Taniguchi%20Laboratory/Mouse%20CM.pdf (2024).
  16. Jee, J. H., et al. Development of collagen-based 3D matrix for gastrointestinal tract-derived organoid culture. Stem Cells Int. 13 (2019), 8472712(2019).
  17. Pipkin, M. E., Rao, A., Lichtenheld, M. G. The transcriptional control of the perforin locus. Immunol Rev. 235 (1), 55(2010).
  18. Li, X., et al. Tim-3 suppresses the killing effect of Vγ9Vδ2 cells on colon cancer cells by reducing perforin and granzyme B expression. Exp Cell Res. 386 (1), 111719(2020).
  19. Li, L. T., Jiang, G., Chen, Q., Zheng, J. N. Ki67 is a promising molecular target in the diagnosis of cancer (Review). Mol Med Rep. 11 (3), 1566-1572 (2015).
  20. Sato, T., et al. Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche. Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).
  21. Li, H. Y., Ren, K., Wang, C., Bu, W. B. Skin organoid research progress and potential applications. International Journal of Dermatology and Venereology. 5 (2), 101-106 (2022).
  22. Sun, L., et al. A human mucosal melanoma organoid platform for modeling tumor heterogeneity and exploring immunotherapy combination options. Sci Adv. 9 (43), eadg6686 (2023).
  23. Vlachogiannis, G., et al. Patient-derived organoids model treatment response of metastatic gastrointestinal cancers. Science. 359 (6378), 920-926 (2018).
  24. Ganesh, K., et al. A rectal cancer organoid platform to study individual responses to chemoradiation. Nat Med. 25 (10), 1607-1614 (2019).
  25. Vilgelm, A. E., et al. Fine-needle aspiration-based patient-derived cancer organoids. iScience. 23 (8), 101408(2020).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Meer artikelen verkennen

Melanoom-organoïde-modellenpatiëntafgeleide organoïdentumor-micro-omgevingorganoïde-kweekimmuuncelsamenstellingT-celactivatiedrugscreeninggepersonaliseerde kankerbehandelingcollageengelmethodeMatrigel-coating
Onthulling van therapeutische mogelijkheden met van melanoom patiënt afgeleide organoïde modellen
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.