De onmiddellijke gedeeltelijke verwijdering van cumulus-eicelcomplexen: een verfijnde aanpak voor snelle observatie van in-vitrofertilisatie

Samenvatting

Hier presenteren we een geoptimaliseerde methode voor het onmiddellijk verwijderen van een deel van de cumulus-eicelcomplexen na het ophalen van eieren om het IVF-observatieproces te versnellen, de tijd die nodig is voor het verwijderen van granulosacellen te verkorten, de blootstelling van eicellen aan externe elementen te minimaliseren en de ontwikkeling van embryo's niet te belemmeren, wat uiteindelijk de efficiëntie van IVF-laboratoriumprocedures verbetert.

Samenvatting

Ondanks de snelle vooruitgang in klinische en laboratoriumtechnologieën voor in-vitrofertilisatie (IVF), blijft een aanzienlijk deel (10%-15%) van de patiënten bevruchtingsstoornissen ervaren, wat leidt tot lage bevruchtingspercentages en de productie van niet-levensvatbare embryo's. Bevruchting op korte termijn omvat de vroege verwijdering van granulosacellen om de extrusie van het tweede poollichaam te observeren, waardoor de bemesting kan worden beoordeeld en vroege herstelmaatregelen kunnen worden genomen om lage bevruchtingspercentages en volledig mislukken van de bevruchting aan te pakken. De observatie van kortetermijnbevruchting bij IVF wordt echter belemmerd door uitdagingen zoals buitensporig grote onverwerkte clusters van cumulus-eicelcomplexen en hechting tussen eieren, waardoor complexe externe procedures voor het verwijderen van granulosacellen en een langere observatieduur nodig zijn. Om dit probleem aan te pakken, stelt deze studie een methode voor voor onmiddellijke gedeeltelijke verwijdering van granulosacellen na het ophalen van eieren. Deze aanpak stroomlijnt de volgende stadia van kortetermijnbevruchting en traditionele bevruchtingsmonitoring, verkort de tijd die nodig is voor eicelextrusie, minimaliseert de kans op externe milieueffecten op de eicellen en vermindert het risico op het missen van het kritieke waarnemingsvenster voor bevruchting. Bijgevolg levert de studie nieuw klinisch bewijs op dat gericht is op het verbeteren van de operationele efficiëntie van embryonale laboratoria bij IVF.

Inleiding

Op het gebied van in-vitrofertilisatie-embryotransfer (IVF-ET) ligt het typische bevruchtingspercentage tussen 60% en 80%¹. Ongeveer 4% tot 16% van de gevallen heeft echter te maken met volledig mislukken van de bevruchting of lage bevruchtingspercentages, wat een uitdaging vormt bij de voorspelling ^2,3. Om de klinische zwangerschapsuitkomsten te verbeteren en het aantal gevallen van volledige niet-bevruchting en lage bevruchting te verminderen, neemt het gebruik van kortetermijnbevruchting in IVF-procedures toe⁴. Deze aanpak omvat de onmiddellijke verwijdering van granulosacellen om de extrusie van het tweede poollichaam te controleren, de bevruchtingsstatus te beoordelen en mogelijk remediërende intracytoplasmatische sperma-injectie (ICSI) uit te voeren. De binding tussen het cumuluscelcelcomplex van de eicel (OCCC) en de eicel is sterker tijdens kortetermijnbevruchting in vergelijking met traditionele nachtbevruchting, waardoor de uitdaging van OCCC-verwijdering toeneemt⁵. Factoren zoals een overmaat aan eicellen, grote OCCC-complexen of verklevingen tussen eicellen kunnen leiden tot langere verwijderingstijden van granulosacellen tijdens kortdurende bevruchting, waardoor de periode dat eieren buiten de broedmachine blijven wordt verlengd⁴. Om de observatieperiode van de bevruchting te optimaliseren, is een aangepaste aanpak na het ophalen van eieren bedacht, waarbij gedeeltelijke excisie van granulosacellen uit eicellen met significante OCCC-complexen wordt gebruikt. Deze techniek helpt bij het behouden van de granulosacellen rond de eicellen, het behouden van de integriteit van de vroege eicelstructuur⁶ en het mogelijk maken dat deze cellen vitale factoren blijven leveren voor de rijping van de eicellen en de daaropvolgende bevruchting-embryobinding⁷.

Bijgevolg richt deze studie zich op patiënten die een IVF-ET-behandeling ondergaan in een centrum voor reproductieve geneeskunde als onderzoeksdeelnemers, met als doel de impact te onderzoeken van een onmiddellijke gedeeltelijke granulosacel mechanische excisiemethode op de duur van procedures voor zowel kortetermijnbevruchting als nachtelijke bevruchtingsmonitoring, terwijl ook de resultaten van normale bevruchting en ontwikkeling in een laat stadium worden geëvalueerd. Dit onderzoek is bedoeld om waardevolle inzichten te bieden voor het verbeteren van embryolaboratoriumprocedures bij IVF.

Protocol

Alle procedures werden uitgevoerd in overeenstemming met de standaardprocedures van de afdeling Reproductieve Geneeskunde van het Meizhou People's Hospital en werden onderworpen aan beoordeling door de ethische commissie van dezelfde afdeling. Van elk deelnemend paar werd schriftelijke geïnformeerde toestemming verkregen. De studie omvatte deelnemers die hun eerste IVF-cyclus ondergingen met embryotransfer in het splitsings- of blastocyststadium, evenals vrouwen tussen 20 en 45 jaar. Uitsluitingscriteria waren onder meer het gebruik van donoreicellen/sperma en specifieke aandoeningen zoals aangeboren of secundaire baarmoederafwijkingen (bijv. septaat baarmoeder, eenhoornige baarmoeder, baarmoeder didelphys), adenomyose, submucosale vleesbomen van de baarmoeder of endometriumdikte van minder dan 7 mm op de dag van de embryotransfer. In totaal werden 115 patiënten die tussen december 2023 en februari 2024 waren ingeschreven, gestratificeerd in twee groepen op basis van het al dan niet onmiddellijk gedeeltelijk verwijderen van OCCC.

1. Voorbereiding voor het ophalen van de eicel

1. Plaats de schaaltjes voor het oppakken van de eicellen (Materiaaltabel) een nacht in de broedmachine bij 37 °C.
2. Incubeer een nacht 12 ml follikelmanipulerend medium (materiaaltabel) in reageerbuisjes met ronde bodem van 14 ml bij 37 °C. Breng de buisjes 30 minuten voor het ophalen van de eicellen over naar het voorverwarmde reageerbuisrek.
3. Bereid het follikelmanipulerende medium voor: Voeg 9 ml follikelmanipulerend medium toe aan een reageerbuisje met ronde bodem van 14 ml (materiaaltabel) en incubeer een nacht bij 37 °C. Breng op de dag van het ophalen van de eicel 4,5 ml van het medium over naar een voorbebroede eicelopraapschaal (Materiaaltabel) bedekt met 2 ml 100% paraffineolie.
4. Bereid de OCCC-spoeloplossing voor: Voeg 4,5 ml bemestingsmedium (Materiaaltabel) toe aan een eicelopraapschaaltje en incubeer een nacht bij 37 °C.
5. Bereid het bemestingsmedium voor: Voeg 1 ml bemestingsmedium toe aan een schaal van 6 cm bedekt met 100% paraffineolie (Materiaaltabel) en incubeer een nacht bij 37 °C.
6. Bereid de glazen pasteurpipetten voor (Materiaaltabel): Maak de uiteinden voorzichtig bot en rond ze af door ze ongeveer 5 s op een alcohollamp te branden (Figuur 1). Bevestig een zuigkop aan de punt van de pasteurpipetten en zorg ervoor dat deze de bodem van de schaal kan raken zonder te krassen. Spoel de glazen pasteurpipetten en schaaltjes van 10 cm af met een follikelmanipulatiemedium.

2. Eicelpunctie en onmiddellijke gedeeltelijke verwijdering van OCCC

OPMERKING: Gebruik een stereomicroscoop tijdens de isolatie van de eicellen en de OCCC-verwijderingsprocedures. Voor een optimaal resultaat moeten alle procedures worden uitgevoerd op een verwarmingstafel met temperatuurregeling (37 °C) en moet alle apparatuur 30 minuten voor het ophalen van de eicel worden voorverwarmd.

1. Verzamel pre-ovulatoire follikelvloeistof tijdens het ophalen van de eicel volgens de ESHRE-aanbevelingen⁸.
   1. Gebruik in het kort een naald van 17 G om de eicellen op te halen onder transvaginale echografie. De juiste onderdruk varieert van 120-140 mmHg.
   2. Giet de follikelvloeistof die is verzameld in de 14 ml reageerbuis met ronde bodem in een schaaltje van 10 cm (Materiaaltabel), waarbij een vloeistofdiepte van minder dan 0,5 cm behouden blijft. Plaats de schaal op een platform met constante temperatuur (37 °C).
2. Observeer de OCCC onder een stereomicroscoop om de aanwezigheid van eicellen te bevestigen en hun rijpheid te beoordelen.
   OPMERKING: De rijpheid van de OOOC wordt beoordeeld op basis van de morfologie van de cumuluscellen en de zichtbaarheid van bepaalde eicelstructuren⁹.
3. Zuig de OCCC aan met behulp van een pasteurpipet met stomp uiteinde. Kantel de schaal van 10 cm ongeveer 15 graden en spreid alle grote OCCC uit. Vermijd het opzuigen van de eicel en de omliggende granulosacellen binnen een straal van 2500 μm. Snijd overtollige granulosacellen met de pasteurpipet langs de lengteas (Figuur 2). De gedetailleerde stappen zijn als volgt:
   1. Observeer met het blote oog om te zien of er een grijsachtige, doorschijnende slijmvliesmassa in de folliculaire vloeistof zit. Als het niet wordt gevonden, zoek dan snel naar de grijsachtige doorschijnende slijmvliesmassa door met de klok mee van buiten naar binnen te draaien onder een stereomicroscoop, de OCCC.
   2. Bevestig of er eicellen in de OCCC zijn en maak een voorlopige beoordeling van de rijping van de eicellen.
   3. Bereid vervolgens een siliconen aspiratiepipet voor met een ronde, vlamgepolijste pasteurpipet, zuig de OCCC op en til tegelijkertijd de kweekschaal voorzichtig op 9-10 uur met de linker ringvinger van de hand die de schaal van 10 cm vasthoudt, kantel de cultuurschaal iets ongeveer 15° naar links (plaats de ringvinger onder de schaal is ongeveer de vereiste hoek).
   4. Terwijl u de aangezogen OCCC uitspuugt op de 11 uur-positie van de schaal, verlengt u deze voorzichtig horizontaal naar rechts. Observeer vervolgens de grootte van de granulosacellen rond de geëxpandeerde OCCC. Gebruik vervolgens, op de geschikte positie van de horizontaal langwerpige OCCC, de Pasteur-pipet om een snelle en zachte dalende snede te maken op de overtollige granulosacellen van boven naar beneden.
4. Breng de gesneden OCCC over in een opvangschaal met OCCC-spoeloplossing. Giet de resterende follikelvloeistof in een steriele monstercontainer (Materiaaltabel). Herhaal deze stappen totdat alle complexen zijn verzameld.

3. Spermabereiding en in-vitro-inseminatie

1. Verzamel de spermamonsters via ejaculatie op de ochtend van het ophalen van de eicel. Evalueer de concentratie, beweeglijkheid en morfologie van het sperma onder een lichtmicroscoop volgens de criteria van de Wereldgezondheidsorganisatie (WHO, 2010)¹⁰. Breng vervolgens de spermakorrel over in een nieuwe centrifugebuis en was deze twee keer in bevruchtingsmedium¹¹. Incubeer ze bij 6% CO₂ en 37 °C tot ze nodig zijn.
2. Insemineer OCCC's met 1 x 10⁵ tot 3 x 10⁵ beweeglijke spermatozoa per milliliter in een enkele druppel ongeveer 2-3 uur na het ophalen in de bevruchtingsschaal (Materiaaltabel). Voeg 6-8 OCCC en 1 ml van het bemestingsmedium toe aan de bemestingsschaal.
   OPMERKING: Na het wassen van de kleverige OCCC worden ze met behulp van een pasteurpipet overgebracht naar de bemestingsschaal. Laat één OCCC tegelijk los, til de pipet voorzichtig van het vloeistofoppervlak voordat u de volgende loslaat, zorg ervoor dat elke OCCC afzonderlijk in de schaal wordt geplaatst om clustering te voorkomen.

4. Verwijdering van cumuluscellen

1. Volg voor kortdurende bemesting de onderstaande stappen.
   1. Co-incubeer OCCC's met spermatozoa gedurende 4-6 uur. Verwijder na de incubatie mechanisch de cumuluscellen rond de eicellen.
   2. Zuig de eicellen op met behulp van een pipet met een binnendiameter die iets kleiner is dan de eicellen om ervoor te zorgen dat de cumuluscellen volledig worden verwijderd.
   3. Bevestig de bevruchting door de aanwezigheid van twee poollichamen te observeren. Eicellen die een tweede poollichaam vertonen, worden als bevrucht beschouwd.
   4. Identificeer die gevallen waarin het tweede poollichaam niet te zien is als mislukte bevruchting, waardoor redding-ICSI nodig is.
2. Voor regelmatige bevruchting verwijdert u na 18-20 uur co-incubatie cumuluscellen met behulp van de pipetten voor bevruchtingsbeoordeling.

5. Embryo cultuur

1. Kweek en controleer de bevruchte eicellen gedurende 3-5 dagen na het ophalen van de eicel. Beoordeel de bevruchting 20 uur na de inseminatie om het aantal pronuclei te bepalen. Kweek vervolgens elke zygote afzonderlijk in een mediumdruppel en breng de embryo's na de bevruchting over naar een splitsingsmedium.
   OPMERKING: Een ideaal embryo op de derde dag moet bestaan uit zes of meer blastomeren van gelijke grootte en een fragmentatiesnelheid vertonen van minder dan of gelijk aan 10%¹².
2. De beslissing om door te gaan met blastocystcultuur hangt af van de voorkeuren van de patiënt en de specifieke omstandigheden, zoals de kwantiteit en kwaliteit van de embryo's die op dag 3 zijn verkregen. Breng de embryo's van dag 3 over naar het blastocystmedium en beoordeel op dag 5. Gebruik het scoresysteem van Gardner om blastocysten te evalueren, waarbij blastocysten van hoge kwaliteit een score van ≥ 4 BB¹³ hebben.

6. Uitkomstmetingen en statistische analyse

1. Rapporteer continue gegevens als het gemiddelde ± standaarddeviatie en druk ordinale gegevens uit als verhoudingen. Voer statistische analyse uit met behulp van de t-toets van de student of de chi-kwadraattoets in een geschikte software voor gegevensanalyse (hier IBM SPSS Statistics). Beschouw een significantieniveau van P < 0,05 als statistisch significant.

Resultaten

In de groep die korte co-incubatieprocedures onderging, werden patiënten die gered werden uitgesloten. Van de 47 patiënten die een kortdurende inseminatie kregen, werden geen significante verschillen waargenomen in termen van leeftijd van de patiënt en het aantal afgenomen eicellen (tabel 1). De onmiddellijke gedeeltelijke verwijdering van OCCC resulteerde in een loslating van de resterende OCCC rond de eicellen (Figuur 3), waardoor de detectie van een tweede poollichaam werd vergemakkelijkt. De gemiddelde proceduretijd was significant korter in de groep met gedeeltelijke verwijdering van OCCC (4,42 ± 1,68 min versus 9,29 ± 5,04 min, P < 0,001) in vergelijking met de controlegroep, ondanks dat er geen significante verschillen werden gevonden in de splitsingssnelheid, optimale embryosnelheid en optimale blastocystsnelheid.

In een ander cohort van 68 patiënten die traditionele in-vitrofertilisatie (IVF) ondergingen, waarbij bevruchtingscontroles 18-20 uur na de inseminatie werden uitgevoerd, werden overeenkomsten opgemerkt in de leeftijd van de patiënt en het aantal opgehaalde eicellen tussen de twee groepen (Tabel 2). Een verhoogde losheid in de structuur van granulosacellen rond de eicel werd waargenomen bij patiënten die onmiddellijk gedeeltelijk OCCC ondergingen tijdens het ophalen van de eieren (Figuur 4). Hoewel een iets kortere gemiddelde operatietijd werd opgemerkt bij de gedeeltelijke verwijdering van de OCCC-groep (4,93 ± 0,80 min versus 6,54 ± 7,77 min, P = 0,207), was er geen statistisch significant verschil. Hoewel strakke hechtingen in sommige gevallen kunnen leiden tot langdurige observatieprocedures van meer dan 40 minuten, kunnen de over het algemeen losse verklevingen van OCCC in de meeste gevallen na nachtelijke opslag een verklaring zijn voor het gebrek aan statistische variatie in bedrijfstijden tussen de twee groepen. Net als bij de vorige groep werden er geen significante discrepanties vastgesteld in de splitsingssnelheid, de optimale embryosnelheid en de optimale blastocystsnelheid.

Over het algemeen geven de representatieve resultaten aan dat onmiddellijke gedeeltelijke verwijdering van de OCCC de operatietijden bij kortdurende inseminatieprocedures aanzienlijk verkort zonder afbreuk te doen aan belangrijke IVF-resultaten zoals splitsingspercentage, optimale embryosnelheid en optimale blastocystsnelheid. Deze techniek vergemakkelijkt de detectie van het tweede poollichaam door de resterende OCCC rond de eicellen los te maken, wat waarschijnlijk bijdraagt aan kortere operatietijden. In de context van traditionele IVF-procedures was het verschil niet statistisch significant, hoewel er een trend naar kortere operatietijden werd waargenomen met onmiddellijke gedeeltelijke verwijdering van OCCC, mogelijk vanwege de inherente variabiliteit in de hechting van cumuluscellen na nachtelijke opslag. Deze bevindingen suggereren dat hoewel onmiddellijke gedeeltelijke verwijdering van OCCC de procedurele efficiëntie kan verbeteren, met name in contexten van inseminatie op korte termijn, de impact op traditionele IVF-tijdlijnen mogelijk minder uitgesproken is.

Figuur 1: Bereiding van de pasteurpipet met behulp van een alcoholbrander. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 2: Typische afbeelding van OCCC die moet worden verwerkt. De typische eicellen met een diameter van meer dan 2,5 mm van (A en B) twee patiënten ondergingen een gedeeltelijke verwijdering langs de afgelijnde rode stippellijn. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 3: Typische microfoto's die de morfologische kenmerken van de bevruchting 4-6 uur na co-incubatie met spermatozoa weergeven. Typische eicel (A) met of (B) zonder gedeeltelijke verwijdering van OCCC. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 4: Typische microfoto's die de morfologische kenmerken van de evaluatie van pronuclei 18-20 uur na co-incubatie met spermatozoa weergeven. Typische eicel (A) met of (B) zonder gedeeltelijke verwijdering van OCCC. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

	Gedeeltelijke verwijdering van de OCCC-groep	Controlegroep	p-waarde
Patiënten (n)	26	21
Leeftijd (y)	32.04 ± 4.11	33.33 ± 3.41	0.193
Nee. van de opgehaalde eicellen	12.85 ± 9.02	11.38 ± 5.32 uur	0.493
4 uur proceduretijd (min)	4,42 ± 1,68	9.29 ± 5.04	<0,001
Splitsingspercentage, n (%)	98.89 ± 0.04, 24	100,00 ± 0,00, 19	0.221
Optimaal embryopercentage, n (%)	71.38 ± 35.46, 24	72.14 ± 35.72, 19	0.945
Optimaal blastocytenpercentage, n (%)	58.13 ± 28.29, 19	65.18 ± 28.09, 12	0.504

Tabel 1: Vergelijking van de bevruchtingsresultaten tussen de twee groepen met of zonder de onmiddellijke gedeeltelijke verwijdering van OCCC die korte co-incubatieprocedures ondergaat.

	Gedeeltelijke verwijdering van de OCCC-groep	Controlegroep	p-waarde
Patiënten (n)	29	39
Leeftijd (y)	32.21 ± 4.11	32,72 ± 4,25	0.619
Nee. van de opgehaalde eicellen	12.93 ± 7.00 uur	12.44 ± 7.26 uur	0.777
20 uur gebruikstijd (min)	4,93 ± 0,80	6,54 ± 7,77	0.207
Splitsingspercentage, n (%)	98.81 ± 0.04, 28	95,93 ± 0,17,37	0.39
Optimaal embryopercentage, n (%)	72.07 ± 36.75, 28	72.62 ± 30.01,36	0.948
Optimaal blastocytenpercentage, n (%)	62.93 ± 28.30, 21	63.36 ± 24.61, 28	0.955

Tabel 2: Vergelijking van bevruchtingsresultaten tussen de twee groepen met of zonder de onmiddellijke gedeeltelijke verwijdering van OCCC die traditionele in-vitrofertilisatie (IVF) ondergaat.

Discussie

De onmiddellijke gedeeltelijke verwijdering van granulosacellen kan het vroege desintegratieproces van kortetermijnbevruchting versnellen, de observatietijd voor het tweede poollichaam verkorten bij zowel kortetermijnbevruchting als conventionele IVF en de daaropvolgende embryonale ontwikkeling niet in gevaar brengen. Momenteel gebruiken laboratoria wereldwijd verschillende strategieën om bevruchtingsstoornissen en lage slagingspercentages te verminderen. De voorkeursmethode omvat het verwijderen van granulosacellen voor het observeren van het tweede poollichaam 4-6 uur na kortetermijnbevruchting¹⁴. Er ontstaan uitdagingen vanwege de nauwe hechting tussen eicellen en omliggende cumuluscellen, waardoor de mechanische verwijdering met een pipet wordt belemmerd. Onmiddellijk plukken en snijden van eicellen kan dit probleem verminderen door de adhesie en het volume van OCCC te verminderen, waardoor de observatietijd wordt verkort. Een cruciale stap in het protocol is de onmiddellijke gedeeltelijke verwijdering van OCCC na het ophalen van eieren, wat helpt bij het losmaken van de resterende cumuluscellen rond de eicellen om de detectie van het tweede poollichaam te vergemakkelijken, wat cruciaal is voor het beoordelen van het succes van de bevruchting. De snelle verwijdering verkort de operatietijd aanzienlijk zonder afbreuk te doen aan de splitsingssnelheid, optimale embryosnelheid of optimale blastocystsnelheid.

Voorgestelde aanpassingen en probleemoplossing van de snijtechniek zijn als volgt: (i) Naaldfixatie wordt niet nodig geacht, omdat dit zou leiden tot langere extracorporale tijd. In de praktijk vertegenwoordigt het een handige snijbenadering. (ii) Focussen op de OCCC, het behouden van 3-4 granulosacellen aan elke kant die overeenkomen met de diameter van de eicel, wordt geadviseerd. Voor bilaterale OCCC moeten beide zijden worden doorgesneden; voor eenzijdige OCCC, knip de kant af met de OCCC. Men kan streven naar symmetrie, zij het niet noodzakelijkerwijs perfect. (iii) Om te voorkomen dat de follikels krullen en de verspreide toestand verstoren, moet de follikelvloeistof bovenop de schaal tijdens het snijden voldoende dun zijn om OCCC-floating te voorkomen. (iv) Het folliculaire vocht bevat vaak bloedbestanddelen tijdens het ophalen van de eicel. Na het snijden moet men de follikels onmiddellijk overbrengen naar een wasschaal om de impact van bloedbesmetting te verminderen en doorgaan met wassen na het ophalen van de eicel.

Het vasthouden van cumuluscellen na gedeeltelijke verwijdering zorgt ervoor dat eicellen essentiële stoffen ontvangen voor de vroege embryonale ontwikkeling, zoals groeifactoren en aminozuren, waardoor de embryonale ontwikkeling wordt bevorderd¹⁵. Eerdere studies hebben aangetoond dat co-cultuur op lange termijn een grote hoeveelheid reactieve zuurstofsoorten (ROS) kan genereren, wat leidt tot de verharding van de embryonale zona pellucida en het potentieel van embryo's aantast. Onmiddellijke gedeeltelijke verwijdering van granulosacellen, met behoud van de nodige cumulus granulosacellen vermindert de ROS door granulosacellen en het energieverbruik in kweekmedia¹⁶. Momenteel is er geen uniforme consensus over de timing en het aandeel van het verwijderen van granulosacellen voor kortetermijnbevruchting bij IVF. De gegevens die in deze studie zijn verkregen, suggereren dat de onmiddellijke verwijdering van geselecteerde eicellen tot een OCCC-diameter van ongeveer 2500 μm de daaropvolgende embryonale ontwikkeling of het observatieproces voor kortdurende en conventionele IVF-bevruchting niet belemmert.

Een belangrijke beperking van deze techniek is de mogelijkheid van variabiliteit in de mate van adhesie tussen de eicellen en cumuluscellen, wat de consistentie van de resultaten kan beïnvloeden. Bovendien, hoewel de onmiddellijke gedeeltelijke verwijderingsbenadering de observatietijden verkort, vereist het een nauwkeurige uitvoering om eicelbeschadiging te voorkomen of de daaropvolgende embryonale ontwikkeling in gevaar te brengen. Verdere experimenten zijn nodig om de optimale hoeveelheid resterende OCCC na het snijden te bepalen. Door bijvoorbeeld te onderzoeken of het vasthouden van ongeveer 2000 μm OCCC en het vooraf markeren van een schaal op de plukschaal de uniforme beoordeling van de OCCC-grootte en het snijbereik zou kunnen verbeteren.

Concluderend kan worden gesteld dat deze verfijnde techniek geen significante nadelige effecten heeft op de bevruchting of de ontwikkeling van embryo's, waardoor het een waardevolle methode is om te onderschrijven.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
G-IVFT PLUS	Vitrolife	10136
OVOIL	Vitrolife	10029
G-MOPS PLUS	Vitrolife	10130
Falcon 3003 schaal	Corning	353003
Falcon 3001 schaal	Corning	353001
Falcon 2001 buis	Corning	352001
Falcon 4013 kop	Corning	354013
Falcon 3037 schaal	Corning	351058
Pasteur pipette	Darwin	D1150-5P