Methodenartikel

Optimalisatie van antigeenpreparaat voor hemagglutinatie-inhibitietest van Newcastle Disease Virus-serologie

DOI:

10.3791/67256

⸱

24 januari 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Medical Science and Technology, Suzhou Chien-shiung Institute of Technology, 2Jiangsu Province Engineering Research Center of Novel Tumor-targeting Drug Conjugates, 3Crown Bioscience Inc.

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit artikel presenteert een vereenvoudigde methode voor het bereiden van 4 hemagglutinatie-eenheden antigeen voor serologische tests van het virus van de ziekte van Newcastle. Door de hemagglutinatietiter van het antigeen nauwkeurig te bepalen, in combinatie met een strengere back-titratiemethode en een goed gedefinieerd aanpassingsproces, verbetert het de testefficiëntie, vermindert het valse positieven en verbetert het ziektetoezicht bij pluimvee.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Een nauwkeurige beoordeling van de antilichaamtiters van het Newcastle disease virus (NDV) is cruciaal voor een effectieve bestrijding en bewaking van pluimveeziekten. Dit artikel introduceert een geoptimaliseerde methode voor het bereiden van 4 hemagglutinatie-eenheden (4-HAU) antigeenoplossing, een belangrijk onderdeel van de hemagglutinatie-inhibitietest (HI) die wordt gebruikt bij serologische detectie van NDV. In tegenstelling tot conventionele methoden, die tijdrovende en ongedefinieerde back-titratie- en aanpassingsstappen met zich meebrengen, stroomlijnt deze benadering dit proces door de HA-titer nauwkeurig te meten met behulp van een eerste reeks verdunningen (1:3, 1:5, 1:7 en 1:9). We bieden ook een specifieke methode voor het aanpassen of herformuleren op basis van de resultaten van de back-titratie, waardoor de noodzaak van herhaalde back-titraties wordt verminderd. Daarnaast evalueerden we het effect van de nauwkeurigheid van de 4-HAU-antigeenoplossing op de serum-HI-titer en ontdekten dat wanneer de titer van het 4-HAU-antigeen lager was dan 3, dit resulteerde in het verschijnen van vals-positieve HI-monsters. Door een nauwkeurige methode te bieden en rekentaken te minimaliseren, verhoogt deze aanpak de efficiëntie en betrouwbaarheid van de test, wat bijdraagt aan een betere ziektebewaking en -bestrijding in pluimveepopulaties.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De ziekte van Newcastle (ND) is een wijdverbreide en ernstige aandoening bij pluimvee die wereldwijd wordt erkend 1,2,3. Het manifesteert zich door verschillende symptomen, zoals hoge koorts, ademnood, dysenterie, zenuwaandoeningen en slijmvliesbloeding4. De veroorzaker, het Newcastle Disease Virus (NDV), bestaat al bijna een eeuw en treft meer dan 200 vogelsoorten, waaronder kippen, eenden, ganzen en duiven5. Overdracht vindt voornamelijk plaats door direct of indirect contact met besmette vogels, waarbij pluimvee, duiven en vrij rondlopende vogels als potentiële reservoirs dienen6. Ondanks het enkele serotype van NDV, vormt de genetische diversiteit ervan aanzienlijke uitdagingen voor de inspanningen op het gebied van ziektebeheer en -bestrijding 3,7.

Vaccinatie dient als de primaire strategie voor het beheersen van ND, aangevuld met strenge bioveiligheidsmaatregelen 5,8. Er zijn wereldwijd verschillende commerciële vaccins beschikbaar voor pluimvee, die na immunisatie robuuste serumantilichaamresponsen veroorzaken9. Deze antilichamen spelen een cruciale rol bij het verminderen van de ernst van de symptomen bij blootstelling aan virulente stammen en bij het terugdringen van de overdracht tussen koppels10. Standaard hervaccinatieprotocollen, waarbij doorgaans elke 6-12 weken levende verzwakte vaccins worden toegediend, zijn standaardpraktijk in regio's die endemisch zijn voor ND9. Routinematige monitoring van antilichaamtiters na vaccinatie in commerciële pluimveekoppels is essentieel voor het beoordelen van de effectiviteit van het vaccin 11,12,13. Lage antilichaamtiters na vaccinatie kunnen duiden op falen van het vaccin, wat leidt tot tijdige corrigerende maatregelen zoals aanvullende vaccinatie of onderzoek naar mogelijke immunosuppressieve factoren die de immuunrespons beïnvloeden14.

Er worden meerdere technieken gebruikt voor het detecteren van serumantilichamen tegen NDV, waaronder enzymgekoppelde immunosorbenttest, hemagglutinatieremming (HI) en neutralisatietest 9,13,15,16. Elke methode heeft unieke voordelen en beperkingen op het gebied van gevoeligheid, specificiteit en kosteneffectiviteit.

Dit artikel schetst een stapsgewijs protocol op basis van het protocol van de Wereldorganisatie voor diergezondheid (OIE) voor het uitvoeren van HI om serumspecifieke antilichaamtiters tegen NDV11 te kwantificeren. Hemagglutinatie (HA), een fenomeen dat wordt veroorzaakt door bepaalde omhulde virussen zoals NDV, omvat het samenklonteren van rode bloedcellen (RBC's)9. Het hemagglutinine-neuraminidase (HN)-eiwit op het NDV-oppervlak interageert met rode bloedcellen, wat resulteert in celklontering en roostervorming2. HI-assay heeft de voorkeur als serologische methode vanwege het vermogen om de serumantilichaamspecificiteit ten opzichte van het HN-eiwit van NDV 8,9 te beoordelen. Bovendien maken de kosteneffectiviteit en de onafhankelijkheid van gespecialiseerde instrumenten het toegankelijk en praktisch voor routinematig gebruik.

Om de efficiëntie van de test te verbeteren, hebben we de workflow van het OIE-protocol11 verfijnd, met een focus op het verkrijgen van nauwkeurigere antigeen HA-titers en het aanbieden van gedetailleerde aanpassingen voor de antigeenoplossing met 4 hemagglutinatie-eenheden (4-HAU). Bovendien hebben we door middel van vergelijkende analyse de impact van 4-HAU-nauwkeurigheid op HI-resultaten beoordeeld, wat waardevolle inzichten opleverde voor veldwerkers. Deze benadering is niet beperkt tot het testen van NDV-antilichamen, maar strekt zich uit tot de detectie van virale subtypes en andere hemagglutinerende virussen, waaronder mazelen, polyomavirus, bof en rodehond.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Goedkeuring voor het protocol werd verleend door de lokale institutionele commissie voor dierenverzorging en -gebruik. Alle procedures met levende virusantigenen en klinische serummonsters werden uitgevoerd in een laboratorium van bioveiligheidsniveau 2, in overeenstemming met de vastgestelde veiligheidsprotocollen.

1. Bereiding van 1% kip RBC suspensie

  1. Voeg 3 ml Alserver-oplossing (antistollingsmiddel) toe aan een steriele conische centrifugebuis van 15 ml.
  2. Verzamel 1 ml bloed uit de vleugelader van elk van de drie niet-immuunkippen (zonder NDV-antilichamen). Breng het bloed onmiddellijk over naar het buisje met het antistollingsmiddel en meng voorzichtig.
  3. Vul de tube met steriele 1x fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS, pH 7,2-7,4) tot een totaal volume van 12 ml en meng voorzichtig. Centrifugeer gedurende 10 minuten bij 500 × g met behulp van een horizontale rotor.
  4. Verwijder voorzichtig het bovenstaande en de witte bloedcellaag. Herhaal stap 1.3 en 1.4 2x om de RBC-pellet te verkrijgen.
  5. Pipetteer 1 ml van de RBC-pellet in 99 ml steriele PBS om een RBC-suspensie van 1% te bereiden.
    OPMERKING: Het vereiste volume van de 1% kip RBC-suspensie wordt geschat op 3 ml/plaat (25 μl/putje x 96 putjes x 1,25 = 3,0 ml; waarbij 1,25 staat voor pipetteerverspilling om voldoende volume te garanderen).

2. Reconstitutie van gevriesdroogd antigeen of serum

  1. Voeg 2 ml steriel PBS toe aan de ampul die het gevriesdroogde antigeen of serum bevat. Schud de ampul voorzichtig en laat deze 2-3 minuten staan om luchtbellen te minimaliseren en volledige oplossing te garanderen.
    OPMERKING: Volg de specifieke instructies van de fabrikant, aangezien verschillende soorten gevriesdroogde materialen in dit onderzoek niet zijn vergeleken.
  2. Verdeel de gereconstitueerde oplossing in centrifugebuisjes van 1,5 ml en vries in bij -20 °C tot gebruik.
    OPMERKING: Bepaal de HA-titer opnieuw telkens wanneer het antigeen wordt ontdooid en gebruikt, of wanneer een nieuwe RBC-suspensie wordt bereid.

3. HA-titratie van antigenen

  1. Doseer respectievelijk 40, 80, 120 en 160 μL PBS in vier aangrenzende putjes van een wegwerpbare 96-well microtiterplaat met V-bodem, voeg vervolgens 20 μL antigeen toe aan elk putje en meng door 10x op en neer te pipetteren om verdunningen van respectievelijk 1:3, 1:5, 1:7 en 1:9 te bereiken. Een schematisch schema van de verdunningsprocedure is weergegeven in figuur 1.

figure-protocol-1
Figuur 1 : Schematisch schema ter illustratie van de procedure voor het verdunnen van de antigeenoplossing in de hemagglutinatietest. De antigeenoplossing wordt verdund in PBS in verhoudingen van respectievelijk 1:3, 1:5, 1:7 en 1:9. PBS in putten of centrifugebuizen wordt weergegeven in blauw, terwijl antigenen in groen worden weergegeven. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

  1. Label een nieuwe microtiterplaat. Voeg 25 μL PBS toe aan elk putje in rijen 1-5.
  2. Breng 25 μl van de verdunde antigeenoplossingen met behulp van een meerkanaalspipet in de eerste putjes van de rijen 1-5 en meng door minstens 5x op en neer te pipetteren.
  3. Breng 25 μL over van het eerste putje van elke rij naar het tweede putje en meng grondig. Ga door met het overbrengen van de ene put naar de andere, tot en met de 11e kolom, om tweevoudige seriële verdunningen te creëren (1:2 tot 1:2048). Gooi 25 μL na de 11e kolom weg.
  4. Voeg 25 μL PBS toe aan elk putje, te beginnen met de putjes met de laagste antigeenconcentratie.
  5. Voeg 25 μL 1% kip RBC-suspensie toe aan elk putje, opnieuw te beginnen met de putjes met de laagste antigeenconcentratie.
  6. Schud de plaat op een microplate shaker gedurende ~20 s om goed te mengen.
  7. Laat het ongestoord op een werkblad bij kamertemperatuur (20-25 °C) gedurende ~30 minuten staan tot de RBC van de 12e kolom volledig tot rust is gekomen. Voor de lay-out van de plaat zie Figuur 2.

figure-protocol-2
Figuur 2: Schematische lay-out van een microtiterplaat die wordt gebruikt in de hemagglutinatietest. De eerste kolom van de rijen 1 tot en met 5 bevat onverdunde en verschillende beginverdunningen van de antigeenoplossing, gevolgd door een tweevoudige seriële verdunning van links naar rechts tot kolom 11. PBS-besturingselement wordt in de laatste kolom geplaatst. De gradiënt van donker naar licht geeft een afnemende antigeenconcentratie aan. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

  1. Lees en noteer de resultaten. HA wordt bepaald door de plaat 90° te kantelen gedurende ~25 s en de aan- of afwezigheid van traanvormige stroming van de RBC's te observeren. De hoogste verdunning die volledige hemagglutinatie vertoont (geen streaming), vertegenwoordigt 1 HA-eenheid. Putten in de 12e kolom dienen als RBC (negatieve) controles.
  2. Bereken de HA-titer van elke rij aan de hand van tabel 1, waarvan het maximum wordt gebruikt voor de bereiding van de 4-HAU-antigeenoplossing. Als a, b, c, d en e bijvoorbeeld gelijk zijn aan respectievelijk 9, 8, 7, 6, 6, dan is 3 x 28 = 768 de maximale waarde en is het de HA-titer van de antigeenvoorraad.
AntigenenHoogste verdunningskolom van volledig HAHA titer van onverdunde voorraad
Onverdunde voorraadeen2een
3-voudige verdunningb3 x 2b
5-voudige verdunningc5 x 2c
7-voudige verdunningd7 x 2d
9-voudige verdunninge9 x 2e

Tabel 1: Resultaten van de HA-bepaling en berekening van de HA-titer van de stockoplossing.

4. Bereiding van de 4-HAU-antigeenoplossing

  1. Bereken de verdunningsfactor voor de bereiding van de 4-HAU-antigeenoplossing: figure-protocol-3. Bepaal het totale benodigde volume van 4-HAU: V = 3 ml x aantal microplaten. Bereken vervolgens de vereiste hoeveelheden antigeenvoorraadoplossing: figure-protocol-4, en PBS: Vp = V - Va.
    OPMERKING: Volumes worden gemeten in milliliters. Schat 3 ml per microtiterplaat van de 4-HAU (25 μL/putje x 96 putjes x 1,25 = 3 ml).
  2. Pipetteer het berekende volume PBS in een recipiënt, voeg vervolgens het overeenkomstige volume antigeenstockoplossing toe en meng goed om de 4-HAU-antigeenoplossing te verkrijgen.
    OPMERKING: De 4-HAU-antigeenoplossing moet zo snel mogelijk worden gebruikt.

5. Terugtitratie van de 4-HAU-antigeenoplossing

  1. Doseer 25, 50, 75, 100, 125 en 150 μl PBS in zes aangrenzende putjes van een microtiterplaat, voeg vervolgens 25 μl van de 4-HAU-antigeenoplossing toe aan elk putje en meng door 10x op en neer te pipetteren.
    OPMERKING: Verdun de 4-HAU-antigeenoplossing met PBS in verdunningen van 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6 en 1:7. Een schematisch schema van de verdunningsprocedure is weergegeven in figuur 3.

figure-protocol-5
Figuur 3: Schematisch schema van de verdunningsprocedure van de oplossing van 4 hemagglutinatie-eenheden in back-titratie. De 4-HAU werkoplossing wordt verdund met PBS in verhoudingen van 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6 en 1:7. PBS is afgebeeld in blauw en antigenen in groen. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

  1. Breng 25 μl van elke verdunde antigeenoplossing over in de putjes van een andere rij met behulp van een meerkanaalspipet. Voeg 25 μL PBS toe aan een extra putje als negatieve controle.
  2. Voeg 25 μL PBS toe aan elk putje en voeg vervolgens 25 μL 1% kip RBC toe aan elk putje.
  3. Schud de plaat op een microplate shaker gedurende ~20 s om te mengen.
  4. Laat het ongestoord op het werkblad bij kamertemperatuur (20-25 °C) gedurende ~30 minuten staan totdat de rode bloedcellen van de negatieve controle volledig tot rust zijn gekomen.
  5. Lees en noteer de resultaten.
    OPMERKING: De negatieve controleput mag geen HA aangeven. Idealiter is de verdunning van 1:4 precies de hoogste verdunning met volledige HA. Als de titer van de 4-HAU-oplossing meer dan 4 is, kan de hoogste verdunning 1:5, 1:6 of 1:7 zijn; als het minder is, kan het 1:2 of 1:3 zijn. Een schematische lay-out van de backtitratie en representatieve resultaten zijn weergegeven in figuur 4.

figure-protocol-6
Figuur 4: Schematische lay-out van de putten voor backtitratie en representatief resultaat. De verdunde 4-HAU-werkoplossing wordt overgebracht naar een nieuwe rij, waaraan een extra PBS-regeling wordt toegevoegd. De gradiënt van donker naar lichtgroen geeft de antigeenconcentratie aan van hoog naar laag. Representatieve resultaten tonen aan dat de verdunning van 1:4 de hoogste verdunning is die volledige hemagglutinatie vertoont. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

  1. Pas de 4-HAU-antigeenoplossing indien nodig aan of herformuleer deze.
    OPMERKING: Als het volume van de 4-HAU-antigeenoplossing die bij terugtitratie wordt gebruikt, ≤1% van het totale volume is (het volume van de 4-HAU-antigeenoplossing ≥ 15 ml), raadpleeg dan tabel 2 voor specifieke aanpassingen. Als de hoogste verdunning met volledig HA bijvoorbeeld 1:2 is, is de titer van de 4-HAU-antigeenoplossing nu 2 en moet een gelijk volume antigeen worden toegevoegd als bij de vorige bereiding van de 4-HAU-antigeenoplossing. Omgekeerd, als de hoogste verdunning van volledig HA 1:6 is, is de titer nu 6 en moet de helft van het volume PBS worden aangevuld.
    Als het volume dat bij de terugtitratie wordt gebruikt meer bedraagt dan 1% van het totaal (het volume van de 4-HAU-antigeenoplossing < 15 ml), herformuleer dan de 4-HAU-antigeenoplossing met behulp van de gecorrigeerde verdunningsfactor. Zie Tabel 3 voor de specifieke correcties. Als de hoogste verdunning van volledig HA bijvoorbeeld 1:2 is, is de titer van de 4-HAU-antigeenoplossing nu 2 en moet de verdunningsfactor worden aangepast aan 1/2 van het origineel. Omgekeerd, als de hoogste verdunning van volledig HA 1:6 is, is de titer van de 4-HAU-antigeenoplossing nu 6 en wordt de verdunningsfactor aangepast aan 3/2 van het origineel.
HA titer van back-titratieAanvulling van antigeen of PBS
1:2Va
1:3Va/3
1:5Vp/4
1:6VP/2
1:73Vp/4

Tabel 2: Referentietabel voor het aanpassen van de 4-HAU-concentratie op basis van back-titratieresultaten. Va en Vp vertegenwoordigen de hoeveelheden antigeen en PBS die respectievelijk worden gebruikt bij de formulering van de 4-HAU-antigeenoplossing.

HA titer van back-titratieCorrectie van de verdunningsfactor
1:2D/2
1:33D/4
1:55D/4
1:63D/2
1:77D/4

Tabel 3: Referentietabel voor de correctie van de verdunningsfactor voor de herbereiding van het 4-HAU-antigeen. D staat voor de verdunningsfactor die eerder werd gebruikt in het 4-HAU-antigeenpreparaat.

6. Bereiding van het serum

  1. Verzamel ~1 ml bloed van kippenvleugels zonder een antistollingsmiddel te gebruiken.
  2. Breng het bloed over in een centrifugebuis van 1,5 ml en incubeer gedurende ~2 uur bij 37 °C. Centrifugeer gedurende 10 minuten bij 3.000 x g en zuig het bovenstaande voorzichtig op in een nieuwe buis.

7. HI-test

  1. Label microtiterplaten volgens de lay-out van de test. Voeg 25 μl PBS toe aan elk putje in de kolommen 1-11 en 50 μl aan de putjes in kolom 12 met behulp van een meerkanaalspipet.
  2. Voeg 25 μL serum toe aan het eerste putje van elke rij, inclusief positieve en negatieve serumcontrolerijen. Meng grondig door minimaal 5x op en neer te pipetteren.
  3. Breng 25 μL over van het eerste putje van elke rij naar het tweede putje en meng grondig. Ga door met overbrengen en mengen van de tweede put naar de derde, enzovoort, tot de 10e kolom. Gooi na het mengen 25 μL vloeistof uit de put in de 10e kolom.
  4. Voeg 25 μl 4-HAU-antigeen toe aan elk putje in de kolommen 1-11 in de richting van lage naar hoge serumconcentratie.
  5. Schud de plaat op een microplate shaker gedurende ~20 s. Laat het ~30 minuten ongestoord op het werkblad staan.
  6. Voeg 25 μL 1% rode bloedcellen voor kip toe aan elk putje in de richting van een lage tot hoge serumconcentratie.
  7. Schud de plaat op een microplate shaker gedurende ~20 s om goed te mengen. Laat het ~30 minuten ongestoord op het werkblad staan totdat de RBC's van de PBS-controleputten volledig zijn bezonken.
  8. Lees en noteer de resultaten.
    OPMERKING: De HI-titer is de hoogste serumverdunning die de hemagglutinatie van het 4-HAU-antigeen volledig remt. Traanvormige stroming van RBC's kan worden waargenomen in de laatste kolom van elke rij, door de plaat 90° gedurende 25 s te kantelen. Volledige HA (geen streaming) kan worden waargenomen in het voorlaatste putje vanaf het einde van elke rij. Geldige testresultaten vereisen dat de HI-titer van de positieve serumcontrole binnen één verdunning van de bekende HI-titer ligt; de HI-titer van de negatieve serumcontrole moet ≤ 2 log2 zijn; en de afwezigheid van zelf-HA van de RBC-controle. Zie figuur 5 voor een schematisch diagram van de HA-testworkflow.

figure-protocol-7
Figuur 5: Schematisch diagram van de workflow van de hemagglutinatietest. PBS wordt weergegeven in blauw, serum in geel, de 4-HAU-antigeenoplossing in groen en de 1% kip RBC-suspensie in rood. Pijlen geven de volgorde van de vloeistofafgifte aan. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Validatie van de titer van de 4-HAU-antigeenoplossing geformuleerd met behulp van de geoptimaliseerde methode
De studie maakte gebruik van verschillende verdunningen van de antigeenvoorraadoplossing om de HA-titer nauwkeurig te bepalen, waardoor de berekening van de verdunningsfactor voor de bereiding van de 4-HAU-antigeenoplossing werd vergemakkelijkt. De resultaten laten zien dat de geoptimaliseerde methode zowel efficiënt als nauwkeurig is, waardoor het aantal repe...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De geoptimaliseerde methode die in dit artikel wordt voorgesteld, presenteert een aanpak voor het nauwkeurig bereiden van de 4-HAU-antigeenoplossing. Hoewel in de OIE- en EU-richtlijnen initiële verdunningen voor HA-titratie worden voorgesteld, geven ze geen precieze details over de te gebruiken verdunningsverhoudingen of bieden ze geen specifieke methodologieën11,12. Bovendien, hoewel de FAO en OIE backtitratie aanbevelen als een middel om de nauwke...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben geen belangenconflicten te melden.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

CC werd ondersteund door het Taicang Technology-programma (TC2021JC16) en Innovation Team Funds van het Suzhou Chien-shiung Institute of Technology (2023JXKYTD01). H.Y. werd ondersteund door het Taicang Technology-programma (TC2021JC11). Beiden werden ondersteund door het Start-up Fund for New Ph.D. Onderzoekers van het Suzhou Chien-Shiung Institute of Technology.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
 Steriele centrifugeerbuis (15 mL) Labshark130201030
Luchtgekoelde laagsnelheids tafelcentrifuge TitanLDC-5
Alserve's oplossingSangon BiotechE607058
CentrifugeDLAB9032002121
Eenmalige Pasteur pipetTitanSWXG-004
Eenmalige steriele spuit(1 mL)BeyotimeFS801-30PCS
Eenmalige V-bodem microtiterplaat(96-well)Labshark130207001
Microplaat shakerJiangsu Xinkang Medical Equipment Co., LtdXK96-3
NDV HI Negatieve seraQingdao Regen Diagnostics Development Center
NDV HI Positieve seraQingdao Regen Diagnostics Development Center
NDV HI Test AntigenQingdao Regen Diagnostics Development Center
PBS-oplossing (1x) Adamas LifeC8020
Steriele centrifugeerbuis (1,5 mL)Labshark130201012

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Ayllon, J., García-Sastre, A., Martínez-Sobrido, L. Rescue of recombinant Newcastle disease virus from cDNA. J Vis Exp. (80), e50830(2013).
  2. Chen, Y., et al. The HN protein of Newcastle disease virus induces cell apoptosis through the induction of lysosomal membrane permeabilization. PLoS Pathog. 20 (2), e1011981(2024).
  3. Miller, P. J., Decanini, E. L., Afonso, C. L. Newcastle disease: evolution of genotypes and the related diagnostic challenges. Infect Genet Evol. 10 (1), 26-35 (2010).
  4. Terregino, C., Capua, I. Clinical traits and pathology of Newcastle disease infection and guidelines for farm visit and differential diagnosis. Avian Influenza and Newcastle Disease: A Field and Laboratory. , 113-122 (2009).
  5. Dimitrov, K. M., Afonso, C. L., Yu, Q., Miller, P. J. Newcastle disease vaccines—A solved problem or a continuous challenge. Vet Microbiol. 206, 126-136 (2017).
  6. Sheng, W., et al. Molecular characteristics and phylogenetic analysis of pigeon paramyxovirus type 1 isolates from pigeon meat farms in Shanghai (2009-2012). Sci Rep. 14 (1), 10741(2024).
  7. Yates, J. G. E., et al. Production of high-titer recombinant Newcastle disease virus from allantoic fluid. J of Vis Exp. (183), e63817(2022).
  8. van Boven, M., et al. Herd immunity to Newcastle disease virus in poultry by vaccination. Avian Pathol. 37 (1), 1-5 (2008).
  9. Oberländer, B., et al. Evaluation of Newcastle disease antibody titers in backyard poultry in Germany with a vaccination interval of twelve weeks. PloS One. 15 (8), e0238068(2020).
  10. Bhattacharya, S., et al. Spillover of Newcastle disease virus to Himalayan Griffon vulture: a possible food-based transmission. Virus Genes. 60 (4), 385-392 (2024).
  11. World Organisation for Animal Health (OIE). Newcastle disease (Infection with Newcastle disease virus). Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals. , (2024).
  12. Council of European Union. Council Directive 92/66/EEC of 14 July 1992 Introducing Community measures for the control of Newcastle disease. Document 31992L0066. L260, 1-20 (1992).
  13. Grimes, S. E. A basic laboratory manual for the small-scale production and testing of I-2 Newcastle disease vaccine. 2002/22, RAP Publication. 1-129 (2002).
  14. Dortmans, J. C. F. M., Peeters, B. P. H., Koch, G. Newcastle disease virus outbreaks: Vaccine mismatch or inadequate application. Vet Microbiol. 160 (1-2), 17-22 (2012).
  15. De Sousa, R. L. M., Montassier, H. J., Pinto, A. A. Detection and quantification of antibodies to Newcastle disease virus in ostrich and Rhea sera using a liquid phase blocking enzyme-linked immunosorbent assay. Clin Diagn Lab Immunol. 7 (6), 940-944 (2000).
  16. Chumbe, A., Izquierdo-Lara, R., Calderón, K., Fernández-Díaz, M., Vakharia, V. N. Development of a novel Newcastle disease virus (NDV) neutralization test based on recombinant NDV expressing enhanced green fluorescent protein. Virol J. 14 (1), 232(2017).
  17. Webster, R., Cox, N., Stöhr, K. WHO animal influenza manual. WHO/CDS/CSR/NCS. 2002.5, 1-99 (2002).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

HI assay4 HAU antigeenantilichaamdetectieback titratiemethodekippenrode bloedcellenmicrotiterplaatserologische detectie

Gerelateerde artikelen