Epileptische aanvallen hebben een negatieve invloed op verschillende functies en de kwaliteit van het leven. Planaria-wormen werden blootgesteld aan verschillende concentraties chemoconvulsiva om hun aanvalsfenotypes en storende motiliteit te evalueren. Deze studie stelt voor om planariawormen te gebruiken als model voor acute aanvallen bij mensen en is van belang bij de ontwikkeling van geneesmiddelen voor epilepsie.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Planarian als diermodel voor experimentele acute aanvallen
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Epilepsie is een van de meest voorkomende neurologische aandoeningen die wordt gekenmerkt door terugkerende spontane aanvallen. Insulten vertegenwoordigen een klinische manifestatie van ongecontroleerde, overmatig gesynchroniseerde neurale celactiviteit. De mate van hersenbeschadiging door aanvallen hangt af van de duur en intensiteit ervan. Helaas is er geen effectief middel tegen epilepsie. Het doel van dit onderzoek is om te beoordelen of de planariaworm Dugesia dorotocephala als model kan dienen om te helpen bij het identificeren en ontwikkelen van behandelingen voor epilepsie die gericht kunnen zijn op acute aanvallen. Momenteel worden verschillende modellen, zoals mariene modellen, gebruikt om anti-epileptica (ASM) te evalueren. Ze zijn echter erg duur en er zijn ethische bezwaren. Als alternatief bieden ongewervelde modellen een kosteneffectieve onderzoeksmogelijkheid in het proces voor het ontdekken van geneesmiddelen voor ASM. Planaria behoren tot de familie van de platwormen en leven in zoetwater- en terrestrische mariene omgevingen. Dugesia dorotocephala is de dominante soort aquatische planaria in Noord-Amerika. D. dorotocephala presenteert zich als een levensvatbaar ongewerveld model voor epilepsiestudies vanwege de kosteneffectiviteit, gewervelde neuronen en kwantificeerbaar gedrag, in tegenstelling tot andere ongewervelde dieren of grotere dieren. Ze zijn gebruikt in verschillende farmacologische en milieutoxicologische onderzoeken met betrekking tot leeftijd, geheugen en regeneratie. In deze studie werden planaria blootgesteld aan verschillende concentraties pilocarpine, een veel voorkomend chemoconvulsivum om hun gedrag bij blootstelling te bestuderen. Na de observatie werden planaria geëuthanaseerd en geconserveerd in formaldehyde of Golgi-oplossing voor neurohistologische beoordeling. Zes verschillende gedragsfenotypes werden waargenomen bij planaria: dorsale oscillaties, hoofdoscillaties, dorsale expansie van de staart, C-vorm, kopflick en staartflick. De frequentie van de dorsale oscillatie was significant verhoogd bij experimentele groepen in vergelijking met de controlegroep en de vertoonde dosisafhankelijkheid. Bovendien verstoorde pilocarpine de beweeglijkheid van de planaria. Pilocarpine-geïnduceerde aanvallen in planaria kunnen dienen als model voor het evalueren van acute aanvallen en anti-epileptische medicatie, wat essentieel is bij het ontwikkelen van therapeutische interventies voor menselijke patiënten die lijden aan epilepsie.
Inleiding
Epilepsie, gekenmerkt door twee of meer aanvallen binnen 24 uur zonder duidelijke oorzaak, treft wereldwijd ~50 miljoen mensen1. Onder hen wordt gemeld dat 10-15 miljoen mensen geneesmiddelresistente epilepsiehebben 2. Daarom is onderzoek naar epilepsie cruciaal. De aandoening omvat korte episodes van gedeeltelijke of gegeneraliseerde onwillekeurige beweging, variërend van leeg staren tot verstijven en schudden van het lichaam, en is gekoppeld aan een golf van elektrische activiteit in de hersenen3.
Historisch gezien is het onderzoek naar epilepsie gebaseerd op knaagdieren en andere zoogdieren vanwege hun evolutionaire overeenkomsten met mensen. Deze methoden kunnen echter tijdrovend en duur zijn, waardoor een alternatieve aanpak nodig is 4,5. Niet-zoogdieren zoals fruitvliegjes, bloedzuigers, kikkervisjes, zebravissen en rondwormen zijn gebruikt in onderzoeken en hebben veelbelovende resultaten laten zien6. Bovendien werd aangetoond dat planaria een vergelijkend genomisch studiemodel zou kunnen bieden tussen ongewervelde en menselijke genomen, naast de mogelijkheid om pro-convulsieve, anti-epileptica (ASM) en gedragspatronen te testen6. Planaria (Phylum Platyhelminthes), bekend als platwormen en leden van de Turbellaria-klasse, staan vooral bekend om hun regeneratieve vermogen; Dit onderzoek concentreert zich echter op hun reactie op stoffen die epileptische aanvallen veroorzaken.
Planaria delen fundamentele neurologische mechanismen met mensen, zoals responsiviteit op serotonine en dopamine, vertonen een gelijkenis van 95% met de zenuwstelselgerelateerde genen in de hersenen van zoogdieren en bezitten een herkenbare hersenstructuur7. Bovendien vertonen ze waarneembare bewegingen in laboratoriumomstandigheden en zijn ze kosteneffectief, tijdbesparend en ethisch in vergelijking met knaagdieren of andere zoogdieren. Deze waarneembare gedragingen, zoals schroefachtige, C-achtige en walnootvormige bewegingen, zijn al tientallen jaren uitgebreid gedocumenteerd en worden in verband gebracht met stoffen als cocaïne, nicotine, dopamine en pilocarpine 7,8,9,10,11,12,13,14. Vandaar dat planaria naar voren komen als een levensvatbaar model voor onderzoek naar epilepsiegeneesmiddelen bij mensen.
Deze methode heeft tot doel neuronen van planaria te karakteriseren die zijn blootgesteld aan pilocarpine met behulp van een Golgi-kleuring. De Golgi-kleuring wordt gebruikt om neuronen te visualiseren onder lichtmicroscopie en is gebruikt om te onderzoeken of een verandering in morfologie verband houdt met epileptische aanvallen 15,16,17. De huidige literatuur heeft geen bewijs dat Golgi-kleuring wordt uitgevoerd op planarische hersenen. Hoewel eerdere studies farmacologische effecten hebben gedocumenteerd door gedragsfenotypes te observeren, is dit manuscript het eerste dat de neuronen van planaria die zijn blootgesteld aan pilocarpine karakteriseert met behulp van Golgi-kleuring11,18. Deze techniek blijkt waardevol bij het visualiseren en begrijpen van de morfologische veranderingen die gepaard gaan met epileptische aanvallen. Deze studie merkte een significante toename op van de frequentie van oscillerend dorsaal oscillatiegedrag bij planarische wormen naarmate de concentratie pilocarpine werd verhoogd.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
OPMERKING: Het algemene experimentele ontwerp wordt beschreven in figuur 1.
1. Gedrag fenotype test
- Bereid concentraties van 1 mM en 2 mM pilocarpine opgelost in bronwater en bestrijd alleen met bronwater.
- Pipetteer 3 ml van elke oplossing in een plaat met 4 x 3 putjes, waarbij elke rij een andere concentratie pilocarpine vertegenwoordigt.
- Plaats een in het laboratorium gekweekte Dugesia dorotocephala van ongeveer 2 weken oud in elk van de 12 putjes met behulp van een transferpipet waarvan de punt is afgesneden.
OPMERKING: Snijd de punt af zodat het uiteinde groot genoeg is om in de planaria te passen zonder deze te beschadigen. - Leg het gedrag van de planaria gedurende 1 uur vast met behulp van een camera die het gedrag goed registreert en waarneembaar is voor het menselijk oog, geplaatst over de plaat van 4 x 3 putjes in normale lichtomstandigheden binnenshuis.
- Herhaal stap 1.1-1.4 met concentraties van 3 mM, 4 mM en 6 mM pilocarpine opgelost in bronwater.
2. Analyse van de beweeglijkheid
OPMERKING: Planaria-gedrag werd geregistreerd in putten met een diameter van 2,5 cm. De video-opnamen van 1 uur werden opgesplitst in delen van 30 minuten en bijgesneden met behulp van commerciële software om planaria afzonderlijk te analyseren.
- Begin een nieuw experiment met behulp van geautomatiseerde gedragsanalysesoftware. Open het verbeterde geautomatiseerde gedragsvolgsysteem. Klik op Nieuw onder Nieuw experiment. Geef het experiment een naam.
- Stel de experimentele instellingen in zoals hieronder beschreven.
- Klik op Experimentinstellingen in de menuprompt. Zorg ervoor dat de instellingen de standaardinstellingen zijn: videobron (uit videobestand), Aantal arena's (1), Bijgehouden kenmerken (detectie van middelpunten), Detectietechniek voor lichaamspunten (op basis van contouren), Analyse-opties (geen), Eenheden (cm, s, graden).
- Stel de arena-instellingen in zoals hieronder beschreven.
- Klik op Arena-instellingen onder het tabblad Arena-instellingen in het instellingenpaneel linksboven. Wanneer u wordt gevraagd om een video te uploaden, selecteert u opgenomen beelden van planaria van de opgeslagen bestandslocatie. Zodra de video is geselecteerd, klikt u op Pakken.
- Volg de aanwijzingen in de rechterbovenhoek van het scherm. Klik op 1. Teken de weegschaal om te kalibreren. Sleep op het videobeeld van de put een schaallijn van rand tot rand van de monsterput. Voer de werkelijke afstand van de put in (2,5 cm).
- Klik op 2. Selecteer Vorm en teken arena. Zorg ervoor dat Arena 1 is geselecteerd in het rechterpaneel. Verplaats de muiscursor naar het midden bovenaan het scherm en klik op het cirkelpictogram.
- Maak een cirkel in het geüploade videobeeld door van de ene omtrek van de arena naar de andere te slepen. Zorg ervoor dat de arena zich in de oranje zone bevindt. Pas de vorm aan zodat deze in de arena past. Zorg ervoor dat het Arena 1-label binnen de grenzen van de arena valt.
- Wijzig onder aan het rechterdeelvenster de vorm, grootte en positie (breedte: 2,75, hoogte: 2,75, X:0, Y:0) in de gewenste afmetingen.
- Klik op 3. Selecteer Vorm en Tekenzones (optioneel). Zonegroep 1 in het rechterpaneel wordt nu geselecteerd. Verplaats de muiscursor naar het midden bovenaan het scherm en selecteer het cirkelpictogram. Maak een kleinere cirkel in de arena-afbeelding door deze naar binnen te slepen.
- Wijzig in het deelvenster rechtsonder Vorm, Grootte en Positie naar de gewenste afmetingen (Breedte: 1,75, Hoogte: 1,75, X:0, Y:0).
- Klik op de knop Zonelabel toevoegen in dezelfde menubalk als de kring. Klik in het midden van de kleinere cirkel. Klik met de rechtermuisknop op de Zone 1-tag in het rechterdeelvenster om de naam van het Zone Center te wijzigen.
- Klik nogmaals op de knop Zonelabel toevoegen . Klik op de omtrek van de arena, buiten de middenzone. Klik met de rechtermuisknop op Zone 2 in het rechterdeelvenster om de naam van de zone te wijzigen in Perimeter.
- Klik op 4. Valideer de instelling om geldige arena-instellingen te garanderen.
- Stel de instellingen van de proefbediening in zoals hieronder beschreven.
- Klik op Instellingen voor proefbeheer onder het tabblad Instellingen voor proefbediening in het configuratiescherm linksboven. Er verschijnen zes componentvakken. Klik op Instellingen in het vierde vak met de naam Voorwaarde, dat Tijd (1) en Oneindige tijd (voorwaarde nooit vervuld) omvat.
- Klik op de ballon naast Na en voer vervolgens de duur (30 min) in het rechtertekstvak in. Er is ook een vervolgkeuzemenu rechts van het tijdtekstvak om te kiezen tussen h, min en s.
OPMERKING: Detectie-instellingen voor opgenomen beeldmateriaal zijn afhankelijk van de kwaliteit van het beeldmateriaal. De volgende methoden kunnen worden gemanipuleerd om de beste resultaten te observeren, specifiek voor individuele beelden.
- Stel de detectie-instellingen in zoals hieronder beschreven.
- Klik op Detectie-instellingen onder het tabblad Detectie-instellingen in het instellingenpaneel linksboven. Klik op de knop Video selecteren in het deelvenster rechtsboven. Upload de gewenste video om de detectie-instellingen op te baseren.
- Klik op het tabblad Geavanceerd in hetzelfde rechterdeelvenster. Zorg er nu onder het tabblad Methode voor dat deze is ingesteld op Grijze schaling. Wijzig het bereik (0 - 100).
- Zorg er op het tabblad Vloeiend maken van het rechterdeelvenster voor dat het afvlakken van videopixels Geen is, dat correctie voor afgebroken frames is uitgeschakeld en dat ruisonderdrukking bij volgen is uitgeschakeld.
- Pas onder het tabblad Onderwerpcontour van het rechterdeelvenster de volgorde-instelling aan en wijzig Erosie, Verwijding en Erosie in respectievelijk 1, 1 en 0.
- Wijzig op het tabblad Onderwerpgrootte Minimum (0) en Maximum (125000). Klik rechtsonder op Opslaan .
- Zet een reeks videoproeven op voor observatie, zoals hieronder beschreven.
- Klik op Proeflijst in het Setup-paneel linksboven. Upload videobeelden van specimens in de gewenste volgorde door op de ellipsen onder de kolom Systeemvideobestand te klikken. Als u meer proefversies wilt toevoegen, klikt u op Proefversies toevoegen in de linkerbovenhoek van het deelvenster met de proeflijst.
- Stel Acquisitie-instellingen in.
- Klik op Acquisitie onder het tabblad Acquisitie in de linkerbovenhoek. Klik onder Acquisitie-instellingen in het rechterdeelvenster op Alle geplande proefversies volgen.
- Om te beginnen met acquisitie, klikt u op de rode knop in het midden onderaan het scherm naast Klaar voor start. Het verzamelen van video's begint nu en neemt een bepaalde tijd in beslag, afhankelijk van de hoeveelheid en lengte van de geüploade videoproeven.
- Stel de analyse-instellingen in zoals hieronder beschreven.
- Klik op Analyseprofiel onder het tabblad Analyse in het linkerdeelvenster. Klik op de standaard geselecteerde afhankelijke variabelen, Snelheid en Verplaatste afstand, en verwijder ze.
- Klik in het deelvenster met afhankelijke variabelen onder het tabblad Locatie op In zone. Klik op de vakjes Centrum en Perimeterzone zodat ze zijn aangevinkt.
- Klik op het tabblad Proefstatistieken in het vak In Zone. Klik om het vinkje bij Latentie naar Eerste uit te schakelen. Klik op Toevoegen.
- Klik op het tabblad Lichaam op de knop Rotatie. Klik met de klok mee en laat de drempel (50,00 graden) en de minimale afstand verplaatst (2,00 cm) standaard staan. Klik op Toevoegen.
- Klik nogmaals op de knop Rotatie en klik tegen de klok in. Klik op Toevoegen.
- Analyseer tracks zoals hieronder beschreven.
- Klik op het tabblad Resultaten op Visualisatie volgen. Schakel in het rechterdeelvenster onder Filter het vinkje uit voor Laatste. De afspeelbedieningsbalk in het middelste onderpaneel van het scherm geeft de trackvisualisatie van specimens weer tijdens specifieke observatietijden.
- Analyseer en exporteer resultaten. De resultaten zijn te vinden in de rest van de tabbladen in het deelvenster linksonder. Als u gegevens wilt exporteren, klikt u op Onbewerkte gegevens of Statistieken onder Exporteren in het linkerdeelvenster.
3. Euthanasie
- Bereid een 22 mM oplossing van eugenol in bronwater. Breng de planaria aan in petrischaaltjes met 9 ml 22 ml eugenoloplossing met behulp van de gesneden transferpipet, waarbij u elke concentratie gescheiden houdt. Euthanaseer gedurende 3 minuten of totdat alle beweging is gestopt.
- Plaats de planaria in een verse petrischaal gevuld met 9 ml bronwater om 1x-2x te spoelen en plaats deze in de hieronder beschreven Golgi-oplossing (Golgi-kleuring) of 4% paraformaldehyde (immunofluorescentiekleuring).
4. Histologische analyse
- Golgi kleuring
- Nadat de planaria zijn geëuthanaseerd, plaatst u ze in een beker of petrischaal gevuld met een 1:1 mengsel van oplossingen A en B uit de Golgi Stain Kit. Vervang de oplossingen A en B de volgende dag door planaria in een nieuw bekerglas te plaatsen dat is gevuld met een mengsel van de oplossingen A en B.
- Laat de planaria 1 week staan in de oplossingen A en B.
- Verwijder de planaria uit de oplossingen A en B en plaats deze in oplossing C in een ander bekerglas. Vervang oplossing C de volgende dag. Laat de planaria minimaal 72 uur en maximaal 1 week in oplossing C staan.
- Verwijder de planaria uit oplossing C met een transferpipet en sluit deze in door een kleine hoeveelheid OCT-verbinding op een klauwplaat te plaatsen, de planaria toe te voegen en vervolgens de planaria te omringen met OCT-massa. Snijd de planaria dwars in secties van 5 μM met de cryostaatmachine bij -24° C.
- Monteer de planaria op met gelatine beklede objectglaasjes met behulp van een transferpipet en oplossing C en laat deze maximaal 3 dagen in het donker drogen bij RT.
- Kleur de objectglaasjes met behulp van de kleuroplossing (1 deel oplossing D, 1 deel oplossing E, 2 delen bronwater) door de objectglaasjes als volgt onder te dompelen in bekers met de oplossingen: Kleuroplossing gedurende 10 min, vervolgens 2x 2x 4 minuten in bronwater, vervolgens 50% ethanol gedurende 4 min, vervolgens 75% ethanol gedurende 4 min, vervolgens 95% ethanol gedurende 4 min, Vervolgens 4x 4 minuten in 100% ethanol en tenslotte 3x 4 minuten in xyleen.
- Dekglaasjes met histologische montagemedia en observeer weefsel onder helderveldmicroscopie.
- Immunofluorescentie kleuring
- Nadat de planaria zijn geëuthanaseerd, plaatst u deze gedurende ten minste 24 uur in 4% paraformaldehyde. Na deze stap kan het ook in de koelkast worden bewaard.
- Breng planaria over naar 20% sucrose van 4% PFA en laat het 1 dag intrekken. Verwijder de planaria van de sucrose en plaats deze 5 minuten in de PBS-buffer.
- Spoel af met 3-4 wasbeurten PBS-buffer en breng over naar 20% sucrose voor opslag tot het klaar is om te kleuren.
- Doe ze elk 1 minuut in oplossingen van 70%, 95% en 100% alcohol. Plaats 1 minuut in xyleen.
- Voeg elk 1 minuut 95% en 70% alcohol toe. Plaats 3x in de PBS-buffer gedurende 5 minuten. Doe in een 60:40 methanol en waterstofperoxide oplossing gedurende 10-15 min.
- Spoel 3x 5x 5 minuten uit in PBS. Voeg het volume van 4% paraformaldehyde dat eerder in 4.2.1 werd gebruikt toe aan deze PBS-buffer.
- Spoel 3x 5x 5 minuten uit in PBS. Blokkeer gedurende 1 uur met melkpoeder, door de planaria ermee te bedekken.
- Verdun het primaire antilichaam (1H6) tot 5 μg/ml met PBS en incubeer de objectglaasjes een nacht bij 4 °C in de antilichaamoplossing. Spoel de volgende dag de planaria 10 minuten in PBS.
- Verdun secundair antilichaam (geitenanti-muis IgG) tot 1 μg/ml in PBS en incubeer de objectglaasjes een nacht bij RT in de antilichaamoplossing. Spoel de volgende dag de planaria 15 minuten in PBS.
OPMERKING: Verschillende antilichamen hebben verschillende optimale concentraties; Bepaal dit voordat u met het experiment begint. - Monteer de hele planaria op de objectglaas, dek af met een dekglaasje, sluit af met waterige montagemedia en observeer het weefsel onder een fluorescerende microscoop.
5. Analyse van het beeld
- Open de open-source softwaretoepassing voor beeldanalyse. Installeer de colour_deconvolution2.jar-plug-in in de opensource-softwaretoepassing voor beeldanalyse door de plug-in naar de toepassing te slepen.
- Selecteer de afbeelding die u wilt analyseren en sleep deze naar de opensource-softwaretoepassing voor beeldanalyse. Ga naar het tabblad Afbeelding. Klik op kleur. Klik op Kleurdeconvolution2 v2.1.
- Klik in de vectoroptie op H DAB. Klik in de uitvoeroptie op 8bit_Transmittance. Zorg ervoor dat de Gesimuleerde LUT's, Product kruisen voor kleur 3, Matrices weergeven en Legenda verbergen allemaal zijn geselecteerd. Klik op OK.
- Selecteer de afbeelding in zwart-wit om ervoor te zorgen dat de open-source softwaretoepassing voor beeldanalyse de afbeelding effectief kan analyseren.
- Ga naar het tabblad Afbeelding. Klik op Aanpassen. Klik op Drempelwaarde. Pas de drempel zo aan dat de DAB-kleuring of de voorgrond rood van kleur is met een witte achtergrond. Zorg ervoor dat de drempelwaarde voor elke afbeelding hetzelfde is als er meerdere afbeeldingen worden gekwantificeerd.
- Klik op Analyseren. Klik op Afmetingen instellen. Selecteer Gebied, Min & max grijswaarde, Beperken tot drempelwaarde, Weergavelabel, Mediaan en Gemiddelde grijswaarde. Klik op OK. Klik op Analyseren. Klik op Meten. Verkrijg het resultaat.
- Herhaal stap 1.2 tot en met 1. U6ntil alle afbeeldingen zijn gekwantificeerd. Klik op de afbeelding Resultaten. Klik op Bestand. Klik op Opslaan als. Sla het bestand op als een spreadsheet en bekijk de gegevens in de spreadsheetsoftware.
6. Statistische analyse
- Bereken het gemiddelde en de standaardfouten van het gemiddelde (SEM) voor het gedrag van de planaria met behulp van variantieanalyse (ANOVA) en de t-toets van de student voor statistische significantie (p < 0,05).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Het volgende gedrag werd waargenomen door de planaria die werd blootgesteld aan variërende concentraties pilocarpine:
Dorsale oscillaties: een belachtige formatie die zich verplaatst van het craniale uiteinde van het lichaam van de planariër naar het caudale uiteinde.
Koposcillaties: belachtige formatie door het hoofd van de planariër die een kikkervisje-achtig uiterlijk vormt.
C-vorm: kop met de klok mee bewegen en staart tegen de klok in om een C te vormen.
Hoofdbeweging: h...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Deze studie toonde pilocarpine-geïnduceerd gedrag aan in planaria bij verschillende concentraties. Het meest relevante gedrag was oscillerende dorsale expansie, aangezien dit gedrag niet is gedocumenteerd in andere onderzoeken naar aanvalsachtig gedrag in planaria 9,10,11,12. Het mechanisme waarmee pilocarpine epileptisch gedrag bij planaria induceert, is nog o...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te verklaren.
Dankbetuigingen
We willen EVMS Research Incentive Fund (PI: A.E. Musto) en Dr. Jorge Jacot bedanken voor zijn nuttige suggesties bij het optimaliseren van het immunofluorescentieprotocol.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 1.5 mL centrifuge tubes | |||
| 4% paraformaldehyde oplossing | Himedia | TCL119 | |
| Aqueuze montage media | Clini Sciences | NB-47-02240-30ML | |
| Bekers (één voor elke geteste concentratie) | |||
| Carolina Springwater | carolina | 132450 | |
| Cryostat | |||
| Verdunde primaire en secundaire antilichamen | |||
| Ethanol (100%) | sigma Aldrich | ||
| EthosVision XT 16 | noldus | ||
| Fiji Versie 2.9.0 | |||
| Gelatine-gecoate slides | sigma Aldrich | 643203 | |
| Golgi Antilichaam 1H6 | DSHB | AB_2619608 | |
| Golgi-kleuring kit_ | Neuroscience Associate | PK 401/401A | |
| Waterstofperoxide | |||
| Methanol | |||
| Montage media | thermo fischer scientific | ||
| OCT compound | |||
| PBS buffer | sigma Aldrich | P4417 | |
| Poedermelk | |||
| Tin folie | |||
| Transfer pipetten | |||
| XYleen |
Referenties
- World Health Organization. Epilepsy. , (2024).
- Dalic, L., Cook, M. J. Managing drug-resistant epilepsy: challenges and solutions. Neuropsychiatr Dis Treat. 12, 2605-2616 (2016).
- Mayo Clinic. Seizures - Symptoms and causes. , (2023).
- Shomrat, T., Levin, M. An automated training paradigm reveals long-term memory in planarians and its persistence through head regeneration. J Exp Biol. 216 (20), 3799-3810 (2013).
- Moreira-Lobo, D. C., et al. Eugenol modifies the excitability of rat sciatic nerve and superior cervical ganglion neurons. Neurosci Lett. 472 (3), 220-224 (2010).
- Johan Arief, M. F., Choo, B. K. M., Yap, J. L., Kumari, Y., Shaikh, M. F. A systematic review on non-mammalian models in epilepsy research. Front Pharmacol. 9, 655(2018).
- Mineta, K., et al. Origin and evolutionary process of the CNS elucidated by comparative genomics analysis of planarian ESTs. Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 7666-7671 (2003).
- Wu, J. P., Lee, H. L., Li, M. H. Cadmium neurotoxicity to a freshwater planarian. Arch Environ Contam Toxicol. 67 (4), 639-650 (2014).
- Kim, A., Rawls, S. M. Nicotine-induced C-shape movements in planarians are reduced by antinociceptive drugs: Implications for pain in planarian paroxysm etiology. Brain Res. 1778, 147770(2022).
- Reho, G., Lelièvre, V., Cadiou, H. Planarian nociception: Lessons from a scrunching flatworm. Front Mol Neurosci. 15, 935918(2022).
- Pagán, O. R., et al. Planarians require an intact brain to behaviorally react to cocaine, but not to react to nicotine. Neuroscience. 246, 265-270 (2013).
- Raffa, R. B., Holland, L. J., Schulingkamp, R. J. Quantitative assessment of dopamine D2 antagonist activity using invertebrate (Planaria) locomotion as a functional endpoint. J Pharmacol Toxicol Methods. 45 (3), 223-226 (2001).
- Bhatt, P., Reitz, A. B., Tallarida, C. Mephedrone ("bath salt") pharmacology: insights from invertebrates. Neuroscience. 208, 79-84 (2012).
- Neufeld, T., Carniello, T., Dotta, B. A single hypoxic event ameliorates pilocarpine-induced hyperkinetic movements in Planaria. Nat Sci. 14, 149-156 (2022).
- Rossini, L., et al. Dendritic pathology, spine loss, and synaptic reorganization in human cortex from epilepsy patients. Brain. 144 (1), 251-265 (2021).
- Owuor, K., et al. LGI1-associated epilepsy through altered ADAM23-dependent neuronal morphology. Mol Cell Neurosci. 42 (4), 448-457 (2009).
- Dubey, V., et al. Dendritic reorganization in the hippocampus, anterior temporal lobe, and frontal neocortex of lithium-pilocarpine induced Status Epilepticus (SE). J Chem Neuroanat. 133, 102329(2023).
- Löscher, W. Critical review of current animal models of seizures and epilepsy used in the discovery and development of new antiepileptic drugs. Seizure. 20 (5), 359-368 (2011).
- Musto, A. E., Walker, C. P., Petasis, N. A., Bazan, N. G. Hippocampal neuro-networks and dendritic spine perturbations in epileptogenesis are attenuated by neuroprotectin D1. PLoS One. 10 (1), e0116543(2015).
- Omuro, K. G., et al. Novel monoclonal antibodies to study tissue regeneration in planarians. BMC Dev Biol. 15 (2), (2015).
- Keenan, C. L., et al. Cytoarchitecture of primitive brains: Golgi studies in flatworms. J Comp Neurol. 195, 4(1981).
- Pronin, A. N., Wang, Q., Slepak, V. Z. Teaching an old drug new trick: Agonism, antagonism, and biased signaling of pilocarpine through M3 muscarinic acetylcholine receptor. Mol Pharmacol. 92 (5), 601-612 (2017).
- Im, K., Mareninov, S., Diaz, M. F. P., Yong, W. H. An introduction to performing immunofluorescence staining. Methods Mol Biol. 1897, 299-311 (2019).
- Vogt, R. V., Phillips, D. L., Henderson, L. O., Whitfield, W., Spierto, F. W. Quantitative differences among various proteins as blocking agents for ELISA microtiter plates. J Immunol Meth. 101 (1), 43-50 (1987).
- Duhamel, R. C., Johnson, D. A. Use of nonfat dry milk to block nonspecific nuclear and membrane staining by avidin conjugates. J Histochem Cytochem. 33 (7), 711-714 (1985).
- Chen, T. S., Huang, T. H., Lai, M. C., Huang, C. W. The role of glutamate receptors in epilepsy. Biomedicines. 11 (3), 783(2023).
- Kreshchenko, N. Immunocytochemical identification of serotoninergic neurons in Planaria Girardia tigrina. Biochem. Moscow Suppl Ser A. 11, 68-76 (2017).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
