Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Scheiding van pre-ovulatoire follikelgranulosa- en thecacellagen voor stroomafwaartse toepassingen

2.5K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/67344

⸱

25 oktober 2024

 ,  ,  , 
1Department of Animal & Food Sciences, University of Delaware, 2Departments of Animal & Food Sciences, Biological Sciences, Medical & Molecular Sciences, and Microbiology Graduate Program, University of Delaware

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Hier beschrijven we een protocol voor het scheiden van dooier-, granulosacellen en thecacellen in preovulatoire follikels van vogels. Deze precisiebehandeling maakt kritisch onderzoek mogelijk naar de rol van deze lagen in de voortplantingsfunctie, wat helpt bij het begrijpen van folliculaire ontwikkeling, hormonale regulatie en ziekteonderzoek voor verbeterde landbouwopbrengst en biomedische inzichten.

Samenvatting

Leghennen (legkippen) en vleeskuikenouderdieren (fokdieren voor vleesproducerende kippen) zijn als betrouwbare eiwitbron cruciaal voor de voedselvoorziening in de wereld. Ze zijn ook een opkomend diermodel voor de studie van menselijke voortplantingsziekten. Naarmate het onderzoek naar pluimvee zich ontwikkelt, zal de gezondheid en functie van de eierstok van de leghennen en vleeskuikenouderdieren een belangrijk studiepunt zijn voor zowel landbouw- als biomedische onderzoekers. Een van de uitdagingen van deze opkomende interesse is de behoefte aan reproduceerbare technieken die alle onderzoekers kunnen gebruiken bij het verzamelen van ovariële monsters. In het bijzonder moet een gedetailleerd visueel proces worden vastgesteld om de juiste scheiding van de gespecialiseerde granulosa- en thecacellagen van de kippenfollikels te definiëren om overeenstemming en consistentie tussen onderzoekers te bereiken.

Deze studie beschrijft de extractie van pre-ovulatoire follikels en eierstokweefsel bij witte leghorn-kippen in de eerste vruchtbare leeftijd. De scheiding van deze follikels wordt uitgevoerd onder koude, vloeibare omstandigheden om de dooier te laten stollen voor eenvoudigere manipulatie en om te voorkomen dat het eigen gewicht van de follikel de cellagen tijdens het scheidingsproces uit elkaar scheurt. Zodra de scheiding is voltooid, kunnen de gewenste cellagen verder worden verteerd voor weefselkweekbenaderingen of kunnen ze worden gecryopreserveerd voor genomische en proteomische analyses.

Inleiding

Eierproducerende kippen zijn een belangrijk onderdeel van de wereldvoedselvoorzieningsketen en zijn een evoluerend diermodel voor de studie van vruchtbaarheid en eierstokkanker. De kip heeft een lange geschiedenis van laboratoriumgebruik, van in ovo-studies van griepvaccins1 tot de studie van kankertumorgroei2, en is een belangrijk dier voor inzicht in de ontwikkeling van gonadale 3,4,5. Inzicht in de rol van het voortplantingssysteem van een kip, in het bijzonder de cyclische aard van de folliculaire ontwikkeling van de eierstokken en de betrokken soorten cellen, is een gebied van groot belang en potentiële toepassing. Multi-omics-benaderingen om de eierstok van de kip te ondervragen, hebben toepassingen voor het verhogen van de landbouwopbrengst door middel van productiviteitsanalyse en het ophelderen van factoren voor de menselijke gezondheid door middel van de kip als model voor voortplantingsziekten.

De vogeleierstok heeft zeer verschillende ontwikkelingsfolliculaire stadia die zijn samengesteld uit (1) kleine primordiale en primaire follikels (>1 mm), (2) pre-rekruteringsfollikels van variabele grootte (wit tot lichtgeel, 2-8 mm) en (3) grote, met dooier gevulde preovulatoire follikels (geel) (Figuur 1)5,6,7. Een geslachtsrijpe vogeleierstok bestaat uit een buitenste cortex die de eierstokfollikels herbergt en de binnenste medulla die bestaat uit gladde spieren, zenuwen en vaatstelsel8. De hele cyclus van folliculaire ontwikkeling vindt plaats in de cortex. Het is echter pas op de leeftijd van ongeveer vijf maanden dat alleen de linker eierstok een volledige ontwikkelingshiërarchie van preovulatoire (d.w.z. gele) follikels vertoont, en de kip zal haar eerste ovulatie en ovipositie (eierleg) ondergaan. De preovulatoire follikels vormen een duidelijk zichtbare hiërarchie van ongeveer 5 tot 6 follikels die variëren van de grootste en bijna ovulaire - F1-follikel - tot de minder ontwikkelde, kleinste follikel - F5 of F6. Pre-ovulatoire follikels zijn gemakkelijk te onderscheiden van de kleinere pre-rekruteringsfollikels vanwege hun grotere omvang, grote innervatie en diepgele dooier.

Alle follikels bevatten gespecialiseerde celtypen die verschillende rollen ondersteunen bij het signaleren, groeien en ontwikkelen van de follikel terwijl deze door verschillende stadia vordert voorafgaand aan de eisprong - dit zijn de granulosacellen, thecacellen en eicellen (vrouwelijke gameten) (Figuur 2A). In het bijzonder vormen de granulosacellagen de binnenwand van de follikel en de thecacellen vormen de andere wand rond de eicel. Naarmate een follikel door de preovulatiehiërarchie vordert, beginnen de theca- en granulosacellagen uit te dunnen, vooral langs een punt direct tegenover de stengel van de preovulatoire follikel. De stengel is het aanhechtingspunt van de follikel aan de eierstok (Figuur 2B). Deze lijn van de granulosa- en thecalagen tegenover de stengel wordt de stigma genoemd (Figuur 2C). Het mist volledig vasculatuur en zal het punt zijn van folliculaire ruptuur tijdens de eisprong van een F1-follikel. Ook zichtbaar is de kiemschijf, of de donzige witte laag steuncellen die de eicel omringen (Figuur 2B).

Zowel granulosa- als thecacellen zijn belangrijke componenten van de ontwikkeling van de follikels, omdat ze de eicel omringen en ondersteunen door middel van complexe hormonale signalering. De granulosacellaag ondersteunt steroïdogene routes via cyclische AMP (cAMP) signalering om de productie van progesteron tot stand te brengen 9,10,11. Thecacellen daarentegen produceren tijdelijk oestradiol, wat grotendeels anders is dan bij zoogdieren waarvan de thecacellen androgeen en progesteron produceren 12,13,14. Samen met externe signalering zijn de granulosa- en thecacellen cruciale aanjagers van follikelrijping en ovipositie. De techniek van het scheiden van de granulosa- en theca-lagen werd oorspronkelijk gerapporteerd door Gilbert et al. in 197715. Het bereiken van een uitgebreide scheiding van de granulosa- en theca-lagen en ervoor zorgen dat er geen granulosa-materiaal achterblijft, kan problemen opleveren met de Gilbert-methode. Bovendien kan het ontbreken van een duidelijke visuele handleiding voor het voltooien van de scheiding de taak uitdagend maken om uit te voeren. Deze studie heeft tot doel de extractie en scheiding van granulosa-, theca- en eicellagen uit de preovulatoire follikels te beschrijven, aanpassingen aan te bieden en een duidelijke visuele weergave te leveren door het gebruik van zowel afbeeldingen als video's (Figuur 3). Door deze techniek te visualiseren, kunnen wetenschappers die de ovariële follikels van vogels bestuderen, reproduceerbaar granulosa- en theca-lagen vastleggen voor zowel agrarische als biomedische multi-omics-benaderingen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle dieren die in dit onderzoek werden gebruikt, werden gehouden en geëuthanaseerd volgens het protocol dat is goedgekeurd door het Institutional Animal Care and Use Committee van de Universiteit van Delaware (IACUC-protocol 110R).

1. Voorbereiding

  1. Sterilisatie
    1. Autoclaaf 5 oz glazen kommen met behulp van zwaartekrachtverplaatsing autoclaaf (121 °C gedurende 20 min) bedekt met aluminiumfolie met autoclaaftape erop om de steriliteit te behouden en aan te geven.
      OPMERKING: Er is één kom nodig voor elke follikel waarop de scheiding wordt uitgevoerd.
    2. Autoclaaf dissectiegereedschap met behulp van zwaartekrachtverplaatsing autoclaaf (121 °C gedurende 20 min), inclusief schaar, gebogen tang en rechte tang in sterilisatiezakjes.
  2. Opstelling van de scheidingszone
    1. Stel het follikelscheidingsgebied in zoals te zien is in figuur 4. Vul de bewaarcontainers met ijs vlak voor de follikelscheiding en vul indien nodig aan tijdens het follikelscheidingsproces.
  3. Oplossingen
    1. Verdun tot 10x PBS-concentratie tot 1x werkvoorraad en plaats de dag voor de dissectie in de koelkast van +4 °C.
    2. Verdun isopropanol tot 70% werkmateriaalconcentratie in de spuitfles.

2. Ontleding

  1. Euthanaseer een geslachtsrijpe vrouwelijke vogel.
    1. Kies een geslachtsrijpe vrouwelijke vogel (moet momenteel eieren leggen) en euthanaseer16 volgens een goedgekeurde methode (AVMA-richtlijnen) volgens het zorg- en gebruiksprotocol van de instelling, zoals cervicale dislocatie.
    2. Voor het vangen van de grootste F1-follikel, euthanaseert u het dier binnen de eerste 4 uur na het begin van de dag van de dag. Palpeer de onderbuik voorafgaand aan euthanasie om een ei met een harde schaal in de baarmoeder te bevestigen; Dit zorgt ervoor dat ovipositie en dus de volgende eisprong nog niet heeft plaatsgevonden.
  2. Toegang tot de eierstok.
    1. Spuit het uitwendige karkas en de veren in met 70% isopropanol. Dit bevochtigt de veren en reinigt het incisiepunt.
    2. Gebruik een dissectieschaar en een gehandschoende hand om een enkele horizontale (transversale) middenlijnincisie van ongeveer 7,5 cm (3 inch) lang te knijpen en af te knippen. Knijp de huid-, spier- en vetlagen samen voorafgaand aan de incisie om doorboren van organen te voorkomen.
    3. Verbreed de incisie zijdelings aan de rechterkant van de vogel en sonde met gehandschoende vingers om viscerale organen uit de weg van de schaar te duwen. Ga door totdat 2-3 van de ribben van het dier aan de rechterkant zijn doorgesneden.
    4. Verbreed de incisie naar de linkerkant van de vogel zoals aan de rechterkant. Ga extra voorzichtig te werk, aangezien de preovulatoire follikels van de eierstok zich hier bevinden, uit het eierstokoppervlak steken en gemakkelijk kunnen scheuren. Gebruik lichte druk met de vingers om de preovulatoire follikels uit de buurt van de schaar te houden, aangezien 2-3 ribben aan de linkerkant van de vogel worden afgeknipt.
    5. Plaats een hand op de onderbuik van de vogel en de andere stevig op de onderkant van het borstbeen, en trek de borst van de vogel handmatig naar boven terug om verdere toegang tot de coelomische holte van de vogel mogelijk te maken.
    6. Houd elk van de dijen van de vogel dicht bij het spronggewricht en duw ze handmatig naar achteren om beide heupgewrichten tegelijkertijd te ontwrichten. Er is nu volledige toegang tot de eierstok, zowel visueel als ruimtelijk.
  3. Verwijder preovulatoire follikels.
    1. Voer alle stappen uit door routinematig visueel zicht. Als een persoon in enig stadium moeite heeft met visualiseren, gebruik dan een ontleedmicroscoop.
    2. Gebruik alleen gehandschoende vingers, omhul voorzichtig elke zichtbare gele preovulatoire follikel en haal deze uit de eierstok. Knijp alleen in de stengel tijdens de extractie om te helpen bij het doorsnijden van de stengel. Knijp niet in de follikel zelf, anders kan deze scheuren.
    3. Plaats elke follikel in de steriele container met ijskoude PBS.
    4. Laat de pre-ovulatoire follikels minstens 5 minuten op ijs liggen om de dooier te laten stollen. De warme dooier zal zich hechten aan de omliggende folliculaire cellagen, waardoor de daaropvolgende scheidingstechnieken moeilijk uit te voeren zijn.

3. Scheiding in het lab

  1. Neem een geïsoleerde follikel uit de steriele container en plaats de container met de resterende follikels terug op ijs. Bestudeer de follikel voorafgaand aan de manipulatie, let op de locatie van drie kenmerken: de stengel, de stempel en de kiemschijf (Figuur 2).
  2. Begin met het verwijderen van de serosa van het folliculaire oppervlak. Rol de follikel voorzichtig over een droge papieren handdoek om de serosale laag te verwijderen en trek deze indien nodig voorzichtig los.
  3. Houd de follikel bij de steel over de kom gevuld met PBS. Gebruik de zwaartekracht om te visualiseren waar de stengel eindigt aan het oppervlak van de follikel en knip met een schaar alleen de stengel af zonder het follikeloppervlak te doorboren. Ga door met het verwijderen van de serosa totdat deze niet meer zichtbaar is.
  4. Gebruik de lichtbak om te verlichten en de kiemschijf als referentie, verplaats de stempel aan de andere kant en houd de follikel voorzichtig vast met de stempelzijde zichtbaar. Houd de follikel direct boven de kom met ijskoude PBS.
  5. Pak het scalpel op, snijd voorzichtig langs de lengte van het stigma en laat de follikel onmiddellijk in de PBS vallen als de dooier eruit begint te vallen. Houd de follikel niet stevig vast, omdat hierdoor de dooier naar buiten wordt geduwd in plaats van dat deze er gewoon door de zwaartekracht uit valt.
  6. Gebruik een rechte tang zonder tanden om voorzichtig de roze laag van de folliculaire wand van de dooier aan één kant van de plak af te pellen. Voltooi deze extractie met behulp van kleine knijp- en trekbewegingen die de follikelwand van de dooier optillen.
  7. Laagscheiding werkt het beste wanneer ongeveer 5 mm folliculaire wandweefsel per keer van de dooier is teruggetrokken. Wanneer een deel van de folliculaire wand van 5 mm met succes uit de dooier is teruggetrokken, gebruikt u een schuine tang in combinatie met de rechte tang om langs de follikelwand te tasten.
  8. In sommige gevallen kan de granulosalaag nauwer verbonden zijn met de dooier dan de thecalaag. In deze situatie tast u gewoon heel voorzichtig over het oppervlak van de dooier met een van beide tangen om te proberen de tissuepapierachtige laag van de dooier weg te trekken. Zodra de granulosalaag is gevonden, knijpt u deze stevig vast aan de thecalaag en gaat u verder met het wegtrekken van beide lagen van de dooier zoals eerder beschreven.
  9. Gebruik de gebogen tang om de dooier lichtjes weg te borstelen van de geknepen lagen. Veeg de overtollige dooier weg of verwijder deze uit de kom. Schraap de granulosalaag niet; Dit zal scheuren veroorzaken. Krachtige bewegingen zullen de PBS-oplossing vertroebelen en de visualisatie verminderen. Ga verder met zorgvuldige en weloverwogen bewegingen.
  10. Nadat elk deel van de folliculaire wand van 5-10 mm is ingetrokken, pauzeert u om de theca- en granulosalagen in elke tang te nemen en ervoor te zorgen dat de twee lagen geleidelijk van elkaar worden afgepeld, net zoals ze beide worden afgepeld van de dooier. Ga door met dit proces rond de buitenkant van de follikel. Als manipulatie moeilijk wordt vanwege de flap van de granulosa-thecalaag, draai dan de follikel om het proces vanaf de andere kant van de plak te beginnen.
  11. Tijdens het proces van scheiding zal de kiemschijf (vrouwelijke gameet en kiemblaasje) worden aangetroffen. Dit is een gebied dat extreem hecht aan zowel de granulosalaag als de dooier. Benader de kiemschijf voorzichtig en gebruik de rechte tang om de granulosalaag stevig aan de thecalaag vast te houden, aangezien de gebogen tang in lichte borstelbewegingen wordt gebruikt om de kiemschijf weg te duwen van de granulosacellen op het dooieroppervlak.
    1. Als de kiemschijf gewenst is als onderzoeksexemplaar, borstel dan de dooier op dit punt af met een schuine tang en bewaar deze naar wens.
  12. Ga door met het scheiden van de dooier van de folliculaire wand met de gebogen tang totdat de dooier van de hele bol van de follikel is verwijderd.
  13. Zodra de rest van de dooier uit de lagen is geborsteld, scheidt u het laatste deel van de granulosalaag van de thecalaag. De volledig gescheiden granulosalaag mag niet volledig vrij zijn van dooier, maar zorg ervoor dat deze er niet mee bedekt is. Plaats de granulosalaag en de cale laag in afzonderlijke containers met een PBS-temperatuur van 4 °C.
    1. Zodra de granulosalaag zich in een aparte container van de thecalaag bevindt, schudt u de thecalaag voorzichtig heen en weer in de PBS met een tang om ervoor te zorgen dat eventuele resterende restanten van de granulosalaag loskomen.
      OPMERKING: Bepaalde verwerkingsmethoden na scheiding kunnen verantwoordelijk zijn voor de verwijdering van lipideresten door vergisting of centrifugatie, afhankelijk van het gewenste onderzoek.
    2. Wanneer u deze techniek voor het eerst beoefent, bereidt en analyseert u representatieve gescheiden monsters histologisch om een nauwkeurige laagscheiding en -verzameling te bevestigen.
      1. Om dit te doen, fixeert u delen van gescheiden weefsels in neutraal gebufferd formaline met behulp van weefselcassettes of sponzen om verlies van het monster te voorkomen, en vervolgens in paraffine in te bedden, te snijden en de sectie te kleuren met hematoxyline en eosine (H&E).
      2. Vanwege de delicate aard moet u de granulosalaag voorzichtig hanteren en op biopsiesponzen in een histologische cassette plaatsen om ervoor te zorgen dat de cellulaire laag intact blijft.
      3. Plaats de thecalaag direct in een histologische cassette. Hierdoor kan ook het niveau van besmetting van het monster door ander folliculair weefsel worden gevisualiseerd (d.w.z. granulosacellaagmonster met hechting van dooiereiwit of thecale cellen).
        OPMERKING: Het is misschien niet altijd mogelijk om slechts een enkele interesselaag te verkrijgen vanwege de nauwe associatie van folliculaire weefsels. Het kennen van het niveau van mogelijke besmetting kan echter worden gebruikt voor de interpretatie van daaropvolgende multi-omics-benaderingen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Dit protocol levert de scheiding op van granulosa- en thecale cellagen van de ovariële follikel (Figuur 5 en Figuur 6). Deze lagen kunnen vervolgens worden voorbereid voor histologisch onderzoek om een succesvolle scheiding te bevestigen. Deze histologische beelden, beoordeeld en vastgelegd door een gecertificeerde veterinaire patholoog (EMB), tonen duidelijk de effectieve scheiding van de granulosa- en theca-lagen aan voor zowe...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Deze studie schetst de procedure voor de duidelijke scheiding van zowel granulosa- als thecale cellagen van preovulatoire follikels bij pluimvee. In tegenstelling tot de bestaande methode die in 1977 door Gilbert et al. werd vastgesteld, zorgen de aanpassingen die in deze methode zijn aangebracht voor een meer gecontroleerde omgeving bij het handmatig scheiden van de granulosacellaag van de thecalaag van alle preovulatoire follikels15. Bovendien stelt het onderzoe...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben geen tegenstrijdige belangen te melden.

Dankbetuigingen

We zijn Milos Markis (AviServe) dankbaar voor hun hulp bij de veeteelt, Nicole Guarino (University of Delaware) voor hun hulp bij de voorbereiding van het manuscript, Evelyn Weaver en Ramesh Ramachandran (The Pennsylvania State University) voor hun hulp bij het demonstreren van de procedure en de voorbereiding van het manuscript. Figuur 2A en Figuur 3 zijn gemaakt met behulp van BioRender.com met behulp van een institutionele licentie die wordt gesponsord door het University of Delaware Research Office. Dit werk werd ondersteund door het UD CANR Comparative Pathology Laboratory. KME wordt ondersteund door USDA NIFA-subsidie 2023-67011-40333. Dit werk werd ondersteund door subsidies van de University of Delaware Research Foundation (UDRF) en het Delaware INBRE-programma (ondersteund door een subsidie van het National Institute of General Medical Sciences - NIGMS P20 GM103446 van de National Institutes of Health en de staat Delaware) aan AD.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
3.5 inch kleine glazen schalen, 5 ozAmazonB0BXP5PJTNIn de autoclaaf te steriliseren glazen schalen van minimaal 3.5 inch diameter
AluminiumfolieCostco720Dek af met autoclaaf schalen
Amazon Pet Training Pads, Normaal, 100-TelligAmazonB0B58WTPFSTe gebruiken als necropsie pads, iedere absorberende pad zal werken
Autoclaaf TapeFisherbrand15-901-111
Cole-Parmer LED Vezel Optische VerlichtersCole-ParmerEW-41723-02
Gebogen Zeer Fijne Precisie Tip TangenFisherbrand16-100-123Niet Gekarteld
Dissectie MicroscoopLeica S6E
Fijne Precisie SchaarFisherbrand12-000-155Niet Gekarteld
Voedsel Containers met Deksel Set van 17 Helder/Groen Microgolfoven Vriezer Vaatwasser VeiligAmazonB09QGZCRDBGebruik iedere container die ijs kan bevatten EN een 3.5 inch kleine glazen schaal
Hoge Precisie 45 Graad Gebogen Taper Zeer Fijne Punt Tweezers/ForcepsFisherbrand12-000-125Niet Gekarteld
Hoge Precisie Rechte Zeer Fijne Punt Tweezers/ForcepsFisherbrand16-100-120Niet Gekarteld
Isopropanol FisherbrandA426P-4
McKesson Steriel Proefmonster Container, Schroefdop, Lekvrij, 120 mLMcKesson16-95264 oz. / 120 cc, gradueel
Fosfaat-buffered saline (PBS, 10x), pH 7.6ThermoFisherJ62692.K7Moet gemaakt worden in 1x PBS
SpuitflesCole-ParmerEW-06091-01Voor 70% Isopropanol
Steriele Chirurgische Bladen #22Cincinnati Surgical122
Sterilisatie Zakken 10" x 16"AmazonB07MFB455C
Gebogen Ultrafijne Tip Tangen Fisherbrand Fisherbrand16-100-121Niet Gekarteld
Schuim Biopsie Pads, RechthoekigFisherbrand22-038-221
Formaline Oplossing, 10% (Histologisch)Fisher ChemicalSF98-4
Weefsel verwerking/inbedding cassettes met dekselSimport M490-2Z672122

Referenties

  1. Finter, N. B., Liu, O. C., Henle, W. Studies on host-virus interactions in the chick embryo-influenza virus system. X. An experimental analysis of the von Magnus phenomenon. J Exp Med. 101 (5), 461-478 (1955).
  2. Fredrickson, T. N. Ovarian tumors of the hen. Environ Health Perspect. 73, 35-51 (1987).
  3. Etches, R. J., Petitte, J. N. Reptilian and avian follicular hierarchies: models for the study of ovarian development. J Exp Zool Suppl. 4, 112-122 (1990).
  4. McCarrey, J. R., Abbott, U. K. Mechanisms of genetic sex determination, gonadal sex differentiation, and germ-cell development in animals. Adv Genet. 20, 217-290 (1979).
  5. Tilly, J. L., Kowalski, K. I., Johnson, A. L. Stage of ovarian follicular development associated with the initiation of steroidogenic competence in avian granulosa cells. Biol Reprod. 44 (2), 305-314 (1991).
  6. Gilbert, A. B. Innervation of the ovarian follicle of the domestic hen. Q J Exp Physiol Cogn Med Sci. 50 (4), 437-445 (1965).
  7. Johnson, P. A., Stoklosowa, S., Bahr, J. M. Interaction of granulosa and theca layers in the control of progesterone secretion in the domestic hen. Biol Reprod. 37 (5), 1149-1155 (1987).
  8. Apperson, K. D., Bird, K. E., Cherian, G., Lohr, C. V. Histology of the ovary of the laying hen (Gallus domesticus). Vet Sci. 4 (4), 66(2017).
  9. Johnson, A. L. Ovarian follicle selection and granulosa cell differentiation. Poult Sci. 94 (4), 781-785 (2015).
  10. Kim, D., Johnson, A. L. Differentiation of the granulosa layer from hen prehierarchal follicles associated with follicle-stimulating hormone receptor signaling. Mol Reprod Dev. 85 (8-9), 729-737 (2018).
  11. Lu, J., et al. Effects of exogenous energy on synthesis of steroid hormones and expression characteristics of the CREB/StAR signaling pathway in theca cells of laying hen. Poult Sci. 103 (3), 103414(2024).
  12. Huang, Y., et al. Comparative analysis among different species reveals that the androgen receptor regulates chicken follicle selection through species-specific genes related to follicle development. Front Genet. 12, 752976(2021).
  13. Tilly, J. L., Johnson, A. L. Regulation of androstenedione production by adenosine 3',5'-monophosphate and phorbol myristate acetate in ovarian thecal cells of the domestic hen. Endocrinology. 125 (3), 1691-1699 (1989).
  14. Young, J. M., McNeilly, A. S. Theca: the forgotten cell of the ovarian follicle. Reproduction. 140 (4), 489-504 (2010).
  15. Gilbert, A. B., Evans, A. J., Perry, M. M., Davidson, M. H. A method for separating the granulosa cells, the basal lamina and the theca of the preovulatory ovarian follicle of the domestic fowl (Gallus domesticus). J Reprod Fertil. 50 (1), 179-181 (1977).
  16. AVMA Panel on Euthanasia. AVMA guidelines for the euthanasia of animals: 2020 edition. , American Veterinary Medical Association. Schaumburg, IL. (2020).
  17. Mori, M., Kohmoto, K., Shoda, Y. Role of granulosa and theca cells on in vitro progesterone production in preovulatory follicles of the Japanese quail. Japan Poult Sci. 21 (4), 206-214 (1984).
  18. Porter, T. E., Hargis, B. M., Silsby, J. L., El Halawani, M. E. Characterization of dissimilar steroid productions by granulosa, theca interna and theca externa cells during follicular maturation in the turkey (Meleagris gallopavo). Gen Comp Endocrinol. 84 (1), 1-8 (1991).
  19. Bahr, J. M., Wang, S. C., Huang, M. Y., Calvo, F. O. Steroid concentrations in isolated theca and granulosa layers of preovulatory follicles during the ovulatory cycle of the domestic hen. Biol Reprod. 29 (2), 326-334 (1983).
  20. Micke, P., et al. Biobanking of fresh frozen tissue: RNA is stable in nonfixed surgical specimens. Lab Invest. 86 (2), 202-211 (2006).
  21. Madisen, L., Hoar, D. I., Holroyd, C. D., Crisp, M., Hodes, M. E. DNA banking: the effects of storage of blood and isolated DNA on the integrity of DNA. Am J Med Genet. 27 (2), 379-390 (1987).
  22. Yang, Y. Z., et al. Histological characteristics of follicles and reproductive hormone secretion during ovarian follicle development in laying geese. Poult Sci. 98 (11), 6063-6070 (2019).
  23. Wang, Y., et al. Quantitative proteomic analyses during formation of chicken egg yolk. Food Chem. 374, 131828(2022).
  24. Vanmontfort, D., Rombauts, L., Decuypere, E., Verhoeven, G. Source of immunoreactive inhibin in the chicken ovary. Biol Reprod. 47 (6), 977-983 (1992).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Meer artikelen verkennen

Granulosalaagthecalaagscheiding van aviaire follikelspreovulatoire follikelsreproductieve biologie van pluimveeisolatie van eiersteweefseleierstok van leghennenweefselkweekgenexpressiecryopreservatie
Scheiding van pre-ovulatoire follikelgranulosa- en thecacellagen voor stroomafwaartse toepassingen
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.