Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Dit protocol onderzoekt de heterochromatineverdeling in acht populaties van Lycoris aurea (L'Her) Herb, met behulp van gecombineerde PI- en DAPI-chromosoomkleuring, fluorescentie in situ hybridisatie (FISH) met 18S-5.8-26S rRNA-genregio's (45S rDNA-regio's) en 5S ribosomale DNA-sondes.
Om de variatie in het karyotype in acht populaties te begrijpen, werden gedetailleerde karyotypes minutieus vastgesteld met behulp van chromosomale metingen, fluorescentiebanden en rDNA FISH-signalen. Het aantal 45S rDNA-sites varieert van één tot vijf paren per populatie, waarbij het meest voorkomende aantal per karyotype vier paren is. De 45S rDNA-locus bevindt zich voornamelijk in de korte armen en terminale gebieden van chromosomen, terwijl de 5S rDNA-locus voornamelijk wordt aangetroffen in de korte arm en de terminale of proximale regio's. Populaties HBWF, HNXN, HBBD en HNZX vertoonden een vergelijkbare verdeling van 45S rDNA-sites, net als GXTL, HBFC en SCLS, wat wijst op een nauwe verwantschap tussen populaties met vergelijkbare 45S rDNA-sitedistributies. De karyotypes van alle bestudeerde populaties zijn symmetrisch en omvatten stabiele en metastabiele centromeren of uitsluitend stabiele centromeren. Spreidingsdiagrammen van MCA en CVCL onderscheiden effectief hun karyotypische structuren. De analyse omvat zes kwantitatieve parameters (x, 2n, TCL, MCA, CVCL, CVCI). Bovendien geven de resultaten aan dat PCoA op basis van deze zes parameters een robuuste methode is voor het bepalen van biologische karyotyperelaties tussen de acht populaties. Het aantal chromosomen in Lycoris-populaties is x = 6-8. Op basis van de huidige studie en literatuur wordt genomische differentiatie van deze populaties besproken in termen van genoomgrootte, heterochromatine, 45S en 5S rDNA-sites en karyotype-asymmetrie.
Lycoris is een familie die verschillende belangrijke tuinbouwplanten omvat1. Lycoris aurea (L'Hér.) Kruid. is een traditionele Chinese geneeskrachtige plant met een lange geschiedenis. Fytochemische analyse heeft aangetoond dat Lycoris aurea (L'Her.) Kruid bevat galantamine en andere alkaloïden, die de gevoeligheid voor acetylcholine kunnen verbeteren en het potentieel hebben om de ziekte van Alzheimer te behandelen als cholinesteraseremmers2.
In hogere planten is karyotype-analyse cruciaal voor het integreren v....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De reagentia en apparatuur die in dit onderzoek zijn gebruikt, worden gedetailleerd beschreven in de materiaaltabel, terwijl de gebruikte sondes worden vermeld in aanvullend bestand 1.
1. Preparaat van apicale chromosomen
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Door gebruik te maken van de nauwgezette enzymonderdompeling en vlamdroging (EMF) methode, verspreide en goed gedifferentieerde metafasechromosomen van Lycoris aurea (L'Hér.) Kruiden werden verkregen en het cytogenetische chromosoomkaryotype van Lycoris aurea werd geconstrueerd (Figuur 1). De metafasechromosomen met de hoogste mate van condensatie zijn ongeschikt voor karyotype-analyse vanwege de verminderde morfologische verschillen. Aange.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De bereiding van Lycoris aurea (L'Hér.) Kruidenwortelchromosomen omvatten verschillende cruciale stappen: (1) het kweken van wortels via hydrocultuur, (2) het behandelen van wortelpunten met verzadigd α-broomaftaleen, (3) het fixeren van wortels met een alcohol-azijnzuuroplossing, (4) het uitvoeren van enzymatische hydrolyse op wortelpunten met een enzymoplossing, en (5) het grondig pletten van de verteerde wortels en het drogen van de dia's boven een vlam van een alcohollamp.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De auteurs hebben verklaard dat er geen concurrerende belangen bestaan.
Dit werk werd ondersteund door de Natural Science Foundation of China (32070367).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Alcohol | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | A500737-0005 | (70%, 90%, 100%) |
| 1× TNT | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | B548108 | 1×, 10× |
| 2× SSC | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | B548109 | 2×, 20× |
| 45S rDNA | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | TAMRA is toegevoegd aan beide uiteinden (5 'en 3' uiteinden) | |
| 4'6-diamidino-2-phenylindole(DAPI) | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | E607303 | 20ml |
| 5S rDNA | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | 5 'einde plus 6-FAM(FITC) | |
| Adobe Photoshop-software | Adobe Systems Incorporated | CS6 | |
| Alpha broom-naftaleen | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | A602718 | Verzadiging |
| Anti-burnout-middel | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | Vectashield H-1000 | 10 mL |
| Biochemische incubator | Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., LTD | LRH-70 | |
| Cellulase | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | A426068 | 10 g |
| Citroenzuur | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | A501702 | 10 g |
| Gedeïoniseerd formamide (FAD) | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | A600211-0500 | 0.7 |
| Dextraansulfaat | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | A428229 | 10 mL |
| Fluorescentie in situ hybridisatie-instrument | USA/Abbott ThermoBrite | S500-24 | |
| Fluorescentiemicroscoop | Olympus China Co.ltd | BX60 | |
| IJsazijnzuur | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | A501931 | 500 mL |
| HCl | Aladdin Reagent Co. Ltd. (Shanghai) | H399657 | 500 mL |
| IJsmachine | Dan Ding Shanghai International Trade Co., Ltd. | ST-70 | |
| Leica biologische microscoop | Germany Leica Instrument Co., LTD | DM6000B | |
| Methylalcohol | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | A601617 | 500 mL |
| MetMorph-software | Molecular Devices | Version 7.35 | |
| Oven | Thermo Scientific™ Heratherm™ | THM#51028152 | |
| Pectinase | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | A004297 | 10 g |
| Pepsine | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | 1.07185 | 100 g |
| Propidiumjodide(PI) | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | A425259 | 1 g |
| RNaseA | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | R4642 | 10 mg |
| Zalmklier-DNA(ssDNA) | Aladdin Reagent Co. Ltd. (Shanghai) | D119871 | 1 g |
| Natriumcitraat | Aladdin Reagent Co. Ltd. (Shanghai) | S189183 | 10 g |
| Statistica voor Windows 10.0 | voor statistische analyse |
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Dit artikel is gepubliceerd
Video binnenkort beschikbaar