Dit manuscript beschrijft de operationele procedures en voorzorgsmaatregelen om de mogelijke gemeenschappelijke pathogene mechanismen die primair syndroom van Sjögren en longadenocarcinoom met elkaar verbinden, te onderzoeken door middel van bio-informaticaanalyse en experimentele verificatie.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Primair syndroom van Sjögren geassocieerd met longadenocarcinoom: onderzoek naar de mogelijke gemeenschappelijke pathogene mechanismen en experimentele verificatie
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Deze studie had tot doel de mogelijke gemeenschappelijke pathogene mechanismen te onderzoeken die het primaire syndroom van Sjögren (pSS) en longadenocarcinoom (LUAD) met elkaar verbinden door middel van bio-informaticaanalyse en experimentele verificatie. De relevante genen geassocieerd met pSS en LUAD werden opgehaald uit de Gene Expression Omnibus (GEO) database en de Genecard-database. Vervolgens werden differentieel tot expressie gebrachte genen (DEG's) geassocieerd met pSS en LUAD gescreend als pSS-LUAD-DEG's. Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) en Gene Ontology (GO) verrijkingsanalyses werden uitgevoerd om de significante biologische functies van pSS-LUAD-DEG's op te helderen. Kerndoelen werden geïdentificeerd door het eiwit-eiwitinteractie (PPI)-netwerk te construeren, waarbij de diagnostische nauwkeurigheid van het hub-gen verder werd beoordeeld door middel van Receiver Operating Characteristics (ROC)-curveanalyses. In deze studie dienden NOD/Ltj-muizen als pSS-diermodellen en werden ze gestimuleerd met fijnstof 2.5 (PM2.5) om een ontstekingsreactie op te wekken. Kwantitatieve real-time polymerasekettingreactie (qPCR), enzymgekoppelde immunosorbenttest (ELISA) en western blotting werden gebruikt voor relevante verificatie van moleculair-biologische experimenten. De resultaten die zijn onthuld door KEGG- en GO-verrijkingsanalyses geven aan dat ontsteking een cruciale rol speelt bij het koppelen van pSS en LUAD. IL6, CCNA2, JAK2, IL1B, ASPM, CCNB2, NUSAP1 en CEP55 werden bepaald als de belangrijkste doelen van pSS-LUAD. BALB/c-muizen en NOD/Ltj-muizen vertoonden verbeterde expressie van inflammatoire cytokines IL-6 en IL-1β in longweefsel na 21 dagen stimulatie met PM2.5, waardoor de JAK2/STAT3-signaleringsroute werd geactiveerd en de expressie van tumor-geassocieerde genen CCNA2, CCNB2 en CEP55 werd opgereguleerd, waarbij NOD/Ltj-muizen meer uitgesproken veranderingen vertoonden dan BALB/c-muizen. Dit protocol toont aan dat carcinogenese geïnduceerd door de pulmonale inflammatoire micro-omgeving een belangrijke reden kan zijn voor de hoge incidentie van LUAD bij pSS-patiënten. Bovendien kunnen blokkeringsgerelateerde mechanismen het optreden van LUAD bij pSS-patiënten helpen voorkomen.
Inleiding
Primair syndroom van Sjögren (pSS) is een auto-immuunziekte die wordt gekenmerkt door lymfatische infiltratie van de exocriene klieren en leidt tot de klinische symptomen van droge ogen (xeroftalmie) en droge mond (xerostomie)1,2. pSS gaat meestal ook gepaard met extraglandulaire manifestaties van betrokkenheid, waaronder hyperglobulinemie3, interstitiële longziekte4, renale tubulaire acidose5, neurologische schade6, en trombocytopenie7, die de voornaamste on....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
De proefdieren werden gehuisvest in de dierenfaciliteit van het China-Japan Friendship Hospital, waar de huisvestingsomstandigheden voldeden aan de diervoedingsomgeving in overeenstemming met China's nationale standaard, Laboratory Animal-Requirements of Environment and Housing Facilities (GB14925-2010). Alle procedures en experimenten voor dierenverzorging voldeden aan de ARRIVE-richtlijnen en waren gebaseerd op de 3V-principes (vermindering, vervanging, verfijning), in overeenstemming met de richtlijnen van de National Animal Welfare Law of China. BALB/c-muizen werden gekocht van SPF (Beijing) Biotechnology Co., Ltd., en NOD/Ltj-mui....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
In totaal werden 3290 DEG's geïdentificeerd van de 23348 genen in GSE84884 (pSS), waaronder 2659 opgereguleerde genen en 631 neerwaarts gereguleerde genen (Figuur 1A). Voor GSE51092 (pSS) werden in totaal 3290 DEG's geïdentificeerd van de 11409 genen, waaronder 667 opgereguleerde genen en 587 neerwaarts gereguleerde genen (Figuur 1B). De GeneCards-database verkreeg 102 ovariële pSS-gerelateerde DEG's en de correlatiescore van sc.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Hoewel pSS wordt beschouwd als een ziekte die voornamelijk wordt gekenmerkt door de invasie van exocriene klieren, kan de schade aan extra-klieren niet worden genegeerd24. De longen vertegenwoordigen een doelorgaan voor pSS, en betrokkenheid van de longen is een veel voorkomende extraglandulaire manifestatie van pSS, meestal met lymfocytaire infiltratie van het bronchiale slijmvlies en het pulmonale interstitium25. Onderzoek wijst uit dat t.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben geen belangenconflicten te onthullen.
Dankbetuigingen
Deze studie werd ondersteund door National High Level Hospital Clinical Research Funding (2023-NHLHCRF-BQ-01) en het Youth Project van China-Japan Friendship Hospital (nr. 2020-1-QN-8).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 3-Color Prestained Protein Marker | Epizyme | WJ103 | Western Blot |
| Antibody Dilution Buffer | Epizyme | PS119 | Western Blot |
| BCA Protein Quantification Kit | Epizyme | ZJ101 | Western Blot |
| Cytoscape 3.7.1 software | National Institute of General Medical Sciences (NIGMS), National Institutes of Health (NIH) | Versie 3.7.1. | Open-source software voor biologische netwerkanalyse en visualisatie |
| ECL Luminous Fluid | Epizyme | SQ203 | Western Blot |
| Electrophoresis Buffer | Epizyme | PS105S | Western Blot |
| GraphPad Prism 10.0 | GraphPad | Versie 10.0 | Data-analyse |
| HRP-conjugated Goat anti-Rabbit IgG (H+L) (AS014) | abclonal | AS014 | Western Blot |
| JAK2 Antibody | Cell Signaling Technology | 3230T | Western Blot |
| Mouse IL-1β ELISA Kit | Beijing 4A Biotech Co., Ltd | CME0015 | ELISA |
| Mouse IL-6 ELISA Kit | Beijing 4A Biotech Co., Ltd | CME0006 | ELISA |
| Phosphatase Inhibitor Cocktail (100×) | Epizyme | GRF102 | Western Blot |
| Phospho-JAK2 (Tyr1007/1008) Antibody | Cell Signaling Technology | 3776S | Western Blot |
| Phospho-STAT3 (Tyr705) Antibody | Cell Signaling Technology | 9145S | Western Blot |
| Protease Inhibitor Cocktail (100×) | Epizyme | GRF101 | Western Blot |
| Protein Free Rapid Blocking Buffer (5×) | Epizyme | PS108 | Western Blot |
| PVDF membrane | Millipore | IPVH00010 | Western Blot |
| R software | R Foundation for Statistical Computing | Niet van toepassing | Statistisch analysesoftware en programmeertaal gebruikt voor data-analyse, visualisatie en machine learning-toepassingen |
| Radio Immunoprecipitation Assay | Epizyme | PC101 | Western Blot |
| Reverse Transcription System | Promega | A3500 | PCR |
| SDS-PAGE | Epizyme | LK303 | Western Blot |
| SDS-PAGE Protein Loading Buffer (5×) | Epizyme | LT103 | Western Blot |
| STAT3 Antibody | Cell Signaling Technology | 9139S | Western Blot |
| SYBR Green Realtime PCR Master Mix | TOYOBO | QPK-201 | PCR |
| TBST (10×) | Epizyme | PS103 | Western Blot |
| Western Blot Transfer Buffer (10×) | Epizyme | PS109 | Western Blot |
| β-Actin Antibody | abclonal | AC026 | Western Blot |
Referenties
- Thorlacius, G. E., Bjork, A., Wahren-Herlenius, M. Genetics and epigenetics of primary sjogren syndrome: Implications for future therapies. Nat Rev Rheumatol. 19 (5), 288-306 (2023).
- Bjordal, O., Norheim, K. B., Rodahl, E., Jonsson, R., Omdal, R. Primary Sjogren's syndrome and th....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
