Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Detectie van gereguleerde moederkorenalkaloïden in voedselmatrices door middel van vloeistofchromatografie-ingesloten ionenmobiliteitsspectrometrie-time-of-flight massaspectrometrie

2K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/67484

⸱

22 november 2024

 ,  ,  , 
1Department of Analytical Chemistry, Faculty of Sciences, University of Granada, 2Department of Preventive Medicine and Public Health, Food Science, Toxicology and Forensic Medicine, Faculty of Pharmacy and Food Science, University of Valencia

In dit artikel

Samenvatting

Dit protocol presenteert een gevalideerde massaspectrometriemethode voor vloeistofchromatografie-ionenmobiliteit en hoge resolutie om de aanwezigheid van moederkorenalkaloïden in voedsel te bepalen in overeenstemming met de onlangs uitgebrachte Verordening (EU) 2023/915 van de Commissie.

Samenvatting

Massaspectrometrie (IMS) voor ionenmobiliteit fungeert als een extra scheidingsdimensie wanneer deze wordt geïntegreerd in workflows voor vloeistofchromatografie-massaspectrometrie (LC-MS). LC-IMS-MS-methoden bieden een hogere piekresolutie, verbeterde scheiding van isobare en isomere verbindingen en een verbeterde signaal-ruisverhouding (S/N) in vergelijking met traditionele LC-MS-methoden. IMS biedt een andere moleculaire eigenschap voor de identificatie van analyten, namelijk de parameter collision cross section (CCS), waardoor vals-positieve resultaten worden verminderd. Daarom pakken LC-IMS-MS-methoden belangrijke analytische uitdagingen aan op het gebied van voedselveiligheid (d.w.z. detectie van verbindingen op sporenniveaus in complexe voedselmatrices en eenduidige identificatie van isobare en isomere moleculen).

Moederkorenalkaloïden (EA's) zijn een familie van mycotoxinen die worden geproduceerd door schimmels die een grote verscheidenheid aan grassoorten aanvallen, waaronder kleine granen zoals rogge, triticale, tarwe, gerst, gierst en haver. In verschillende levensmiddelen zijn maximumgehalten (ML's) van deze mycotoxinen vastgesteld, zoals beschreven in Verordening (EG) 2023/915 van de Commissie. Deze nieuwe wetgeving omvat zes belangrijke EA's en de bijbehorende epimeren, dus er is een efficiënte methodologie nodig om deze isomere moleculen goed te onderscheiden, rekening houdend met hun gelijktijdige voorkomen.

Daarom is het doel van dit protocol om aan te tonen hoe de integratie van IMS in LC-MS-workflows bijdraagt aan de scheiding van isomere EA's, waardoor de selectiviteit van de analytische methode wordt verbeterd. Bovendien illustreert het hoe het genereren van CCS-bibliotheken door de karakterisering van analytische standaarden een groter vertrouwen biedt voor de identificatie van mycotoxinen. Dit protocol is bedoeld om de voordelen van de toepassing van IMS op het gebied van voedselveiligheid duidelijk uit te leggen, waarbij bijvoorbeeld de bepaling van EA's in granen wordt genoemd. Een op QuEChERS gebaseerde extractie gevolgd door een LC-trapped ion mobility spectrometrie (TIMS)-MS-analyse leverde kwantificeringslimieten op van 0,65 tot 2,6 ng/g met een acceptabele nauwkeurigheid (hoewel laag herstel voor ergotaminine) bij 1,5x, 1x en 0,5x de ML en vertoonde een verwaarloosbaar matrixeffect.

Inleiding

Ionenmobiliteit massaspectrometrie (IMS) wordt een steeds meer gebruikte analytische techniek, vaak gepresenteerd als een extra scheidingsdimensie die is geïntegreerd in traditionele vloeistof-/gaschromatografie (LC/GC) gekoppeld aan MS-workflows. IMS bestaat uit de scheiding van moleculen langs een mobiliteitscel, gevuld met een buffergas, onder een elektrisch veld en bij atmosferische druk1. Afhankelijk van de massa-tot-ladingsverhouding (m/z) en de geometrische conformatie, zal een geïoniseerd molecuul interageren met het buffergas terwijl het door de mobiliteitscel beweegt, wat wordt weerspiegeld in de ionenmobiliteit (K) parameter2 en berekend door middel van de volgende vergelijking:

figure-introduction-1

waarbij D de totale driftlengte voorstelt, td de totale drifttijd en  E het elektrische veld. Daarom wordt K gemeten in m2 V−1 s−1, hoewel het om praktische redenen vaak wordt uitgedrukt als cm2 V−1 s−1. Het intrinsieke vermogen om door de mobiliteitscel te bewegen kan worden gemeten aan de hand van de drifttijd en later worden omgezet in de zogenaamde collision cross section (CCS)-waarde, een zeer reproduceerbare parameter voor elk molecuul, onafhankelijk van het IMS-instrument3. De CCS kan worden afgeleid uit de mobiliteit volgens de volgende vergelijking:

figure-introduction-2

q is de lading van het ion; N de dichtheid van het buffergasgetal; μ de verminderde massa van de buffergas-ion van de aanvaringspartners; kB de constante van Boltzmann; en T de buffergastemperatuur. Daarom biedt IMS aanvullende informatie ter aanvulling van de analytische gegevens die voortvloeien uit chromatografie- en MS-analyses.

Het is aangetoond dat de implementatie van IMS in LC-MS-platforms de betrouwbaarheid van analytische bepalingen verhoogt, vooral bij het werken met verbindingen die sporenconcentraties bevatten. Verschillende studies hebben gemeld dat LC-IMS-MS-methoden de kwaliteit van massaspectra verbeteren door achtergrondruis te verminderen, wat uiteindelijk de gevoeligheid van de methode beïnvloedt, en het aantal valse positieven en negatieven vermindert dat wordt geleverd door LC-MS-methodologieën met meerdere residuen 4,5,6. Verder maakt de reproduceerbaarheid van CCS-waarden het mogelijk om niet alleen verschillende instrumenten te vergelijken die dezelfde technologie gebruiken, maar ook tussen verschillende ionenmobiliteitstechnologieën, namelijk reizende golfionenmobiliteitsspectrometrie (TWIMS), ingesloten ionenmobiliteitsspectrometrie (TIMS) en driftbuisionenmobiliteitsspectrometrie (DTIMS)2,7, de meest gebruikte systemen1. Een opmerkelijk gevolg van het potentieel van CCS als identificatieparameter ligt dus in de mogelijkheid om CCS-bibliotheken op te bouwen, wat tot uiting komt in de toepasbaarheid ervan in metabolomics-studies8. Desalniettemin is een van de krachtigste kenmerken van IMS het vermogen om isomere en isobare verbindingen te scheiden die mogelijk niet voldoende worden opgelost door LC-MS-methoden. Dit kan het geval zijn bij het werken met grote sets analyten die van belang zijn in complexe matrices, wat een veel voorkomende situatie is in milieu- en voedselanalyse. In dit verband zijn LC-IMS-MS-methoden voorgesteld voor de monitoring van pesticiden en, in mindere mate, diergeneesmiddelen en mycotoxinen in voedsel9.

Vanwege hun hoge oplossend vermogen en selectiviteit komen LC/GC-IMS-MS-platforms naar voren als de nuttigste instrumenten om enkele van de huidige uitdagingen op het gebied van voedselveiligheid aan te pakken, met name die met betrekking tot isomere mengsels. Het gezondheidsrisico in verband met isomere mengsels als voedselcontaminanten komt tot uiting in de huidige Europese wetgeving, die bijvoorbeeld de maximale concentratie van zes belangrijke moederkorenalkaloïden (EA's) en de overeenkomstige zes epimeren in verschillende voedingsproducten beperkt10.

EA's vormen een familie van toxische secundaire metabolieten die worden geproduceerd door een breed scala aan schimmels, voornamelijk van de familie Clavicipitaceae (bijv. Claviceps purpurea, de belangrijkste EA-producent vanwege zijn brede gastheerbereik), maar ook Trichocomaceae, die de zaadkop van levende planten (zoals rogge, gerst, tarwe en haver) kan parasiteren op het moment van bloei11, 12. okt. Onder specifieke omstandigheden, met name temperatuur en wateractiviteit, kunnen Claviceps-schimmels EA's produceren die zich ophopen in vruchtlichamen, bekend als sclerotia of moederkoren, in het waardgewas. Tot op zekere hoogte zijn EA's bestand tegen de verwerking van de grondstof tot het eindproduct; Daarom doorbreken in de voedselketen. Inslikken van besmet voedsel kan leiden tot EA-intoxicatie, bekend als ergotisme, dat zich presenteert met acute symptomen zoals buikpijn, braken, branderig gevoel van de huid, slapeloosheid en hallucinaties13. Om de impact van EA's op de menselijke gezondheid te verminderen, heeft de Europese Commissie maximumgehalten (ML's) in verschillende levensmiddelen vastgesteld voor de som van de belangrijkste EA's: de R-epimeren ergometrine (Em), ergotamine (Et), ergosine (Es), ergocristine (Ecr), ergokryptine (Ekr) en ergocornine (Eco) en hun overeenkomstige S-epimeren: ergometrinine (Emn), ergosinine (Esn), ergotaminine (Etn), ergocorninine (Econ), ergokryptinine (Ekrn), en ergocristinine (Ecrn). Deze verbindingen kunnen epimeriëren van R- naar S-vormen en vice versa, vooral bij blootstelling aan sterk licht, langdurige opslag of contact met sommige oplosmiddelen bij hoge of lage pH 12. Hoewel het aandeel R- en S-formulieren onder verschillende omstandigheden kan variëren, meldde het Contam-panel van de EFSA dat R-formulieren vaker voorkomen dan S-formulieren na bestudering van de beschikbare literatuur over EA's in levensmiddelen14. Daarom variëren de ML's afhankelijk van verschillende factoren, zoals de gevoeligheid van het gewas, de mate van verwerking of de consumptiefrequentie. In het EU-kader zijn de ML's voor volwitte producten van gerst, tarwe, spelt en haver vastgesteld op 50 of 150 μg/kg (afhankelijk van het asgehalte lager of hoger dan respectievelijk 900 mg/100 g), terwijl voor granen die rechtstreeks voor menselijke consumptie zijn bestemd, een ML van 150 μg/kg geldt, met uitzondering van babyvoeding op basis van granen, waarbij de ML wordt verlaagd tot 20 μg/kg10.

Deze strenge wetgeving vereist analytische methodologieën die gevoelig genoeg zijn om de niveaus van sporenconcentraties (μg/kg) te bepalen, terwijl gereguleerde EA's en de bijbehorende epimeren correct worden geïdentificeerd, aangezien beide vormen, R- en S-isomeren, samen in besmette monsters kunnen worden aangetroffen. Deze taak vormt een grote uitdaging, aangezien elk toxine-epimeerpaar exact dezelfde massa en hetzelfde fragmentatiepatroon deelt. Bovendien kan een goede chromatografische scheiding tussen beide verbindingen complex zijn. Daarom zijn goed geoptimaliseerde LC-gradiënten nodig om verkeerde kwantificering te voorkomen wanneer EA-epimeren samen voorkomen in voedselmonsters. Hoewel verschillende studies LC-MS-methoden hebben gerapporteerd voor ondubbelzinnige bepaling van EA's 15,16,17,18, moet de chromatografische methode uitgebreid worden bestudeerd om een adequate scheiding van de chromatografische pieken te bereiken om EA's ondubbelzinnig te identificeren. Dit is echter meestal niet haalbaar voor multi-class methoden waarbij contaminanten die tot verschillende chemische families behoren tegelijkertijd worden bepaald. In deze context rapporteerde een recente studie uitgevoerd door Carbonell-Rozas, Hernández-Mesa, et al.19 een LC-IMS-MS-methode voor de kwantificering van EA's in tarwe- en gerstmonsters, waarbij gebruik werd gemaakt van twee verschillende TWIMS-instrumenten die reproduceerbare CCS-waarden en lage kwantificeringslimieten (LOQ's) leverden om niet-naleving op te sporen in overeenstemming met de huidige wetgeving. Daarom is het doel van dit protocol om aan te tonen hoe de integratie van IMS in LC-MS-workflows bijdraagt aan de scheiding van isomere EA's, waardoor de selectiviteit van de analytische methode wordt verbeterd. Bovendien illustreert het hoe het genereren van CCS-bibliotheken door de karakterisering van analytische standaarden een groter vertrouwen biedt voor de identificatie van mycotoxinen. Dit protocol is bedoeld om de voordelen van de toepassing van IMS bij de analyse van de voedselveiligheid duidelijk uit te leggen, waarbij bijvoorbeeld de bepaling van EA's in granen wordt genoemd. Dit protocol behandelt de monsterbehandeling op basis van een QuEChERS-procedure, monsteranalyse door LC-TIMS-MS en IMS-gegevensextractie en -interpretatie.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

1. Voorbereiding van voorraad-, tussen- en werkstandaardoplossingen

OPMERKING: Gebruik nitrilhandschoenen, laboratoriumjas en veiligheidsbril.

  1. Bereid individuele voorraadoplossingen van de 12 EA's (zie materiaaltabel) met 10.000 ng/ml in amberkleurige glazen flesjes van 4 ml met acetonitril. De R-vormen (-ine) werden voorheen verdeeld in porties van 25.000 ng, terwijl de S-vormen (-inine) werden verdeeld in porties van 10.000 ng. Deze studie begon met deze aliquots, waarbij concentraties van 10.000 ng/ml werden bereikt door de R- en S-vorm te verdunnen in respectievelijk 2,5 en 1 ml acetonitril, gevolgd door vortexing gedurende 2 minuten.
  2. Bereid een tussenvoorraadoplossing van 1.000 ng/ml totale EA's (83,33 ng/ml van elk) in een amberkleurige glazen injectieflacon van 12 ml door 65 μl van elke afzonderlijke alkaloïde-oplossing en 7,02 ml acetonitril toe te voegen.
    OPMERKING: Zodra de tussenliggende voorraadoplossing is bereid, moeten de afzonderlijke voorraadoplossingen worden gedroogd en bewaard bij -20 °C, afgedekt met aluminiumfolie om epimerisatie te voorkomen.
  3. Bereid werkende standaardoplossingen voor uit de tussenliggende voorraadoplossing door 2,7, 1,8 en 0,9 ml te pipetteren in amberkleurige glazen buizen van 4 ml. Breng ze droog onder een zachte stikstofstroom en resuspendeer ze in 600 μL acetonitril.
    OPMERKING: De resulterende concentraties werden vastgesteld op 1.5, 1 en 0.5x de ml (150 ng/g) bij toevoeging van 50 μl aan 1 g van het monster. Deze worden geselecteerd als concentratieniveaus voor validatiestudies (d.w.z. terugwinning, herhaalbaarheid, enz.).
  4. Verdeel de 600 μl van elke werkende standaardoplossing in drie amberkleurige glazen flesjes van 2 ml door 200 μl te pipetteren en breng ze droog op.
    OPMERKING: Stap 1.2 tot en met 1.4 worden schematisch uitgelegd in Figuur 1. Door de standaardwerkoplossingen te verdelen en te drogen, is het mogelijk om op drie verschillende dagen in drievoud te versterken, zoals vereist door de validatiestudie, zonder de chemische integriteit van de EA's te verliezen.
  5. Resuspendeer op elke validatiedag een amberkleurige glazen injectieflacon van 2 ml van elk verrijkingsniveau in 200 μl acetonitril.
    OPMERKING: Elk verrijkingsniveau wordt in drievoud beoordeeld met behulp van 50 μL per monster; daarom zal in totaal 150 μL van de oplossing worden gebruikt.

2. Bereiding van reagentia en oplossingen

OPMERKING: Gebruik nitrilhandschoenen, laboratoriumjas en veiligheidsbril.

  1. Bereid een ammoniumcarbonaatoplossing van 5 mM door 24,02 mg ammoniumcarbonaat af te wegen en op te lossen in 50 ml water. Weeg 24,02 mg ammoniumcarbonaat af in een bekerglas en voeg ongeveer 5 ml water toe. Los het ammoniumcarbonaat op door de oplossing voorzichtig met de hand te schudden en breng het vervolgens over in een maatkolf van 50 ml. Om het uiteindelijke volume van 50 ml te bereiken, spoelt u het bekerglas met extra water en brengt u het rijzend over naar de maatkolf.
  2. Bereid 250 ml van de extractieoplossing [acetonitril: 5 mM ammoniumcarbonaat (85:15, v/v)] door 212,5 ml acetonitril en 37,5 ml van de ammoniumoplossing bereid in stap 2.1 te mengen.
  3. Bereid 100 ml van een mengsel van methanol en water (1:1, v/v) om de monsterextracten opnieuw te suspenderen (stap 8.8.).
  4. Weeg voor elk monster 150 mg van een dispersief vastefasemateriaal C18:sorptiemiddel op basis van zirkoniumoxide (1:1, m/w) af in centrifugebuisjes van 15 ml voor dispersieve opruimfase (stap 8.5.).
  5. Bereid de oplosmiddelen voor op chromatografische scheiding in twee verschillende flessen, namelijk 1 L ultrapuur water (oplosmiddel A) en methanol (oplosmiddel B), die beide 0,3% (v/v) mierenzuur bevatten. Om deze concentratie te bereiken, werd 3,03 ml mierenzuur (99% zuiverheid) aan de flessen toegevoegd.
    OPMERKING: Oplosmiddelen voor de mobiele fase moeten vlak voor het uitvoeren van de LC-IMS-MS-analyses worden voorbereid.

3. Instrumentele parameters instellen

OPMERKING: Het instrument dat werd gebruikt om deze LC-IMS-MS-studie uit te voeren, was een UHPLC in combinatie met een IM-HRMS, uitgerust met een vacuümgeïsoleerde sonde verwarmde elektrospray-ionisatiebron (VIP-HESI). Het instrument werd in positieve modus bediend.

  1. Creëer een chromatografische methode met behulp van de acquisitiesoftware voor de scheiding van de analyten door de volgende elutiegradiënt in te stellen: 0 min, 10% B; 2 min, 10% B; 4,5 min, 40% B; 9 minuten, 45% B; 11 minuten, 95% B; 12 minuten, 95% B; 13 minuten, 10% B; 16 min, 10% B.
  2. Stel het mobiele fasedebiet in op 0.4 ml/min, de kolomtemperatuur op 35 °C en het injectievolume op 5 μl. Houd indien mogelijk een vaste temperatuur van 10 °C aan in de autosampler.
  3. Stel de IMS-parameters als volgt in: mobiliteitswaarden (1/K0), van 0,1 tot 1,5 V·s/cm2; aanlooptijd, 100 ms; nauwkeurigheidstijd, 10 ms; inschakelduur, 10%; en hellingssnelheid, 9,05 Hz.
  4. Stel de ionenbronparameters voor MS-detectie als volgt in: capillaire spanning, 2.500 V; vernevelingsdruk, 2,5 bar; droog gasdebiet, 8 l/min; temperatuur droog gas, 200 °C; temperatuur van het mantelgas, 450 °C; mantelgasdebiet, 4 l/min. Selecteer voor MS-acquisitie de volgende parameters, rekening houdend met twee scangebeurtenissen: volledige scan van het gehele massaspectrum met een m/z van 20 tot 1.300 gevolgd door bbCID (broadband collision-induced dissociation), die productionen genereert van elke voorloper met drie vaste botsingsenergie van 24, 36 en 50 eV. Voer ionisatie en gegevensverzameling uit in de positieve polariteitsmodus.
  5. Sla dit bestand met de acquisitiemethode op voor verder gebruik.

4. Gegevensverzameling uit de analytische standaarden van EA's

OPMERKING: Gebruik nitrilhandschoenen, laboratoriumjas en veiligheidsbril alleen voor stap 4.1.

  1. Bereid twee amberkleurige injectieflacons van 1,5 ml met 500 μl tussenoplossing van 1.000 ng/ml en een andere injectieflacon met een mengsel van oplosmiddelen A en B (1:1, v/v) als wasoplossing.
  2. Kalibreer het timsTOF-instrument zoals aangegeven door de fabrikant en selecteer een positieve polariteit voor zowel IMS- als MS-acquisities.
  3. Plaats de C18-kolom (zie Materiaaltabel) in de LC-oven, met de temperatuur ingesteld op 35 °C zoals aangegeven in het bestand met de acquisitiemethode dat is opgeslagen in stap 3.5.
    NOTITIE: Zorg ervoor dat beide uiteinden goed zijn vastgedraaid; Anders wordt lekkage van de mobiele fase waargenomen.
  4. Conditioneer de LC-kolom om een mobiel fasedebiet van 0.1 ml/min mogelijk te maken en selecteer een oplosmiddel A- en B-mengselverhouding van 90:10 (%) als de initiële samenstellingsverhouding van de mobiele fase.
  5. Wacht tot de kolomdruk stabiel is (~130 bar).
  6. Verhoog het mobiele fasedebiet tot 0.2 ml/min, wacht tot de druk stabiliseert en verhoog deze opnieuw tot 0.3 ml/min.
  7. Zodra de druk weer stabiliseert, stelt u het debiet in op 0.4 ml, wat het werkdebiet is zoals beschreven in het bestand met de acquisitiemethode dat is opgeslagen in stap 3.5, en wacht u tot de druk zich stabiliseert rond de 350 bar.
    OPMERKING: Het is belangrijk om het debiet niet direct te verhogen van 0,2 naar 0,4 ml/min. Een sterke verandering in de stroming veroorzaakt hogedrukpieken die de chromatografiekolom kunnen beschadigen.
  8. Terwijl de kolom wordt geconditioneerd, schrijft u de werklijst, inclusief twee monsters die overeenkomen met de twee injectieflacons met de EAs-tussenoplossing van 1.000 ng/ml, zoals aangegeven in stap 4.1, en de wasfles. Analyseer de wasflacon twee keer, aan het begin en einde van de monsterbatch.
  9. Laad in de kolom Methodebestand van de werklijst het bestand met de acquisitiemethode dat eerder is opgeslagen in stap 3.5.
  10. Maak een map om alle verkregen gegevensbestanden op te slaan en alle voorbeelden te routeren door de map te selecteren in de kolom Voorbeeldpad .
    OPMERKING: Zorg ervoor dat u dezelfde map gebruikt om alle bestanden die tijdens het validatieonderzoek zijn gegenereerd, op te slaan voor verdere verwerking. Tijdens de kolomconditionering kunnen de waarden waarbij de druk stabiliseert enigszins variëren. Zorg er echter voor dat de druk stabiel is voordat u het debiet opnieuw verhoogt om de integriteit van de kolom te behouden. Bovendien moet de druk, wanneer het werkdebiet is bereikt, ook stabiel zijn om een reproduceerbare chromatografische scheiding te bereiken.
  11. Ga naar de bovenste werkbalk van de software en voer de werklijst uit.

5. Gegevensverwerking voor het creëren van een kwantificeringsmethode

  1. Zodra de werklijst is uitgevoerd, opent u de kwalitatieve software.
  2. Laad alle geanalyseerde monsters door te klikken op Bestand | Open werklijst.
  3. Klik met de rechtermuisknop op een monster dat overeenkomt met de EAs-tussenoplossing bij 1.000 ng/ml, ga naar Chromatogram bewerken en selecteer vervolgens Type | Geëxtraheerd ionchromatogram en voer de theoretische molecuulmassa van het geprotoneerde ion in met betrekking tot elke EA. Klik vervolgens op Toevoegen en ten slotte op OK. Aangezien de set analyten wordt gevormd door zes EA's en hun gerelateerde epimeren die exact dezelfde massa delen, verschijnen er zes geëxtraheerde ionenchromatogrammen.
    OPMERKING: De parameter Breedte wijzigt hoe smal het m/z-venster is. Het wordt aanbevolen om een voldoende breed m/z-venster te kiezen in geval van problemen bij het vinden van de chromatografische piek van de analyt van belang. Het is echter raadzaam om smalle m/z-vensters in te stellen om mogelijke interferentie te voorkomen (minder dan 0,05 eenheden).
  4. In elk geëxtraheerd ionchromatogram verschijnen twee chromatografische pieken die verband houden met de belangrijkste EA en zijn epimeer. Klik met de rechtermuisknop terwijl u het hele gebied van één piek selecteert. Bijgevolg zal het ionenmobiliteitsspectrum er direct onder verschijnen.
  5. Ga naar de x-as van het ionenmobiliteitsspectrum, klik met de rechtermuisknop en klik vervolgens op Collision Cross Section. Noteer de CCS-waarde.
    OPMERKING: Als de CCS-waarden niet automatisch verschijnen, gaat u naar Kalibreren in de bovenste werkbalk, vervolgens naar Mobiliteitscalculator en typt u handmatig de mobiliteitswaarde om de bijbehorende CCS te verkrijgen.
  6. Selecteer het gebied dat overeenkomt met de andere chromatografische piek binnen hetzelfde ionenchromatogram en herhaal stap 5.4. en 5.5.
  7. Op dezelfde manier verschijnt het fragmentatiepatroon ook na stap 5.4. Op basis van het fragmentatiepatroon dat in literatuur en databases wordt gerapporteerd, vergelijkt en kiest u het meest intense production als aanvullend identificatiepunt.
  8. Noteer de retentietijd, CCS-waarde en exacte massa van het hoofdionadduct (meestal het geprotoneerde ion) van elke EA om een kwantificeringsmethode te creëren.
  9. Herhaal stap 5.4 tot en met 5.8. voor de overige analyten.
  10. Selecteer alle molecuulmassa's die in stap 5.3 zijn gegenereerd door erop te klikken terwijl u op Ctrl drukt. Klik vervolgens met de rechtermuisknop en selecteer Kopiëren. Ga naar het andere voorbeeld dat overeenkomt met de tussenoplossing van EAs, klik er met de rechtermuisknop op en selecteer Plakken. De ionchromatogrammen en mobiliteitsspectra worden automatisch geëxtraheerd.
  11. Controleer de identificatieparameters voor alle analyten in dit tweede monster.

6. Invoering van een gegevensverwerkingsmethode voor de routinematige bepaling van moederkorenalkaloïden

  1. Open de software en klik op het tabblad Methodebeheer .
  2. Klik op Analyte-instellingen en voer de naam van elke EA in, naast de retentietijd, de CCS-waarde en de massa van de geprotoneerde adducten die in stap 5.4 zijn verzameld. tot 5.9. Wijzig de tolerantie van elk identificatiepunt indien nodig, hoewel de standaardinstellingen worden aanbevolen voor de toepassing van dit protocol.
    OPMERKING: Hoe hoger de ingestelde tolerantiewaarden, hoe groter de kans om met valse positieven om te gaan, aangezien een grotere afwijking van de theoretische waarden wordt geaccepteerd. Evenzo kunnen te strenge tolerantiewaarden leiden tot vals-negatieven. Dit gebeurt wanneer de afwijking van de theoretische waarde uitsluitend wordt veroorzaakt door de prestaties van het instrument.
  3. Bewaar de kwantificeringsmethode voor verder gebruik.

7. Bemonstering

  1. Koop monsters van tarwe en haver in supermarkten, bij voorkeur in containers van 1 kg, volgens de richtlijnen voor bemonstering die zijn opgesteld door de Europese Commissie20. Als er geen verpakkingen van 1 kg beschikbaar zijn, zorg er dan voor dat u ten minste 50 g monsters bij de hand heeft om de hele analyse te voltooien.
  2. Maal de monsters met behulp van een molen. In dit onderzoek werd een messenslijper gebruikt om de volledige inhoud van de verpakkingen te malen, die vervolgens werden teruggebracht naar hun oorspronkelijke verpakkingen voor homogenisatie.
    NOTITIE: Reinig de molen grondig tussen de monsters om kruisbesmetting te voorkomen. Gebruik een laboratoriumjas.
  3. Verdeel de gehomogeniseerde monsters in centrifugebuisjes van 50 ml en bewaar ze op koele en droge omstandigheden.

8. Voorbereiding van het monster

  1. Bereid een schema voor om het validatieonderzoek gedurende drie niet-opeenvolgende dagen uit te voeren (om de interne reproduceerbaarheid te beoordelen). Test voor elke dag drie concentratieniveaus door monsters te versterken bij 225 ng/g (1,5 ml), 150 ng/g (ML) en 75 ng/g (0,5 ml). Bestudeer elk niveau in drievoud, wat neerkomt op negen steekproeven met spikes plus nog eens drie blanco monsters per dag.
    OPMERKING: Rekening houdend met de 3 validatiedagen, zijn er in totaal 36 monsters nodig naast nog eens 8 blanco monsters die bedoeld zijn voor het voorbereiden van de matrix-gematchte kalibratiecurve. Gebruik nitrilhandschoenen, laboratoriumjas en veiligheidsbril voor dit hele deel van het protocol.
  2. Weeg 1 g monster af in een centrifugebuis van 50 ml.
    OPMERKING: Versterk bij het uitvoeren van het validatieonderzoek de monsters net na het wegen met 50 μL van de overeenkomstige werkende standaardoplossing zoals beschreven in stap 1.3. en 1.5.
  3. Voeg 4 ml van de extractieoplossing toe [acetonitril:5 mM ammoniumcarbonaat waterige oplossing (85:15, v/v)]. Vortex het monster gedurende 1 min.
  4. Centrifugeer het monster gedurende 5 minuten bij 9.750 × g en 4 °C.
    OPMERKING: De capaciteit van de centrifuge kan een beperkende factor zijn in de procedure, dus het wordt aanbevolen om tegelijkertijd alleen het exacte aantal monsters te extraheren dat in de centrifuge past.
  5. Breng het hele bovenstaande over in de centrifugebuis van 15 ml die 150 mg van het mengsel van opruimsorptiemiddelen (1:1, m/m) bevat. Vortex het monster gedurende 1 min.
  6. Centrifugeer de buis gedurende 5 minuten bij 9.750 × g en 4 °C.
  7. Verzamel het bovenstaande en doe het in een amberkleurig glazen flesje van 4 ml. Verdamp het extract onder een zachte stroom stikstof.
    OPMERKING: Monsters moeten gedroogd worden bewaard bij -20 °C als ze niet op dezelfde dag worden geanalyseerd.
  8. Reconstitueer het monster in 750 μl van het mengsel methanol:water (1:1, v/v).
  9. Breng het extract over in een spuit van 2 ml en filtreer het door een nylonfilter van 0,22 μm in een amberchromatografische injectieflacon van 1,5 ml.
  10. Verzamel de gereconstitueerde extracten van de acht blanco monsters die bestemd zijn voor de matrix-afgestemde kalibratiecurve in een amberkleurige glazen injectieflacon van 12 ml (elk monster wordt geresuspendeerd in 750 μl, wat een totaal volume van 6 ml vertegenwoordigt).
  11. Pipetteer 1 ml van de tussenoplossing bij 1.000 ng/ml (83,33 ng/ml voor elke ergot-alkaloïde) (stap 1.2) in een amberkleurige glazen injectieflacon van 2 ml, droog het oplosmiddel onder een zachte stikstofstraal en suspendeer in 1 ml van het eerder verzamelde blanco monsterextract.
    OPMERKING: Dit mengsel in een concentratie van 1.000 ng/ml (83,33 ng/ml voor elke EA) zal worden gebruikt om de matrix-gematchte kalibratiecurve voor te bereiden.
  12. Bereid tien amberkleurige glazen flesjes van 2 ml voor en doe in elk flesje 450 μl blanco monsterextract (stap 8.10) en markeer ze met nummers van 1 tot 10. Elke injectieflacon is een punt van de kalibratiecurve.
    OPMERKING: In dit protocol werd 450 μL gebruikt, omdat dit de laagste waarde was die het LC-apparaat in de injectieflacon kon bereiken zonder inserts te gebruiken. Als de naald niet zo ver in de injectieflacon komt, verhoog dan het volume en bereken dus hoeveel extra blanco monsters moeten worden geëxtraheerd, rekening houdend met het feit dat elk monster wordt geresuspendeerd in 750 μL methanol:water (1/1, v:v) mengsel.
  13. Bouw de kalibratiecurve op door middel van seriële verdunning. Breng 450 μl van het in stap 8.11 bereide mengsel over. in injectieflacon 1, die al 450 μl blanco monsterextract bevat, om een concentratie van 41,67 ng/ml (het hoogste kalibratiepunt) te bereiken. Draai de injectieflacon gedurende 2 minuten.
    OPMERKING: Het volume van het mengsel moet overeenkomen met het volume van het blanco monsterextract om in elke stap twee keer te verdunnen.
  14. Breng 450 μl over van injectieflacon 1 naar injectieflacon 2, die al 450 μl blanco monsterextract bevat, om een concentratie van 20,83 ng/ml te bereiken (het op één na hoogste kalibratiepunt).
  15. Herhaal stap 8.14 (d.w.z. van injectieflacon 2 naar injectieflacon 3, enzovoort) en ga vervolgens door totdat de tien kalibratiepunten zijn verkregen. Het concentratiebereik voor elke EA is dan: 41.67, 20.83, 10.42, 5.21, 2.60, 1.30, 0.65, 0.33, 0.16 en 0.08 ng/ml.
  16. Bereid een standaardmengsel van 1.000 ng/ml (83,33 ng/ml voor elke EA) zoals beschreven in stap 8.11, maar gebruik een mengsel van 1 ml methanol:water (1:1, v/v).
  17. Bereid een standaardkalibratiecurve voor zoals beschreven in de stappen 8.13 tot en met 8.15, maar gebruik een mengsel van 450 μl methanol:water (1:1, v/v) voor de seriële verdunningen. Deze kalibratiecurve wordt gebruikt om het matrixeffect te evalueren door het te vergelijken met de matrix-gematchte kalibratiecurve.

9. Kwantitatieve gegevensverwerking

  1. Initialiseer en voer het instrument uit volgens de instructies beschreven in stap 4.1. tot 4.11. Zie Figuur 2 voor de werklijst die in dit protocol wordt gebruikt.
    OPMERKING: Wanneer u de werklijst voor kalibratiecurven schrijft, injecteert u deze vóór de verrijkte monsters, te beginnen met de standaard kalibratiecurve van de laagste naar de hoogste concentratie, een wasflacon met methanol:water (1:1, v/v) en de matrix-afgestemde kalibratiecurve van de laagste naar de hoogste concentratie.
  2. Open de kwantitatieve software en navigeer naar TASQ Snel tabblad | Importbatch linksonder.
  3. Selecteer de map die in stap 4.10 is gemaakt. met alle ruwe gegevens (bestanden met betrekking tot de informatie die is verkregen na de LC-IMS-MS-analyse voor alle monsters die in de werklijst zijn opgenomen).
  4. Eenmaal geïmporteerd in de software, ga je naar Batch verwerken, direct onder Batch importeren.
  5. Kies de monsters die u wilt verwerken (d.w.z. de 27 steekproeven, 9 blanco's en beide kalibratiecurves) en de gegevensverwerkingsmethode die eerder in stap 6.1 is gemaakt. tot 6.3. Er verschijnt een venster met verschillende parameters die moeten worden ingesteld (d.w.z. het type integrator om de chromatografische pieken te beoordelen of het type analytisch signaal waarmee rekening moet worden gehouden). Wijzig die parameters naar wens, hoewel de standaardwaarden geschikt zijn voor de uitvoering van dit protocol.
  6. Ga naar Screening beoordelen nadat de gegevensverwerking is voltooid en controleer of er problemen zijn met de automatische integratie, zoals de selectie van onjuiste chromatografische pieken die mogelijk te dicht bij elkaar liggen. Als dit het geval is, beperk dan de waarden die verwijzen naar retentietijdtolerantie, CCS-waardentolerantie en/of massafout die oorspronkelijk in het kwantitatieve methodebestand zijn vastgesteld en verwerk de gegevens opnieuw. Als automatische piekintegratie nog steeds onjuiste pieken selecteert, integreert u de piek handmatig door het gebied in het chromatogram te selecteren dat wordt weergegeven in het venster Review Screening (houd hiervoor rekening met de analytische parameters die zijn verkregen voor de EA-standaarden in sectie 5).
    OPMERKING: Het is erg belangrijk om elk monster te bekijken, aangezien sommige belangrijke EA-epimeerparen zeer vergelijkbare retentietijden hebben en verkeerd kunnen worden geïdentificeerd door de software.
  7. Wanneer alle pieken voor alle monsters met succes zijn geïntegreerd, klikt u op het tabblad Batchbeheer in de linkerbovenhoek en geeft u het type monster aan dat bij elke analyse hoort: oplosmiddel, blanco, kwaliteitscontrole, monster of kalibratiepunt. Wijs in het laatste geval elk kalibratiepunt op een niveau toe met een nummer.
  8. Navigeer op hetzelfde tabblad Batchbeheer naar het onderste venster met de naam Batchconcentratie en geef een concentratiewaarde op voor elk niveau dat in de vorige stap is vastgesteld. Zodra dit is gebeurd, klikt u op Concentraties opslaan.
  9. Klik op Batch kwantificeren en wijzig de parameters naar wens (d.w.z. het model dat past bij de kalibratiegegevens, weging, of het model gedwongen wordt nul te overschrijden, enz.). De standaardwaarden zijn geschikt voor de uitvoering van dit protocol, met uitzondering van de weging van de kalibratiecurves, die is overgeschakeld naar 1/x.
    OPMERKING: Aangezien de software slechts één kalibratiecurve tegelijk kan beschouwen, is het noodzakelijk om stap 9.9 twee keer te herhalen om informatie te krijgen over standaard- en matrix-gematchte kalibratiecurves. In dit protocol werden matrix-gematchte kalibratiecurven gebruikt voor de kwantificering van analyten, dus de kalibratiecurves van het oplosmiddel werden eerst beoordeeld, kalibratiegegevens werden geëxtraheerd zoals later uitgelegd in stap 9.13, en ten slotte werden de matrix-gematchte kalibratiecurven geselecteerd om de kwantificering van monsters uit te voeren.
  10. Zodra de kwantificering van moederkorenalkaloïden is uitgevoerd volgens het bestand met de kwantificeringsmethode, klikt u op het tabblad Kwantificering in het bovenste gedeelte van het scherm.
  11. Als de standaardparameters die in stap 9.9 zijn ingesteld geen goede lineariteit en precisie bieden, pas dan de kalibratiecurves aan door de fitting en het gewicht te wijzigen door met de rechtermuisknop op de grafiek te klikken met als doel een goed lineair model (R2 > 0,99) te hebben met voldoende precisie op elk kalibratieniveau (afwijking minder dan 20%).
    OPMERKING: De software markeert de cellen van de kalibratieniveaus die niet de juiste precisie bieden, rood.
  12. Als u klaar bent, klikt u met de rechtermuisknop op de batchmap uiterst links in het scherm en selecteert u Rapport genereren. Selecteer vervolgens Kwantificering van analyten om het rapport naar het gewenste formaat te exporteren.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Eerst werden werkende standaardoplossingen in het LC-IMS-MS-instrument geïnjecteerd om alle identificatiekenmerken (d.w.z. retentietijd, CCS en massaspectra) van elke EA die hier werd geanalyseerd, te verkrijgen. Omdat de identificatieparameters, behalve de exacte massa, aanvankelijk onbekend waren, was de acquisitiemethode gebaseerd op een gebeurtenis met twee scans, te beginnen met een volledige scan van het volledige massaspectrum gevolgd door een bbCID. De retrospectieve manier om di...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Het succesvolle gebruik van dit protocol is gebaseerd op de optimalisatie van de extractieprocedure, eerder uitgevoerd door Carbonell-Rozas et al.17, die het gebruik van een extractieoplosmiddel implementeerden dat effectief genoeg is om EA's te extraheren uit complexe voedselmatrices zoals gerst en tarwe, en een opschoning die relatief lage SSE-waarden opleverde. De keuze van het extractieoplosmiddel is een cruciale stap, gezien de chemische eigenschappen van de ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben geen belangenconflicten te onthullen.

Dankbetuigingen

Dit onderzoek werd gefinancierd door de Consejería de Universidad, Investigación e Innovación - Junta de Andalucía (PROYEXCEL_00195) en de postdoctorale beurs van de Generalitat Valenciana en het Europees Sociaal Fonds+ (CIAPOS/2022/049). De auteurs danken het "Centro de Instrumentación Científica (CIC)" van de Universiteit van Granada voor het verlenen van toegang tot de analytische instrumenten die in dit protocol worden gebruikt.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
AcetonitrileVWR83640.32
Bernstein glasbuizen 4 mLVWR548-0052
Bernstein glasbuizen 12 mLVWR548-0903
Bernstein vials 1.5 mLAgilent5190-9063
Ammonium carbonaatFluka9716
Analytische weegschaal BAS 31 Boeco4400519
Weegschaal CP 323 S Sartorius23-84182
C18Supelco52604-U
Centrifugebuizen, 15 mLVWR525-1082
Centrifugebuizen, 50 mLVWR525-0155
Centrifuge Universal 320 RHettich1406
Compass HyStar BrukerAcquisitiesoftware
DataAnalysisBrukerKwalitatieve software
Elute PLUS UHPLCBruker
EVA EC-S verdamperVLMV830.012.12
Mierenzuur GR voor analyse ACS, Reag. Ph EurMerck100264
Grinder TitanMill300Cecotec1559
MethanolVWR83638.32
Milli-Q waterzuiveringssysteem (18.2 MΩ cm)MilliporeZD5211584
Pipetpunten 1- 5 mLLabortecnic162005
Pipetpunten 100 - 1000 µLLabortecnic1622222
Pipetpunten 5 - 200 µLLabortecnic162001
Pipet Transferpette S variabel, DE-M 10 - 100 µLBRAND704774
Pipet Transferpette S variabel, DE-M 100 - 1000 µLBRAND704780
Pipet Transferpette S variabel, DE-M 500 - 5000 µLBRAND704782
Spuit 2 mLVWR613-2003
Spuitfilter 13 mm, 0.22µmPhenomenexAF-8-7707-12
TASQBrukerKwantitatieve software
timsTOFPro2 IM-HRMSBruker
Vortex Genie 2Scientific Industries15547335
Zorbax Eclipse Plus RRHD C18 kolom (50 x 2.1 mm, 1.8 µm deeltjesgrootte)Agilent 959757-902
Z-Sep+Supelco55299-UZirconium-gebaseerd sorptiemiddel
Ergot alkaloïdenCAS-register sorptiemiddel
Ergocornine (Eco)Techno SpecE178564-36-3
Ergocorninine (Econ)Techno SpecE130564-37-4
Ergocristine (Ecr)Techno SpecE180511-08-0
Ergocristinine (Ecrn)Techno SpecE188511-07-9
Ergokryptine (Ekr)Techno SpecE198511-09-1
Ergopkryptinine (Ekrn)Techno SpecE190511-10-4
Ergometrine (Em)Romer Labs"002067"60-79-7
Ergometrinine (Emn)Romer LabsLMY-090-5ML479-00-5
Ergosine (Es)Techno SpecE184561-94-4
Ergosinine (Esn)Techno SpecE194596-88-3
Ergotamine (Et)Romer Labs"002069"113-15-5
Ergotaminine (Etn)Romer Labs"002075"639-81-6

Referenties

  1. Kanu, A. B., Dwivedi, P., Tam, M., Matz, L., Hill, H. H. Jr Ion mobility-mass spectrometry. J Mass Spectrom. 43 (1), 1-22 (2008).
  2. Gabelica, V., et al. Recommendations for reporting ion mobility Mass spectrometry measurements. Mass Spectrom Rev. 38 (3), 291-320 (2019).
  3. Feuerstein, M. L., et al. Comparability of steroid collision cross sections using three different IM-HRMS technologies: An interplatform study. J Am Soc Mass Spectrom. 33 (10), 1951-1959 (2022).
  4. Regueiro, J., Negreira, N., Berntssen, M. H. G. Ion-mobility-derived collision cross section as an additional identification point for multiresidue screening of pesticides in fish feed. Anal Chem. 88 (22), 11169-11177 (2016).
  5. Regueiro, J., Negreira, N., Hannisdal, R., Berntssen, M. H. G. Targeted approach for qualitative screening of pesticides in salmon feed by liquid chromatography coupled to traveling-wave ion mobility/quadrupole time-of-flight mass spectrometry. Food Control. 78, 116-125 (2017).
  6. Hernández-Mesa, M., Monteau, F., Le Bizec, B., Dervilly-Pinel, G. Potential of ion mobility-mass spectrometry for both targeted and non-targeted analysis of phase II steroid metabolites in urine. Anal Chim Acta: X. 1, 100006(2019).
  7. George, A. C., et al. Interplatform comparison between three ion mobility techniques for human plasma lipid collision cross sections. Anal Chim Acta. 1304, 342535(2024).
  8. Mairinger, T., Causon, T. J., Hann, S. The potential of ion mobility-mass spectrometry for non-targeted metabolomics. Curr Opin Chem Biol. 42, 9-15 (2018).
  9. Hernández-Mesa, M., Escourrou, A., Monteau, F., Le Bizec, B., Dervilly-Pinel, G. Current applications and perspectives of ion mobility spectrometry to answer chemical food safety issues. TrAC Trend Anal Chem. 94, 39-53 (2017).
  10. European, C. Commission Regulation (EU) 2023/915 of 25 April 2023 on maximum levels for certain contaminants in food and repealing Regulation (EC) No 1881/2006. Off J Eur Union. 119, 103-157 (2023).
  11. Carbonell-Rozas, L., et al. Occurrence of egot alkaloids in major and minor cereals from Northern Italy: A three harvesting years scenario. J Agricl Food Chem. 71 (42), 15821-15828 (2023).
  12. Arroyo-Manzanares, N., Gámiz-Gracia, L., García-Campaña, A. M., Diana Di Mavungu, J., De Saeger, S. Fungal Metabolites. Jean-Michel Mérillon, J. -M., Ramawat, K. G. , Springer International Publishing. (2016).
  13. van Dongen, P., de Groot, A. History of ergot alkaloids from ergotism to ergometrine. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 60 (2), 109-116 (1995).
  14. European Food Safety Authority. Human and animal dietary exposure to ergot alkaloids. EFSA J. 15 (7), e04902(2017).
  15. Nam, M., Kim, D., Kim, M. -S. Simultaneous determination of total ergot alkaloids in wheat flour by Orbitrap mass spectrometry. Food Chem. 441, 138363(2024).
  16. García-Juan, A., León, N., Armenta, S., Pardo, O. Development and validation of an analytical method for the simultaneous determination of 12 ergot, 2 tropane, and 28 pyrrolizidine alkaloids in cereal-based food by LC-MS/MS. Food Res Int. 174 (Pt 1), 113614(2023).
  17. Carbonell-Rozas, L., Mahdjoubi, C. K., Arroyo-Manzanares, N., García-Campaña, A. M., Gámiz-Gracia, L. Occurrence of ergot alkaloids in barley and wheat from Algeria. Toxins. 13 (5), 316(2021).
  18. Carbonell-Rozas, L., Gámiz-Gracia, L., Lara, F. J., García-Campaña, A. M. Determination of the main ergot alkaloids and their epimers in oat-based functional foods by ultra-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry. Molecules. 26 (12), 3717(2021).
  19. Carbonell-Rozas, L., et al. Ion mobility-mass spectrometry to extend analytical performance in the determination of ergot alkaloids in cereal samples. J Chromatogr A. 1682, 463502(2022).
  20. European Commission. Commission Implementing Regulation (EU) 2023/2782 of 14 December 2023 laying down the methods of sampling and analysis for the control of the levels of mycotoxins in food and repealing Regulation (EC) No 401/2006. Off J Eur Union. , (2023).
  21. Carbonell-Rozas, L., Vander Cruyssen, L., Dall'Asta, C., Leggieri, M. C., Battilani, P. Fit-for-purpose method development to determine co-occurring multiclass mycotoxins in apple and apple puree samples. Food Anal Methods. 16 (8), 1403-1412 (2023).
  22. Laouni, C., et al. Emerging mycotoxin occurrence in chicken feed and eggs from Algeria. Mycotoxin Res. 40, 447-456 (2024).
  23. Ben Hassouna, K., et al. Mycotoxin occurrence in milk and durum wheat samples from Tunisia using dispersive liquid-liquid microextraction and liquid chromatography with fluorescence detection. Toxins. 15 (11), 633(2023).
  24. Narváez, A., et al. Occurrence and exposure assessment of mycotoxins in ready-to-eat tree nut products through ultra-high performance liquid chromatography coupled with high resolution Q-orbitrap mass spectrometry. Metabolites. 10 (9), 344(2020).
  25. Arroyo-Manzanares, N., Rodríguez-Estévez, V., García-Campaña, A. M., Castellón-Rendón, E., Gámiz-Gracia, L. Determination of principal ergot alkaloids in swine feeding. J Sci Food Agric. 101 (12), 5214-5224 (2021).
  26. Pereira, V. L., Fernandes, J. O., Cunha, S. C. Comparative assessment of three cleanup procedures after QuEChERS extraction for determination of trichothecenes (type A and type B) in processed cereal-based baby foods by GC-MS. Food Chem. 182, 143-149 (2015).
  27. Tuzimski, T., Szubartowski, S. Method development for selected bisphenols analysis in sweetened condensed milk from a can and breast milk samples by HPLC-DAD and HPLC-QqQ-MS: Comparison of sorbents (Z-SEP, Z-SEP Plus, PSA, C18, chitin and EMR-lipid) for clean-up of QuEChERS extract. Molecules. 24 (11), 2093(2019).
  28. Łozowicka, B., Rutkowska, E., Jankowska, M. Influence of QuEChERS modifications on recovery and matrix effect during the multi-residue pesticide analysis in soil by GC/MS/MS and GC/ECD/NPD. Environ Sci Pollut Res. 24 (8), 7124-7138 (2017).
  29. Schummer, C., Xandonella, I., van Nieuwenhuyse, A., Moris, G. Epimerization of ergot alkaloids in feed. Heliyon. 6 (6), e04336(2020).
  30. Cherewyk, J. E., Grusie-Ogilvie, T. J., Parker, S. E., Blakley, B. R., Al-Dissi, A. M. The impact of storage temperature and time on ergot alkaloid concentrations. Toxins. 15 (8), 497(2023).
  31. Silva, Â, Mateus, A. R., Barros, S. C., Silva, A. S. Ergot alkaloids on cereals and seeds: Analytical methods, occurrence, and future perspectives. Molecules. 28 (20), 7233(2023).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Meer artikelen verkennen

Detectie van ergotalkaloïdenvloeistofchromatografie-massaspectrometrievoedselveiligheidsanalysekwantificering van mycotoxinenbotsingsdoorsnedechromatografische scheidingmatrix-gematchte kalibratieQuEChERS-extractieepimeerscheiding
Detectie van gereguleerde moederkorenalkaloïden in voedselmatrices door middel van vloeistofchromatografie-ingesloten ionenmobiliteitsspectrometrie-time-of-flight massaspectrometrie
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.