Zoutoplossing neusspoeling kan worden gebruikt om de nasale immuunmicro-omgeving van honden te bemonsteren. Omdat de aanpak relatief niet-invasief is en het neusweefsel niet verstoort, kan deze serieel worden uitgevoerd. Cellen en eiwitten die zijn verzameld uit de neusspoeltechniek kunnen worden verwerkt voor verschillende laboratoriumanalyses.
Methodenartikel
Zoutoplossing voor bemonstering van de nasale immuunmicro-omgeving van honden
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Het evalueren van de lokale immuunmicro-omgeving van de neusholte van de hond kan belangrijk zijn voor het onderzoeken van normale weefselgezondheid en ziektetoestanden, met name die welke verband houden met lokale ontstekingen. We hebben een techniek geoptimaliseerd om de lokale nasale immuunmicro-omgeving van honden te evalueren via seriële neusspoeling. In het kort, met honden onder narcose en in sternale lighouding, wordt voorverwarmde steriele zoutoplossing in het aangetaste neusgat gespoeld met behulp van een flexibele katheter van zacht rubber. De terugstroom van de vloeistof wordt opgevangen in conische buizen en dit proces wordt herhaald. De vloeistoffen die losgeraakte cellen en eiwitten bevatten, worden samengevoegd en de gepoolde neusspoelingsmonsters worden gefilterd door een celzeef om groot vuil en slijm te verwijderen. Monsters worden gecentrifugeerd en de celpellets worden geïsoleerd voor analyse. Nadat de monsters zijn verwerkt, omvatten analyses die kunnen volgen op nasale spoeling flowcytometrie, transcriptomische analyse van cellen via bulk- of eencellig RNA-seq en/of kwantificering van cytokines die aanwezig zijn in de spoelvloeistof.
Inleiding
Honden ontwikkelen hun hele leven routinematig inflammatoire neusaandoeningen. De onderliggende oorzaak van acute of chronische rhinitis bij honden kan variëren van infectieus (viraal: bijv. griep, para-influenza, herpesvirussen; bacterieel [bijv. Bordetella, mycoplasma's], schimmel [bijv. aspergillose, cryptokokkose]; parasitair [bijv. neusmijten]) tot neoplastisch (bijv. sinonasale maligniteiten, meestal carcinoom of sarcoomhistotypes) tot vreemd materiaal (bijv. vreemd lichaam, intranasale migratie van verplaatste tanden) tot parodontitis, evenals idiopathische inflammatoire rhinitisbij honden 1,2,3,4,5,6,7.
Naast een lichamelijk onderzoek worden verschillende benaderingen gebruikt om de toestand van de sinonasale holte bij honden met neusontsteking te evalueren. Beeldvormingsprocedures kunnen bestaan uit röntgenfoto's (tandheelkunde, schedel), computertomografie (CT) of magnetische resonantiebeeldvorming (MRI). Een andere benadering voor het in beeld brengen van de neusholte is rhinoscopie. Weefselbemonstering kan bestaan uit het verkrijgen van neusuitstrijkjes, borstelmonsters of weefselbiopsieën, waaruit cytologische en/of histopathologische evaluatie kan worden uitgevoerd, evenals het indienen van monsters voor schimmel- of bacteriecultuur. Deze monsters kunnen op verschillende manieren worden verkregen, variërend van "blinde" bemonstering tot beeldgeleide met rhinoscopie of geavanceerde beeldvorming, en verkregen via de neusgaten, van de nasopharynx, of met een chirurgische benadering van trephination, rhinotomie of sinusotomie.
Neusspoeling, waarbij steriele zoutoplossing in de neusholte wordt toegediend, is ook gebruikt voor het bemonsteren van de neusholte van de hond voor diagnostische en therapeutische doeleinden. Een alternatieve versie van de nasale spoeltechniek die is gebruikt voor nasale tumoren wordt nasale hydropulsie genoemd, beschreven als krachtige neusspoeling, die grote tumormonsters kan losmaken voor diagnostische evaluatie en therapeutische verlichting kan bieden voor de verbetering van klinische symptomen geassocieerd met de neuskanker8.
We presenteren hier een andere versie van de nasale spoeltechniek voor het beoogde doel om cellen en eiwitten van de nasale immuunmicro-omgeving te verzamelen en te analyseren. Door middel van een zachte, relatief niet-invasieve benadering hebben we deze nasale spoelingstechniek geoptimaliseerd voor seriële bemonstering van de nasale immuunmicro-omgeving. In onderzoeken met honden met niet-ontstoken neusholten, actieve herpesvirusinfectie en sinonasale tumoren, hebben we het nut van neusspoeling aangetoond voor het verzamelen en verwerken van monsters voor stroomafwaartse toepassingen 9,10.
In dit manuscript beschrijven we een techniek van zoutoplossing neusspoeling voor seriële bemonstering van de nasale immuunmicro-omgeving van honden. We bieden protocoldetails voor het effectief verkrijgen van het neusspoelingsmonster met minimale verstoring van de weefsels en vervolgens het verwerken van de monsters voor een verscheidenheid aan analyses.
Protocol
Deze neusspoelingsprocedure is goedgekeurd door de Colorado State University Institutional Animal Care and Use Committee en Clinical Review Board (IACUC #2425). Een schema van de neusspoelingsmethode wordt weergegeven in figuur 1.
1. Voorbereiding op de neusspoeling
- Vul de dag voor de neusspoeling vijf spuiten van 20 ml met steriele fysiologische zoutoplossing (0,9% natriumchlorideoplossing) en sluit af met een dop. Plaats de spuiten in een couveuse die is ingesteld op 37 °C, zodat ze een nacht kunnen opwarmen.
2. Positionering van de hond voor de neusspoeling
- Verdoving de hond voor de procedure (bijv. met intraveneuze (IV) injectie van dexmedetomidine (1-4 μg/kg) en butorfanol (0,2-0,5 mg/kg) via een IV-katheter), gevolgd door toediening van propofol IV (2-5 mg/kg) getitreerd voor intubatie; Handhaaf de anesthesie met 1-2% inhalatiemiddel isofluraan.) Bevestig de juiste diepte van de anesthesie door te controleren op ooglidrespons en kaaktonus.
- Smeer de ogen in om uitdroging tijdens de procedure te voorkomen.
- Bewaak cardiale telemetrie, bloeddruk, capnografie en pulsoximetriewaarden tijdens de procedure.
- Plaats de verdoofde hond in sternale lighouding. Plaats het hoofd van de hond zo dat het op een natuurlijke en comfortabele manier in een neerwaartse hoek staat vanaf de rand van de behandeltafel voor een optimale afname van neusspoelingsmonsters.
- Blaas de manchet van de endotracheale tube op om een goede afdichting van de luchtweg te garanderen.
3. Het uitvoeren van de neusspoeling
- Knip een 8 FR steriele, rode rubberen katheter aan de basis af, zodat deze goed past op een van de voorgevulde spuiten van 20 ml die de warme zoutoplossing bevatten. Meet een steriele rode rubberen katheter zo af dat de distale punt van de katheter ongeveer halverwege de neusholte uitsteekt wanneer deze door het neusgat wordt ingebracht. Als u een neustumor bemonstert, gebruik dan beeldvorming of rhinoscopische begeleiding om de locatie van het rostrale aspect van de neustumor te schatten voor het meten van de lengte van de rode rubberen katheter, zodat de punt zich uitstrekt tot het rostrale aspect van de tumor.
- Knip vervolgens de katheter aan de punt af voor de gedefinieerde intranasale katheterlengte, zodat de punt op de juiste plaats terechtkomt wanneer deze in de neusholte wordt ingebracht. Houd echter rekening met een extra lengte voor de basis van de katheter die buiten het neusgat uitsteekt (katheterlengte van het fixatiepunt van de spuit tot de ingang van het neusgat, ongeveer 3-5 cm). Breng een markering met een permanente marker aan op het onderste uiteinde van de katheter om het startpunt aan te geven, dat overeenkomt met de ingang van het neusgat; De vooraf bepaalde katheterlengte strekt zich intranasaal uit, waarbij de katheterpunt op de gewenste plaats in de neusholte wordt geplaatst.
- Voor het uitvoeren van de neusspoelingsprocedure is de deelname van twee personen vereist. Maak één persoon (persoon A) verantwoordelijk voor het inbrengen van de katheter in de neusholte en het toedienen van de spoeling en de andere persoon (persoon B) voor het verzamelen van het monster wanneer het de neus verlaat.
- Laat persoon A zich voor en onder het hoofd van de hond positioneren. Laat persoon A met gehandschoende handen de punt van de rode rubberen katheter voorzichtig in het mediale deel van de neusholte leiden en deze naar voren brengen totdat de markering op de katheter op één lijn ligt met de buitenkant van het neusgat. Zorg er tijdens dit proces voor dat de katheter is aangesloten op de spuit met de verwarmde steriele zoutoplossing. Laat persoon B een conische slang van 50 ml onder het neusgat houden met de katheter op zijn plaats.
- Persoon A sluit voorzichtig het contralaterale neusgat af en begint de zoutoplossing in de neusholte te brengen met langzame, constante druk of met een gepulseerd infuus. Terwijl het hoofd van de hond in een neerwaartse hoek wordt geplaatst, verzamelt persoon B de vloeistof die via de zwaartekracht uit de neusholte wegvloeit in de conische buis van 50 ml.
- Herhaal deze neusspoelingstechniek voor een totaal van in totaal vijf zoutoplossingspoelingen van 20 ml, waarbij u indien nodig conische buizen vervangt om de gepoolde monsters te verzamelen. Noteer het totale volume van de verzamelde neusspoelvloeistof in verhouding tot de hoeveelheid met zoutoplossing toegediende oplossing na voltooiing van de procedure.
- Eenmaal voltooid, indien verdoofd met dexmedetomidine, intramusculair hetzelfde volume atipamezol toedienen als gebruikt voor dexmedetomidine, en laat de hond herstellen van anesthesie. Om voorzichtig te zijn, houdt u de hond in sternale lighouding met het hoofd naar beneden gericht om extra afvoer van eventuele resterende zoutoplossing uit de neusspoeling te vergemakkelijken.
4. Verwerking van het neusspoelingsmonster
- Draai en/of pipetteer voorzichtig de neusspoelingsmonsters in de conische buisjes om klonten puin en cellen te breken. Haal de gepoolde neusspoelingsmonsters door een 70 μm celzeeffilter om groot vuil en slijm te verwijderen. Centrifugeer de monsters bij 300 × g gedurende 5-10 minuten om een celpellet te vormen.
- Verzamel het bovenstaande via aspiratie met een pipet en deponeer het in een schone buis voor analyse van interessante eiwitten.
- Resuspendeer celpellets in fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) of voorkeursoplossing voor interessante celtesten.
- Om rode bloedcellen uit de monsters te verwijderen, voert u ammoniumchloride-kalium (ACK) lysis uit om genucleeerde cellen te verzamelen uit neusspoeling 11,12.
Resultaten
Bij deze neusspoelmethode zal het afgenomen monster er enigszins troebel uitzien, mogelijk met zichtbare stukjes celresten en slijm wanneer de buis wordt rondgedraaid. Een monster wordt als besmet met perifeer bloed beschouwd als de spoelingsprocedure per ongeluk bloedingen veroorzaakt en het monster rood getint is. Hoewel een deel van de geïnfuseerde zoutoplossing tijdens de procedure verloren zal gaan, wordt een negatieve spoeling overwogen als de geïnfuseerde zoutoplossing niet terug uit het neusgat en in de buis stroomt; Mogelijke oorzaken kunnen zijn dat het hoofd niet voldoende naar beneden is gekanteld om een effectieve terugstroming mogelijk te maken, dat het monster caudaal of lateraal door het contralaterale neusgat naar buiten is geleegd, of dat de rode rubberen katheter niet stevig aan de spuit is bevestigd en dat de zoutoplossing vanaf het aansluitpunt naar buiten is gelekt.
Wanneer neusspoelingsmonsters met succes zijn verzameld bij honden met neuskanker, wordt een aantal kerncellen verwacht in het bereik van 1 × 10 6-200 × 106, met 75-96% levende cellen. Als alternatief, wanneer neusspoelingsmonsters met succes zijn verzameld van honden met verder gezonde, niet-ontstoken neusholten, lag het celgetal in het bereik van 7 × 105-2 × 106, met 6-16% levende cellen. Een representatief beeld van cytologische monsters verkregen uit nasale spoelingsbemonstering van tumordragende honden is te zien in figuur 2. Bovendien wordt in figuur 3 de flowcytometrische evaluatie weergegeven van cellulaire populaties geanalyseerd op basis van neusspoelingsmonsters van gezonde en tumordragende honden. Het zou te verwachten zijn dat het aantal cellen en het percentage levensvatbaarheid lager dan deze bereiken erop zouden wijzen dat de nasale spoelingsprocedure en de monsterafname niet succesvol waren. Tabel 1 geeft een overzicht van de resultaten van de neusspoelingstechniek die door de auteurs is uitgevoerd met betrekking tot het aantal uitgevoerde procedures, het aantal honden, de toestand van de neusholte (gezond of tumordragend), de opbrengst van het aantal cellen met kerncellen, de levensvatbaarheid van cellen verkregen voor de procedure, en of het spoelingsmonster als een succes of mislukking werd beschouwd voor stroomafwaartse analyse. Voor de doeleinden die werden uitgevoerd met de neusspoelingsmonsters die in tabel 1 zijn opgenomen, werd een minimale celnummeropbrengst van 150.000 beschouwd als een succesvolle afname van neusspoelingsmonsters.
Bij deze neusspoeltechniek wordt steriele 0,9% zoutoplossing gebruikt om de cellen te verzamelen. Als alternatief kan Hartmann-oplossing (Ringer-lactaatoplossing) worden overwogen; monsters die zijn verzameld met zoutoplossing of Hartmann-oplossing zouden echter moeten worden getest om vergelijkbare levensvatbaarheid en resultaten voor de cellen van belang te garanderen. Bovendien zou een alternatief voor het gebruik van een rode rubberen katheter bij niet-tumordragende honden kunnen zijn om de neusspoeling uit te voeren met een Foley-katheter. Hoewel het niet wordt gebruikt in de neusspoeltechniek die hier wordt gepresenteerd, zou het gebruik van een Foley-katheter het mogelijk maken om de ballon aan het uiteinde van de katheter op te blazen, waardoor de neusholte wordt afgesloten en caudaal vochtverlies wordt voorkomen. Hoewel niet getest in de hier gepresenteerde benadering van de verwerking van nasale spoeling, kan de toevoeging van hyaluronidase aan het neusspoelingsmonster worden overwogen om het slijm dat in het neusspoelingsmonster is verzameld, af te breken en meer cellen vrij te maken voor analyse. Dit zou ook moeten worden geoptimaliseerd om ervoor te zorgen dat de resultaten niet worden gewijzigd door de toevoeging van hyaluronidase aan de behandelingsprocedure voor nasale spoeling.
Gepubliceerde resultaten verkregen uit succesvolle neusspoelingsprocedures die zijn uitgevoerd bij honden die deelnamen aan een klinische studie naar hondenkanker, worden weergegeven in figuur 310. De resultaten in figuur 3 zijn afkomstig van een onderzoek naar de impact van electieve nodale bestraling op de lokale immuunmicro-omgeving van honden met sinonasale tumoren waarvan de tumoren alleen of in combinatie met regionale bestraling van de cervicale lymfeklieren werden bestraald. Door middel van seriële bemonstering van de neusholte van honden in de klinische studie met neusspoeling, toonde flowcytometrische analyse van verzamelde cellen een significante afname van de populaties van effector-T-cellen op de laatste dag van radiotherapie wanneer regionale lymfeklieren gelijktijdig met de sinonasale tumor werden bestraald in vergelijking met honden die radiotherapie kregen gericht op de tumor en de regionale lymfeklieren werden gespaard. Dit toont het nut aan van het serieel bemonsteren van de neusholte met spoeling om verschuivingen in celpopulaties op verschillende punten en met verschillende behandelingsomstandigheden te onderzoeken.
Figuur 1: Schema van de neusspoelingsmethode. Verwarmde, steriele zoutoplossing wordt met behulp van een rode rubberen katheter in de neusholte van verdoofde honden toegediend. De neusspoelvloeistof wordt opgevangen in een buis terwijl deze uit de neus loopt. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2: Cellulaire samenstelling van een neusspoelingsmonster verzameld bij een hond met een neustumor. Representatief beeld van cytologische monsters verkregen uit bemonstering van de neusspoeling (500x vergroting, gemodificeerde Wright-Giemsa-kleuring). Neutrofielen (pijlen) zijn de overheersende cellen, met een paar plaveiselepitheelcellen (pijlpunt) en kleine rijpe lymfocyten (gemarkeerd in het vierkante vak). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 3. Flowcytometrische analyse van neusspoelingsmonsters verzameld bij gezonde en tumordragende honden. Vergelijking van de overvloed aan levende cellen, immuuncellen en neutrofielen tussen gezonde honden (blauw, n = 3) en tumordragende honden met sinonasaal carcinoom (rood, n = 4). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 4: Flowcytometrische analyse van cellen verzameld uit neusspoeling van honden die deelnamen aan een klinische studie waarin de impact van electieve nodale bestraling (ENI) op de lokale immuunmicro-omgeving werd onderzocht. Kwantificering van CD4 (CD5+CD4+) en CD8 (CD5+CD8+) T-cellen uit neusspoelmonsters. Honden die gelijktijdig met ENI werden behandeld met tumorbestraling (n = 3) hadden significant verminderde effector CD4- en CD8 T-cellen op de laatste dag van de bestraling (dag 3) in vergelijking met honden die werden behandeld met straling gericht op de tumor alleen (n = 3). Dit cijfer is gewijzigd ten opzichte van Darragh et al.10. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
| Gezond (n=3) | Tumor dragend (n= 19) | |
| Aantal uitgevoerde procedures | 3 | 80 |
| Aantal cellen | 0,7 x 106 - 2,8 x 106 | 1,6 x 106 - 210 x 106; mediaan: 8,7 x 106 |
| Levensvatbaarheid van cellen | 6.3 - 15.9% | 75% - 96%; mediaan: 87% |
| Slagingspercentage | 100% | 98.80% |
Tabel 1: Samenvatting van uitgevoerde neusspoelingsprocedures en cellulaire kenmerken van de verkregen monsters.
Discussie
Er zijn verschillende cruciale stappen in het protocol voor neusspoeling. Met betrekking tot de hond die de neusspoelingsprocedure ondergaat, moet de hond zich binnen een voldoende diep vlak van anesthesie bevinden zodat hij niet reageert op het plaatsen van de katheter of het toedienen van de spoeling. Als ze onder narcose reactief zijn, kan dit de kwaliteit en kwantiteit van de afname van spoelmonsters in gevaar brengen, en mogelijk ook het risico op acuut neusweefselletsel als gevolg van lokaal trauma van de intranasale katheter of voor de hond die de spoelvloeistof opzuigt, vergroten.
De positionering van het hoofd van de hond is ook van cruciaal belang voor een optimale afname van neusspoelingsmonsters. Als de neerwaartse hoek van het hoofd onvoldoende is voor de zwaartekrachtafhankelijke terugstroming van de ingedruppelde zoutoplossing, kan de neusspoelvloeistof caudaal stromen en kan het monster verloren gaan via de nasopharynx. Daarnaast is een duidelijke communicatie tussen persoon A en persoon B belangrijk tijdens de neusspoeling. Persoon B kan snelle aanpassingen nodig hebben voor het plaatsen van de opvangbuis, aangezien de vloeistof uit het neusgat loopt terwijl persoon A doorspoelt; de zichtbaarheid van de spoelvloeistof die in de conische buis stroomt, is mogelijk niet helemaal duidelijk voor zowel persoon A als persoon B tijdens de procedure, dus actieve communicatie tijdens het hele proces is de sleutel tot een succesvolle monsterafname. Zodra het neusspoelingsmonster is verzameld en de levensvatbaarheid van de cellen moet worden behouden voor toekomstige analyse, is het van cruciaal belang dat cellen worden bewaard in een fysiologische pH-oplossing, zoals 0,9% zoutoplossing of 1x PBS.
Tijdens de afname- en verwerkingsfasen kunnen wijzigingen worden aangebracht in het protocol voor neusspoeling. Tijdens het afnemen van monsters kan de diepte van de anesthesie worden aangepast om ervoor te zorgen dat de hond niet reageert op de neusspoeling. Dit kan worden bereikt door het percentage van het verdovingsgas (bijv. isofluraan) aan te passen of een bolus kortwerkend intraveneus anestheticum (bijv. propofol) toe te dienen.
Als na het indruppelen van de zoutoplossing in de neusholte slechts een kleine hoeveelheid vloeistof in de buis wordt verzameld, verplaats dan het hoofd van de hond in een neerwaartse hoek, zodat het comfortabel van de rand van de tafel rust, om de kans op zwaartekracht te vergroten om de vloeistof uit de neus te laten weglopen. Als wordt opgemerkt dat er vloeistof uit het contralaterale neusgat wegloopt, sluit het contralaterale neusgat dan goed af voor de volgende spoelingen. Als tijdens de verwerkingsfase het aantal aanvankelijke monstercellen laag is, centrifugeer dan het bovenstaande deel van het monster opnieuw om eventuele extra cellen te verzamelen die aanwezig zijn om de totale opbrengst te verhogen.
Er zijn opmerkelijke beperkingen aan het gebruik van de neusspoelingsmethode om de nasale immuunmicro-omgeving van honden te analyseren. Met deze techniek zijn de neusspoelingsmonsters een verzameling van oppervlaktecellen en eiwitten uit de neusholte die gemakkelijk kunnen worden losgemaakt. Deze oppervlaktecellen en eiwitten zijn mogelijk niet volledig representatief voor de diepere weefsels van de nasale micro-omgeving van de hond. Er worden inspanningen geleverd om de cellulaire en eiwitprofielen van neusspoeling bij honden te vergelijken met biopsiemonsters om de overeenkomsten en verschillen in deze factoren tussen de twee bemonsteringstechnieken van de neusholte te bepalen.
Ondanks deze beperkingen biedt de nasale spoeltechniek voor het bemonsteren van de nasale immuunmicro-omgeving van honden een alternatieve benadering van bestaande methoden. In vergelijking met een weefselbiopsie of zelfs een rhinoscopieprocedure is neusspoeling relatief niet-invasief voor de hondenpatiënt. Het verzamelen van cellen en eiwitten via neusspoeling in vergelijking met weefselbiopsie vermindert het risico op klinisch zorgwekkende, langdurige of significante acute bloeding; Na de neusspoelingsprocedure is er waarschijnlijk ook minder lokale ontsteking en ongemak in vergelijking met een neusweefselbiopsie. Daarom kan de neusspoeling serieel worden uitgevoerd om in de loop van de tijd meerdere monsters te verzamelen voor analyses. Bovendien is er een groter relatief gemak bij het verwerken van de neusspoelingsmonsters in vergelijking met weefselbiopsiemonsters met betrekking tot het scheiden van de cellulaire component van de eiwitten in het bovenstaande voor stroomafwaartse laboratoriummethoden en assays.
De nasale spoelingsmethode heeft het potentieel voor belangrijke toepassingen in onderzoeksgebieden die verband houden met de immuunmicro-omgeving. In kankeronderzoek is de neusspoelingstechniek gebruikt10 en kan deze worden gebruikt om seriële veranderingen in de micro-omgeving van de neusholte bij tumordragende honden te documenteren in relatie tot behandelingsomstandigheden; Deze neusspoelingsmonsters kunnen ook waardevol blijken te zijn bij het correleren van verschuivingen in de immuunmicro-omgeving om de reacties op de behandeling van kanker beter te begrijpen. Vergelijkbare aspecten van het onderzoeken van seriële veranderingen in de nasale immuunmicro-omgeving kunnen worden onderzocht en onderzocht voor tal van veterinaire klinische en translationele infectieuze en inflammatoire onderzoeksgebieden.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben geen belangenconflicten te melden.
Dankbetuigingen
De neusspoelingstechniek voor honden die hierin wordt beschreven, is geoptimaliseerd door middel van projecten die worden ondersteund door K01 OD03109, CCTSI Colorado Pilot Grant Award, CSU CVMBS College Research Council Shared Resources Program en CO HNC SPORE CA261605: Career Enhancement Program. Figuur 1 is gemaakt met BioRender.com.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 1.5 mL Tubes | Eppendorf | 05-402 | |
| 1000 µL Pipette | VWR | 89079-974 | |
| 1x PBS | Corning | 21-040-CV | |
| 20 mL Syringes | VWR | BD302830 | |
| 50 mL Conical Tubes | VWR | 89039-656 | |
| 70 µm Cell Strainer | Fisherbrand | 22-363-548 | |
| 8FR Sterile Red Rubber Catheter | Med Vet International | 50-252-2428 | |
| ACK Lysis Buffer | Gibco | A1049201 | |
| Centrifuge | Beckman Coulter | 366816 | |
| Physiological Saline (0.9%) | Vetivex | 17033-492-01 | |
| Vortex | VWR | 10153-838 |
Referenties
- Cohn, L. A. Canine nasal disease: An update. Vet Clin: Small Anim Pract. 50 (2), 359-374 (2020).
- Mortier, J., Blackwood, L. Treatment of nasal tumours in dogs: A review. J Small Anim Pract. 61 (7), 404-415 (2020).
- Plickert, H., Tichy, A., Hirt, R. Characteristics of canine nasal discharge related to intranasal diseases: A retrospective study of 105 cases. J Small Anim Pract. 55 (3), 145-152 (2014).
- Windsor, R. C., Johnson, L. R. Canine chronic inflammatory rhinitis. Clin Tech Small Anim Practice. 21 (2), 76-81 (2006).
- Van Pelt, D. R., Mckiernan, B. C. Pathogenesis and treatment of canine rhinitis. Vet Clin North Am Small Anim Pract. 24 (5), 789-806 (1994).
- Hazuchova, K., Neiger, R., Stengel, C. Topical treatment of mycotic rhinitis-rhinosinusitis in dogs with meticulous debridement and 1% clotrimazole cream: 64 cases (2007-2014). JAVMA. 250 (3), 309-315 (2017).
- Lobetti, R. Idiopathic lymphoplasmacytic rhinitis in 33 dogs. JS Afr Vet Assoc. 85 (1), 1-5 (2014).
- Ashbaugh, E. A., Mckiernan, B. C., Miller, C. J., Powers, B. Nasal hydropulsion: A novel tumor biopsy technique. JAAHA. 47 (5), 312-316 (2011).
- Wheat, W., et al. Local immune and microbiological responses to mucosal administration of a liposome-tlr agonist immunotherapeutic in dogs. BMC Vet Res. 15 (1), 330(2019).
- Darragh, L. B., et al. Elective nodal irradiation mitigates local and systemic immunity generated by combination radiation and immunotherapy in head and neck tumors. Nat Commun. 13 (1), 7015(2022).
- Pinard, C. J., et al. Evaluation of lymphocyte-specific programmed cell death protein 1 receptor expression and cytokines in blood and urine in canine urothelial carcinoma patients. Vet Comp Oncol. 20 (2), 427-436 (2022).
- Choi, J. W., et al. Development of canine pd-1/pd-l1 specific monoclonal antibodies and amplification of canine t cell function. PLoS One. 15 (7), e0235518(2020).
Herprints en machtigingen
