Isolatie van kleine extracellulaire blaasjes afgeleid van mesenchymale stamcellen uit monsters met een groot volume met GMP-conformiteit voor klinische onderzoeken

Yixiao Zhou; Chunge Ren; Qiongfang Zhang; Pan Xie; Min Chen; Hongjia Zhang; Yanxia Wang; Qin Niu; Bianbaduojie; Yong Liu; Baishijiao Bian

doi:10.3791/67644

Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Isolatie van kleine extracellulaire blaasjes afgeleid van mesenchymale stamcellen uit monsters met een groot volume met GMP-conformiteit voor klinische onderzoeken

911 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/67644

⸱

28 maart 2025

Yixiao Zhou^*¹^,² , Chunge Ren^*¹^,² , Qiongfang Zhang³ , Pan Xie³ , Min Chen¹^,² , Hongjia Zhang¹^,² , Yanxia Wang⁴ , Qin Niu⁴ , Bianbaduojie⁵ , Yong Liu¹^,²^,⁶ , Baishijiao Bian¹^,²^,⁵^,⁶^,⁷

¹Southwest Hospital/Southwest Eye Hospital, Third Military Medical University (Army Medical University), ²Key Lab of Visual Damage and Regeneration & Restoration of Chongqing, ³Department of Nephrology, First Affiliated Hospital, Third Military Medical University (Army Medical University), ⁴Institute of Pathology and Southwest Cancer Center, Southwest Hospital, Third Military Medical University (Army Medical University) and Key Laboratory of Tumor Immunopathology, ⁵Army 953 Hospital, Shigatse Branch of Xinqiao Hospital, Third Military Medical University (Army Medical University), ⁶Jinfeng Laboratory, ⁷Department of Trauma Medical Center, Daping Hospital, State Key Laboratory of Trauma and Chemical Poisoning, Army Medical University

^* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Kleine extracellulaire blaasjes afgeleid van mesenchymale stamcellen (MSC-sEV's) zijn onderstreept als een celvrije behandelingsmodaliteit met minimale nadelige effecten. Deze studie biedt een protocol dat hemodialyse combineert met ultracentrifugatie, waardoor de tijd die aan het hele proces wordt besteed aanzienlijk wordt verminderd en de naleving van de normen voor goede productiepraktijken (GMP) wordt gegarandeerd.

Samenvatting

Kleine extracellulaire blaasjes (sEV) afgeleid van mesenchymale stamcellen (MSC-sEV's) zijn onderstreept als een celvrije behandelingsmodaliteit met minimale bijwerkingen. Traditionele extractiemethoden zoals ultracentrifugatie en chromatografie met uitsluiting van grootte worden daarentegen beperkt door hun tijdsintensiteit, kosten en schaalbaarheid. Om deze beperkingen te overwinnen, stellen we een methode voor die een hemodialysator en ultracentrifugatie integreert. Deze aanpak maakt gebruik van een hemodialyse-apparaat met een 100 kDa moleculair gewicht cut-off (MWCO) membraan, dat selectief sEV's concentreert terwijl een overvloed aan eiwitten wordt gefilterd, waardoor de opbrengst en zuiverheid van sEV's worden verbeterd. Deze eerste zuiveringsstap wordt gevolgd door ultracentrifugatie om de sEV-bereiding verder te verfijnen. De integratie van deze twee technologieën verminderde niet alleen de tijd die aan het hele proces werd besteed aanzienlijk, maar zorgde er ook voor dat werd voldaan aan de normen voor goede productiepraktijken (GMP). De methode toont hier een hoge efficiëntie aan bij het isoleren van sEV's uit een groot aantal monsters, wat een aanzienlijke vooruitgang biedt ten opzichte van traditionele methoden. Dit protocol is veelbelovend voor het versnellen van de vertaling van op EV gebaseerde therapieën naar de klinische praktijk door een schaalbare, kosteneffectieve en GMP-conforme oplossing te bieden.

Inleiding

Kleine extracellulaire blaasjes afgeleid van mesenchymale stamcellen (MSC-sEV's) zijn heterogene blaasjes verrijkt met meerdere componenten zoals mRNA, micro-RNA, cytokines, lipiden en metabolieten¹. In de afgelopen jaren hebben veel onderzoeken het immense therapeutische potentieel van MSC-SEV's onderstreept als een celvrije behandelingsmodaliteit met minimale nadelige effecten², wat veelbelovend is voor het aanpakken van een spectrum van aandoeningen, waaronder veroudering, weefseldegeneratie, kanker en ontstekingsaandoeningen ^3,4,5,6