Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Maagslijmvlies Kwantitatieve polymerasekettingreactieanalyse voor het detecteren van Helicobacter pylori en antibioticaresistentie

1.1K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/67704

⸱

7 maart 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory Medicine, Guangdong Provincial People's Hospital (Guangdong Academy of Medical Sciences), Southern Medical University

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Een snelle en nauwkeurige methode voor de detectie van H. pylori en het testen van resistentie tegen geneesmiddelen is zeer belangrijk voor het efficiënt uitroeien van H. pylori in de klinische praktijk. Dit protocol heeft tot doel een specifieke methodologie te presenteren met betrekking tot kwantitatieve polymerasekettingreactie (qPCR) van het maagslijmvlies voor de snelle detectie van H. pylori en antibioticaresistentie.

Samenvatting

Helicobacter pylori is een belangrijke ziekteverwekker die bijna de helft van de wereldbevolking infecteert en de volksgezondheid bedreigt vanwege de toenemende antibioticaresistentie. Bovendien is Helicobacter pylori ook verantwoordelijk voor chronische gastritis, maag- en darmzweren, maagcarcinoom en maagslijmvlies-geassocieerd lymfoïde weefsel (MALT) lymfoom. Daarom is het essentieel om een tijdige en nauwkeurige diagnose van H. pylori uit te voeren en de antibioticaresistentie te bepalen. Tegenwoordig omvatten de bestaande methoden voor de diagnose van H. pylori voornamelijk de snelle ureasetest (RUT), de ureumademtest (UBT), de serumantilichaamtest, de antigeentest, gastroscopie en bacteriecultuur. Bacteriën konden echter niet worden gekweekt via de eerste vijf detectiemethoden, om nog maar te zwijgen van de detectie van resistentie tegen geneesmiddelen. De bacteriecultuur is tijdrovend en gevoeligheidstests voor antibiotica kunnen niet snel en routinematig worden uitgevoerd. In klinische omgevingen is de snelle en nauwkeurige identificatie van H. pylori en zijn gevoeligheid voor antibiotica cruciaal voor de effectieve eliminatie ervan. Het doel van dit protocol is het schetsen van een gerichte aanpak waarbij gebruik wordt gemaakt van kwantitatieve polymerasekettingreactie (qPCR) op maagslijmvliesmonsters om de diagnose van H. pylori te versnellen en de resistentie tegen antimicrobiële middelen te beoordelen. qPCR werd gebruikt om het ureA-gen voor H. pylori-infectie en mutaties in de 23S rRNA- en gyrA-genen te detecteren die geassocieerd zijn met resistentie tegen respectievelijk claritromycine en chinolonen. Momenteel blijven er uitdagingen op het gebied van maagslijmvlies qPCR vanwege het ontbreken van standaard operationele procedures. Daarom is het essentieel om methodologieën met experimentele details te delen om nauwkeurige communicatie van experimentele procedures te garanderen, wat bijdraagt aan gouden standaardprotocollen die meer transparantie mogelijk maken. Over het algemeen biedt dit protocol een economisch en snel alternatief voor conventionele methoden voor het beoordelen van H.pylori-infectie en de resistentie tegen antibiotica door de toepassing van kwantitatieve polymerasekettingreactie (qPCR)-technologie.

Inleiding

H. pylori is een gramnegatieve bacterie die kan overleven in de aanwezigheid van een laag zuurstofgehalte. Het organisme behoort tot verschillende verschillende genetische populaties en vertoont een hoge genetische diversiteit. Hoewel het organisme meestal spiraalvormig is, kan het worden veranderd in een staaf1. Het is een belangrijke ziekteverwekker die bijna 50% van de wereldbevolking infecteert2. Meestal treedt infectie op wanneer patiënten tijdens de kindertijd gezonde dragers blijven en manifesteren de symptomen zich later in de volwassenheid. Er is gemeld dat het relatief is aan chronische gastritis, maag- en darmzweren, maagcarcinoom en maagslijmvlies-geassocieerd lymfoïde weefsel (MALT) lymfoom3. Verschillen in de manifestaties van H. pylori-infectie kunnen voortkomen uit de pathogeniteitselementen van verschillende bacteriestammen, evenals de kenmerken van de gastheer en hun voedingspatronen4. Het onderzoek geeft aan dat mannen die roken en alcohol gebruiken een hoger risico lopen om H. pylori-infecties op te lopen5. De werkzaamheid van het elimineren van H. pylori voor het voorkomen van maagkanker en precancereuze laesies is in verschillende onderzoeken geverifieerd 6,7. Daarom werd de uitroeiing van H. pylori geadviseerd als preventieve maatregel door het Internationaal Agentschap voor Kankeronderzoek van de Wereldgezondheidsorganisatie (WHO)8.

De snelle en nauwkeurige diagnose van H. pylori-infectie is een cruciaal onderdeel van de behandeling voor de meeste mensen die lijden aan asymptomatische dyspepsie. De diagnose van H. pylori omvat een combinatie van zowel invasieve als niet-invasieve benaderingen. De invasieve technieken omvatten doorgaans endoscopie voor directe visualisatie, histologische analyse van weefselmonsters, de snelle ureasetest (RUT) om bacteriële activiteit te detecteren en het kweken van de bacteriën. Aan de andere kant omvatten niet-invasieve strategieën de ureumademtest (UBT), die het bacteriële metabolisme meet; de ontlastingsantigeentest (SAT), die bacteriële eiwitten in de ontlasting detecteert; serologische tests die zoeken naar antilichamen in het bloed; en moleculaire diagnostiek waarbij genetisch materiaal wordt gebruikt voor detectie. Hoewel elk van deze diagnostische methoden zijn eigen voor- en nadelen heeft, is er in de klinische praktijk geen enkele methode die universeel wordt erkend als de ultieme benchmark9.

Momenteel is de primaire behandeling voor H. pylori-infecties antibiotica. De slagingspercentages van antimicrobiële therapieën gericht op het uitroeien van H. pylori zijn echter aan het afnemen, wat toe te schrijven is aan verschillende factoren. De belangrijkste oorzaken van ineffectiviteit van de behandeling worden vermoed de resistentie van de bacteriën tegen antimicrobiële middelen en de therapietrouw van patiënten aan het voorgeschreven regimete zijn 10. Met name stammen van H. pylori die resistent zijn tegen claritromycine zijn het onderwerp geweest van uitgebreid onderzoek11. De incidentie van dergelijk verzet neemt in tal van landen toe. Resistentie tegen H. pylori is voornamelijk te wijten aan mutaties in het variabele regio-gen van 23S rRNA, dat conformationele veranderingen in het ribosoom veroorzaakt. Bijgevolg verandert de bindingsplaats voor claritromycine, wat leidt tot een verzwakte affiniteit tussen H. pylori en claritromycine, waardoor de remming van de bacteriële eiwitsynthese wordt voorkomen12. Van mutaties op de posities A2143G, A2142G en A2142C binnen het 2,9 kb-segment van het 23S rRNA-gen is bekend dat ze resistentie tegen claritromycine verlenen. De verspreiding van resistentie tegen fluoroquinolonen is ook een focus geweest van tal van onderzoeken. Studies hebben resistentiepercentages tegen levofloxacine gedocumenteerd van 34,5% in China en 22,1% in Italië13. Quinolongeneesmiddelen werken voornamelijk op H. pylori's topoisomerase II door de enzymactiviteit te remmen, de DNA-synthese en -replicatie en de secundaire structuur te beïnvloeden, waardoor antibacteriële doeleinden worden bereikt. Als er mutaties optreden in de genen die coderen voor de topoisomerase-subeenheden, gyrA en gyrB, zal dit de binding van antibiotica zoals levofloxacine en het enzym voorkomen, wat resulteert in het onvermogen om de replicatie van het H. pylori-genoom te remmen, waardoor resistentie ontstaat. Hiervan zijn de hotspots van mutaties in het gyrA-gen geconcentreerd op de aminozuren 87 en 91, terwijl mutaties in het gyrB-gen minder vaak voorkomen en vaak gepaard gaan met mutaties in gyrA14. De mutatieloci van het gen voor levofloxacineresistentie omvatten voornamelijk de zes mutatieplaatsen (A260T, C261A, T261G, G271A, G271T, A272G) die zich in het gen gyrA bevinden. De identificatie van resistentiemechanismen die voortvloeien uit genetische veranderingen heeft geleid tot een geleidelijke overgang in de detectie van H. pylori, waarbij wordt overgestapt van op cultuur gebaseerde methoden naar moleculaire diagnostische technieken.

UBT en SAT zijn de meest gekozen niet-invasieve tests, maar ze kunnen geen informatie over de gevoeligheid voor geneesmiddelen verstrekken. Bijgevolg is de ontwikkeling van een snelle en uitgebreide techniek voor het detecteren van H. pylori en het beoordelen van de resistentie tegen medicijnen cruciaal voor de effectieve eliminatie ervan in klinische omgevingen15. Onder de moleculaire detectietechnieken heeft kwantitatieve polymerasekettingreactie (qPCR) aanzienlijke vooruitgang geboekt. In tegenstelling tot standaard PCR elimineert qPCR de noodzaak van gelelektroforese en maakt het de nauwkeurige kwantificering van DNA of RNA mogelijk door specifieke primers en sondes op te nemen tijdens de gloeifase. In de handel verkrijgbare qPCR-kits bieden nu de mogelijkheid om H. pylori-infecties en resistentie tegen geneesmiddelen te identificeren16.

Kortom, er is een onmiddellijke klinische behoefte aan een diagnostische benadering die zowel krachtig als alomvattend is, in staat is om H. pylori-infecties te detecteren en tegelijkertijd de resistentie tegen geneesmiddelen te beoordelen. We hebben maagslijmvlies qPCR-analyse toegepast voor de detectie van H. pylori en antibioticaresistentie met behulp van verschillende primersondes.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

De bestaande studie werd uitgevoerd in overeenstemming met ethische overwegingen die zijn opgesteld door de ethische commissie van het Guangdong Provincial People's Hospital, Southern Medical University, Guangzhou, China (goedkeuringsnummer: KY2024-1115-01). Patiënten van 18 tot 60 jaar namen deel aan deze studie. Voor deze studie werden deelnemers uitgesloten als ze onlangs antibiotica, antibacteriële kruidengeneesmiddelen, protonpompremmers (PPI's) of H 2-receptorantagonisten hadden ingenomen in de 2 weken voorafgaand aan het testen. Bovendien kwamen personen die in de afgelopen 3 maanden anti-H. pylori-therapie hadden ondergaan, of personen met aanzienlijke hart-, lever- of nierproblemen, ernstige neuropathie of psychiatrische stoornissen niet in aanmerking voor deelname. Degenen met contra-indicaties voor gastroscopieonderzoek, zoals gastro-intestinale perforatie, hoge leeftijd, onstabiele vitale functies, enz., werden uitgesloten. De studie omvatte ook geen zwangere vrouwen of vrouwen die borstvoeding geven. Het formulier voor geïnformeerde toestemming van de proefpersonen omvat voornamelijk de volgende inhoud: (1) onderzoeksachtergrond en doel; (2) Wie is ongeschikt om deel te nemen aan dit onderzoeksproject? (3) Wat zijn de vereisten om deel te nemen aan het onderzoek? (4) Mogelijke voordelen van deelname aan onderzoek; (5) Mogelijke bijwerkingen, risico's en ongemak; (6) Bescherming van de persoonlijke levenssfeer; (7) Rechten van betrokkenen; (8) Verklaring van onderwerp; (9) Verklaring van de onderzoeker, enz.

1. Afname van het maagslijmvlies

  1. Voorbereiding van verbruiksartikelen voor het bemonsteren
    1. Bereid het bemonsteringsbuisje met de bewaaroplossing voor.
    2. Bereid een gastroscoopbiopsietang voor.
  2. Voorbereiding van bemonsteringsobjecten
    1. Verzamel monsters van patiënten met chronische gastritis, maagzweer, darmzweer, maagkanker of verdachte patiënten. Verzamel monsters met behoud van de aseptische procedures.
      OPMERKING: De verzamelde monsters bevatten maagslijmvliesweefsel van patiënten of verdachte patiënten.
    2. Bevestig de voorgeschiedenis van het geneesmiddel.
      1. Zorg ervoor dat de patiënt binnen 4 weken geen antibiotica en bismut voor H. pylori inneemt en dat er binnen 2 weken geen zuurremmer wordt ingenomen.
      2. Vraag patiënten die anticoagulantia gebruiken (warfarine, aspirine, clopidogrel, enz.) om gedurende 5-7 dagen te stoppen met het gebruik van medicatie.
  3. Verzameling van specimens
    1. Plaats van bemonstering
      1. Volgens de vereisten van het nieuwe Sydney-systeem worden biopsiemonsters genomen van het maagantrum, de grote en kleine bocht van het maaglichaam en de maaghoek (in totaal 5 punten). De specifieke locaties zijn weergegeven in figuur 1. Een kleine buiging van de pylorussinus op 2-3 cm van de pylorusring (A1) en een grote bocht (A2); 4 cm van de buik (B1) en een grote bocht 8 cm van de cardia (B2); maaghoek (IA).
      2. Volgens de consensus van deskundigen over de standaardisatie van endoscopische spijsverteringsbiopsie en pathologisch onderzoek in China (ontwerp), neemt u biopsiemonsters vanaf de kleine kant van de maagholte op 5 cm van de pylorus (grenzend aan de maaghoek) of de grote kant van de maaghoek (biopsie: 1-2 stuks).
    2. Beschrijving van de verzamellocatie van speciale monsters
      1. Voor patiënten die een behandeling ondergaan, verzamel na een ontwenning gedurende 4 weken tegelijkertijd maagantrum- en maaglichaamsmonsters.
      2. Verzamel voor patiënten met maagkanker weefsel van de grote kromming van de maag, maar niet van het tumorweefsel.
      3. Verzamel voor patiënten met maagzweren het maagantrum en het randweefsel van de maagzweer. Verzamel de onderkant van de zweer niet.
      4. Voor patiënten met atrofische gastritis, verzamel maag antrum en maaglichaam. Verzamel geen monsters uit gebieden met maagslijmvliesatrofie en darmmetaplasie.
    3. Stappen voor steekproeven
      1. Open de biopsieklemklep en beweeg deze langzaam naar de dominante hand. Wanneer de kop van de tang zich in het gezichtsveld bevindt, opent u de klemflap en manipuleert u de endoscoop op het maagslijmvlies van de bemonsteringsplaats.
      2. Oefen een lichte druk uit, sluit de biopsietang en klem het maagslijmvliesweefsel vast (diameter: 0,5-1 mm, ongeveer 5-10 mg/blok). Extraheer de weefselmonsters met de tang in het bemonsteringsbuisje (inclusief conserveringsvloeistof) om de site te voltooien.
      3. Ga door met het voltooien van de bemonstering van andere locaties en plaats ze in hetzelfde bemonsteringsbuisje (inclusief conserveringsoplossing).
      4. Voltooi de bemonstering van alle locaties, draai het deksel van de bemonsteringsbuis vast en sluit af om uitdroging te voorkomen. Label de buizen met een uniek identificatienummer aan de buitenkant.
      5. Dien de verzamelde monsters zo snel mogelijk in voor testen. Plaats de monsters niet langer dan 24 uur bij kamertemperatuur (RT). Vermijd herhaaldelijk invriezen en ontdooien van klinische monsters tijdens transport over lange afstanden. Als een temperatuur van -20 ± 5 °C niet kan worden gegarandeerd, transporteer ze dan bij 0-8 °C. Bewaar de monsters gedurende een periode van vijf maanden bij -20 ± 5 °C en bewaar ze voor langdurige opslag onder -70 °C.
    4. Voorzorgsmaatregelen
      1. Druk bij het afmonsteren de biopsietang zo diep mogelijk in om de hele slijmvlieslaag te bereiken.
      2. Wees bij het verwijderen van de biopsietang en het openen van de biopsie voorzichtig om slijmvliesscheuren te voorkomen.

2. Extractie van nucleïnezuur

  1. Stel de temperatuur van het metalen bad vooraf in op 100 °C; als het monster bevroren is, verwijder het dan en herstel het naar RT.
  2. Meng het lysaat goed om de iminodiazijnzuurhars te suspenderen. Neem 100 μL lysaat in de centrifugaalbuis met het filterelement, of voeg direct het maagslijmvliesweefsel toe aan de centrifugebuis met 200 μL lysaat en meng met vortexoscillatie.
  3. Plaats de centrifugebuis gedurende 10 minuten in een metalen bad bij 100 °C, verwijder deze en laat afkoelen tot RT.
  4. Centrifugeer bij 9500 g gedurende 5-10 min. Zuig het bovenstaande voorzichtig in een andere gesteriliseerde centrifugebuis en markeer deze.
  5. Voer het volgende experiment onmiddellijk uit of bewaar het tijdelijk bij 4 °C voor inspectie.

3. qPCR-detectie van H. pylori en geneesmiddelresistentiegenen (claritromycine en chinolonen)

  1. Verwijder de primersonde, de gemengde enzymoplossing en de detectiebuffer uit de set. Smelt alle componenten op ijs of 2-8 °C en meng ze door licht te schudden en onmiddellijk te centrifugeren op lage snelheid.
  2. Meng 12,5 μL detectiebuffer + 7,0 μL primersonde + 0,5 μL enzymoplossing. Bereken eerst de hoeveelheid van elk reagens, voeg toe aan de centrifugebuis met het juiste volume, meng goed en centrifugeer kort.
    OPMERKING: De totale hoeveelheid PCR-reactieoplossing moet worden berekend door het aantal testmonsters, één sterke positieve controle, één zwak positieve controle, één negatieve controle en één PCR-negatieve controle op te nemen.
  3. Nadat de PCR-reactieoplossing is geconfigureerd, voegt u 20,0 μl PCR-reactieoplossing toe aan elk PCR-reactieputje. Voeg vervolgens 5,0 μL nucleïnezuur toe aan de PCR-reactieput met de PCR-reactieoplossing. Voeg geen monster of nucleïnezuur toe aan de PCR-negatieve controleput.
  4. Plaats de reactiebuis in de fluorescerende PCR-thermocycler en stel de cyclusparameters als volgt in: verwarm eerst het reactiemengsel gedurende 2 minuten bij 42 °C en 95 °C; ten tweede, denatureer gedurende 10 s bij 95 °C, gloei en verleng gedurende 45 s bij 58 °C, herhaal gedurende 40 cycli.
  5. Verzamel de fluorescentiesignalen als FAM (23S rRNA-genmutatie), HEX/VIC (gyrA-genmutatie ), ROX (H. pylori) en CY5 (interne standaard) en gegevens bij 58 °C.
  6. Sla na de reactie de gegevens op en analyseer deze met behulp van specifieke qPCR-software.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Beoordeling van H. pylori-infectie en antibioticaresistentie in maagweefsel via qPCR
De qPCR-assays voor het identificeren van H. pylori werden uitgevoerd door zich te richten op het ureA-gen , en antibioticaresistentie werd vastgesteld door specifieke mutaties in de 23S rRNA- en gyrA-genen te onderzoeken (Tabel 1). De kwaliteitsborgingsgegevens, weergegeven door de CT-waarden in al...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Traditionele testen zoals RUT, UBT, histologie, kweek en serologie worden gebruikt voor de detectie van H. pylori. Elke diagnostische benadering biedt duidelijke voordelen en staat voor specifieke uitdagingen, afhankelijk van de klinische context17. De kweek van H. pylori uit maagslijmvliesbiopten wordt vaak beschouwd als de maatstaf voor diagnose. Desalniettemin is deze methode arbeidsintensief en wordt de nauwkeurigheid ervan beperkt door techn...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Dankbetuigingen

Dit werk werd ondersteund door subsidies van het NSFC Incubation Program van GDPH (8220080645) en het Guangdong Provincial Medical Science and Technology Research Fund Project (A2024108).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Bath IncubatorALLSHENGMK2000-2Zorg voor een omgeving met constante temperatuur
Biosafety cabinetHaierHR1500-figure-materials-1B2
CentrifugeThermo Fisher ScientificTHERMO ST16RCentrifugeer de resterende vloeistof van de wand van de buis.
Chelex-100 sigmaC7901Hars
Gastroscoop biopsietangBoston Scientific CorporationBemonstering van het maagslijmvlies
Helicobacter pylori 23S rRNA-gen en gyrA-gen mutatiedetectiekitJiangsu Mole BioscienceCFDA 20223400137qPCR-detectiekit voor H. pylori en geneesmiddelresistentiegenen (clarithromycine en chinolonen)
Nucleïnezuur extractie reagensJiangsu Mole BioscienceSEDA 20150076Voor DNA extractie
SDS SoftwareApplied Biosystems7300/7500Data-analyse
ThermocylcerThermo Fisher ScientificABI 7500Voor qPCR detectie van H. pylori en geneesmiddelresistentiegenen (clarithromycine en chinolonen)
VortexmixerJOANLABVM-5005Voor het mengen van reagens

Referenties

  1. Sharndama, H. C., Mba, I. E. Helicobacter pylori: an up-to-date overview on the virulence and pathogenesis mechanisms. Braz J Microbiol. 53 (1), 33-50 (2022).
  2. Ravikumara, M. Helicobacter pylori in children: think before you kill the bug. Therap Adv Gastroenterol. 16 (6), 1-10 (2023).
  3. Reshetnyak, V. I., Burmistrov, A. I., Maev, I. V. Helicobacter pylori: Commensal, symbiont or pathogen. World J Gastroenterol. 27 (7), 545-560 (2021).
  4. Al-Ouqaili, M. T. S., et al. Study of vacuolating cytotoxin A (vacA) genotypes of ulcerogenic and non-ulcerogenic strains of Helicobacter pylori and its association with gastric disease. Saudi J Biol Sci. 30 (12), 103867(2023).
  5. Hussein, R. A., Al-Ouqaili, M. T. S., Majeed, Y. H. Association between alcohol consumption, cigarette smoking, and Helicobacter pylori infection in Iraqi patients submitted to gastrointestinal endoscopy. J Emerg Med Trauma Acute Care. 6, 12(2022).
  6. Thrift, A. P., Wenker, T. N., El-Serag, H. B. Global burden of gastric cancer: Epidemiological trends, risk factors, screening and prevention. Nat Rev Clin Oncol. 20 (5), 338-349 (2023).
  7. Liou, J. M., et al. Screening and eradication of Helicobacter pylori for gastric cancer prevention: The Taipei global consensus. Gut. 69 (12), 2093-2112 (2020).
  8. Gao, T. Y., et al. Cancer burden and risk in the Chinese population aged 55 years and above: A systematic analysis and comparison with the USA and Western Europe. J Glob Health. 14, 04014(2024).
  9. Hussein, R. A., Al-Ouqaili, M. T. S., Majeed, Y. H. Detection of Helicobacter pylori infection by invasive and non-invasive techniques in patients with gastrointestinal diseases from Iraq: A validation study. PLoS One. 16 (8), e0256393(2021).
  10. Thung, I., et al. Review article: The global emergence of Helicobacter pylori antibiotic resistance. Aliment Pharmacol Ther. 43 (4), 514-533 (2016).
  11. Zhang, Y., et al. Mutations in the antibiotic target genes related to clarithromycin, metronidazole and levofloxacin resistance in Helicobacter pylori strains from children in China. Infect Drug Resist. 13 (1), 311-322 (2020).
  12. Saranathan, R., et al. Helicobacter pylori Infections in the Bronx, New York: Surveying antibiotic susceptibility and strain lineage by whole-genome sequencing. J Clin Microbiol. 58 (3), e01591-e01619 (2020).
  13. Malfertheiner, P., et al. Management of Helicobacter pylori infection - The Maastricht IV/ Florence consensus report. Gut. 61 (5), 646-664 (2012).
  14. Palma, G. Z. D., et al. Occurrence of mutations in the antimicrobial target genes related to levofloxacin, clarithromycin, and amoxicillin resistance in Helicobacter pylori isolates from Buenos Aires city. Microb Drug Resist. 23 (3), 351-358 (2017).
  15. Zhang, L., Zhao, M., Fu, X. S. Gastric microbiota dysbiosis and Helicobacter pylori infection. Front Microbiol. 14, 1153269(2023).
  16. Peng, X., et al. Gastric juice-based real-time PCR for tailored Helicobacter Pylori treatment: A practical approach. Int J Med Sci. 14 (6), 595-601 (2017).
  17. Weingart, V., et al. Sensitivity of a novel stool antigen test for detection of Helicobacter pylori in adult outpatients before and after eradication therapy. J Clin Microbiol. 42 (3), 1319-1321 (2004).
  18. Chi, W. J., et al. A rapid and high-throughput multiplex genetic detection assay for detection, semi-quantification and virulence genotyping of Helicobacter pylori in non-invasive oral samples. Front Cell Infect Microbiol. 13, 1267288(2023).
  19. Zhang, Y. M., et al. Validation of a high-throughput multiplex genetic detection system for Helicobacter pylori identification, quantification, virulence, and resistance analysis. Front Microbiol. 7, 1401(2016).
  20. Gisbert, J. P. Empirical or susceptibility-guided treatment for Helicobacter pylori infection? A comprehensive review. Therap Adv Gastroenterol. 13, 1756284820968736(2020).
  21. Bénéjat, L., et al. Real-time PCR for Helicobacter pylori diagnosis. The best tools available. Helicobacter. 23 (5), e12512(2018).
  22. Vasapolli, R., et al. Real-time assessment of H. pylori infection to guide molecular antibiotic resistance testing: A combined endoscopy-gastric juice analysis approach. Aliment Pharmacol Ther. 61 (3), 465-471 (2025).
  23. Hussein, R. A., Al-Ouqaili, M. T. S., Majeed, Y. H. Detection of clarithromycin resistance and 23SrRNA point mutations in clinical isolates of Helicobacter pylori isolates: Phenotypic and molecular methods. Saudi J Biol Sci. 29 (1), 513-520 (2022).
  24. Wang, Y. H., et al. A systematic review and meta-analysis of genotypic methods for detecting antibiotic resistance in Helicobacter pylori. Helicobacter. 23 (2), e12467(2018).
  25. Egli, K., et al. Comparison of the diagnostic performance of qPCR, Sanger sequencing, and whole-genome sequencing in determining clarithromycin and levofloxacin resistance in Helicobacter pylori. Front Cell Infect Microbiol. 10, 596371(2020).
  26. Liu, Y., et al. Relationship between Helicobacter pylori infection and colorectal polyp/colorectal cancer. World J Gastrointest Surg. 16 (4), 1008-1016 (2024).
  27. Oliver, A. S., Wu, F., Chen, Y. The role of gastric microbiota in gastric cancer. Gut Microbes. 11 (5), 1220-1230 (2020).
  28. Hulten, K. G., et al. Comparison of culture with antibiogram to next-generation sequencing using bacterial isolates and formalin-fixed, paraffin embedded gastric biopsies. Gastroenterology. 161 (5), 1433-1442 (2021).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Trefwoorden

Detectie van Helicobacter pyloriqPCR van het maagslijmvlieskwantitatieve PCRmaagbiopsieclaritromycine resistentielevofloxacine resistentie23S rRNA mutatiegyrA genmutatiefluorescentie PCR thermocycler
Maagslijmvlies Kwantitatieve polymerasekettingreactieanalyse voor het detecteren van Helicobacter pylori en antibioticaresistentie
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleid

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.