Methodenartikel

Evaluatie van antioxiderende en anthelmintische eigenschappen van Tithonia diversifolia-extracten tegen gastro-intestinale nematodeneieren met behulp van in vitro assays

845 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/67760

⸱

1 augustus 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Multidisciplinary Center for Technological Research, National University of Asunción (CEMIT - UNA), 2Centre of Marine Sciences (CCMAR/CIMAR LA), University of Algarve, 3Department of Food Biochemistry, Biodiversity, Food and Health Group (BIOALSA), Faculty of Chemical Sciences, National University of Asunción (FCQ - UNA), 4Carleton College

In dit artikel

Samenvatting

Deze studie evalueerde de biologische activiteiten van Tithonia diversifolia-extracten met behulp van op radicalen gebaseerde methoden en een in vitro egg hatching assay (EHA) om hun effecten op gastro-intestinale nematoden bij kleine herkauwers te beoordelen. De methodologie en de belangrijkste bevindingen worden beschreven, waarbij het potentieel van deze extracten voor de bestrijding van parasieten wordt benadrukt.

Samenvatting

Parasitaire ziekten veroorzaakt door gastro-intestinale nematoden (GIN) worden wereldwijd beschouwd als belangrijke beperkende factoren voor de veehouderij, omdat ze het dierenwelzijn aanzienlijk in gevaar brengen en de productiekosten verhogen. Jarenlang is de bestrijding van parasieten uitsluitend gebaseerd op het gebruik van synthetische drugs. Resistentie van GIN tegen commerciële anthelmintica wordt over de hele wereld in toenemende mate gemeld. Daarom zijn er alternatieve benaderingen ontstaan voor het beheersen van GIN bij landbouwhuisdieren, waaronder de exploratie van planten met bioactief potentieel. Tithonia diversifolia kan het hele jaar door worden geoogst en alle delen van de plant zijn in de volksgeneeskunde gebruikt voor een breed scala aan ziekten. Deze studie evalueerde de in vitro antioxiderende eigenschappen van water en 70% waterige acetonextracten van T. diversifolia bovengrondse delen, waaronder bladeren, takken en bloemen, met behulp van op radicalen gebaseerde methoden, en beoordeelde het anthelmintisch potentieel door middel van een parasietmodel, waarbij gebruik werd gemaakt van de egg hatching assay (EHA) met waterextracten. Bovendien werd het totale polyfenolgehalte van de extracten bepaald. Deze bevindingen benadrukken T. diversifolia als een veelbelovende natuurlijke bron van antioxidanten en anthelmintica.

Inleiding

Parasitaire ziekten veroorzaakt door gastro-intestinale nematoden (GIN) worden wereldwijd beschouwd als belangrijke beperkende factoren voor de veehouderij, omdat ze het dierenwelzijn aanzienlijk in gevaar brengen en de productiekosten verhogen1. De relatie tussen de parasiet en het vee wordt beïnvloed door verschillende factoren die verband houden met de gastheer, namelijk de genetische kenmerken van resistentie en veerkracht van de dieren, de voedingsstatus van de dieren, de mate van parasitisme en de pathogeniteit van de betrokken parasietpopulaties2.

Jarenlang heeft de bestrijding van parasieten uitsluitend vertrouwd op synthetische antiparasitaire geneesmiddelen. Langdurig en exclusief gebruik heeft echter geleid tot het ontstaan van resistentie, waardoor hun effectiviteit is afgenomen en het zoeken naar alternatieve strategieën is aangedrongen3. Resistentie van nematoden tegen verschillende anthelmintica is over de hele wereld in toenemende mate beschreven, wat een zorgwekkend scenario oplevert, vooral in tropische gebieden4. Bovendien zijn consumenten zich steeds meer bewust van de noodzaak om de residuen van antiparasitaire geneesmiddelen in dierlijk vlees en het milieu te verminderen5. Daarom zijn er alternatieve benaderingen ontstaan voor de bestrijding van nematodenparasieten bij landbouwhuisdieren6.

Tithonia diversifolia is een tropische struik afkomstig uit Midden-Amerika en heeft unieke eigenschappen die hem waardevol maken voor productiesystemen van herkauwers. Het kan het hele jaar door worden geoogst en alle delen van de plant worden traditioneel gebruikt in de volksgeneeskunde door inheemse gemeenschappen om een breed scala aan aandoeningen te behandelen. Topisch is het toegepast om buikpijn, wonden, dermatose en spieraandoeningen te verlichten, terwijl orale toediening is gebruikt om infecties, malaria, koorts, hepatitis en diabetes te beheersen. Deze diverse therapeutische toepassingen benadrukken het brede medicinale potentieel7.

Oxidatieve stress speelt een belangrijke rol bij de ontwikkeling en progressie van parasitaire infecties, zowel in het gastheerorganisme als in het parasitaire organisme dat worstelt om te overleven8. Om deze reden is het detecteren van antioxidantactiviteit cruciaal voor het evalueren van de biologische activiteit van medicinale plantenextracten met anthelmintisch potentieel. Als gevolg van parasitaire infectie neemt de concentratie van antioxidanten in de gastheer af, terwijl de concentratie van oxidatieproducten van cellulaire componenten toeneemt. In het geval van parasieten is het handhaven van het oxidatieve evenwicht essentieel om hun interactie met de gastheer te verlengen en om zich te verdedigen tegen de oxidatieve stress die in het gastheerorganisme wordt gegenereerd9.

Bewijs van de ontwikkeling en snelle verspreiding van resistentie tegen anthelmintica geeft aanleiding tot bezorgdheid dat veelgebruikte behandelingen ineffectief kunnen worden. Daarom wordt een in-vitrotest, de egg hatch assay (EHA) genaamd, gebruikt om de gevoeligheid of resistentie tegen benzimidazol (BZ) in gastro-intestinale nematoden te beoordelen. Deze test wordt vaak gebruikt om de anthelmintische activiteit van plantenextracten op eieren te evalueren en om hun activiteit als functie van de dosis te vergelijken. Een van de belangrijkste beperkingen van deze test is de variabiliteit in het uitkomen van eieren tussen tests. De levensvatbaarheid van de eieren is beperkt tot maximaal 3 uur, wat een snel herstel en snelle start vereist. Desondanks kan het uitkomstpercentage variëren. Om deze reden is vastgesteld dat ten minste 70% van de eieren in de controlegroep moet uitkomen om het resultaat als geldig te beschouwen10,11. Het is een goedkope, snelle, gemakkelijke en reproduceerbare test 12,13,14.

Het gebruik van plantenextracten om alternatieven voor GIN-controle te onderzoeken, is gebaseerd op de aanwezigheid van secundaire metabolieten en hun bioactief potentieel. Een van de uitdagingen in dit onderzoeksgebied is de kwantiteit en stabiliteit van secundaire metabolieten, aangezien deze variëren afhankelijk van biotische en abiotische factoren, en ook als gevolg van de chemische stress die wordt veroorzaakt door het extractieproces 15,16,17.

Deze studie veronderstelde dat verschillen in biologische activiteiten (antioxiderende en anthelmintische effecten) zouden kunnen optreden, afhankelijk van het type oplosmiddel dat voor de extractie wordt gebruikt, wat de samenstelling van polyfenolen en bijgevolg hun bioactiviteit zou kunnen beïnvloeden. Het doel van dit manuscript was om de stappen te schetsen die zijn genomen bij de evaluatie van extracten met behulp van een in vitro model dat gemakkelijk kan worden gerepliceerd.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

De ethische commissie voor dieren van CEMIT keurt alle experimenten met diermanipulatie goed. De eidonordieren zijn eigendom van boerderijen die samenwerken met CEMIT door fecale monsters te verstrekken voor preventieve diagnostische doeleinden. Deze dieren zijn schapen of geiten (geen specifiek ras), van beide geslachten, ouder dan één jaar, en mogen niet binnen 15 dagen voorafgaand aan de monsterneming zijn ontwormd. Alle deelnemende bedrijven worden geïnformeerd over het gebruik van de monsters voor onderzoeksdoeleinden en geven toestemming om deel te nemen aan het onderzoek. Voor het verzamelen van eieren worden eerst nabijgelegen vestigingen op de hoogte gebracht en na toestemming worden veldbezoeken georganiseerd om verse ontlastingsmonsters te verzamelen, zodat deze binnen drie uur worden verwerkt. De reagentia en apparatuur die in dit onderzoek zijn gebruikt, staan vermeld in de materiaaltabel.

1. Bereiding van plantaardig materiaal

  1. Kies een geschikte locatie voor het verzamelen van de plantensoorten.
  2. Verzamel ten minste twee exemplaren van Tithonia diversifolia voor taxonomische identificatie en herbariumbereiding.
  3. Verzamel minimaal 1000 g T. diversifolia bovengrondse delen.
  4. Droog de verzamelde biomassa bij kamertemperatuur (ongeveer 26 °C; zie figuur 1).
  5. Maal de gedroogde biomassa met een elektrische molen.
  6. Bewaar het gemalen materiaal in de koelkast bij 4 °C.

2. Bereiding van extracten

  1. Bereid het waterextract voor:
    1. Meng 10 g gedroogde biomassa met 100 ml gedestilleerd water van 100 °C.
    2. Laat het mengsel 24 uur macereren onder continu schudden bij 120 tpm.
    3. Filtreer het uittreksel door filtreerpapier (Whatman nr. 5 of gelijkwaardig).
    4. Vriesdroog het gefilterde extract.
  2. Bereid het acetonextract voor:
    1. Meng 10 g gedroogd plantaardig materiaal met 70% waterige aceton in een verhouding van 1:3.
    2. Laat het mengsel 24 uur macereren onder continu schudden bij 120 tpm.
    3. Filtreer het uittreksel door filtreerpapier (Whatman nr. 5 of gelijkwaardig).
    4. Vriesdroog het gefilterde extract.
      OPMERKING: Bewaar de gevriesdroogde extracten bij -20 °C voor een betere bewaring (zie afbeelding 2). Zorg ervoor dat ten minste 5 g gevriesdroogde extracten worden verkregen.

3. Bereiding van de stockoplossing

  1. Voor de antioxidanttest:
    1. Solubiliseren van de gedroogde extracten in de overeenkomstige oplosmiddelen (gedestilleerd water of 70% waterige aceton) tot een eindconcentratie van 10 mg/ml.
  2. Voor de analyse van het uitbroeden van de eieren:
    1. Verdun 12 mg gevriesdroogde extracten in 5 ml gedestilleerd water om een stockoplossing van 2,4 mg/ml te verkrijgen.
    2. Bereid vijf concentraties voor: 1,2 mg/ml, 0,6 mg/ml, 0,3 mg/ml en 0,15 mg/ml (zie figuur 3).
      NOTITIE: Pas het volume van de voorraadoplossing aan op basis van het aantal gebruikte putjes en platen. Als er bijvoorbeeld 48 putten worden gebruikt in plaats van 12, verminder dan het volume dienovereenkomstig; bereid 6 mg in 2,5 ml in plaats van 12 mg in 5 ml.

4. Fytochemische samenstelling

  1. Totaal fenolgehalte van extracten (TPC)
    1. Meng 5 μL van de monsters met 100 μL Folin-Ciocalteu (F-C) reagens verdund 10× in gedestilleerd water in doorzichtige plastic platen met 96 putjes.
    2. Incubeer gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur (RT).
    3. Voeg 100 μL natriumcarbonaatoplossing (75 g/L in water) toe.
    4. Incubeer 90 minuten bij RT.
    5. Meet de extinctie bij 650 nm.
      OPMERKING: Druk TPC uit als galluszuurequivalenten (GAE). Bouw een kalibratiecurve op met ten minste vijf concentraties galluszuur.
  2. Totaal gehalte aan flavonoïden (TFC)
    1. Meng 50 μL van de extracten met 50 μL 2% aluminiumchloride in methanol in doorzichtige plastic platen met 96 putjes.
    2. Incubeer gedurende 10 minuten bij RT.
    3. Meet de extinctie bij 405 nm.
      OPMERKING: Druk TFC uit als quercetine-equivalenten (QE). Bouw een kalibratiecurve op met ten minste vijf concentraties quercetine.
  3. Totaal tanninegehalte (TTC)
    1. Meng 10 μL van de extracten met 200 μL 1% DMACA in methanol en 100 μL 37% HCl in doorzichtige plastic platen met 96 putjes.
    2. Incubeer gedurende 15 minuten bij RT.
    3. Meet de extinctie bij 640 nm.
      OPMERKING: Druk TTC uit in termen van mg/ml catechine.

5. Antioxidant test - ABTS

  1. Voeg 0,003514 g kaliumpersulfaat en 0,0203 g ABTS toe aan 5 ml gedestilleerd water.
  2. Wikkel de oplossing in aluminiumfolie en incubeer 12-16 uur bij 4 °C in de koelkast.
  3. Meet de extinctie bij 734 nm en stel deze in op ongeveer 0,7 door ethanol toe te voegen. Meng om te beginnen 5 μl ABTS-oplossing met 195 μl ethanol.
  4. Meng in doorzichtige plastic platen met 96 putjes 10 μl van de extracten met 190 μl ABTS-oplossing.
  5. Meng voor de positieve controle (C+) 10 μl Trolox (bepaal de concentratie aan de hand van een standaardcurve op basis van de extinctie van het monster) met 190 μl ABTS-oplossing.
  6. Meng voor de negatieve controle (C-) 10 μl van het oplosmiddel dat wordt gebruikt om de extracten op te lossen (water of waterige aceton) met 190 μl ABTS-oplossing.
  7. Incubeer de platen gedurende 6 minuten bij kamertemperatuur (RT).
  8. Meet de extinctie bij 734 nm.
    OPMERKING: Figuur 4 toont een voorbeeld van een ABTS-test.

6. Parasitologische procedures

  1. Verzamel fecale monsters rechtstreeks uit het rectum van natuurlijk geïnfecteerde geiten.
    OPMERKING: Verzamel fecale monsters rechtstreeks uit het rectum van natuurlijk geïnfecteerde geiten en schapen om versheid te garanderen en milieuverontreiniging te voorkomen. Houd dieren voorzichtig in bedwang met behulp van getraind personeel om stress te minimaliseren. Steek met schone wegwerphandschoenen een gesmeerde, gehandschoende vinger in het rectum en neem ongeveer 5-10 g fecaal materiaal op. Plaats de monsters in schone, gelabelde plastic containers en bewaar ze bij 4-8 °C. Verwerk alle monsters binnen 3 uur na verzameling om de levensvatbaarheid van wormeieren te behouden. Volg de institutionele richtlijnen voor dierenwelzijn en verkrijg geïnformeerde toestemming van boerderijeigenaren.
  2. Identificeer de diersoorten die bij elk monster horen.
  3. Meng 30 g van elk fecale monster met 50 ml verzadigde zoutoplossing (dichtheid = 1,2) ter voorbereiding op coprologische testen.
  4. Gebruik een McMaster-dia om de eieren te tellen.
    1. Homogeniseer 3 g fecaal monster in 50 ml verzadigde NaCl-oplossing. Filtreer het mengsel door kaasdoek, vul beide kamers van een dia en laat het 5 minuten staan.
    2. Onderzoek het glaasje onder een microscoop met een vergroting van 10× en tel eieren van het strongyle-type. Bereken eieren per gram (EPG) met behulp van de formule: EPG = (aantal eieren) × 50. Deze methode standaardiseert de kwantificering van gastro-intestinale nematoden bij kleine herkauwers.
  5. Druk het aantal eieren uit in eieren per gram (EPG).
  6. Selecteer fecale monsters met een EPG van ten minste 800 voor de voorbereiding van de fecale cultuur.
  7. Verkrijg L3-larven uit fecale culturen en identificeer hun geslachten of soorten.
    OPMERKING: Eieren van gastro-intestinale nematoden worden tijdens de levenscyclus in gras afgezet (zie figuur 5). Kleine herkauwers in het vee vertonen vaak polyparasitisme. Figuur 6 toont de stappen voor het uitvoeren van coprologische análisis.

7. In-vitrotests - Egg Hatch Assay (EHA)

  1. Verzamel verse fecale monsters.
  2. Filtreer de ontlasting twee keer met behulp van een steriel gaasje.
  3. Filtreer de resulterende suspensie en breng deze over naar een zeef.
  4. Was het materiaal op de zeef met gedestilleerd water.
  5. Vang de gewassen suspensie op in buisjes van 15 ml.
  6. Centrifugeer de monsters bij ~4800 × g gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur met behulp van een tafelcentrifuge die is uitgerust met een zwenkende emmerrotor. Centrifugeer twee keer met gedestilleerd water en één keer met een verzadigde zoutoplossing om de eieren op de bodem te concentreren (zie figuur 7 voor de morfologie van de eieren).
  7. Resuspendeer de eieren in PBS.
  8. Pas de eiconcentratie aan op 100 eieren/ml voor het instellen van de analyse.
  9. Bereid de positieve controle voor door thiabendazool (TBZ) op te lossen in PBS in een dosis van 0,025 mg/ml.
  10. Bereid de negatieve controle voor met behulp van de ei-suspensie in PBS.
  11. Gebruik multiwellplaten met 48 putjes voor de test.
  12. Bereid in elk putje een eindvolume van 250 μl met behulp van een 50/50 (v/v) mengsel van extract en eisuspensie.
  13. Voeg ongeveer 100 eieren/ml toe aan elk kuiltje.
  14. Test elke concentratie in quadruplicaat (vier replicaten).
  15. Tel de eieren onder een omgekeerde microscoop met een vergroting van 40×.
  16. Gebruik alleen platen met een uitkomstpercentage van ≥70%.
  17. Tel larven (L1), niet-uitgekomen eieren (UnE), eieren met larven (LFE) en gemoruleerde eieren (ME) voor elke concentratie.
    OPMERKING: Een representatieve samenvatting van het analyseprotocol voor het uitkomen van eieren wordt weergegeven in figuur 8.

8. Statistische análisis

  1. Voer beschrijvende statistische analyse uit met behulp van Excel.
  2. Gebruik eenrichtingsvariantieanalyse (ANOVA) en t-toetsen om verschillen tussen concentraties op een significantieniveau van 0,05 te evalueren.
  3. Bereken de 50% effectieve concentratie (EC50) met behulp van Probit-analyse op basis van log10-getransformeerde concentratiegegevens (zie aanvullend bestand 1).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Totaal fenolgehalte (TPC), totaal flavonoïdengehalte (TFC) en totaal tanninegehalte (TTC)
Resultaten van TPC, TTC, TFC en ABTS op Tithonia diversifolia worden weergegeven in Tabel 1. De waarden worden uitgedrukt als mg galluszuurequivalenten per gram droge stof (mg GAE/g DS) voor TPC, mg quercetine-equivalenten per gram droge stof (mg QE/g DS) voor TFC, en mg catechine-equivalenten per gram droge stof (mg CE/g DS) voor TTC. De antioxidantcapa...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Dit artikel schetst verschillende essentiële stappen voor het bevorderen van onderzoek naar geneeskrachtige planten. In-vitrotests, zoals de egg hatch assay (EHA), zijn bijzonder aantrekkelijk omdat ze onder gecontroleerde laboratoriumomstandigheden kunnen worden uitgevoerd. De EHA is ontworpen om de activiteit van plantenextracten in verschillende concentraties op nematodeneieren te evalueren, waarbij de resultaten worden vergeleken met zowel positieve als negatieve controles. ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs verklaren geen belangenconflict.

Dankbetuigingen

Aan alle producenten die ons vertrouwen om de bemonstering met hun dieren uit te voeren. Luísa Custódio heeft Portugese nationale middelen ontvangen van de Stichting voor Wetenschap en Technologie (FCT) via de projecten UIDB/04326/2020 ( D O I: 1 0 . 5 4 4 9 9 / U I D B / 0 4 3 2 6 / 2 0 2 0 ), U I D P / 0 4 3 2 6 / 2 0 2 0 (DOI:10.54499/UIDP/04326/2020), LA/P/0101/2020(DOI:10.54499/LA/P/0101/2020) en CEECIND/00425/2017. Rocio Avila ontving Nini's Endowed Internship Fund voor het mogelijk maken van dit project door mij financiële steun te geven en aan het Carleton Career Center voor professionele begeleiding en ondersteuning. Griselda Meza ontving een Beca de Investigacion BINV02 -52 CONACYT - 2e convocatoria om naar Portugal te reizen en fytochemische tests te maken. Ismael Llano ontving Beca Movility-formulier PINV01 -306, CONACYT, om de ei-uitbroedtest in Brazilië uit te voeren.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
15 mL tubesOp locatie
48-hole plateOp locatie
96 well platesVWR 734-0126
ABTSEnzymaticA1088.0005Op locatie
Academic optical microscope and inverted microscopeOp locatie
AcetoneEnzymaticA/0600/17
Aluminum chloride Sigma Aldrich6911
DMACA reagentSigma Aldrich49825
Ethanol 96%EnzymaticVR11202
Feces from animalsVerzameld op boerderijen in de buurt van de universiteit
Folin CiocalteauSigma AldrichF9252
Gallic acidSigma Aldrich91215
HClSigma Aldrich258148
McMaster cameraOp locatie
MethanolEnzymaticM/4000/17
PBSOp locatie
Plant extractsOp locatie
Potassium persulfate Sigma Aldrich216224
QuercetinSigma AldrichQ4951
SaltOp locatie
Sodium carbonate Sigma Aldrich1063920500
ThiabendazoleOp locatie
TroloxSigma Aldrich648471Op locatie
WaterOp locatie
Whatmann no. 5VWR WHAT97039654

Referenties

  1. Vineer, H. R., et al. Increasing importance of anthelmintic resistance in European livestock: Creation and meta-analysis of an open database. Parasite. 27, 69(2020).
  2. Ribeiro, W. L. C., Vilela, V. L. R. Editorial: Alternatives for the control of parasites to promote sustainable livestock. Front Vet Sci. 9, 1097432(2023).
  3. Hodgkinson, J. E., et al. Refugia and anthelmintic resistance: Concepts and challenges. Int J Parasitol Drugs Drug Resist. 10, 51-57 (2019).
  4. Molento, M. B. Parasite control in the age of drug resistance and changing agricultural practices. Vet Parasitol. 163 (3), 229-234 (2009).
  5. Morgan, E. R., van Dijk, J. Climate and the epidemiology of gastrointestinal nematode infections of sheep in Europe. Vet Parasitol. 189 (1), 8-14 (2012).
  6. Hoste, H., Torres-Acosta, J. F. J. Non-chemical control of helminths in ruminants: Adapting solutions for changing worms in a changing world. Vet Parasitol. 180 (1-2), 144-154 (2011).
  7. Mabou Tagne, A., Marino, F., Cosentino, M. Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray as a medicinal plant: A comprehensive review of its ethnopharmacology, phytochemistry, pharmacotoxicology and clinical relevance. J Ethnopharmacol. 220, 94-116 (2018).
  8. Pawłowska, M., Mila-Kierzenkowska, C., Szczegielniak, J., Woźniak, A. Oxidative stress in parasitic diseases-reactive oxygen species as mediators of interactions between the host and the parasites. Antioxidants. 13 (1), 38(2024).
  9. Maldonado, E., Rojas, D. A., Morales, S., Miralles, V., Solari, A. Dual and opposite roles of reactive oxygen species (ROS) in Chagas disease: Beneficial on the pathogen and harmful on the host. Oxid Med Cell Longev. 2020, 8867701(2020).
  10. Adamu, M., Naidoo, V., Eloff, J. N. Efficacy and toxicity of thirteen plant leaf acetone extracts used in ethnoveterinary medicine in South Africa on egg hatching and larval development of Haemonchus contortus. BMC Vet Res. 9, 38(2013).
  11. Molan, A. L. Effect of purified condensed tannins from pine bark on larval motility, egg hatching and larval development of Teladorsagia circumcincta and Trichostrongylus colubriformis (Nematoda: Trichostrongylidae). Folia Parasitol. 61 (4), 371-376 (2014).
  12. Eguale, T., Tadesse, D., Giday, M. In vitro anthelmintic activity of crude extracts of five medicinal plants against egg-hatching and larval development of Haemonchus contortus. J Ethnopharmacol. 137 (1), 108-113 (2011).
  13. von Samson-Himmelstjerna, G., et al. Standardization of the egg hatch test for the detection of benzimidazole resistance in parasitic nematodes. Parasitol. Res. 105, 825-834 (2009).
  14. Robles-Pérez, D., Martínez-Pérez, J. M., Rojo-Vázquez, F. A., Martínez-Valladares, M. Screening anthelmintic resistance to triclabendazole in Fasciola hepatica isolated from sheep by means of an egg hatch assay. BMC Vet Res. 11, 5(2015).
  15. War, A. R., Paulraj, M. G., War, M. Y., Ignacimuthu, S., Sharma, H. C. Mechanisms of plant defense against insect herbivores. Plant Signal Behav. 7, 1306-1320 (2012).
  16. Veeresham, C. Natural products derived from plants as a source of drugs. J Adv Pharm Technol Res. 3, 200-201 (2012).
  17. Barthwal, R., Mahar, R. Exploring the significance, extraction, and characterization of plant-derived secondary metabolites in complex mixtures. Metabolites. 14, 119(2024).
  18. Vargas-Magaña, J. J., et al. Anthelmintic activity of acetone-water extracts against Haemonchus contortus eggs: Interactions between tannins and other plant secondary compounds. Vet Parasitol. 206, 199-206 (2014).
  19. Gertrude, M., et al. In vitro anthelmintic activity of Bidens pilosa Linn. (Asteraceae) leaf extracts against Haemonchus contortus eggs and larvae. Eur J Med Plants. 4, 1325-1333 (2014).
  20. Castañeda-Ramírez, G. S., et al. Bio-guided fractionation to identify Senegalia gaumeri leaf extract compounds with anthelmintic activity against Haemonchus contortus eggs and larvae. Vet Parasitol. 270, 13-19 (2019).
  21. Chan-Pérez, J. I., et al. In vitro susceptibility of ten Haemonchus contortus isolates from different geographical origins towards acetone:water extracts of two tannin-rich plants. Vet Parasitol. 217, 53-60 (2016).
  22. Alonso-Díaz, M. A., Torres-Acosta, J. F. J., Sandoval-Castro, C. A., Hoste, H. Comparing the sensitivity of two in vitro assays to evaluate the anthelmintic activity of tropical tannin-rich plant extracts against Haemonchus contortus. Vet Parasitol. 181 (2-4), 360-364 (2011).
  23. Meza Ocampos, G., et al. Two in vitro anthelmintic assays of four Paraguayan medicinal plants for proof of concept of the role of polyphenols in their biological activities and LC-HRMS analysis. J Ethnopharmacol. 312, 116453(2023).
  24. Babják, M., Königová, A., Urda Dolinská, M., Vadlejch, J., Várady, M. Anthelmintic resistance in goat herds-In vivo versus in vitro detection methods. Vet Parasitol. 254, 10-14 (2018).
  25. Elfawal, M. A., et al. High-throughput screening of more than 30,000 compounds for anthelmintics against gastrointestinal nematode parasites. ACS Infect Dis. 11 (1), 1-11 (2025).
  26. de Araújo Sanchez, C., et al. In vivo anthelmintic activity of hydroethanolic extract of Piper cubeba fruits in sheep naturally infected with gastrointestinal nematodes. Vet Parasitol. 333, 110348(2025).
  27. Hördegen, P., Cabaret, J., Hertzberg, H., Langhans, W., Maurer, V. In vitro screening of six anthelmintic plant products against larval Haemonchus contortus with a modified methyl-thiazolyl-tetrazolium reduction assay. J Ethnopharmacol. 108 (1), 85-89 (2006).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Antioxidante eigenschappengastro intestinale nematodeneitest voor uitkomenpolyfenolgehalteparasitbestrijdingeieren van strongyle typedosis responssamenhang

Gerelateerde artikelen