Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Seksuele kruisingen met de Mucoromyceet Phycomyces blakesleeanus

841 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/67790

⸱

6 juni 2025

 , 
1Organismal Biology and Ecology Department, Colorado College

In dit artikel

Samenvatting

Hier presenteren we een basisprotocol voor de inductie van P. blakesleeanus paring.

Samenvatting

Phycomyces blakesleeanus, een filamenteuze schimmel in de Mucoromyco-stam, onderscheidt zich door zijn opmerkelijke vermogen tot omgevingsperceptie en adaptieve reacties. Hoewel eerder werk heeft aangetoond dat omgevingsstimuli, waaronder zwaartekracht, licht, vocht en beschikbaarheid van voedingsstoffen, de groeidynamiek en voortplantingsstrategieën beïnvloeden, blijven de onderliggende mechanismen een aandachtsgebied van onderzoek. Omgevingsfactoren veroorzaken seksuele of ongeslachtelijke voortplanting. Seksuele voortplanting begint met feromoonsignalering, die hyphal-chemoattractie veroorzaakt, wat uiteindelijk leidt tot seriële morfologische overgangen die culmineren in de vorming van een zygospore.

In een laboratoriumomgeving resulteren kruisingen van P. blakesleeanus in complementaire mycelia die de seksuele cyclus in verschillende stadia ondergaan. Ons werk is gericht op het testen of omgevingsfactoren paring kunnen veroorzaken in het mycelia van P. blakesleeanus. Kruisingen van P. blakesleeanus gekweekt op voedingsarme media zullen worden onderworpen aan voedingsstofbeperkte agar om een seksuele respons op te wekken in overeenstemming met nutriëntentekort. Het succesvol op gang brengen van paring in P. blakesleeanus zal toekomstige studies vergemakkelijken die een grote hoeveelheid seksueel reproducerende mycelia in specifieke stadia vereisen. De resultaten van dit onderzoek zullen ons begrip van hoe de voortplantingsmechanismen van P. blakesleeanus worden beïnvloed door omgevingsfactoren verder vergroten, wat zal bijdragen aan de bredere kennisbasis over de seksuele voortplanting van draadschimmels.

Inleiding

De inductie van paring in schimmelsystemen in laboratoriumomstandigheden heeft het begrip van eukaryote genetica, celbiologie, evolutionaire biologie en biotechnologie verbeterd. De dikaryan schimmels, in het bijzonder de Ascomycota, beschikken over de meest uitgebreide kennis over paringsinductie in een laboratoriumsetting1. Interessant is dat de eerste schimmel waarbij seksuele voortplanting werd voorgesteld, Syzygites megalocarpus, geen lid is van Ascomycota, maar eerder een lid van de phylum Mucoromycota2. De phylum Mucoromycota is een vroeg divergerende groep die vroeger werd geclassificeerd als "Zygomycota", maar nu wordt beschouwd als de zuster van de Dicaryan-geslachten 3,4. De Mucoromycotta zijn, samen met Zoopagomycota, evolutionair belangrijk omdat deze phyla de overgang van schimmels naar terrestrische ecosystemen vertegenwoordigen 4,5. Net als andere schimmels gebruiken de Mucoromyceten ongeslachtelijke en seksuele voortplantingsstrategieën als reactie op hun omgeving 3,6. Onder omstandigheden met beperkte voedingsstoffen beginnen mucoromyceten aan de seksuele cyclus6. Mucoromyceten vertonen zowel homothallische als heterothallische paringsmechanismen, waarbij de compatibiliteit wordt bepaald door de paringsgenen sexM en sexP, aangeduid als respectievelijk (-) en (+) 7,8,9.

Blakeslee10 benadrukte de gevoeligheid van de seksuele cyclus van mucoromyceet voor externe omstandigheden, en merkte op dat vocht van cruciaal belang is voor hun vorming en dat de beschikbaarheid van voedingsstoffen in het substraat een belangrijke rol speelt. Complementaire paringstypen beginnen de seksuele cyclus door coöperatieve synthese van trisporzuren (TA) met bètacaroteen als voorloper 11,12,13. Na de detectie van TA worden de reagerende vegetatieve hyfen dikker en worden ze sterk vertakte zygoforen 14,15,16. De zygoforen zetten de productie van TA voort en trekken elkaar chemoattract aan. Bij P. blakesleeanus differentiëren zygoforen binnen het substraat en zijn ze niet direct zichtbaar op vaste agarmedia17. Bij het maken van contact verstrengelen de zygoforen zich en worden ze luchtzygoforen.

Naarmate de seksuele cyclus vordert, hechten de uiteinden van de zygoforen zich vast en duwt het midden van de cellen naar buiten om een ringachtige structuur te vormen met coralloïde zwelling aan de basis, waardoor de overgang naar het progametangium wordt voltooid. De uiteinden van de cellen die het progametangium vormen, beginnen samen te smelten en ontwikkelen zich tot het gametangium. In het gametangia-stadium vertonen de zygoforen doornachtige versieringen. De celwand aan de uiteinden lost op en er verschijnen onvoorziene septa, die het gebied afbakenen waar de zygospore zich zal vormen, en de zygoforen fungeren als tangachtige suspensors18. De zygospore zal gepigmenteerd worden naarmate de celwand dikker wordt en het extra doornachtige versieringen krijgt17,18. Eenmaal gevormd, zal de zygospore een periode van rust ingaan voordat hij de groeicyclus opnieuw start.

Phycomyces blakesleeanus is een heterothallisch mucoromyceet dat opmerkelijk is vanwege zijn grote cellen en milieuvriendelijke sporangioforen 6,8,18. Dit organisme kan gemakkelijk in het laboratorium worden gekweekt en de delen van de seksuele cyclus die leiden tot de vorming van zygosporen kunnen worden waargenomen in een tijdsbestek van 8-10 dagen. Als model is P. blakesleeanus onderzocht op zijn vermogen om licht in zijn omgeving waar te nemen17,19. Het kweekgemak en het vermogen om paring op te wekken maakten het ook tot een ideaal model om het mechanisme achter zijn vermogen om licht waar te nemente bestuderen 20; Deze bevindingen benadrukten ook de evolutionaire conservering van lichtgevoelige mechanismen in schimmels. In P. blakesleeanus is aangetoond dat licht de seksuele voortplanting remt via deze geconserveerde lichtgevoelige eiwitten21. Recente evolutionaire ontwikkelingsstudies hebben geprobeerd te begrijpen welke genen bijdragen aan celdifferentiatie tijdens de seksuele cyclus van P. blakesleeanus 6. Het correleren van morfogenese met specifieke genen zou vereisen dat voldoende weefsel van dezelfde celtypen wordt geïsoleerd om genexpressiestudies uit te voeren.

Hoewel protocollen voor het induceren van paring van P. blakesleeanus in een laboratoriumomgeving eerder zijn beschreven, vermelden sommige alleen het type medium dat moet worden gebruikt en de relevante stammen18. Sommige protocolbeschrijvingen bevatten geen specifieke mediaformulering, maar beschrijven wel waar vermoedelijke complementaire paringstypen op een plaat moeten worden geplaatst10. Recentere protocollen maken een verhoogde productie van zygosporen mogelijk door ofwel sporen van elk paringstype te mengen en te inoculeren met de gemengde sporensuspensie21 of door paringstypen op enige afstand van elkaar te plaatsen en de cultuur 20 dagen te laten incuberen22. Deze benaderingen zijn nuttig voor het genereren van voldoende gedifferentieerde cellen, met name zygosporen, maar zijn mogelijk niet geschikt voor het observeren van een ontwikkelingsverloop of het selecteren van seksuele structuren die zich vóór zygosporen vormen voor single-cell transcriptomics. Ander werk heeft dit aangepakt door complementaire paringstypen op afstand van elkaar te plaatsen op vaste media om de observatie van seriële morfologische overgangen mogelijk te maken wanneer de seksuele cyclus begint 6,22,23. Net als bij andere schimmels breidt P. blakesleeanus mycelia zich radiaal uit24,25. Daarom, wanneer complementaire paringstypen op dezelfde plaat worden gekweekt, zullen verschillende delen van hun mycelia op verschillende tijdstippen met elkaar in contact komen. Aangezien contact tussen mycelia een van de eerste stappen is in de seksuele cyclus van P. blakesleeanus, betekent dit dat verschillende delen van interagerende mycelia zich in verschillende stadia van de seksuele cyclus zullen bevinden. Deze asynchronie kan van invloed zijn op de uitkomst van een genexpressieonderzoek, zodat als gedifferentieerde celtypen worden gemengd en als ze verschillende genexpressieprogramma's hebben, het moeilijk zou zijn om de rol van een gen aan een bepaalde structuur toe te schrijven.

Naast de waarde van P. blakesleeanus als model voor het onderzoeken van genen die betrokken zijn bij morfogenese tijdens de seksuele cyclus, maken de krachtige groei en het vermogen om te differentiëren in een tijdsbestek van een paar dagen het een ideale schimmel voor het opleiden van studenten die geïnteresseerd zijn in vroeg divergerende filamenteuze schimmels en voor gebruik in een niet-gegradueerde klasomgeving om meer te weten te komen over de diversiteit van schimmels en hun ontwikkelingsprocessen. Het hier gepresenteerde protocol maakt gebruik van drie concentraties van twee verschillende soorten media om het effect van de beschikbaarheid van voedingsstoffen op het uiterlijk van mycelium, de inductie van paring en verrijking voor bepaalde seksuele structuren aan te tonen, hetzij voor kwantificering, observatie of potentiële single-cell transcriptomics.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

1. Voorbereiding van de media

  1. Suspendeer maïsmeelagar in poedervorm (CMA) of aardappeldextrose-agar (PDA) in gedeïoniseerd water. Voor 100% CMA of PDA, volg de instructies van de fabrikant en suspendeer 17 g CMA in 1 L gedeïoniseerd water of 39 g PDA in 1 L gedeïoniseerd water. Voor N% CMA of PDA, suspendeer 1/N van de door de fabrikant aanbevolen hoeveelheid en vul aan met extra agar om een agarconcentratie van 7.5% (w/v) te bereiken.
    OPMERKING: Optionele stap: Voeg vóór het autoclaveren 25 μg/ml chlooramfenicol toe als bacteriële besmetting een probleem is.
  2. Steriliseer de media in een autoclaaf, bij 121 °C gedurende 15 min.
  3. Koel de media af tot ~60 °C door ze 30 minuten in een waterbad te plaatsen dat is ingesteld op 60 °C.
    OPMERKING: Als de warme fles met media 6 s kan worden vastgehouden met weinig tot geen ongemak, dan is hij klaar om te schenken.
  4. Giet platen onder aseptische omstandigheden in een laminaire stromingskap of biologische veiligheidskast. Kantel de fles met media over een open, lege petrischaal en giet net genoeg om de bodem volledig te bedekken.
    1. U kunt ook een serologische pipet van glas gebruiken en 20 ml media in elke plaat pipetten.
      OPMERKING: Deze aanpak verlengt de tijd dat de mediafles op een lagere temperatuur is en verhoogt het risico op voortijdige stolling van de agar.
  5. Laat de media opnieuw stollen. Bewaar de platen bij 4 °C als ze niet direct worden gebruikt.

2. Schimmelsporen of weefsel voorbereiden

  1. Verkrijg culturen van elk paringstype P. blakesleeanus (bijv. NRRL 1555 (-), NRRL 1554 (+), NRRL 1464 (-) en NRRL 1465 (+)). Om kruisingen met sporen te inoculeren, kweek je eerst elk paringstype in zuivere cultuur op 100% CMA of PDA
  2. Snijd een deel van het geavanceerde mycelia uit bestaande culturen en plaats het uitgesneden mycelium op een 100% CMA/PDA-plaat. Incubeer zuivere culturen gedurende 1 week bij 27 °C onder een lichtcyclus van 12 uur.
  3. Zodra er sporangioforen aanwezig zijn, overspoelt u een sporulerende zuivere cultuur met 0,01% Tween 20 in gesteriliseerd, gedeïoniseerd water met behulp van een aseptische techniek. Zuig met een P1000-micropipet 1.0 ml van het Tween 20-sporenmengsel van de plaat en in een microcentrifugebuis.
  4. Centrifugeer in een minicentrifuge gedurende 30 s en decanteer vervolgens de supernatant.
    1. Als er meer sporen nodig zijn, blijf dan 1.0 ml van het Tween 20-sporenmengsel in dezelfde microcentrifugebuis toevoegen en herhaal stap 2.4. Nadat u een geschikte hoeveelheid sporen hebt verkregen, decanteert u het bovenstaande en vervangt u het door 500 μL steriel gedeïoniseerd water.
    2. Optioneel: Gebruik een hemacytometer om de concentratie van sporen te schatten, zodat u kunt zien of er meer water moet worden toegevoegd of dat de sporen opnieuw moeten worden gecentrifugeerd.
  5. U kunt de kruisingen ook inoculeren met geavanceerd mycelia uit de zuivere culturen.
    1. Gebruik een gesteriliseerd scheermesje of een boor met kurkgaten om het weefsel weg te snijden en het inoculum onmiddellijk te plateren.
  6. Stel de kruisen in als 2-voudige kruisen, 4-voudige kruisen of 8-voudige kruisen (Afbeelding 1).
    OPMERKING: Als kruisen worden ingesteld voor transcriptomisch werk, wordt aanbevolen om 1-2 extra platen per voorwaarde/media in te stellen om als indicatieplaten te dienen. Indicatorplaten stellen onderzoekers in staat om de blootstelling aan licht aan experimentele platen te beperken, omdat licht de seksuele voortplanting remt in P. blakesleeanus.
    1. Voor een 2-weg kruising plaatst u complementaire paringstypen tegenover elkaar (Figuur 1A).
      1. Plaats het mycelia van het (-) paringstype, NRRL 1555 of NRRL 1464, op ten minste 1 cm afstand van de rand van een petrischaaltje op PDA of CMA.
      2. Op dezelfde plaat, tegenover waar het (-) paringstype is geplaatst en op 1 cm afstand van de rand van het petrischaaltje, plaatst u het (+) paringstype, NRRL 1554 of NRRL1465 (Figuur 1A).
        OPMERKING: De afstand tussen complementaire paringstypen zal de grootte van het weefsel beïnvloeden dat deelneemt aan de seksuele cyclus. Door paringstypes die verder uit elkaar liggen, kan het mycelia zich meer uitbreiden, waardoor het aantal seksuele interacties tussen de twee partners zal toenemen.
    2. Voor een 4-weg kruising, plaats gelijke paringstypen tegenover elkaar maar grenzend aan een complementair paringstype (Figuur 1B).
      1. Plaats de sporen of mycelia van de (-) paringstypes, NRRL 1555 en NRRL 1464, tegenover elkaar op minstens 1 cm afstand van de rand van een petrischaaltje op PDA of CMA.
      2. Kies op dezelfde plaat een plaats tussen de twee (-) paringstypen en op minstens 1 cm afstand van de rand van de plaat en inoculeer de plaats met sporen of mycelia van het (+) paringstype, NRRL 1554 of 1465.
      3. Plaats op dezelfde plaat, tegenover de plaats waar het eerste (+) paringstype is geënt en op ten minste 1 cm afstand van de plaat, het andere (+) paringstype.
    3. Voor een 8-voudige kruising, wissel de paringstypen af langs de omtrek van de petrischaal, met vier van elk paringstype (Figuur 1C).
  7. Sluit de platen na het enten af met parafilm of (laat ze niet verzegeld) en plaats ze in een secundaire recipiënt voordat ze in het donker bij 22 °C worden geïncubeerd. Observeer de platen dagelijks op tekenen van paring, gedurende welke tijd, maak foto's van onder de plaat en traceer het mycelia terwijl de culturen groeien.
    OPMERKING: Verwacht na 24 uur na inoculatie dat mycelia zich uitbreidt op alle mediatypen, maar het is onwaarschijnlijk dat individuen in dit stadium in contact komen.
  8. Afhankelijk van het mediatype (PDA of CMA) en de formulering (25%, 50%, 100%), als de mycelia contact beginnen te maken, inspecteer dan mycelia van complementaire paringstypen die in contact zijn onder een dissectiebereik op bewijs van paring. Maak foto's van interagerende mycelia met een camera of een smartphone die op de ontleedkijker is gemonteerd.
    1. Verkrijg afbeeldingen van mycelia en hecht ze aan elkaar (bijvoorbeeld met behulp van de Panorama Stitcher-applicatie). Gebruik ImageJ om de oppervlakte van het mycelia te schatten (zie online tutorials).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Na een kruising in 4 richtingen varieerde elke stam enigszins in groeisnelheid, zoals bepaald door de verandering in oppervlakte van het mycelium (Figuur 2). Hoewel niet statistisch significant, had NRRL 1555 een snellere verandering in oppervlakte wanneer het werd geplateerd op 25% CMA, 25% PDA of 100% PDA. Evenzo had NRRL 1465 een grotere verandering in oppervlakte wanneer het werd gekweekt op 50% PDA of CMA. NRRL 1464 had de snelste toename in oppervlakte...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Een eenvoudig protocol voor het induceren van seksuele voortplanting bij P. blakesleeanus in een laboratoriumomgeving wordt hier gepresenteerd. Een van de meest kritische overwegingen voor dit protocol is de beperking van voedingsstoffen. Er wordt verondersteld dat schimmels seksuele voortplanting coöpteerden als reactie op barre omgevingsomstandigheden zoals nutriëntenbeperking 6,28,29,30,31,32.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben geen belangenconflicten te melden.

Dankbetuigingen

We willen het Colorado College Natural Sciences Executive Committee, de afdeling Organismal Biology and Ecology en het Hevey Family Fund for Student Research bedanken voor het financieren van dit werk. We danken ook Alice Keller en Tia Hutchens voor hun technische ondersteuning.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

```html
Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Agar powderThermoFisher3453PK
chloramfenicolFisherSciBP904-100
Cornmeal agarCarolina742460
Panorama StitcherApple App Store
Phycomyces blakesleeanus (-) NRRL 1555United States Department of Agriculture - Agricultural Research Service1555USDA-ARS verzendt alleen naar academische onderzoekers; zie hieronder voor alternatieven
Phycomyces blakesleeanus (-) NRRL 1564United States Department of Agriculture - Agricultural Research Service1564USDA-ARS verzendt alleen naar academische onderzoekers; zie hieronder voor alternatieven
Phycomyces blakesleeanus (-) Tube CultureCarolina Biological Supply156183Cultuur van onderwijskwaliteit beschikbaar voor aankoop; NRRL 1555
Phycomyces blakesleeanus (+) NRRL 1554United States Department of Agriculture - Agricultural Research Service1554USDA-ARS verzendt alleen naar academische onderzoekers; zie hieronder voor alternatieven
Phycomyces blakesleeanus (+) NRRL 1565United States Department of Agriculture - Agricultural Research Service1565USDA-ARS verzendt alleen naar academische onderzoekers; zie hieronder voor alternatieven
Phycomyces blakesleeanus (+) Tube CultureCarolina156182Cultuur van onderwijskwaliteit beschikbaar voor aankoop; NRRL 1554
Aardappel dextrose agarFisherSciDF0013-17-6
Sprout Plus Mini CentrifugeHeathrow ScientificSKU 120610
Tween 20Sigma-AldrichP6585-10ML
```

Referenties

  1. NaranjoOrtiz, M. A., Gabaldón, T. Fungal evolution: diversity, taxonomy and phylogeny of the fungi. Biol Rev Camb Philos Soc. 94 (6), 2101-2137 (2019).
  2. Idnurm, A. Sex determination in the firstdescribed sexual fungus. Eukaryot Cell. 10 (11), 1485-1491 (2011).
  3. Spatafora, J. W., et al. A phylumlevel phylogenetic classification of zygomycete fungi based on genomescale data. Mycologia. 108 (5), 1028-1046 (2016).
  4. Wang, Y., et al. Divergent evolution of early terrestrial fungi reveals the evolution of mucormycosis pathogenicity factors. Genome Biol Evol. 15 (4), evad046(2023).
  5. Gryganskyi, A. P., et al. Sequencing the genomes of the first terrestrial fungal lineages: what have we learned. Microorganisms. 11 (7), 1830(2023).
  6. Peña, J. F. The evolutionary developmental biology of Mucoromycotina [Doctoral dissertation]. , University of California, Riverside. (2022).
  7. Wetzel, J., Burmester, A., Kolbe, M., Wöstemeyer, J. The matingrelated loci sexM and sexP of the zygomycetous fungus Mucor mucedo and their transcriptional regulation by trisporoid pheromones. Microbiology (Reading). 158 (Pt 4), 1016-1021 (2012).
  8. Camino, L. P., Idnurm, A., CerdáOlmedo, E. Diversity, ecology, and evolution in Phycomyces. Fungal Biol. 119 (11), 1007-1021 (2015).
  9. Gryganskyi, A. P., et al. Structure, function, and phylogeny of the mating locus in the Rhizopus oryzae complex. PLoS One. 5 (12), e15273(2010).
  10. Blakeslee, A. F. Sexual reproduction in the Mucorineae. Proc Am Acad Arts Sci. 40, 205-319 (1904).
  11. Sutter, R. P., Grandin, A. B., Dye, B. D., Moore, W. R. (-) mating typespecific mutants of Phycomyces defective in sex pheromone biosynthesis. Fungal Genet Biol. 20 (4), 268-279 (1996).
  12. Sahadevan, Y., RichterFecken, M., Kaerger, K., Voigt, K., Boland, W. Early and late trisporoids differentially regulate βcarotene production and gene transcript levels in the mucoralean fungi Blakeslea trispora and Mucor mucedo. Appl Environ Microbiol. 79 (23), 7466-7475 (2013).
  13. Gooday, G. W., Carlile, M. J. The discovery of fungal sex hormones: III. Trisporic acid and its precursors. Mycologist. 11 (3), 126-130 (1997).
  14. Banbury, G. H. Processes controlling zygophore formation and zygotropism in Mucor mucedo Brefeld. Nature. 173, 499-500 (1954).
  15. Sutter, R. P., Whitaker, J. P. Zygophorestimulating precursors (pheromones) of trisporic acids active in (-)Phycomyces blakesleeanus. Acidcatalyzed anhydro derivatives of methyl 4dihydrotrisporateC and 4dihydrotrisporateC. J Biol Chem. 256 (5), 2334-2341 (1981).
  16. Gooday, G. W. Functions of trisporic acid. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 284, 509-520 (1978).
  17. Bergman, K., et al. Phycomyces. Bacteriol Rev. 33 (1), 99-157 (1969).
  18. O'Donnell, K. L., Hooper, G. R., Fields, W. G. Zygosporogenesis in Phycomyces blakesleeanus. Can J Bot. 54, 2573-2586 (1976).
  19. Delbrück, M., Reichardt, W. I. System analysis for the light growth reactions of Phycomyces. Cellular Mechanics in Differentiation and Growth. Rudnick, D. , Princeton University Press. 3-44 (1957).
  20. Idnurm, A., et al. The Phycomyces madA gene encodes a bluelight photoreceptor for phototropism and other light responses. Proc Natl Acad Sci USA. 103 (12), 4546-4551 (2006).
  21. Shakya, V. P. S., Idnurm, A. The inhibition of mating in Phycomyces blakesleeanus by light is dependent on the MadAMadB complex that acts in a sexspecific manner. Fungal Genet Biol. 101, 20-30 (2017).
  22. Yamazaki, Y., Miyazaki, A., Kataoka, H., Ootaki, T. Effects of chemical components and nitrogen sources on zygospore development in Phycomyces blakesleeanus. Mycoscience. 42 (1), 11-17 (2001).
  23. Idnurm, A., Walton, F. J., Floyd, A., Heitman, J. Identification of the sex genes in an early diverged fungus. Nature. 451 (7175), 193-196 (2008).
  24. Agrios, G. N. Plant pathogens and disease: general introduction. Encyclopedia of Microbiology. Schaecter, M. , Elsevier. 613-646 (2009).
  25. Valle, M., et al. Impact of water activity on the radial growth of fungi in a dairy environment. Food Res Int. 157, 111247(2022).
  26. Heo, Y. M., et al. Investigation of filamentous fungi producing safe, functional watersoluble pigments. Mycobiology. 46 (3), 269-277 (2018).
  27. Wickham, H. ggplot2 elegant graphics for data analysis. , Springer International Publishing. Cham, Switzerland. (2016).
  28. Lubkowitz, M. A., et al. Schizosaccharomyces pombe isp4 encodes a transporter representing a novel family of oligopeptide transporters. Mol Microbiol. 28 (4), 729-741 (1998).
  29. Nelson, M. A., Metzenberg, R. L. Sexual development genes of Neurospora crassa. Genetics. 132 (1), 149-162 (1992).
  30. Sato, S., Suzuki, H., Widyastuti, U., Hotta, Y., Tabata, S. Identification and characterization of genes induced during sexual differentiation in Schizosaccharomyces pombe. Curr Genet. 26 (1), 31-37 (1994).
  31. Grishkan, I., Korol, A. B., Nevo, E., Wasser, S. P. Ecological stress and sex evolution in soil microfungi. Proc Biol Sci. 270 (1510), 13-18 (2003).
  32. Bernstein, H., Byers, G. S., Michod, R. E. Evolution of sexual reproduction: importance of DNA repair, complementation, and variation. Am Nat. 117 (4), 537-549 (1981).
  33. Heitman, J., et al. The fungal kingdom. , ASM Press. (2017).
  34. Heitman, J., et al. Sex in fungi molecular determination and evolutionary implications. , ASM Press. (2007).
  35. Wang, Z., LópezGiráldez, F., Wang, J., Trail, F., Townsend, J. P. Integrative activity of mating loci, environmentally responsive genes, and secondary metabolism pathways during sexual development of Chaetomium globosum. mBio. 10, (2019).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

Filamenteuze schimmelsseksuele reproductieparingstypezygosporevormingnutriëntbeperkte mediahyfale chemoattractieaardappel-dextrose-agargenexpressie
Seksuele kruisingen met de Mucoromyceet Phycomyces blakesleeanus
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.