Dit rapport beschrijft een methode voor het meten van de tijd tot knockdown van volwassen Drosophila melanogaster met behulp van een Drosophila Activity Monitor (DAM2) als reactie op een warmtestressor voor luchtgeleiding in een couveusekamer. De DAM2 meet de activiteit door individuele vliegbewegingen te registreren terwijl ze een infraroodstraal kruisen. De analyse van de gegevens wordt vergemakkelijkt door een nieuw uitvoerbaar bestand dat door de auteurs is gemaakt.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Hittetolerantietesten met behulp van het Drosophila-activiteitsmonitorsysteem : een gids voor een uitvoerbare toepassing voor gegevensanalyse
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
De studie van hittetolerantie in Drosophila melanogaster is al tientallen jaren van bijzonder belang voor onderzoekers, met een gebruikelijke benadering voor het beoordelen van hittetolerantie het monitoren van de tijd tot knockdown (TKD) na blootstelling aan een verhoogde temperatuur. Klassiek worden vliegen gehuisvest in individuele flesjes en in een verwarmd waterbad geplaatst. TKD wordt vervolgens handmatig gemonitord door onderzoekers. Hoewel zeer goed ingeburgerd, blijven er problemen bestaan met betrekking tot subjectiviteit en consistente toepassing van een tastbare definitie van stopzetting van alle bewegingen, inclusief spierspasmen, bij het implementeren van deze handmatige testen. We hebben een high-throughput methode ontwikkeld voor het automatiseren van hittetolerantietesten met behulp van de TriKinetics Drosophila Activity Monitors (DAM2). Om het DAM2-systeem te begeleiden, hebben we een programma geschreven en een gebruiksvriendelijk uitvoerbaar bestand gemaakt om automatisch de laatste bewegingstijd af te lezen uit de gegenereerde activiteitsgegevens. Dit script schrijft vervolgens naar een .csv bestand de tijd tot hitteverlamming (TKD) voor elke vlieg. Uit onze gegevens blijkt dat deze geautomatiseerde DAM2-methode consistent en betrouwbaar is. Ondertussen zijn activiteitsprofielen die zijn gemaakt op basis van de gegevens van het aantal activiteiten interessant. Deze activiteitsprofielen kunnen worden samengesteld en hebben het potentieel om hittetolerantietests uit te breiden met de relatief niet-bestudeerde gedragscomponenten van hittetolerantie. In dit protocol wordt in detail beschreven hoe u het DAM2-systeem en de HoTDAM! software om de warmtetolerantie in D. melanogaster te schatten.
Inleiding
Ectothermen reageren doorgaans op hittestress met verhoogde locomotorische activiteit. Dit fenomeen is al tientallen jaren duidelijk voor onderzoekers, met de karakteristieke gedragsrespons beschreven door Cowles en Bogert in 19441. Ze beschreven hoe een organisme onder hittestress eerst een verhoogde locomotorische beweging zal vertonen. Naarmate de hittestress toeneemt, worden korte uitbarstingen van activiteit afgewisseld met perioden van inactiviteit. De temperatuur waarbij het organisme geen gecoördineerde beweging meer kan vertonen, is het kritische thermische maximum (CTmax). Gespierde spams volgen en uiteindelijk stort het organisme in 1,2. Deze ineenstorting is moeilijk te definiëren en vertegenwoordigt iets dat lijkt op "hitte, strengheid, coma of dood"2. Hier zullen we de term fysiologische ineenstorting gebruiken om theoretisch te verwijzen naar dit wazige eindpunt van hittestress.
Drosophila melanogaster en andere kleine insecten zijn waardevolle modellen geweest om hittestress te bestuderen. Om ten minste een deel van de complexe verzameling eigenschappen die warmtetolerantie vormen te schatten, hebben veel onderzoekers handmatig de tijd en de temperatuur waargenomen waarbij fysiologische ineenstorting optreedt, die respectievelijk de tijd tot knockdown (TKD) en CTmax vertegenwoordigen. Hoewel deze handmatige testmethoden zeer goed ingeburgerd zijn, hebben ze enkele nadelen. Een operationele definitie van fysiologische collaps kan moeilijk vast te stellen en op de juiste manier toe te passen op alle gevallen, vooral wanneer waarnemers minder ervaren zijn. Op welk punt gaat het organisme bijvoorbeeld van spierspasmen naar collaps? Het patroon van spierspasmen en aanvalsactiviteit voorafgaand aan collaps kan onvoorspelbaar zijn en kan nauwkeurige observatie bemoeilijken 2,3, waardoor de nauwkeurigheid en precisie in gevaar komen. Ondertussen beperkt de moeilijkheid bij observatie ook het aantal organismen dat tegelijk kan worden getest, waardoor de schaalbaarheid wordt beperkt.
Aangezien een toename van de activiteit een consistente reactie op hitte is en TKD en CTmax uiteindelijk het punt zijn waarop de activiteit stopt, hebben we geprobeerd de Drosophila Activity Monitors (DAM2) van TriKinetics te gebruiken om warmtetolerantietests te automatiseren. We hebben onlangs een methode gepubliceerd voor een geautomatiseerde test, samen met gebruiksvriendelijke software, met behulp van het DAM2-systeem4. De test werd gevalideerd door metingen van hittetolerantie in termen van TKD te vergelijken met een klassieke handmatige observatie-gebaseerde TKD-test op basis van verschillende factoren. We hebben ook de locomotorische activiteitscomponent van TKD-assays onderzocht om het induceerbare thermotolerantiefenotype verder te karakteriseren. We hebben de test en bijbehorende software HoTDAM genoemd! (Hittetolerantietesten met behulp van het Drosophila Activity Monitoring System). Hier geven we een gedetailleerde beschrijving van de geautomatiseerde hittetolerantietestmethode met behulp van het DAM2-systeem en de HoTDAM! software. De test is gemakkelijk te gebruiken en is gemakkelijk schaalbaar om veel organismen tegelijk te kunnen meten.
In dit manuscript hebben we TKD-testen uitgevoerd op thermosensorische mutante vliegen (transient receptor potential ankyrin 1; TRPA1) en hun genetische controles (White1118; w1118). Deze organismen werden gekozen om het belang te benadrukken van de karakteristieke verhoogde activiteit die wordt waargenomen tijdens hittestress voor de test. TRPA1-organismen vertonen dit ontsnappingsgedrag namelijk niet, wat het intrinsieke verband illustreert tussen geconserveerde gedragsreacties en schattingen van hittetolerantie, zoals TKD. We hebben de test uitgevoerd voor zowel vrouwen als mannen, samen met het implementeren van een warmtehardende voorbehandeling. De representatieve resultaten die hier worden gepresenteerd, zijn gegevens van geheel nieuwe tests dan die welke zijn gebruikt in de oorspronkelijke validatietests die eerder zijn gepubliceerd.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
1. Vliegen houden
- Kies de juiste vliegvoorraad/lijn voor het onderzoek.
OPMERKING: Om de test te illustreren, gebruikten we de transiënte receptorpotentiaal TRPA1 knock-outvoorraad en de genetische controle ervan, de w1118-voorraad . - Houd de vliegenbestanden indien nodig onder consistente omstandigheden. Om dit protocol te volgen, moet u standaardvoedsel (maïsmeel, melasse en torula-gist) bij 25 °C onder een dagcyclus van 12:12 bewaren.
- Scheid mannen en vrouwen met lichte anesthesie.
OPMERKING: Afhankelijk van het experiment kunnen maagdelijke of gedekte vliegen worden gebruikt.- Laat volwassen mannetjes en vrouwtjes (afzonderlijk voor beide bestanden) 5 dagen paren en eieren leggen. Haal de volwassenen uit de flessen.
- Als volwassenen enkele dagen later beginnen te sluiten, maak je de flessen weer leeg. Scheid na 2 dagen de mannetjes en vrouwtjes met behulp van lichte etheranesthesie en laat ze afzonderlijk rijpen met een dichtheid van 25 vliegen per injectieflacon.
2. Voorbehandeling
- Pas de voorbehandeling of onafhankelijke variabele toe die de experimentele groepen definieert (genetisch, omgevings-, farmacologisch of anderszins).
- Om dit protocol te volgen, scheidt u de volwassenen op geslacht en behandelt u na 5 dagen de helft van de volwassenen door een afgesloten injectieflacon met de organismen gedurende 1 uur onder te dompelen in een waterbad bij 37 °C. Houd de bedieningselementen in de broedmachine op 25 °C. Laat de vliegen 24 uur na de voorbehandeling herstellen, voorafgaand aan de hittetolerantietest.
3. DAM2-systeem instellen
- Laad de vliegen in de DAM2 monitorbuizen en bedek de buizen aan beide uiteinden met katoen. Als de vliegen onmiddellijk op hittetolerantie moeten worden beoordeeld, gebruik dan geen anesthesie tijdens het laden van de organismen in de monitorbuizen om mogelijke verstorende effecten die verband houden met blootstelling aan anesthesie te voorkomen. Zuig in plaats daarvan individuele vliegen uit de flesjes in de monitorbuizen op.
- Plaats de analysebuisjes in de activiteitenmonitors en noteer op welke slotnummers de verschillende groepen zijn geladen.
OPMERKING: Deze kunnen worden gerandomiseerd, afhankelijk van het experiment, als de locatie binnen de monitor als een verstorende variabele kan worden beschouwd. - Software voor DAM2-data-acquisitie
OPMERKING: Het DAM2-systeem en de software worden uitgebreid beschreven in het DAMSystem3 Software Data Sheet dat beschikbaar is op de website van het bedrijf (zie de materiaaltabel). Raadpleeg de DAM2-instructies voor specifieke probleemoplossing en algemene functionaliteit. Hier geven we richtlijnen voor het gebruik van het systeem in het kader van onze hittetolerantietest.- Het DAM2-systeem bewaakt het aantal keren dat een individuele vlieg in elke buis een infraroodstraal breekt. De data-acquisitiesoftware indexeert en reset deze telling vervolgens elk gedefinieerd tijdsinterval. Selecteer onder voorkeuren het leesinterval dat in de test moet worden gebruikt. We hebben een leesinterval van 15 s gevonden om een goede balans te bereiken tussen resolutie en leesfouten.
OPMERKING: Het wordt aanbevolen om het leesinterval in seconden niet korter te maken dan het aantal monitoren dat wordt gebruikt. Een korter leesinterval geeft een betere temporele resolutie aan de test, maar zal mogelijk ook het aantal leesfouten vergroten. De software kan achterop raken bij het indexeren van de metingen. Bovendien helpt een nieuwere, snellere computer om leesfouten te voorkomen. - Zorg er bij het overwegen van leesfouten voor dat de computer die wordt gebruikt om de DAM2-data-acquisitiesoftware uit te voeren, is ingesteld om nooit te slapen of in de sluimerstand te gaan om de test niet te onderbreken. Zorg er verder voor dat automatische updates (inclusief door de instelling gecontroleerde netwerkupdates) zijn uitgeschakeld tijdens het verzamelen van gegevens.
- Controleer of alle monitoren zijn aangesloten en communiceren met de software. Controleer of de status van elke monitor groen is onder het tabblad huidige gegevens .
OPMERKING: Zie de DAMSystem3 Software Datasheet voor details over welke problemen verschillende kleurcodes aanduiden. - De software voor gegevensverzameling schrijft automatisch het aantal activiteiten naar tekstbestanden in de map Gegevens in de systeembestanden. Om de gegevensanalyse te vergemakkelijken, verwijdert u alle tekstbestanden in deze gegevensmap voordat u de gegevensverzamelingssoftware voor een test start.
OPMERKING: De tekstbestanden worden automatisch ingevuld, dus het is toegestaan om ze uit deze map te verwijderen om oude gegevens te wissen zonder het programma te hinderen.
- Het DAM2-systeem bewaakt het aantal keren dat een individuele vlieg in elke buis een infraroodstraal breekt. De data-acquisitiesoftware indexeert en reset deze telling vervolgens elk gedefinieerd tijdsinterval. Selecteer onder voorkeuren het leesinterval dat in de test moet worden gebruikt. We hebben een leesinterval van 15 s gevonden om een goede balans te bereiken tussen resolutie en leesfouten.
4. Hittetolerantie test
- Laad de monitoren in de testincubator.
- Start de acquisitiesoftware en laat de software gedurende een bepaalde tijd indexeren (bijv. 40 indexen of 10 minuten als het leesinterval is ingesteld op 15 s) voordat u de hittestress toepast.
OPMERKING: Dit zorgt voor enige acclimatisering aan de buizen en herstel van de beweging van de monitoren tijdens het instellen. Vooral als de activiteit tijdens de test wordt geanalyseerd, zal deze acclimatiseringstijd een basisactiviteit vaststellen voorafgaand aan de inductie van hittestress. Afhankelijk van de specifieke aard van de test die wordt uitgevoerd, kan deze acclimatiseringsfase worden overgeslagen, waarbij de monitoren al bij de stresstemperatuur direct in de couveuse worden geplaatst. - Als u een statische (TKD) test uitvoert, stelt u de incubator zo snel mogelijk in op de ingestelde schadelijke temperatuur na de acclimatisatieperiode. De responsvariabele wordt geoperationaliseerd als de laatst geregistreerde bewegingstijd (d.w.z. de laatste niet-nulindex) om de TKD te schatten.
- Als u een dynamische test uitvoert, bepaalt u de snelheid waarmee de temperatuur na de acclimatiseringsperiode zal stijgen. Hier is de gemeten responsvariabele technisch gezien weer tijd. Het tijdstip waarop de laatste beweging wordt geregistreerd, valt samen met een temperatuur (CTmax), afhankelijk van de snelheid van het oplopen.
- Bewaak de activiteitsaantallen in realtime op het DAM-systeemdisplay in de acquisitiesoftware of bekijk direct de tekstbestanden in de gegevensmap in de DAMSystem3-programmabestanden. Kopieer de tekstbestanden en open de kopie in plaats van het originele bestand in de gegevensmap om problemen met het live opnemen van gegevens te voorkomen.
- Nadat er enkele minuten geen beweging in een van de vliegen te zien is, stopt u de acquisitiesoftware.
OPMERKING: Met onze testen hebben we ontdekt dat een paar tot enkele minuten inactiviteit een indicatie is van fysiologische collaps als gevolg van hittestress, vergelijkbaar met die gezien in de klassieke handmatige TKD-testen. Dit is echter afhankelijk van het spontane ontsnappingsgedrag. Overweeg daarom mogelijke verstorende variabelen als de specifieke behandeling in het onderzoek deze gedragsrespons zou kunnen veranderen. Verder zal, afhankelijk van de specifieke parameters van de test (bijv. temperatuur, behandeling), de lengte van de test uiteraard variëren.
5. Organisatie en analyse van gegevens
OPMERKING: Zie Aanvullende video S1 voor een uitleg over het downloaden van de uitvoerbare toepassing van de GitHub, evenals de basisfunctionaliteit van de software.
- Zodra de gegevens zijn verkregen, scant u de tekstbestanden op fouten met behulp van de software waarnaar wordt verwezen (zie de materiaaltabel) en selecteert u specifieke start- en stoppunten voor gegevens over samenvoegingsactiviteiten. Als er een acclimatiseringsinterval van 10 minuten is geïmplementeerd, begint u 10 minuten na de activiteitsregistratie met binning. Zie de discussie voor meer informatie over binning.
- Open de HoTDAM! analysesoftware en importeer de gescande monitorgegevensbestanden door te klikken op Bestand | Laad monitorgegevens.
OPMERKING: De software en de uitvoerbare toepassing zijn beschikbaar via GitHub (https://github.com/MatthewR47/HoTDAM) of via de website van het bedrijf in de sectie Analysesoftware . Houd er rekening mee dat de uitvoerbare toepassing op dit moment alleen compatibel is met Windows-besturingssystemen. - Voeg groepsaanduidingen toe om aan te geven welke behandelingsgroepen overeenkomen met welke cel binnen de DAM2-monitoren.
OPMERKING: De lay-out van de software-interface komt overeen met de lay-out van de monitoren. - Klik op Definitie van meerdere groepen starten om een dialoogvenster te openen om een groepsaanduiding toe te voegen die op meerdere cellen wordt toegepast. Zodra de groepsaanduiding is geaccepteerd, klikt u op de cellen om de groepsaanduiding toe te passen en klikt u vervolgens op Aanduiding van meerdere groepen stoppen.
OPMERKING: De software organiseert en exporteert DAMSystem3-gegevens naar .csv bestanden die moeten worden geanalyseerd in statistische software. - Exporteer de TKD (d.w.z. de laatste niet-nul-index) voor elke fly in de monitoren naar een .csv bestand door te klikken op Bestand | Knockdown-gegevens exporteren | Exporteer alle beeldschermen of exporteer geselecteerde beeldschermen. TKD voor elke vlieg wordt in de uitvoer georganiseerd op groepsaanduiding.
- Exporteer activiteitsgegevens voor elke vlieg door op Bestand | Activiteitsgegevens exporteren | Exporteer alle beeldschermen of exporteer geselecteerde beeldschermen naar een .csv bestand, waarbij alleen de tijdstempel- en telgegevens behouden blijven, waardoor het gegevensbestand gemakkelijker is om mee te werken, terwijl ook aangewezen groepslabels aan elke vlieg worden toegewezen.
OPMERKING: De eerste kolommen in de DAMSystem3-gegevensbestanden komen overeen met interne gegevens voor de monitors (bijv. lichtmonitoring of foutmeldingen) tijdens de acquisitie. De telgegevens staan in de kolommen 11-42 (zie het gegevensblad van DamSystem3 voor details). Als u de activiteitsgegevens exporteert met de analysesoftware, worden alle kolommen verwijderd, behalve de kolommen met de tijdstempel en de telgegevens. - Als u een CTmax-experiment uitvoert, gebruikt u de TKD om de CTmax te bepalen met behulp van de snelheid van temperatuurverhoging.
OPMERKING: De analysesoftware is op een objectgeoriënteerde manier geschreven in C# (broncode beschikbaar op GitHub; https://github.com/MatthewR47/HoTDAM) zodat aspecten van het programma eenvoudig kunnen worden aangepast om aanpassing aan specifieke doeleinden mogelijk te maken.
6. Statistieken
OPMERKING: Er kunnen veel verschillende tests worden gebruikt om de TKD-gegevens te analyseren, afhankelijk van de specifieke kenmerken van de experimentele opstelling.
- Gebruik overlevingsanalyse (bijv. Cox-regressie, Kaplan-Meier) om knockdown te conceptualiseren als een gebeurtenis die elke vlieg binnen de test zal ervaren.
OPMERKING: Voor een gedetailleerd overzicht, zie Bradburn's en Clark's 4-paper serie over overlevingsanalyse en de implementatie ervan 5,6,7,8. - Gebruik ANOVA om groepsverschillen te beoordelen en modaliteiten te vergelijken, vooral bij het valideren van de geautomatiseerde test voor specifieke aandoeningen.
- Analyseer de TKD-gegevens met behulp van Kaplan-Meier-overlevingsanalyse. Splits het bestand op voorraad zodat de analyse afzonderlijk wordt uitgevoerd (bijv. voor TRPA1 - en w1118-aandelenlijnen ). Kies de tijdsvariabele als TKD (in min), knockdown als de gebeurtenis, voorbehandeling als de factor en geslacht als de lagen.
- Voer de log-rank-, Breslow- en Tarone-Ware-tests uit om de voorbehandeling voor elke laag (d.w.z. geslacht) te vergelijken, ter illustratie en laat verschillende methoden zien.
- Bouw overlevingsplots.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
De analyses voor TRPA1 - en w1118-bestanden werden afzonderlijk uitgevoerd. Percentiel TKD-tijden en andere beschrijvende gegevens zijn te vinden in Tabel 1.
| Percentielena | ||||||||
| Geslacht | Behandeling | |||||||
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
De hittetolerantietestmethode die we hier beschrijven is veelzijdig en schaalbaar. Eerder hebben we al een validatiestudie gepubliceerd waarin we de HoTDAM! methode naar een klassieke, op observatie gebaseerde TKD-test en ontdekte dat de geautomatiseerde test dezelfde algemene trend liet zien over verschillende factoren4 (Figuur 3). Met andere woorden, op dezelfde manier als de klassieke handmatige TKD-test, was de DAM2 geautomatiseer...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs verklaren dat zij geen belangenconflicten hebben.
Dankbetuigingen
Het beschreven project werd ondersteund door Institutional Development Award (IDeA) subsidies van het National Institute of General Medical Sciences van de National Institutes of Health (5P20GM103427 en 1U54GM115458). Het UNK Undergraduate Research Fellows-programma en het UNMC Medical Student Summer Research Program.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 14 mL polystyreen testbuisjes | Falcon | 352057 | |
| 30 gallon aquarium | Wal-mart | ||
| 8 oz flessen | Genesee | 32-129F | |
| Constant Climate Chamber | Memmert | HPP750eco | |
| maïsmeel | Lab Scientific | FLY801010 | |
| DAM2 Drosophila Activiteitsmonitor | TriKinetics | DAM2 | (DAMSystem3 Data Sheet) https://www.trikinetics.com/Downloads/DAMSystem%20Price%20List%202024.7.pdf |
| DAMSystem data-acquisitie software | TriKinetics | gratis download | |
| Drosophila agar | Lab Scientific | FLY80201 | |
| ethanol | Fisher Scientific | BP82011 | |
| Ether | Fisher Scientific | E134-4 | |
| FileScan software | TriKinetics | voor het scannen van tekstfouten, het verzamelen van gegevens en uitvoer | |
| FlyStuff Flugs voor flessen | Genesee | 49-100 | |
| FlyStuff Flugs voor flesjes | Genesee | 49-102 | |
| FlyStuff flesjes | Genesee | 32-113RL | |
| HoTDAM software | Github of Trikinetics | https://github.com/MatthewR47/HoTDAM | |
| Immersiecirculatie verwarmer | PolyScience | MX-CA11B | |
| moutwijn | Lab Scientific | FLY80084 | |
| propionzuur | Fisher Scientific | A258-500 | |
| Pyrex Glasbuisjes 5 x 65 mm voor DAM2 | TriKinetics | PGT 5x65 | https://www.trikinetics.com/Downloads/DAMSystem%20Price%20List%202024.7.pdf |
| kleine verfkwast | Wal-mart | ||
| SPSS Statistics | IBM | ||
| tegosept | Lab Scientific | FLY55015 | |
| torula gist | MP Biomedicals | 290308505 | |
| TRPA1 mutante stam | Bloomington Stock center | 26504 | w[1118]; TI{w[+mW.hs]=TI}TrpA1[1] |
| w1118 stam | Bloomington Stock center | 3605 |
Referenties
- Cowles, R. B., Bogert, C. M. A preliminary study of the thermal requirements of desert reptiles. Bull Am Mus Nat Hist. 83, 261-296 (1944).
- Lutterschmidt, W. I., Hutchison, V. H. The critical thermal maximum: history and critique. Can J Zool. 75, 1561-1574 (1997).
- Jørgensen, L. B., Malte, H., Overgaard, J. How to assess Drosophila heat tolerance: Unifying static and dynamic tolerance assays to predict heat distribution limits. Funct Ecol. 33 (4), 629-642 (2019).
- Rokusek, B., et al. HoTDAM! An easy-to-use automated assay expands the inducible thermotolerance phenotype in Drosophila melanogaster: Heat hardening reduces motility. Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 286, 111522(2023).
- Bradburn, M. J., Clark, T. G., Love, S. B., Altman, D. G. Survival analysis part III: Multivariate data analysis - Choosing a model and assessing its adequacy and fit. Br J Cancer. 89 (4), 605-611 (2003).
- Bradburn, M. J., Clark, T. G., Love, S. B., Altman, D. G. Survival analysis part II: Multivariate data analysis- An introduction to concepts and methods. Br J Cancer. 89 (3), 431-436 (2003).
- Clark, T. G., Bradburn, M. J., Love, S. B., Altman, D. G. Survival analysis part IV: Further concepts and methods in survival analysis. Br J Cancer. 89 (5), 781-786 (2003).
- Clark, T. G., Bradburn, M. J., Love, S. B., Altman, D. G. Survival analysis part I: Basic concepts and first analyses. Br J Cancer. 89 (2), 232-238 (2003).
- Hazra, A., Gogtay, N. Biostatistics series module 9: survival analysis. Indian J Dermatol. 62 (3), 251-257 (2017).
- Stevenson, R. D. The relative importance of behavioral and physiological adjustments controlling body temperature in terrestrial ectotherms. Am Nat. 126 (3), 362-386 (1985).
- Grigg, G. C., Beard, L. A., Augee, M. L. The evolution of endothermy and its diversity in mammals and birds. Physiol Biochem Zool. 77 (6), 982-997 (2004).
- Soto-Padilla, A., et al. Thermosensory perception regulates speed of movement in response to temperature changes in Drosophila melanogaster. J Exp Biol. 221 (10), jeb174151(2018).
- Hoffmann, A. A., Sørensen, J. G., Loeschcke, V. Adaptation of Drosophila to temperature extremes: bringing together quantitative and molecular approaches. J Therm Biol. 28 (3), 175-216 (2003).
- Terblanche, J. S., et al. Ecologically relevant measures of tolerance to potentially lethal temperatures. J Exp Biol. 214 (22), 3713-3725 (2011).
- Rezende, E. L., Castaneda, L. E., Santos, M. Tolerance landscapes in thermal ecology. Funct Ecol. 28 (4), 799-809 (2014).
- MacLean, H. J., Hjort Hansen, J., Sørensen, J. G. Validating the automation of different measures of high temperature tolerance of small terrestrial insects. J Insect Physiol. 137, 104362(2022).
- Gioia, A., Zars, T. Thermotolerance and place memory in adult Drosophila are independent of natural variation at the foraging locus. J Comp Physiol A. 195, 777-782 (2009).
- Kjærsgaard, A., et al. The effect of developmental temperature fluctuation on wing traits and stressed locomotor performance in Drosophila melanogaster, and its dependence on heterozygosity. Evol Ecol Res. 14 (7), 803-819 (2012).
- Bak, N. K., Rohde, P. D., Kristensen, T. N. Strong sex-dependent effects of malnutrition on life- and healthspan in Drosophila melanogaster. Insects. 15 (1), 9(2023).
- Bettencourt, B. R., et al. Natural variation in Drosophila stressed locomotion meets or exceeds variation caused by Hsp70 mutation: analysis of behavior and performance. Behav Genet. 393, 306-320 (2009).
- Kjærsgaard, A., et al. Locomotor activity of Drosophila melanogaster in high temperature environments: plastic and evolutionary responses. Clim Res. 43 (1-2), 127-134 (2010).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
