Methodenartikel

Oncogene expressieanalyse met veranderingen in pH in een ductale cellijn van de pancreas

DOI:

10.3791/67843

⸱

11 april 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1Translational Research Centre, Asian Healthcare Foundation, AIG Hospitals, 2Department of Biochemistry, Osmania University, 3Department of Medical Gastroenterology, Asian Institute of Gastroenterology (AIG) Hospitals

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deze studie beschrijft een protocol voor het onderzoeken van de effecten van veranderde pH op de expressie van het oncogen via RNA-seq-analyse van een ductale cellijn van de pancreas.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De vierde belangrijkste doodsoorzaak door kanker, ductaal adenocarcinoom van de pancreas (PDAC), heeft een overlevingspercentage van 12% na vijf jaar. Deze ziekte heeft een slechte prognose en wordt gekenmerkt door een stijve stromale micro-omgeving, die een tastbare uitdaging vormt bij de behandeling ervan. Patiënten met chronische pancreatitis hebben een 10-voudig groter risico om PDAC te ontwikkelen; bij deze patiënten daalt de ductale pH van pH 8,0 naar pH 6,0 als gevolg van bicarbonaatinsufficiëntie en het inflammatoire milieu. Ons doel was om de rol te begrijpen van de zure omgeving die wordt waargenomen bij chronische pancreatitis op de expressie van oncogen in een ductale cellijn van de pancreas.

Daarom werden 80% confluente menselijke ductaal epitheelcellen van de alvleesklier gedurende 6 uur geïncubeerd bij pH 6,0 tot pH 7,2. Totaal RNA van de cellen werd verwerkt om het totale mRNA in de monsters te verrijken. Genexpressie werd geëvalueerd via next-generation sequencing (NGS) van biologische replicaten. RNA-seq-analyse werd uitgevoerd met behulp van een online tool en de differentieel tot expressie gebrachte genen (FC's < ± 2.0) werden geïdentificeerd; er waren 90, 148 en 109 opgereguleerde genen en 20, 14 en 23 gelaagde genen bij pH 6,0, 6,5 en 7,0 Vier oncogenen werden opgereguleerd bij pH 6,0, zeven werden opgereguleerd bij pH 6,5 en zeven werden opgereguleerd bij pH 7,0. De veel voorkomende genen die werden opgereguleerd bij pH 6,0, pH 6,5 en pH 7,0 waren lymfocytcelspecifiek eiwit-tyrosinekinase (LCK) [pH 6,0, FC: 2,93; pH 6,5, FC: 2,93; pH 7,0, FC: 3,32], FGR proto-oncogen, Src-familie tyrosinekinase (FGR) [pH 6,0, FC: 4,17; pH 6,5, FC: 5,25; pH 7,0, FC: 5,09] en ArfGAP met SH3-domein, ankyrineherhaling en PH-domein 3 (ASAP3) [pH 6,0, FC: 2,37; pH 6,5, FC: 3,84; pH 7,0, FC: 2,51]. De zure omgeving veroorzaakt de activering van proto-oncogenen, wat tumorinitiatie bij chronische pancreatitis kan veroorzaken.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ductaal adenocarcinoom van de alvleesklier (PDAC) is een van de belangrijkste vormen van kanker en staat op de vierde plaats van kankers in termen van aantal gerelateerde sterfgevallen1. Een hoger sterftecijfer is duidelijk onder PDAC-patiënten en volgens recente studies is het overlevingspercentage na vijf jaar slechts 12%. Patiënten met gedocumenteerde chronische pancreatitis, een ziekte die resulteert in ontsteking van de alvleesklier2, hebben meer kans (ongeveer 15-16 keer) om PDAC3 te ontwikkelen. Er zijn verschillende soorten CP met verschillende etiologieën, zoals alcoholgerelateerde, erfelijke en idiopathische CP4. Van de aandoeningen die tijdens CP bestaan, is bekend dat ze leiden tot de vorming van verkalkte stenen, de ontwikkeling van kankercellen en zelfs diabetes. De prevalentie van PDAC is hoog bij patiënten met erfelijke chronische pancreatitis5.

Sommige fysiologische aandoeningen in de alvleesklier van CP-patiënten kunnen gunstig zijn voor het ontstaan van andere aandoeningen; deze omvatten het inflammatoire milieu, actieve spijsverteringsenzymen en de zure pH van het pancreassap6. Er wordt een breed scala aan onderzoeken uitgevoerd op het gebied van ontstekingen, aangezien ontsteking chaos veroorzaakt in de normale werking van het orgaan 7,8,9. Een onbalans in de pH-regulatie is echter een ander fenomeen dat de initiatie van de ongecontroleerde groei van cellen kan veroorzaken10. Het pancreassap van gezonde personen is alkalisch, wat helpt bij het neutraliseren van de zure chymus die door de maag wordt geproduceerd. Daarentegen blijft het pancreassap zuur bij CP-patiënten vanwege onvoldoende bicarbonaatsecretie. Een laag bicarbonaatgehalte kan het sap niet volledig neutraliseren, wat resulteert in een licht zure omgeving in het kanaal11.

Eerdere studies geven aan dat kankercellen zich aanpassen aan en gedijen in zure omgevingen12. In dergelijke gevallen suggereren aandoeningen die bestaan tijdens het proces van chronische pancreatitis een gunstige omgeving voor de proliferatie en metastase van deze cellen13. Daarom was onze studie gericht op het beoordelen van de morfologische veranderingen in menselijke ductale cellen van de pancreas en het beoordelen van de expressie van het oncogen onder licht zure omstandigheden.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Herleving van de cellijn

  1. Verkrijg de menselijke normale ductale cellijn van de alvleesklier (HPDEC / H6C7) en breng de cellen nieuw leven in een vers medium.
    1. Ontdooi de cellen bij 37 °C in een waterbad.
    2. Bereid het volledige medium vers en filtreer het met behulp van een spuitfilter.
      OPMERKING: Volledig medium bevat Dulbecco's gemodificeerde Eagle's medium (DMEM) aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS).
    3. Voeg 6 ml van het volledige medium toe aan een verse conische buis van 15 ml, voeg de ontdooide celsuspensie toe en meng het grondig.
    4. Centrifugeer de suspensie bij 1.800 × g gedurende 6 minuten. Gooi het bovenstaande weg, voeg 1 ml kweekmedium toe aan de pellet en meng voorzichtig.
      OPMERKING: Kweekmedium bevat DMEM met 10% foetaal runderserum (FBS) en 1% pen/streptokokkenantibiotica.
    5. Voeg de cellen druppelsgewijs toe aan een T-25-kolf met 4 ml voedingsbodem en incubeer bij 37 °C, 5 % CO2.

2. De pH van het kweekmedium veranderen

  1. Bereid 100 ml 0.5 M natriumfosfaatbuffervoorraadoplossingen met pH-waarden van 6.0, 6.5 en 7.0 zoals vermeld in tabel 1.
  2. Controleer de pH met een pH-meter en pas deze aan met 1 N HCl/1 M NaOH.
  3. Filter en steriliseer de buffers in een laminaire luchtstroomkap met een spuitfilter van 0,45 μm.
    OPMERKING: De buffer kan tot verder gebruik bij 4 °C worden bewaard.
  4. Bereid kweekmedia met pH-waarden van 6.0, 6.5 en 7.0 voor door 20 ml steriele natriumfosfaatbuffer van 0.5 M met de respectievelijke pH toe te voegen aan 80 ml kweekmedium.
  5. Voeg de media met de gewijzigde pH toe aan 85-90% confluente menselijke ductale cellen van de alvleesklier en controleer de morfologische veranderingen onder een helderveldmicroscoop met tussenpozen van 1 uur gedurende 6 uur.

3. RNA-isolatie

OPMERKING: Steriele handschoenen moeten worden gebruikt voor RNA-isolatie uit cellen en het oppervlak moet worden ontsmet met 100% ethanol.

  1. Verwijder het kweekmedium en spoel de cellen af met fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS).
  2. Plaats de plaat op ijs, voeg PBS toe aan het putje en schraap de cellen vervolgens met een celschraper.
    OPMERKING: De hoeveelheid toegevoegde PBS moet voldoende zijn om de cellen te bedekken om te schrapen. Het is niet nodig om een groot volume PBS toe te voegen.
  3. Vang de suspensie op in een nieuwe buis en centrifugeer deze gedurende 10 minuten bij 8.000 × g . Gooi het bovenstaande weg.
  4. Voeg lysisbuffer met β-mercaptoethanol toe aan de pellet en pipetteer deze 5-10 minuten op en neer op ijs.
  5. Voeg een gelijk volume van 70% ethanol toe aan het lysaat en meng grondig. Niet draaikolken.
  6. Voeg de oplossing toe aan de silicamembraankolom, centrifugeer gedurende 30 s bij >8.000 ×g en gooi de stroom erdoor.
  7. Voeg wasbuffer toe aan het monster en centrifugeer op >8.000 ×g gedurende 30 s. Centrifugeer de lege buis gedurende 1 minuut bij >8.000 ×g.
  8. Voeg 30-50 μL nucleasevrij water toe aan de kolom en laat het 5 minuten op kamertemperatuur staan. Centrifugeer de kolom op >8.000 ×g gedurende 5 minuten.
    OPMERKING: RNA-monsters kunnen tot verder gebruik bij -20 °C worden bewaard.

4. RNA-seq/transcriptoom

  1. Beoordeling van de integriteit van RNA
    1. Controleer de integriteit van RNA in een bioanalyzer door 1 μL (25-500 ng) te nemen en deze te mengen met 5 μL kleurstofbuffer.
    2. Draai de oplossing gedurende 1 minuut op 500 ×g en draai kort.
    3. Voer een eenstaps polymerasekettingreactie (PCR) uit voor elk monster bij 72 °C gedurende 3 minuten en neem vervolgens de buisjes en incubeer ze 2 minuten op ijs voordat u ze analyseert met een bioanalyzer.
  2. rRNA-verarmd totaal RNA
    1. Voeg 5 μg totaal RNA, 50 μl hybridisatiebuffer en 1-3 μl sondemengsel toe aan een vers PCR-buisje.
    2. Voer de volgende stappen uit: eerste stap, denaturatie bij 70 °C gedurende 10 min; tweede stap, hybridisatie bij 37 °C gedurende 20 min; en incubatie bij 37 °C tot gebruik.
    3. Voeg in een nieuwe buis 500 μL magnetische kralen en het monster toe; Plaats het mengsel 1 minuut op een magnetische standaard totdat de oplossing helder wordt.
    4. Gooi het bovenstaande voorzichtig weg. Verwijder de buis, was de kralen door 500 μL nucleasevrij water toe te voegen en plaats het mengsel terug op de magnetische standaard gedurende 1 minuut. Verwijder het bovenstaande zodra de oplossing helder wordt.
    5. Herhaal het proces 5-7x. Voeg 200 μL hybridisatiebuffer toe en meng goed. Houd de buisjes 5 minuten op 37 °C.
    6. Voeg 100 μL RNA-sonde toe aan het bovenstaande mengsel, meng voorzichtig en incubeer het mengsel gedurende 15 minuten bij 37 °C.
    7. Draai de buis kort rond voordat u deze 1 minuut op de magnetische standaard plaatst.
    8. Verzamel het doorzichtige supernatans met het rRNA-verarmde RNA in een vers buisje.
  3. RNA-fragmentatie
    1. Voeg in een vers PCR-buisje 8-10 μL rRNA-verarmd totaal RNA (500 ng/g), 1 μL 10x buffer en 1 μL RNase III toe.
    2. Meng de oplossing door kort te tikken en te draaien.
    3. Plaats de buizen 10 minuten in een thermische cycler bij 37 °C.
    4. Voeg in een nieuwe tube 5 μL nucleïnezuurbindende korrels toe en voeg vervolgens 90 μL bindoplossingsconcentraat toe.
    5. Voeg 30 μL van de RNA-fragmenten en 150 μL 100% ethanol toe aan het bovenstaande mengsel. Meng het monster door 10x te pipetteren en incubeer het gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur.
    6. Plaats de buisjes op de magnetische standaard totdat de oplossing helder wordt. Verwijder de supernatant en gooi deze weg.
    7. Was de kralen met 150 μL ethanol terwijl de buisjes op een magnetische standaard staan; Laat het mengsel 30 seconden staan en verwijder dan de supernatant.
    8. Laat de buisjes 1-2 minuten op een magnetische standaard staan om de resterende ethanol te laten verdampen.
    9. Voeg 12 μL voorverwarmd nucleasevrij water toe aan de korrels en meng het monster door 10 keer te pipetteren.
    10. Incubeer het monster gedurende 1 minuut bij kamertemperatuur. Plaats de buisjes op een magnetische standaard en verzamel het bovenstaande zodra het helder is.
  4. Voorbereiding van de bibliotheek en cDNA
    1. Voeg 3 μL van het gefragmenteerde RNA-monster toe aan een PCR-buisje en voeg vervolgens 5 μL hybridisatiemengsel toe. Meng het monster door een paar keer te pipetteren en draai het monster vervolgens kort.
    2. Bewaar de buizen 10 minuten in een thermische cycler bij 65 °C, gevolgd door 5 minuten bij 30 °C.
    3. Voeg 10 μL ligatiebuffer en 2 μL ligatie-enzymmengsel toe aan de bovenstaande oplossing. Incubeer de reactie in een thermische cycler gedurende 1 uur bij 30 °C.
    4. Voeg het reverse transcriptase-mastermengsel toe aan het ligatiemengsel en incubeer gedurende 10 minuten bij 70 °C, gevolgd door incubatie op ijs.
  5. Amplificatie van cDNA
    1. Voeg 6 μL cDNA (500 ng) toe aan een verse PCR-buis en voeg vervolgens 46 μL PCR-mix met barcode toe uit een tube met 46 μL high-fidelity polymerase-enzym en 1 μL 3' barcodeprimers.
    2. Stel de PCR-voorwaarden als volgt in: eerste fase, 2 minuten bij 94 °C houden; tweede fase, cycli bij 94 °C gedurende 30 s en 50 °C gedurende 30 s; derde fase, 16 cycli bij 94 °C gedurende 30 s, 62 °C gedurende 30 s en 68 °C gedurende 30 s. Houd de reactie gedurende 5 minuten op 68 °C.
    3. Zuiver het geamplificeerde cDNA door de stappen 4.3.5 tot 4.3.10 te herhalen en vervang het gefragmenteerde RNA-monster door het PCR-product dat in de vorige stap is verkregen.
    4. Analyseer het gezuiverde RNA-monster op een sequencer (NGS) om gegevens te genereren in de vorm van FASTq-bestanden.

5. Bio-informatica

  1. Open de galaxy-tool die online beschikbaar is door de link: https://usegalaxy.org in het zoektabblad van de browser te kopiëren.
  2. Registreer u bij het eerste bezoek aan deze site voor een profiel door te klikken op de inlog - of de registratieoptie in de rechterbovenhoek.
  3. Nadat u een account hebt aangemaakt, logt u in op het account door de openbare naam/gebruikersnaam en het wachtwoord in te vullen.
  4. Upload de FASTq-bestanden die zijn verkregen na RNA-seq-analyse door op de uploadoptie in het linkerzijpaneel te klikken.
  5. Selecteer het cutadapt-gereedschap in het gedeelte gereedschappen op het linkerzijpaneel. Deze tool snijdt sequenties van lage kwaliteit bij.
    OPMERKING: Dit bestand kan nu worden gebruikt voor het in kaart brengen.
  6. Klik op de gereedschapsknop op het linkerzijpaneel en zoek naar de RNA-stertool. Vul de gegevens als volgt in: Gebruik het uitvoerbestand van cutadapt, selecteer het referentiegenoom als menselijk referentiegenoom (hg38) en verander de lengte van de genomische sequentie rond geannoteerde juncties in 36. Selecteer de uitvoer als aantal genen en klik op de optie Gereedschap uitvoeren in de rechterbovenhoek.
    OPMERKING: Deze tool genereert een BAM-bestand.
  7. Selecteer de featurecounts-tool uit de toolopties en upload de BAM-bestanden die zijn verkregen na RNA-steranalyse. Stel de optie voor minimale toewijzing per lezing in de leesfilteropties in op 10 en klik op de optie voor het uitvoeren van tools in de rechterbovenhoek.
  8. Open het uitvoerbestand voor het aantal functies in het rechterdeelvenster en kopieer de gegevens naar een spreadsheet. Bereken de vouwverandering ten opzichte van de besturing door het aantal leestellingen dat in de test is verkregen, te delen door het aantal leestellingen dat is verkregen in de controle met het commando =log (vouwverandering, 2).
    OPMERKING: Een vouwverandering <-2.0 wordt beschouwd als een indicatie van neerwaartse regulatie en een vouwverandering > 2.0 wordt beschouwd als opregulatie.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Morfologische veranderingen
De incubatie van menselijke ductale cellen van de alvleesklier in een zuur medium veranderde de morfologie van de cellen. Een confluent en dicht opeengepakt celpatroon resulteerde in verspreide cellen onder zure omstandigheden, en celdood wordt na verloop van tijd prominent. Vergeleken met normale mediumbevattende cellen krompen en namen de ductale cellen in omvang af. Een drastische verandering in het sterftecijfer werd waargenomen na 6 uu...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deze methode is ontwikkeld om de effecten van zure omstandigheden op goedaardige menselijke ductaal epitheelcellen van de alvleesklier in biologische herhalingen te bepalen. Een verandering in de pH van het medium zorgde ervoor dat de cellen zich in een gestreste toestand bevonden en er werd een verandering in de morfologie waargenomen. De cellen werden gedurende 24 uur gekweekt bij een pH van 6,0, 6,5 of 7,0 en elk uur gecontroleerd om de incubatietijd voor verdere experimenten te optim...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben geen belangenconflicten te melden.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Renuka Goudshelwar is DBT dankbaar dat ze haar de fellowship heeft gegeven. Renuka Goudshelwar erkent de hulp die ze heeft ontvangen van de afdeling Biochemie, Osmania University (Hyderabad) en aan Dr. V. V. Ravikanth voor zijn begeleiding bij het analyseren van de NGS-gegevens. Dr. M. Sasikala erkent de financiële steun die is ontvangen van ICMR, Ministerie van Volksgezondheid, Regering van India (Grant no-94/2020/5582/Proteomics-Adhoc/BMS).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
15 mL graduated centrifuge tubes (Falcon) Tarsons 500031gebruikt voor monstervoorbereiding 
50 mL graduated centrifuge tubes (Falcon)Tarsons 500041gebruikt voor monstervoorbereiding 
Agilent 2100 Bioanalyzer instrumentAgilentAgilent G2938AInstrument voor RNA-kwaliteitsbeoordeling 
Antibiotic Antimycotic Solution 100x liquidHimediaA002-100 mLGebruikt om besmetting te voorkomen 
Cell Scraper with rotatable bladeHimedia TCP223Scrape en verzamel de cellen
CO2 incubator New BrunswickGalaxy 170 SGebruikt voor het incuberen van de cultuur 
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM), hoge glucose HimediaAL007S-500 mLMedium gebruikt voor het kweken van de cellen
Dulbecco's Phosphate Buffered saline 1xHimediaTL1006-500mLcel wassen
Galaxy (https://usegalaxy.org)Online tool voor het verwerken van NSG-gegevens 
HI FBS (origine: Australië)Gibco10100-147Gebruikt voor de groei van cellen 
Human Pancreatic Ductal Epithelial Cell Line (HPDEC/ H6C7)Addex BioT0018001Pancreas ductale cellijn
Ion Total RNA-Seq Kit v2Thermo fisher scientific4475936RNA-monstervoorbereidingskit
Laminar Air Flow
Na2HPO4 DiabasicSigma AldrichS3264-250GNatriumfosfaatbufferbereiding 
NaH2PO4 MonobasicSigma AldrichS3139-250GNatriumfosfaatbufferbereiding 
NovaSeq 6000Illumina3376672Sequencer 
Nunclon Delta Surface (6-well plate)Thermo Scientific140675De cellen kweken 
Refrigerated benchtop CentrifugeThermo Scientific Sorvall ST 8RGebruikt voor centrifugatie
RiboMinus Eukaryote System v2Thermo fisher scientificA15026rRNA-depletiekit 
Rneasy Mini kit Qiagen74104Kit voor het isoleren van totaal RNA uit cellen 
Thermal cyclerEppendorfE950040025PCR-reactie 
Water Bath Equitron#8406MOntdooien van monster

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Franck, C., et al. Advanced pancreatic ductal adenocarcinoma: Moving forward. Cancers (Basel). 12 (7), 1955(2020).
  2. Kong, X., Sun, T., Kong, F., Du, Y., Li, Z. Chronic pancreatitis and pancreatic cancer. Gastrointest Tumors. 1 (3), 123-134 (2014).
  3. Jura, N., Archer, H., Bar-Sagi, D. Chronic pancreatitis, pancreatic adenocarcinoma and the black box in-between. Cell Res. 15 (1), 72-77 (2005).
  4. Kloppel, G. Chronic pancreatitis, pseudotumors and other tumor-like lesions. Mod Pathol. 20 (Suppl 1), S113-S131 (2007).
  5. Schneider, A., Whitcomb, D. C. Hereditary pancreatitis: a model for inflammatory diseases of the pancreas. Best Pract Res Clin Gastroenterol. 16 (3), 347-363 (2002).
  6. Boedtkjer, E., Pedersen, S. F. The acidic tumor microenvironment as a driver of cancer. Annu Rev Physiol. 82, 103-126 (2020).
  7. Coussens, L. M., Werb, Z. Inflammation and cancer. Nature. 420 (6917), 860-867 (2002).
  8. Balkwill, F., Mantovani, A. Inflammation and cancer: back to Virchow. Lancet. 357 (9255), 539-345 (2001).
  9. Clevers, H. At the crossroads of inflammation and cancer. Cell. 118 (6), 671-674 (2004).
  10. Kato,, et al. Acidic extracellular microenvironment and cancer. Cancer Cell Int. 13 (1), 89(2013).
  11. Hegyi, P., Maléth, J., Venglovecz, V., Rakonczay, Z. Jr Pancreatic ductal bicarbonate secretion: challenge of the acinar acid load. Front Physiol. 2, 36(2011).
  12. Ibrahim-Hashim, A., Estrella, V. Acidosis and cancer: from mechanism to neutralization. Cancer Metastasis Rev. 38 (1-2), 149-155 (2019).
  13. Vakkila, J., Lotze, M. T. Inflammation and necrosis promote tumour growth. Nat Rev Immunol. 4 (8), 641-648 (2004).
  14. Zepecki, J. P., et al. Regulation of human glioma cell migration, tumor growth, and stemness gene expression using a Lck targeted inhibitor. Oncogene. 38 (10), 1734-1750 (2019).
  15. Kim, R. K., et al. Role of lymphocyte-specific protein tyrosine kinase (LCK) in the expansion of glioma-initiating cells by fractionated radiation. Biochem Biophys Res Commun. 402 (4), 631-636 (2010).
  16. Hu, Y., et al. Requirement of Src kinases Lyn, Hck and Fgr for BCR-ABL1-induced B-lymphoblastic leukemia but not chronic myeloid leukemia. Nat Genet. 36 (5), 453-461 (2004).
  17. Sharp, N. A., Luscombe, M. J., Clemens, M. J. Regulation of c-fgr proto-oncogene expression in Burkitt's lymphoma cells: effect of interferon treatment and relationship to EBV status and c-myc mRNA levels. Oncogene. 4 (8), 1043-1046 (1989).
  18. Hui, A. B., Lo, K. W., Yin, X. L., Poon, W. S., Ng, H. K. Detection of multiple gene amplifications in glioblastoma multiforme using array-based comparative genomic hybridization. Lab Invest. 81 (5), 717-723 (2001).
  19. Fang, Z. Y., et al. Proteomic identification and functional characterization of a novel ARF6 GTPase-activating protein, ACAP4. Mol Cell Proteomics. 5 (8), 1437-1449 (2006).
  20. Okabe, H., et al. Isolation of development and differentiation enhancing factor-like 1 (DDEFL1) as a drug target for hepatocellular carcinomas. Int J Oncol. 24 (1), 43-48 (2004).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Pancreatische ductale cellenzuur micro milieupH wijzigingchronische pancreatitisRNA sequencinggenexpressieanalysecelproliferatiedifferenti le genexpressiecelkweek

Gerelateerde artikelen