Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

orofaryngeale toediening van bleomycine in het muizenmodel van longfibrose

3K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/67953

⸱

9 mei 2025

 ,  ,  , 
1Department of Medicine, Division of Pulmonary & Critical Care, David Geffen School of Medicine, University of California, Los Angeles, 2Department of Medicine, Pulmonary & Critical Care Section, VA Greater Los Angeles Healthcare System, 3Department of Microbiology, Immunology and Molecular Genetics, University of California, Los Angeles

In dit artikel

Samenvatting

Dit protocol demonstreert de orofaryngeale aspiratietechniek voor gebruik in het bleomycine muizenmodel van longfibrose.

Samenvatting

Interstitiële longziekte (ILD) vertegenwoordigt een breed spectrum van aandoeningen die worden gekenmerkt door de progressieve en vaak onomkeerbare littekens van het longparenchym, waarvan idiopathische longfibrose (IPF) de meest voorkomende is. Er zijn verschillende diermodellen van IPF ontwikkeld, waarvan het bleomycine-muismodel het meest wordt gebruikt. Bleomycine is een chemotherapeuticum waarvan bekend is dat het DNA-schade in het alveolaire epitheel veroorzaakt, wat resulteert in acuut longletsel en longfibrose bij mensen. Knaagdiermodellen van IPF gebruiken bleomycine-toediening via verschillende methoden, waarvan de meest voorkomende intratracheaal (IT) is. Onlangs is aangetoond dat de orofaryngeale aspiratie (OA)-techniek even effectief is als IT voor meerdere fibroseermiddelen, met aanzienlijk minder bijwerkingen en een gemakkelijkere toedieningsweg. Dit protocol beschrijft de OA-methode van toediening van bleomycine in de muizenlong en belicht voorbeelden van mogelijke downstream-toepassingen voor gegevenskwantificering. Deze methodologie biedt een eenvoudige, snelle en veilige manier om dit veelgebruikte diermodel te gebruiken voor het bestuderen van de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan IPF.

Inleiding

Interstitiële longziekte (ILD) verwijst naar een heterogene groep aandoeningen die wordt gekenmerkt door progressieve en onomkeerbare littekens van de longblaasjes, het interstitium en de distale luchtwegen1. Idiopathische longfibrose (IPF) is de meest voorkomende vorm van ILD en heeft een mediane overleving van ongeveer drie jaar2. IPF is uiteindelijk een terminale aandoening, waarbij orthotope longtransplantatie een salvagetherapie is voor geselecteerde patiënten. Er zijn momenteel twee door de FDA goedgekeurde therapieën voor IPF, die beide alleen de progressiesnelheid vertragen in plaats van de longfunctie voor patiënten te stabiliseren of te verbeteren 3,4. Er zijn belangrijke onderzoeksinspanningen aan de gang om de onderbouwing van IPF op te helderen en nieuwe therapeutische doelen te identificeren. Er bestaan talloze diermodellen om de pathogenese van IPF te bestuderen, elk met zijn eigen voor- en nadelen5. Hoewel geen enkel model in staat is om de complexiteit van ziekten bij de mens volledig samen te vatten, bieden deze benaderingen wel een significant inzicht in de moleculaire mechanismen van IPF en kunnen ze translationele studies aanvullen.

Het bleomycine-muismodel blijft het meest gebruikte en best gekarakteriseerde in vivo model van IPF6. Bleomycine is een peptidemiddel dat enkel- en dubbelstrengs DNA-breuken induceert. Na de ontdekking in 1962 bleek bleomycine effectief te zijn bij de behandeling van een aantal vormen van kanker, waaronder testiculaire tumoren en lymfoom, maar het gebruik ervan is beperkt door dosisafhankelijke pneumonitis en de daaruit voortvloeiende longfibrose 7,8. Deze pulmonale toxiciteit wordt gerecapituleerd bij muizen. Bij toediening in een enkele dosis, na een eerste ontstekingsfase, kan fibrose worden gezien vanaf dag 5, met een piek op dag 14-21 9,10,11 (Figuur 1). Spontane verdwijning treedt op na ongeveer 6 weken, hoewel permanente fibrotische veranderingen kunnen worden bereikt met herhaalde dosering12. Gezien de voorbijgaande en inflammatoire aard zijn er enkele inherente nadelen van het bleomycinemodel13, maar het biedt een snel, robuust en reproduceerbaar systeem om enkele van de belangrijkste hiaten in het begrip van ILD in ons vakgebied op te vullen en stelt onderzoekers in staat om resultaten van de afgelopen vijf decennia te vergelijken. Andere installatiebenaderingen zijn de asbestose- en silica-muizenmodellen, die vergelijkbare tijdsverbanden bieden (dagen 14-28)6,14,15,16. Deze modellen genereren echter een histologisch patroon dat meer overeenkomt met pneumoconiose dan IPF en vereisen het gebruik van deeltjes in de lucht, wat een zorgvuldige behandeling vereist. Als alternatief bestaan er diermodellen die gebruik maken van epitheelgestuurde transgenexpressie, zoals difterietoxine en TGF-β1. Deze recapituleren de niet-inflammatoire alveolaire type 2 epitheelcelbeschadiging die wordt gezien bij IPF, maar duren iets langer (21-30d) en vereisen het gebruik van gespecialiseerde dieren die moeten worden teruggekruist in bestaande transgene modellen die van belang zijn. Ten slotte is aangetoond dat adenoviraal-gemedieerde overexpressie van cytokines, waaronder TGF-β1, IL-β1 en TNF-α, longfibrose bij knaagdieren induceert, meestal op dag 14 17,18,19. Deze cytokine-overexpressiemodellen maken gemakkelijke intranasale toediening mogelijk, maar vereisen een zorgvuldige zuivering en behandeling.

Er zijn meerdere benaderingen voor de toediening van bleomycine, waaronder intratracheale (IT), intranasale, intraperitoneale, subcutane en intraveneuze routes6. IT-toediening is de meest gebruikelijke methode, waarbij traditioneel endotracheale intubatie of chirurgische tracheostomie20 betrokken is, die beide diepe sedatie en technische finesse vereisen en geassocieerd zijn met perioperatieve morbiditeit en mortaliteit. Onlangs is aangetoond dat de orofaryngeale aspiratie (OA) -techniek even effectief is als IT, met aanzienlijk minder bijwerkingen en een gemakkelijkere toedieningsroute 14,21,22,23,24,25,26. Hier presenteren we een gedetailleerd visueel protocol voor de OA-methode van bleomycine-afgifte in de muizenlong en belichten we verschillende mogelijke downstream-toepassingen voor gegevenskwantificering.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Dierstudies die in deze experimenten worden beschreven, werden uitgevoerd volgens protocollen (ARC-2021-025, ARC-2010-039) die zijn goedgekeurd door het UCLA Animal Research Committee (ARC) en het Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC). Volledige naleving van alle staats- en federale voorschriften en beleidsregels met betrekking tot het gebruik van proefdieren werd gehandhaafd. Dieren werden gehuisvest in de Animal Care Facility van UCLA en verzorgd door het bekwame personeel van de UCLA Division of Laboratory and Animal Medicine (DLAM) onder pathogeenvrije omstandigheden. Wildtype C57BL/6-muizen werden commercieel verkregen en kregen ten minste 14 dagen de kans om te acclimatiseren. Voor deze onderzoeken werden mannelijke muizen van 8-12 weken gebruikt, met een gemiddeld lichaamsgewicht van 20-25 g. Vrouwelijke muizen kunnen ook worden gebruikt, hoewel het belangrijk is om dieren van geslacht en leeftijd te matchen in verschillende experimentele groepen en omstandigheden27. De commerciële details van de dieren, reagentia en apparatuur die in dit onderzoek zijn gebruikt, staan vermeld in de materiaaltabel.

1. Orofaryngeale toediening van bleomycine

  1. Bereiding van bleomycine
    OPMERKING: Gebruik bleomycine van farmaceutische kwaliteit om consistentie en reproduceerbaarheid tussen dieren en experimenten te garanderen. Dosis bleomycine in eenheden geneesmiddel per kg dier (U/kg), niet milligram (mg) per kg.
    1. Los bleomycinepoeder op in steriel PBS van farmaceutische kwaliteit tot een voorraadconcentratie van 10 E/ml. Bleomycine moet worden bereid onder een chemische kap met behulp van de juiste chemotherapeutische voorzorgsmaatregelen. Bewaar de aliquots maximaal 6 maanden bij -20 °C.
    2. Bereid de laatste werkconcentratie voor. De dosis is gebaseerd op het gewicht (0,5-3 E/kg) en indien nodig worden aanpassingen gemaakt, afhankelijk van de gebruikte bleomycine en het doel van het experiment (bijv. overleving of dodelijke dosering).
    3. Pas het uiteindelijke toedieningsvolume indien nodig aan. Verdun voor deze onderzoeken bleomycine tot 0,375 E/ml, wat overeenkomt met 50 μl voor een muis van 25 g, wat resulteert in een uiteindelijke werkconcentratie van 0,75 E/kg.

2. Inductie van anesthesie

  1. Bereid de anesthesiecocktail voor door ketamine en xylazine in PBS te verdunnen tot werkconcentraties van respectievelijk 10 mg/ml en 1 mg/ml. Voer deze stap uit onder steriele omstandigheden met behulp van reagentia van farmaceutische kwaliteit en in overeenstemming met institutioneel goedgekeurde protocollen.
  2. Dien 10 μL van de cocktail toe per gram lichaamsgewicht van het dier (werkconcentratie: ketamine 100 mg/kg, xylazine 10 mg/kg) via intraperitoneale injectie met behulp van een naald van 27,5 G en een spuit van 1 ml.
    1. Zorg ervoor dat de muis goed verdoofd is en niet reageert op schadelijke stimuli, zoals bekneld in de teen. Effecten zouden binnen 5 minuten moeten worden gezien. Als de respons nog steeds reageert, dien dan extra ketamine/xylazine toe in stappen van 20 μl totdat het gewenste niveau van anesthesie is bereikt. Breng oogzalf aan om droge ogen te voorkomen terwijl u onder narcose bent.
      OPMERKING: Ketamine heeft de voorkeur boven andere geïnjecteerde anesthetica en sedativa vanwege het gunstige bijwerkingenprofiel. Het heeft minimale effecten op de hemodynamica, waaronder hartslag en ademhalingsfrequentie. Geïnhaleerd isofluraan kan worden gebruikt als alternatief anestheticum. In deze onderzoeken heeft ketamine/xylazine de voorkeur omdat het resulteert in langdurige sedatie en minimale hoest of reflux van bleomycine na toediening.

3. Orofaryngeale toediening

  1. Eenmaal goed verdoofd, hangt u de muis op het procedurele platform in een hoek van 60°-80° door hem aan de voorste snijtanden te hangen om de orofarynx effectief te openen (Figuur 2A).
  2. Sluit de neusholte af met een gladde microvasculaire klem en dwing de muis om door zijn orofarynx te ademen.
  3. Trek de tong met een tang uit de orofarynx.
  4. Gebruik een stepperpipet met een stub leur-stub-tip om voorzichtig het gewenste volume bleomycine, of zoutoplossing, in de achterkant van de orofarynx te plaatsen. Zorg ervoor dat er een vloeistofbel goed zichtbaar is (Figuur 2B).
  5. Blijf de tong op zijn plaats houden totdat het dier de oplossing opzuigt. Dit moet zichtbaar en vaak hoorbaar duidelijk zijn.
    OPMERKING: Als het dier de oplossing snel opzuigt, kan de visualisatie aan de achterkant van de orofarynx binnen enkele seconden van voorbijgaande aard zijn. Hoe dan ook, als het lukt, zal het dier een abrupte en voorbijgaande verandering in zijn ademhalingspatroon vertonen, waarbij hij snel, oppervlakkig ademhaalt. Er kan een borrel van de vloeistof optreden, wat verder aangeeft dat de vloeistof met succes de onderste luchtwegen is binnengedrongen. Af en toe hoesten kan ook voorkomen. Dit is meestal een verwaarloosbaar volume van de bleomycineoplossing en zou geen invloed moeten hebben op de experimentele resultaten, waardoor het dier in het onderzoek kan blijven opnemen. Vermijd herhaalde dosering, omdat dit het risico op verstikking verhoogt en de uiteindelijke dosering op basis van gewicht verandert.
  6. Nadat de aspiratie is bevestigd, verwijdert u voorzichtig de neusklem.
  7. Observeer het dier 15-30 s in de hangende positie om ervoor te zorgen dat de bleomycine-oplossing niet terugvloeit en breng het vervolgens terug naar zijn kooi.
    OPMERKING: Een maximaal volume van 50 μL wordt aanbevolen om het risico op verstikking te minimaliseren. Afhankelijk van de gewenste dosis bleomycine en het gewicht van de muis, past u de concentratie van de bleomycine-oplossing indien nodig aan. Gebruik bij het beoefenen van deze techniek een kleurstof op waterbasis, zoals Evans blue, om te bevestigen dat de oplossing in de onderste luchtwegen wordt toegediend in plaats van in de maag14.

4. Herstel van dieren

  1. Plaats het dier na de behandeling op zijn zij in zijn kooi met een verwarmingskussen eronder om de thermoneutraliteit te behouden.
  2. Houd de muizen in de gaten totdat ze volledig bij bewustzijn zijn. Dit duurt meestal 1-2 uur, afhankelijk van de gebruikte dosis ketamine en het metabolisme van het dier. Knijp zachtjes in de tenen en houd de dieren euthermisch om het ontwaken te vergemakkelijken.
  3. Controleer de muizen dagelijks klinisch op veranderingen in lichaamsgewicht, verzorging, activiteitsniveau en ademhalingsstatus. Net als bij andere toedieningsmethoden van bleomycine, kunnen dieren tijdens de kuur van 14-21 dagen aanzienlijk gewichtsverlies ervaren, wat een belangrijke indicator is van de effectiviteit van het model.
  4. Volgens de ARC- en IACUC-protocollen moeten dieren worden geëuthanaseerd als het gewichtsverlies meer dan 20% van het startgewicht van het dier bedraagt. De prevalentie en de ernst van het gewichtsverlies zijn afhankelijk van de gebruikte dosis bleomycine en de demografie van de muizen (zie hierboven).

5. Weefseloogst, verwerking en eindpuntanalyse

  1. Afhankelijk van de experimentele vraag en het gewenste tijdstip, euthanaseer de muizen volgens de IACUC-protocollen en oogst hun longen28 op het juiste moment. De effecten van bleomycine zijn vaak sterk visueel zichtbaar in vergelijking met controle, wat wijst op succesvolle toediening. In deze onderzoeken werden de muizen geofferd op dag 7, 14 en 21.
  2. Ontleed voor histologie de longen en bloc en fixeer ze gedurende 24 uur in 4% PFA. Ga verder met paraffine-inbedding, secties, hematoxyline en eosine (H&E) en/of Masson's trichrome kleuring zoals eerder beschreven 28,29,30.
  3. Voor collageenmeting homogeniseert u de rechterlong en gebruikt u een in de handel verkrijgbare kit (zie materiaaltabel) om het hydroxyprolinegehalte te meten, zoals eerder beschreven31.
  4. Voor flowcytometrie verteert u de rechterlong met behulp van de weefseldissociator en een enzymatische oplossing om een eencellige suspensie te verkrijgen. Voer flowcytometrische kleuring en analyse uit zoals eerder beschreven 32,33,34.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Het hier beschreven protocol geeft een samenvatting van de orofaryngeale aspiratieroute van toediening in het bleomycine muizenmodel. In deze experimenten werden dieren behandeld met bleomycine (0,75 U/kg lichaamsgewicht) of PBS voor schijncontrole. Op dag 7, 14 en 21 werden muizen geëuthanaseerd, hun longen geëxplanteerd en weefsel gefixeerd, zoals eerder beschreven35. Fibrose werd beoordeeld met behulp van histologische kleuring van hematoxyline en eosine (H&E)....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Er wordt een gedetailleerd videoprotocol verstrekt over de orofaryngeale aspiratietechniek voor het toedienen van bleomycine voor gebruik in het muizenmodel van longfibrose. Daarnaast belichten we mogelijke downstream-toepassingen om fibrotische en ontstekingsveranderingen veroorzaakt door OA-bleomycine te kwantificeren.

Hoewel geen enkel dier de complexiteit van ziekten bij de mens volledig recapituleert, is het bleomycine-muismodel de afgelopen vijf decennia...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben geen belangenconflicten.

Dankbetuigingen

Dit werk werd ondersteund door de NIH Ruth L. Kirchstein National Research Service Award (NRSA) Institutional Research Training Grant (T32) toegekend aan RW (2T32HL072752-16). De auteurs willen ook de steun van het Saul and Joyce Brandman Foundation Lung Health Center erkennen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
anti-mouse CD45, Brlliant Violet 605BioLegend103155
anti-mouse CD64, AlexaFluor 647BioLegend139322
anti-mouse Ly6G, AlexaFluor 700BioLegend127622
anti-mouse MerTK, PE/Cy7BioLegend151522
anti-mouse SiglecF, PEBD Biosciences552126
BD Luer-Stub AdaptorsFisher Scientific13-681-21
BleomycinMcKesson1129996Van NorthStar Rx 16714088601
Endotracheal Mouse Intubation KitKent ScientificETI-MSE
Fixable Live/Dead VioletThermoL34955
FlowJo v10 SoftwareFlowJo
gentleMACS DissociatorMiltenyi130-093-235
Hydroxyproline Assay KitSigmaMAK463
Liberase TMRoche5401127001
Moria Vessel ClampFine Science Tools18350-11
Mouse Endotracheal Intubation KitKentETI-MSE
Stepper PipetteDymaxTI15469
Wildtype C57BL/6 mice Jackson LaboratoriesJAX, stain #000664

Referenties

  1. Martinez, F. J., et al. Idiopathic pulmonary fibrosis. Nat Rev Dis Primers. 3, 17074(2017).
  2. Hutchinson, J., Fogarty, A., Hubbard, R., Mckeever, T. Global incidence and mortality of idiopathic pulmonary fibrosis: A systematic review. Eur Respir J. 46 (3), 795-806 (2015).
  3. Richeldi, L., et al. Efficacy and safety of nintedanib in idiopathic pulmonary fibrosis. N Engl J Med. 370 (22), 2071-2082 (2014).
  4. King, T. E. Jr, et al. A phase 3 trial of pirfenidone in patients with idiopathic pulmonary fibrosis. N Engl J Med. 370 (22), 2083-2092 (2014).
  5. Moore, B. B., et al. Animal models of fibrotic lung disease. Am J Respir Cell Mol Biol. 49 (2), 167-179 (2013).
  6. Moore, B. B., Hogaboam, C. M. Murine models of pulmonary fibrosis. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 294 (2), L152-L160 (2008).
  7. Umezawa, H. Chemistry and mechanism of action of bleomycin. Fed Proc. 33 (11), 2296-2302 (1974).
  8. Muggia, F. M., Louie, A. C., Sikic, B. I. Pulmonary toxicity of antitumor agents. Cancer Treat Rev. 10 (4), 221-243 (1983).
  9. Degryse, A. L., et al. Repetitive intratracheal bleomycin models several features of idiopathic pulmonary fibrosis. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 299 (4), L442-L452 (2010).
  10. Kolb, P., et al. The importance of interventional timing in the bleomycin model of pulmonary fibrosis. Eur Respir J. 55 (6), 1901105(2020).
  11. Izbicki, G., Segel, M. J., Christensen, T. G., Conner, M. W., Breuer, R. Time course of bleomycin-induced lung fibrosis. Int J Exp Pathol. 83 (3), 111-119 (2002).
  12. Chung, M. P., et al. Role of repeated lung injury and genetic background in bleomycin-induced fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol. 29 (3 Pt 1), 375-380 (2003).
  13. Moeller, A., Ask, K., Warburton, D., Gauldie, J., Kolb, M. The bleomycin animal model: A useful tool to investigate treatment options for idiopathic pulmonary fibrosis. Int J Biochem Cell Biol. 40 (3), 362-382 (2008).
  14. Lakatos, H. F., et al. Oropharyngeal aspiration of a silica suspension produces a superior model of silicosis in the mouse when compared to intratracheal instillation. Exp Lung Res. 32 (5), 181-199 (2006).
  15. Sanchez, V. C., Pietruska, J. R., Miselis, N. R., Hurt, R. H., Kane, A. B. Biopersistence and potential adverse health impacts of fibrous nanomaterials: What have we learned from asbestos. Wiley Interdiscip Rev Nanomed Nanobiotechnol. 1 (5), 511-529 (2009).
  16. Barbarin, V., et al. The role of pro- and anti-inflammatory responses in silica-induced lung fibrosis. Respir Res. 6 (1), 112(2005).
  17. Sime, P. J., Xing, Z., Graham, F. L., Csaky, K. G., Gauldie, J. Adenovector-mediated gene transfer of active transforming growth factor-beta1 induces prolonged severe fibrosis in rat lung. J Clin Invest. 100 (4), 768-776 (1997).
  18. Kolb, M., Margetts, P. J., Anthony, D. C., Pitossi, F., Gauldie, J. Transient expression of il-1beta induces acute lung injury and chronic repair leading to pulmonary fibrosis. J Clin Invest. 107 (12), 1529-1536 (2001).
  19. Sime, P. J., et al. Transfer of tumor necrosis factor-alpha to rat lung induces severe pulmonary inflammation and patchy interstitial fibrogenesis with induction of transforming growth factor-beta1 and myofibroblasts. Am J Pathol. 153 (3), 825-832 (1998).
  20. Orlando, F., et al. Induction of mouse lung injury by endotracheal injection of bleomycin. J Vis Exp. (146), e58922(2019).
  21. Barbayianni, I., Ninou, I., Tzouvelekis, A., Aidinis, V. Bleomycin revisited: A direct comparison of the intratracheal micro-spraying and the oropharyngeal aspiration routes of bleomycin administration in mice. Front Med (Lausanne). 5, 269(2018).
  22. Egger, C., et al. Administration of bleomycin via the oropharyngeal aspiration route leads to sustained lung fibrosis in mice and rats as quantified by ute-MRI and histology. PLoS One. 8 (5), e63432(2013).
  23. Bale, S., Sunkoju, M., Reddy, S. S., Swamy, V., Godugu, C. Oropharyngeal aspiration of bleomycin: An alternative experimental model of pulmonary fibrosis developed in Swiss mice. Indian J Pharmacol. 48 (6), 643-648 (2016).
  24. Scotton, C. J., et al. Increased local expression of coagulation factor x contributes to the fibrotic response in human and murine lung injury. J Clin Invest. 119 (9), 2550-2563 (2009).
  25. Jenkins, R. G., et al. An official American Thoracic Society Workshop report: Use of animal models for the preclinical assessment of potential therapies for pulmonary fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol. 56 (5), 667-679 (2017).
  26. Rao, G. V., et al. Efficacy of a technique for exposing the mouse lung to particles aspirated from the pharynx. J Toxicol Environ Health A. 66 (15), 1441-1452 (2003).
  27. Redente, E. F., et al. Age and sex dimorphisms contribute to the severity of bleomycin-induced lung injury and fibrosis. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 301 (4), L510-L518 (2011).
  28. Birjandi, S. Z., et al. CD4(+)CD25(hi)Foxp3(+) cells exacerbate bleomycin-induced pulmonary fibrosis. Am J Pathol. 186 (8), 2008-2020 (2016).
  29. Hubner, R. H., et al. Standardized quantification of pulmonary fibrosis in histological samples. Biotechniques. 44 (4), 507-514 (2008).
  30. Joshi, N., et al. A spatially restricted fibrotic niche in pulmonary fibrosis is sustained by M-CSF/M-CSFR signalling in monocyte-derived alveolar macrophages. Eur Respir J. 55 (1), 1900646(2020).
  31. Belperio, J. A., et al. Interaction of IL-13 and C10 in the pathogenesis of bleomycin-induced pulmonary fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol. 27 (4), 419-427 (2002).
  32. Misharin, A. V., Morales-Nebreda, L., Mutlu, G. M., Budinger, G. R., Perlman, H. Flow cytometric analysis of macrophages and dendritic cell subsets in the mouse lung. Am J Respir Cell Mol Biol. 49 (4), 503-510 (2013).
  33. Misharin, A. V., et al. Monocyte-derived alveolar macrophages drive lung fibrosis and persist in the lung over the life span. J Exp Med. 214 (8), 2387-2404 (2017).
  34. Tighe, R. M., et al. Improving the quality and reproducibility of flow cytometry in the lung. An official American Thoracic Society workshop report. Am J Respir Cell Mol Biol. 61 (2), 150-161 (2019).
  35. Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. Instillation and fixation methods useful in mouse lung cancer research. J Vis Exp. 102, e52964(2015).
  36. Adamson, I. Y., Bowden, D. H. The pathogenesis of bleomycin-induced pulmonary fibrosis in mice. Am J Pathol. 77 (2), 185-197 (1974).
  37. Southam, D. S., Dolovich, M., O'byrne, P. M., Inman, M. D. Distribution of intranasal instillations in mice: Effects of volume, time, body position, and anesthesia. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 282 (4), L833-L839 (2002).
  38. Foster, W. M., Walters, D. M., Longphre, M., Macri, K., Miller, L. M. Methodology for the measurement of mucociliary function in the mouse by scintigraphy. J Appl Physiol (1985). 90 (3), 1111-1117 (2001).
  39. Schrier, D. J., Kunkel, R. G., Phan, S. H. The role of strain variation in murine bleomycin-induced pulmonary fibrosis. Am Rev Respir Dis. 127 (1), 63-66 (1983).
  40. Hecker, L., et al. Reversal of persistent fibrosis in aging by targeting nox4-nrf2 redox imbalance. Sci Transl Med. 6 (231), 231ra247(2014).
  41. Chaudhary, N. I., Schnapp, A., Park, J. E. Pharmacologic differentiation of inflammation and fibrosis in the rat bleomycin model. Am J Respir Crit Care Med. 173 (7), 769-776 (2006).
  42. Kim, S. N., et al. Dose-response effects of bleomycin on inflammation and pulmonary fibrosis in mice. Toxicol Res. 26 (3), 217-222 (2010).
  43. Wells, A. U., Denton, C. P. Interstitial lung disease in connective tissue disease--mechanisms and management. Nat Rev Rheumatol. 10 (12), 728-739 (2014).
  44. Idiopathic Pulmonary Fibrosis Clinical Research Network. Prednisone, azathioprine, and n-acetylcysteine for pulmonary fibrosis. N Engl J Med. 366 (21), 1968-1977 (2012).
  45. Raghu, G., et al. An official ATS/ERS/JRS/ALAT statement: Idiopathic pulmonary fibrosis: Evidence-based guidelines for diagnosis and management. Am J Respir Crit Care Med. 183 (6), 788-824 (2011).
  46. Kolb, M., et al. Differences in the fibrogenic response after transfer of active transforming growth factor-beta1 gene to lungs of "fibrosis-prone" and "fibrosis-resistant" mouse strains. Am J Respir Cell Mol Biol. 27 (2), 141-150 (2002).
  47. Sisson, T. H., et al. Targeted injury of type ii alveolar epithelial cells induces pulmonary fibrosis. Am J Respir Crit Care Med. 181 (3), 254-263 (2010).
  48. Pierce, E. M., et al. Therapeutic targeting of cc ligand 21 or cc chemokine receptor 7 abrogates pulmonary fibrosis induced by the adoptive transfer of human pulmonary fibroblasts to immunodeficient mice. Am J Pathol. 170 (4), 1152-1164 (2007).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Trefwoorden

Bleomycine toedieningorofaryngeale aspiratieinterstiti le longziektelonghistologieflowcytometriecollagenmetingalveolaire macrofagenhydroxyproline assay
orofaryngeale toediening van bleomycine in het muizenmodel van longfibrose
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleid

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.