Dit protocol beschrijft een procedure voor het induceren van baarmoederbeschadiging in een muismodel, gevolgd door stroomafwaartse analyses tijdens een volgende zwangerschap.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Dit protocol beschrijft een procedure voor het induceren van baarmoederbeschadiging in een muismodel, gevolgd door stroomafwaartse analyses tijdens een volgende zwangerschap.
Baarmoederbeschadiging door keizersneden (keizersneden) en andere procedures (dilatatie en curettage, myomectomieën, enz.) kunnen leiden tot verschillende morbiditeiten bij volgende zwangerschappen, waaronder placenta previa, placenta accreta spectrum (PAS), keizersnede littekenzwangerschap en baarmoederruptuur. C-secties zijn goed voor ongeveer 30% van de bevallingen in de VS, en de percentages zullen naar verwachting stijgen. Daarom is een beter begrip van de mechanismen waardoor blessuregerelateerde zwangerschapsstoornissen ontstaan en een platform voor het testen van mogelijke interventies essentieel. Om deze doelstellingen te bereiken, is er een kritieke behoefte aan diermodellen van baarmoederletsel, met name modellen die de impact van letsel op de daaropvolgende resultaten in utero aanpakken. Dit protocol beschrijft een nieuwe chirurgische ingreep voor een model van mechanisch geïnduceerd baarmoederletsel bij de laboratoriummuis (Mus musculus). Stappen die zijn genomen ter voorbereiding op de operatie, inductie van het baarmoederletsel zelf en postoperatieve herstelprocedures worden gedemonstreerd. Er wordt aanvullende informatie verstrekt over de stroomafwaartse dissectie van zowel niet-zwangere als drachtige muizen. Over het algemeen presenteert dit protocol, door een reeks procedures voor het induceren van baarmoederletsel in een in vivo-model te beschrijven, een hanteerbare methode voor het ophelderen van de moleculaire en cellulaire gebeurtenissen van baarmoederwondgenezing en de effecten ervan op de daaropvolgende zwangerschap.
Hoewel 1 op de 3 bevallingen in de VS via een keizersnede (C-sectie) wordt uitgevoerd, is er weinig bekend over hoe de baarmoeder geneest en hoe een gewonde baarmoeder leidt tot complicaties bij volgende zwangerschappen 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Alle procedures die in dit protocol worden aangetoond, zijn goedgekeurd door het Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) van de University of California, Davis (IACUC-protocol #23985). De procedures die in dit protocol worden beschreven, worden meestal uitgevoerd bij C3H-vrouwtjes tussen de leeftijd van 7-10 weken en een gewicht van 19-25 g, hoewel dit protocol geschikt is voor vrouwelijke muizen van alle stammen, leeftijden en gewichten, afhankelijk van de vraag van de onderzoeker. Controleer dieren voorafgaand aan de operatie om ervoor te zorgen dat alleen gezonde dieren zonder tekenen van verwonding of angst worden gebr....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Na een operatie met het gebruik van ketamine/xylazine als verdovingsmiddel, zijn dieren doorgaans gedeeltelijk mobiel binnen ~1 uur. en volledig mobiel binnen ~4-6 uur. Herstel van isofluraan-anesthesie vindt meestal binnen enkele minuten plaats. Eventuele complicaties die kunnen optreden, zoals wonddehiscentie of pijn, zijn meestal binnen 1-3 dagen na de operatie zichtbaar. Voer dagelijkse welzijnscontroles uit om te controleren op pijn of complicaties totdat de huidincisie is genezen e.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
C-secties zijn goed voor ~33% van de bevallingen in de VS, en tot 55%-65% van de bevallingen in landen als Brazilië en Egypte12,52, en toch is er weinig bekend over hoe de baarmoeder geneest na een verwonding of hoe deze verwondingen van invloed zijn op volgende zwangerschappen. Hoewel eerdere keizersnede een belangrijke risicofactor is voor zwangerschapsstoornissen zoals placenta accreta spectrum (PAS) en placenta previa, zijn d.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De auteurs hebben geen belangenconflicten te melden.
We danken de UC Davis Teaching and Research Animal Care Services (TRACS) voor hun voortdurende houderij, procedurele en logistieke ondersteuning. We danken het UC Davis Cardiovascular Research Institute (CVRI) Animal Model Core en kerndirecteur Dr. Yi-Je (Jay) Chen, DVM, Ph.D. voor technische begeleiding en ondersteuning, evenals het gebruik van de operatiekamer voor het filmen. We danken alle leden van het Zhang-lab voor hun steun aan dit werk. Figuur 5A is gemaakt met BioRender.com (https://BioRender.com/ig9sfon).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 0.9% NaCl voor injectie, steriele | Fresenius Kabi | 63323-186-10 | |
| 25 G x 5/8 inch BD PrecisionGlide™ Naald | BD | 305122 | |
| 70% ethanol | Fisher Scientific | BP82031GAL | |
| Absorbeerbare 4-0 vicryl naad | Ethicon | J214 | |
| Dierkooien | VWR | 10712-110 en 10715-323 | Kooien die door de dierfaciliteit van de onderzoeker worden verstrekt, zijn acceptabel |
| Dierenordpierser | Fisher Scientific | 13-812-201 | |
| AutoClip wondsluitsysteem | Fine Science Tools | 12020-00 | |
| U-100 insulinespuit | Fisher Scientific | 14-826-79 | BD merk |
| Betadine wattenstaafjes | Medline | MDS093901 | |
| Buprenorfine Extended Release, 1,3 mg/ml (Ethiqa XR) | Fidelis Pharmaceuticals | 099114 | Alternatieve extended release Buprenorfine of Buprenorfine HCl is acceptabel |
| Carprofen (RIMADYL) 50 mg/ml | Zoetis | RIM-00284R1 | |
| Gebogen iris schaar | World Precision Instruments | 501759G | |
| Sterilisator voor chirurgisch gereedschap met droge glazen bolletjes | VWR INTERNATIONAL | 75999-324 | |
| Droog glazen bolletjes navulling | VWR INTERNATIONAL | 75999-332 | |
| Vrouwelijke muizen, typisch 8 tot 12 weken oud, bijv. stam C3H | Charles River | 025 | |
| Fijne schaar - gebogen 10,5 cm | Fine Science Tools | 14370-23 | |
| Bonttrimmer | Fisher Scientific | 50-195-4544 | |
| Glad Press ‘n Seal | Fisher Scientific | NC1089054 | |
| Handschoenen, nitril | Fisher Scientific | 19-130-1597C | |
| H2O, steriele gedistilleerd | Fine Science Tools | 15230170 | |
| Verlichting voor operaties | AmScope | HL150-AY | |
| Ketamine, 100 mg/mL (Zetamine) | Dechra | 501072 | |
| Labjas | Uline | S-15376W-50 | |
| Lichtmicroscoop | Fisher Scientific | S13039 | |
| Lintrekker | Fisher Scientific | 17-018-329 | |
| Nair Haarverwijderingscrème | Target | 049-06-3304 | |
| Naaldhouder | Fine Science Tools | 12500-12 | |
| Papierhanddoeken | Scott | 1804 | |
| Petrischaal | Fisher Scientific | 08-757-100 | |
| Fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) | Thermo Fisher Scientific | 10010023 | |
| Kunststof beker | Thermo Fisher Scientific | 12010250 | |
| Sondezoeker met gebogen uiteinde | Fisher Scientific | 08-995 | |
| Fisherbrand™ Direct Afdichtende Sterilisatie Zakken 9 cm (B) x 13,3 cm (H) | Fisher Scientific | 181250 | |
| Fisherbrand™ Direct Afdichtende Sterilisatie Zakken 9 cm (B) x 23 cm (H) | Fisher Scientific | 181251 | |
| Pincet, Fijn, #5 | Fine Science Tools | 11254-20 | |
| Pincet, Fijn, #55 | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| Weegschaal | Fisher Scientific | S93805 | |
| Chirurgische schaar | Fine Science Tools | 14060-09 | |
| Spuitfles | Fisher Scientific | S413505P | |
| Steriele alcohol prep pads | Fisher Scientific | 22-363-750 | |
| Steriele oftalmische diergeneeskundige zalf | Puralube | PH-PURALUBE-VET | |
| Steriele wattenstokken voor het aanbrengen van oogzalf | Fisher Scientific | 18-366-472 | |
| Sterisatie zakken | Fisher Scientific | 19-910-673 | |
| Chirurgisch kleed | Fisher Scientific | 50-209-1792 | |
| Chirurgisch haarnet | Uline | S-10480BLU | |
| Chirurgische maskers | Fisher Scientific | 18-048-010 | |
| Thomas Scientific Absorbent Bench Onderpad, Bench pads, 16,5 x 23 inch/42 x 58cm | Fisher Scientific | NC1588452 | |
| Verwarming/inductiekamer met volledige vloerverwarming | Fisher Scientific | 14-370-302 | |
| Wijndclip navullingen | Fine Science Tools | 12022-09 | |
| 100mg/ml xylazine | Dechra | Rompun 100 mg/mL Xylazine |
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.