Deze studie presenteert een methodologie voor de toediening van therapieën in het netvlies en de oogzenuwen van de volwassen rat. Daarnaast wordt een unieke methode voor weefselverzameling geïntroduceerd voor een top-down en bloc verzameling van de oogzenuw en het netvlies bij een volwassen rat.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Oculaire therapeutische toediening en geavanceerde weefselafname bij volwassen ratten
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Therapeutische toediening aan het achterste deel van het oog, inclusief het netvlies en de oogzenuw, wordt bemoeilijkt door de aanwezigheid van bloed-hersen- en bloed-retinale barrières. Kleine diermodellen, zoals ratten, worden gebruikt voor het bestuderen van verschillende oculaire pathologieën. Hoewel therapeutische toediening aan het achterste oog een uitdaging is, is het bereiken ervan essentieel voor de behandeling van oogaandoeningen, waarvan er vele validatie in kleine diermodellen vereisen voor translationele relevantie. Daarom worden twee posterieure therapeutische toedieningstechnieken gepresenteerd: intravitreale injectie (IVI) en retrobulbaire injectie (RBI) voor gebruik bij volwassen ratten. Daarnaast wordt een methode geïntroduceerd voor de en bloc verwijdering van de ogen en oogzenuwen voor verschillende histologische en moleculaire analysetechnieken. Het dissectieprotocol maakt volledige observatie van het neurovisuele systeem mogelijk, terwijl postmortale schade aan netvlies- en oogzenuwweefsel tot een minimum wordt beperkt. Succesvolle toediening van de therapeutische ciclosporine aan het netvlies en de oogzenuw werd bereikt, waarbij detecteerbare concentraties vierentwintig uur na injectie werden waargenomen met behulp van zowel IVI als RBI. Bovendien werden en bloc netvlies- en zenuwmonsters met succes geëxtraheerd voor volledige histologische weefselanalyse van het oog, waardoor uitgebreide observatie van het netvlies en het bredere neurovisuele systeem mogelijk werd.
Inleiding
Het toedienen van therapieën aan het netvlies en de oogzenuw is ongelooflijk moeilijk vanwege de complexe anatomie van het oog 1,2, met name de aanwezigheid van de bloed-retinale barrière (BRB)3,4,5. De BRB dient om het netvlies te beschermen tegen invasie van de systemische circulatie, maar is een uitdagende tegenstander van therapeutische toediening, aangezien de systemische therapeutische circulatie vaak wordt geblokkeerd door de BRB 6,7
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met de ARVO-verklaring voor het gebruik van dieren in oogheelkundig en visueel onderzoek en goedgekeurd door de institutionele commissie voor dierenverzorging en -gebruik van de Ohio State University. Mannelijke Sprague Dawley-ratten met een gewicht van ~ 200 g en een leeftijd van ongeveer 2 maanden werden gebruikt voor deze studie25. Nadere gegevens over de gebruikte reagentia en de gebruikte apparatuur staan vermeld in de materiaaltabel.
1. Intravitreale injectie (IVI)
- Sluit de isof....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Voorlopige proefexperimenten werden uitgevoerd op kadaverdieren met behulp van injectiekleurstof (Evans Blue-kleurstof) en tatoeage-inkt (Figuur 2B) om de plaatsing en grootte van de naald voor zowel RBI als IVI te optimaliseren. Tatoeage-inkt was niet-verdund en vervolgens werd Evans Blue-poeder gemengd in PBS totdat de vloeistof ondoorzichtig werd. We concludeerden dat de ideale RBI bestond uit een naald van 28 G die in een hoek halverwege tussen 6 en 7 uu.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
De ingewikkelde uitdagingen die gepaard gaan met het toedienen van therapieën aan het netvlies en de oogzenuw, voornamelijk als gevolg van de ondoordringbare barrière die door de BRB wordt gevormd, onderstrepen het belang van deze studie 3,4. De verkenning van IVI- en RBI-technieken belicht niet alleen innovatieve benaderingen om deze obstakels te overwinnen, maar benadrukt ook de bredere implicaties voor oogzorg en therapeutisch.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs verklaren dat het onderzoek is uitgevoerd zonder enige commerciële of financiële relaties die kunnen worden opgevat als een potentieel belangenconflict.
Dankbetuigingen
Dit werk werd gedeeltelijk gefinancierd door het Vision Research Program Awards W81XWH-15-1-0074 en W81XWH-22-1-0989 van het Amerikaanse ministerie van Defensie. De meningen of beweringen in dit document zijn de privé-opvattingen van de auteurs en mogen niet worden opgevat als officieel of als een weerspiegeling van de opvattingen van het ministerie van het leger of het ministerie van Defensie. Deze onderzoeksbeurs werd gedeeltelijk ondersteund door de Ohio Affiliate of Prevent Blindness Young Investigator Student Fellowship Award for Females Scholars in Vision Research. We zijn dankbaar voor de steun van de Ross Foundation. Diensten ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Anakinra 100 mg/0.67 mL | Sobi | NDC: 66658-0234-07 | |
| Antipamezole hydrochloride (Antisedan) 5.0 mg/mL | Zoetis | NADA #141-033 | 107204-8 | |
| Bacteriostatic sodium chloride (0.9%) | Hospira Inc. | NDC: 0409-1966-02 | |
| Cryotube | VWR | 76417-258 | https://us.vwr.com/store/product?keyword=76417-258 |
| Curved forceps | Fischer Scientific | 08-953F | |
| cyclosporine injection 250 mg/mL | Perrigo | NDC: 00574-0866-10 | |
| cyclosporine topical, 0.05% (Restasis) | AbbVie (Vizient) | NDC: 00023-9163-30 | |
| Cyotube Cap | Thermo Scientific | 3471BLK | https://www.fishersci.com/shop/products/screw-cap-microcentrifuge-tube-caps/14755237?searchHijack=true&searchTerm= screw-cap-microcentrifuge-tube-caps&searchType=Rapid& matchedCatNo=14755237 |
| Evans Blue | Sigma-Aldrich | E2129-10G | |
| Eye Spears | Fischer Scientific | NC0972725 | https://www.fishersci.com/shop/products/ultracell-pva-eye-spears-100-p/NC0972725 |
| Fine forceps | Fischer Scientific | 08-953E | https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-dissecting-jewelers-microforceps-2/08953E?gclid=Cj0KCQiAkJO8BhCGARIsAM kswyiER9Kanmi3ZMgoXTr82Zg3 g44m1Q6WLftkYfb36hC7pbkwR hVAy3MaAqkLEALw_wcB&ef_id =Cj0KCQiAkJO8BhCGARIsAMks wyiER9Kanmi3ZMgoXTr82Zg3g4 4m1Q6WLftkYfb36hC7pbkwRhV Ay3MaAqkLEALw_wcB:G:s&ppc _id=PLA_goog_2086145680_81 843405274_08953E__38624700 1354_6556597232892883360& ev_chn=shop&s_kwcid=AL!4428 !3!386247001354!!!g!827721591 040!&gad_source=1 |
| Fine ophthalmic forceps with teeth | Fisher Scientific | 50-253-8287 | https://www.fishersci.com/shop/products/bonn-suturing-forceps-7-5-cm/502538287 |
| Flat spatula | Fischer Scientific | 14-375-100 | https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-spoonula-lab-spoon/1437510#?keyword= |
| Hot bead Sterilizer | Fine Science Tools | 18000-45 | https://www.finescience.com/en-US/Products/Instrument-Care-Accessories/Sterilization/Hot-Bead-Sterilizers |
| Hypromellose 0.3% (GenTeal Tears Severe Dry Eye Gel) | Alcon Laboratories Inc. | https://www.amazon.com/GenTeal-Tears-Lubricant-Ointment-Night-Time/dp/B01IN5G1L0/ref=sr_1_4?dib=eyJ2IjoiMSJ9.DxYpqjIIBNO TVuPo7jln5xeGazA_YFg0cbt3 kCyC-0ouZARw5qIHYvCM7vB R_vO30OWUEXDZhQmQfLQ9 ySld4mujpzrWjxbsEXLBs5JPhjZ eUPgPY0sHoJA46f9EYULdxiTu BQy5fVA2OB20RV09mbdW8hX 6j8-bXIYTZljPGMo5_GMq9jnJo8 3iR35c1THxEiEH2FsvSx7VXup- QK9uCkWwAYrw2v3tyLUCq2JT APPF34nsYqGnSASMgOARU_ 2lVz-kIy-QUEYHGOoIimIWwBY htz33RkFrq7YjtnC2uDbImNiudG zWJv-uUhmJngYjbBGbeWE0VX 7CGPkEokUZrCQ8AI2HeXjSMph gPhMbK88RcHJ63AyH0TiBtS2k1 Xceh-CD26_prJSNxF6Mv5-jgGf9 iLmXvVtKkkSwc-5uYLk7gZHaFC Yj73F_imbmeHYr.4vfu7h4m4Jlfy- qiqmgeAnDHlJTGYV22HJ2w_xD ir0k&dib_tag=se&keywords=Gent eal+gel&qid=1736793609&sr=8-4 | |
| ibudilast | Millipore Sigma | I0157-10MG | |
| insulin syringe 0.5 mL with a 28 gauge Micro-Fine IV Needle | Becton, Dickinson and Company (BD) | 14-826-79 | |
| Isoflurane | Covetrus | NDC: 11695-6777-2 | |
| Ketamine | Covetrus | NDC: 11695-0703-1 | |
| Long Evans Rat | Charles River Laboratories International, Inc. | https://www.criver.com/products-services/find-model/long-evans-rat?region=3611 | |
| Mayo Scissors | Electron Microscopy Sciences | 72968-03 | |
| Medium microscissors | Amazon | https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/aldrich/z168866#product-documentation | |
| Medium straight he |
Referenties
- Nguyen, D. D., Lai, J. -Y. Advancing the stimuli response of polymer-based drug delivery systems for ocular disease treatment. Polym Chem. 11 (44), 6988-7008 (2020).
- Tsai, C. -H., et al. Ocular drug delivery: Role of de....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
